ARTIGO SUBSTNCIAS HMICAS DE TURFA: ESTUDO DOS PARMETROS QUE INFLUENCIAM NO PROCESSO DE EXTRAO ALCALINA# Andr Henrique Rosa,

Julio Cesar Rocha*, Maysa Furlan Instituto de Qumica de Araraquara - UNESP - CP 355 - 14800-900 - Araraquara - SP Recebido em 17/6/99; aceito em 28/11/99

HUMIC SUBSTANCES OF PEAT: STUDY OF THE PARAMETERS THAT INFLUENCE ON THE PROCESS OF ALKALINE E EXTRACTION. This study reports the parameters which influence on extraction of humic substances (HS) from peat. The yield, organic and inorganic contend, E4/ E 6 ratio and elemental composition (C,H,N) of the extracted HS have been determined. The functional groups were identified by Fourier-transform infrared espectroscopy. The results showed influence of the extractor type, concentration, time, temperature and granular texture of the sample in the extraction. This work contributes to better understanding of the extraction process showing the necessity of the standard method to extract humic substances from soil. Keywords: humic substances; humic acid; fulvic acid; peat; extraction.

INTRODUO Substncias hmicas (SH) so formadas pela transformao de biomolculas, durante o processo de decomposio de resduos vegetais e animais presentes no ambiente 1,2. Devido a natureza heterognea e complexa das SH pouco se sabe sobre sua estrutura qumica e apresentam-se como molculas polidifusas com elevada massa molar3,4. Possuem alto teor de grupos funcionais contendo oxignio na forma de carboxilas, hidroxilas fenlicas e carbonilas5 . Operacionalmente as SH so fracionadas em funo de sua solubilidade a diferentes valores de pH em: cidos hmicos )m ), cidos flvicos (AF) e humina. Devido suas caractersticas estruturais as SH podem interagir com metais6,7 e compostos orgnicos como por exemplo, pesticidas e herbicidas presentes no ambiente8-10. Para melhor compreender o comportamento das SH, estas tm sido estudadas sob diferentes aspectos: caracterizao de estruturas parciais11, determinao de constantes de equilbrio de espcies metal-SH12, labilidade relativa de metais13 etc.. Entretanto, a primeira etapa para esses estudos a extrao das SH. Das condies experimentais utilizadas no procedimento de extrao dependero as futuras interpretaes. Assim, importante o desenvolvimento de mtodos analticos que permitam extrair SH de solos, com mnimas alteraes nas estruturas originais, em tempo relativamente curto, elevado rendimento e baixo teor de contaminantes14. Ainda no existe uma metodologia para extrao de SH de solos, oficialmente adotada. Alguns autores tm utilizado extratores mais brandos como pirofosfato de sdio15, agentes complexantes16, cido frmico17, misturas cidas18 e solventes orgnicos19. Mesmo havendo risco de alteraes estruturais, outros autores preferem a extrao mais completa das SH utilizando lcalis1,2. A International Humic Substances Society (IHSS) recomenda um procedimento baseado em 4 horas de extrao com soluo de NaOH 0,1 mol/L temperatura ambiente na razo solo/extrator 1:10 (m/v) sob atmosfera de nitrognio20. Entretanto, de acordo com Parsons21, vrios fatores influenciam no procedimento de extrao e muitas questes ainda esto por ser respondidas.

Neste trabalho estudaram-se os parmetros que influenciam na extrao alcalina de SH de turfa como, tipo de extrator alcalino, concentrao, tempo, temperatura de extrao, razo turfa/extrator e granulometria da amostra. MATERIAIS E MTODOS Reagentes e solues Utilizou-se gua previamente destilada e purificada em sistema deionizador de gua, Milli-Qplus at apresentar resistividade 18,2 M ohm/cm a 25oC e reagentes de grau analtico. Coleta e preparo da amostra Coletou-se amostra de turfa (30 cm de profundidade) em rea localizada no municpio de Ribeiro Preto-SP. Aps secagem ao ar, triturou-se em grl de porcelana e peneirouse a 2 mm. Tipo, concentrao do extrator e tempo de extrao Fizeram-se extraes das SH variando-se as solues extratoras (NaOH e KOH) e suas respectivas concentraes (0,1, 0,5 e 1,0 mol/L), por 4 horas, razo turfa/extrator 1:10 (m/v), temperatura ambiente (25-30oC), sob atmosfera de nitrognio 22 e agitao mecnica. Aps extrao, centrifugouse a 2000.g por 10 minutos para separar a humina, frao insolvel. Concentrou-se o extrato hmico (50 mL) em evaporador rotativo a 55oC at cerca de 10 mL, transferiu-se para placa de Petri e secou-se em estufa com circulao de ar. Repetiu-se esse procedimento variando-se o tempo de extrao entre 1-8 horas. Razo turfa/extrator, temperatura de extrao e granulometria da amostra Fizeram-se extraes das SH utilizando-se soluo de KOH 0,5 mol/L, por 4 horas temperatura ambiente, sob atmosfera de nitrognio e agitao mecnica com diferentes razes turfa/ extrator: 1:5, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40 e 1:50 (m/v). Posteriormente, com razo turfa/extrator 1:20 (m/v), estudaram-se a influncia da temperatura de extrao (25, 50 e 75oC) e granulometria da turfa (0,21, 0,59 e 1,0 mm).

e-mail: jrocha@iq.unesp.br # Dedicated to the 60th birthday of Dr. Peter Burba and Prof. Dr. Celso A. F. Graner.

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Fracionamento das substncias hmicas em cidos hmicos e flvicos Para fracionamento em cidos hmicos e flvicos, ajustou-se o pH das SH em 1,5 com soluo de HCl 6,0 mol/L. Aps decantao e centrifugao a 2000.g por 10 minutos o AH foi transferido para placa de Petri e seco em estufa de circulao de ar a 55oC. O AF foi concentrado em evaporador rotativo a 55oC, transferido para placa de Petri e seco em estufa de circulao de ar. Teor de matria orgnica e rendimento das extraes Determinou-se o teor de matria orgnica pela diferena entre a massa de material seco submetido calcinao (750oC por 4 horas) e o resduo final obtido23. O rendimento da extrao foi obtido pela diferena entre a massa de turfa seca submetida extrao e a massa de SH extrada. Calcularam-se os rendimentos de AH e de AF pelas diferenas entre a massa de SH submetida acidificao a pH 1,5 e as massas obtidas para os respectivos cidos. Espectroscopia na regio do visvel e do infravermelho Aps purificao das amostras por dilise, conforme procedimento descrito por Town et al.24, dissolveram-se 0,02 g de AH e de AF em 10 mL de soluo de NaHCO3 0,05 mol/L e determinaram-se as razes entre as absorbncias lidas a 465 e 665 nm (E4/E6)25. Obtiveram-se espectros na regio do infravermelho com pastilhas de KBr (200 mg) e 0,5 mg de cada cido, submetendo-se a mistura (KBr:AH ou AF) presso de 10 t /cm2 em pastilhador de 14 mm de dimetro. RESULTADOS E DISCUSSO Tipo e concentrao do extrator A Figura 1 mostra resultados referentes ao rendimento, teor de matria orgnica e inorgnica das SH extradas em funo da concentrao e do tipo de extrator. De acordo com Clapp et al.20 e Swift26 o processo de extrao alcalina compreende a ionizao dos grupos cidos, causando expanso e repulso de cargas da macromolcula hmica resultando na transferncia das SH da fase slida para a soluo. Conseqentemente, a solubilidade das SH dependente do pH, fora inica e natureza dos eletrlitos24.

qentemente, no rendimento da extrao. Com solues extratoras mais diludas (0,1 mol/L) utilizando-se NaOH o rendimento cerca de duas vezes maior. Entretanto, em concentraes mais elevadas (1,0 e 0,5 mol/L) o rendimento maior quando se utiliza soluo de KOH e, alm disso, o material inorgnico co-extrado menor. A vantagem de extrair SH com baixo teor de cinzas diminuir etapas de purificao as quais sempre causam perda de material e possibilitam modificaes estruturais nas SH. Assim, nesse trabalho, optou-se pela no purificao das SH extradas para melhor avaliao dos parmetros envolvidos no processo de extrao. Entretanto, a no purificao das SH tornou invivel a comparao entre os resultados de caracterizao obtidos com dados da literatura para SH com baixos teores de cinzas. A razo E4/E6 est diretamente relacionada condensao estrutural, sendo indicativo do grau de humificao, aromaticidade, peso molecular e contedo cido das SH. A diminuio dos valores da razo E4/E6 indicam maior condensao enquanto que maiores razes esto associadas a estruturas menos condensadas1,4. A Tabela 1 mostra resultados referentes razo das absorbncias E4/E6 das SH, AH e AF extrados de turfa utilizandose solues extratoras de hidrxido de sdio e de potssio em diferentes concentraes. Tabela 1. Influncia do tipo e concentrao da soluo extratora na razo das absorbncias E4/E6, das substncias hmicas, cidos hmico e flvico extrados de turfa. Soluo extratora NaOH NaOH NaOH KOH KOH KOH Concentrao (mol/L) 1,0 0,5 0,1 1,0 0,5 0,1 SH 5,75 5,21 3,75 3,14 3,55 3,58 E4/E6 AH 4,22 4,65 4,72 4,20 3,94 3,80 AF 4,05 4,20 4,63 3,67 3,02 3,26

Figura 1. Influncia do tipo e da concentrao da soluo extratora no rendimento, teor de matria orgnica e inorgnica das substncias hmicas extradas de turfa.

No intervalo de concentrao estudado, o rendimento das SH extradas aumentou em funo do aumento da concentrao da soluo de KOH. Entretanto, este comportamento no foi observado quando utiliza-se soluo de NaOH pois, neste caso, o menor rendimento foi caracterizado utilizando-se concentrao intermediria, ou seja 0,5 mol/L. Provavelmente, as diferentes concentraes e caractersticas termodinmicas (raio de hidratao27 e mobilidade inica28) dos contra ons Na+ e K+ influenciaram no processo de solvatao dos grupos ionizados, e conse-

A maior tendncia do AF em formar pontes de hidrognio intra e intermolecular29 responsvel pelas menores razes E4/ E6 se comparadas quelas referentes ao AH. Independentemente da concentrao, as SH extradas com soluo de KOH, tiveram menores razes E4/E6 indicando maior condensao estrutural. Os resultados da Tabela 2 tambm indicam a influncia do tipo e concentrao do extrator utilizado na composio elementar das substncias hmicas extradas. Os valores das razes molares H/C esto diretamente relacionados ao contedo cido das SH e observa-se pela Tabela 2 que a utilizao de KOH e solues extratoras mais diludas extraem SH com maior acidez. Esses resultados esto associados ao processo de neutralizao e contrabalano das cargas das SH pelo extrator20,26. A diferena entre os teores de nitrognio das SH extradas pode indicar uma possvel contaminao de substncias de natureza no hmica como por exemplo, protenas e aminocidos quando a extrao feita com NaOH ou sugerir uma extrao incompleta do material hmico por KOH. A Figura 2 mostra forte influncia do tipo e da concentrao da soluo extratora no teor de AH e AF extrados da amostra de turfa. Diminuindo a concentrao do lcali, a extrao do AH aumenta e a do AF reduz. Essas evidncias ficaram caracterizadas inclusive por visualizao da diferena de colorao (castanho, amarelo e quase incolor) da frao flvica extrada em funo da concentrao da soluo extratora utilizada. Isto decorre do aumento da concentrao do lcali causando rompimento de foras intermoleculares que ligam o AF ao AH, como pontes de hidrognio ou ligaes do tipo ster1. Comportamento semelhante observado na utilizao de pirofosfato de sdio como soluo extratora30.

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Tabela 2. Resultados da composio elementar das substncias hmicas extradas de turfa. Substncia hmica* SHA SHB SHC SHD SHE SHF C 27,59 26,88 22,31 26,19 25,79 23,06 Composio elementar (%) H N H/C 4,44 4,73 5,18 5,48 6,13 6,35 1,52 1,43 1,58 0,71 0,57 0,49 1,94 2,11 2,78 2,51 2,85 3,31

SHA = extrao com soluo de NaOH 1,0 mol/L; SHB = extrao com soluo de NaOH 0,5 mol/L; SHC = extrao com soluo de NaOH 0,1 mol/L; SHD = extrao com soluo de KOH 1,0 mol/L; SHE = extrao com soluo de KOH 0,5 mol/L; SHF = extrao com soluo de KOH 0,1 mol/L; substncia hmica no purificada

Figura 3. Espectros no IV de cidos hmicos (pH: 1,5) extrados de turfa com solues de NaOH e KOH em diferentes concentraes. (A: NaOH 1,0 mol/L; B: KOH 1,0 mol/L; C: NaOH 0,5 mol/L; D: KOH 0,5 mol/L; E: NaOH 0,1 mol/L; F: KOH 0,1 mol/L).

Figura 2. Influncia da soluo extratora e da sua concentrao no teor de AH e AF extrado de turfa.

As bandas de absoro dos espectros na regio do infravermelho obtidos dos cidos hmicos e flvicos extrados com solues de NaOH e KOH em diferentes concentraes so compatveis com aquelas encontradas na literatura3,31. As principais bandas de absoro do espectros de AH so listadas na Tabela 3 e mostradas na Figura 3. Os espectros dos AF (Figura 4) mostram praticamente as mesmas frequncias de absoro, com excesso da banda cerca de 1700 cm-1 que encontra-se deslocada para frequncias prximas de 1680 cm-1 podendo estar associada ao estiramento C=O de cetonas conjugadas. Tambm verifica-se nos espectros do AF o desaparecimento da banda na regio de 3700 cm-1 associada ao estiramento OH de silicatos e o fortalecimento da banda na regio de 1000 cm-1 caracterstica marcante de estiramento C-O de carboidratos, indicando assim, ser este o contaminante principal da frao flvica.

Figura 4. Espectros no IV de cidos flvicos (pH: 1,5) extrados de turfa com solues de NaOH e KOH em diferentes concentraes. (A: NaOH 1,0 mol/L; B: KOH 1,0 mol/L; C: NaOH 0,5 mol/L; D: KOH 0,5 mol/L; E: NaOH 0,1 mol/L; F: KOH 0,1 mol/L).

Comparando-se os espectros dos cidos hmicos e flvicos extrados com soluo de KOH e de NaOH em diferentes concentraes (Figuras 3 e 4), no se observam alteraes significativas quanto natureza dos grupamentos presentes na estrutura das macromolculas hmicas. Tempo de extrao e razo turfa/extrator A Figura 5 mostra a influncia do tempo de extrao no teor de matria orgnica extrada. Segundo Stevenson1, a quantidade

Tabela 3. Bandas de absoro na regio do infravermelho observadas nos espectros de cidos hmicos extrados de turfa utilizando-se solues extratoras de NaOH e KOH em diferentes concentraes. Nmero de onda (cm-1) 3700 - 3750 ~ 3400 2.940 - 2.900 1720 1.620 - 1.600 1.590 - 1.517 1450 1.400 - 1.370 1.170 - 950 ~ 900 Atribuio estiramento OH de silicatos; estiramento OH de lcoois e/ou fenis e/ou cidos carboxlicos e/ou NH; estiramento assimtrico de C-H de alifticos (-CH2); estiramento C=O, de grupos carboxlicos e/ou carbonlicos; estiramento C=C de anel aromtico; estiramento C=C de anel aromtico, deformao N-H de aminocidos e estiramento C=N; deformao CH de alifticos (-CH2; -CH3); deformao O-H, deformao C-H (-CH2; -CH3), estiramento simtrico do COO-; estiramento C-O de lcoois e/ou fenis e/ou carboidratos, impurezas de silicatos (Si-O); deformaes fora do plano de CH de aromticos

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de matria orgnica (MO) extrada com solventes alcalinos elevase com o tempo de extrao devido lenta despolimerizao de complexos de alto peso molecular. Esses complexos fazem parte da humina e esto associados a sesquixidos e silicatos. Assim, o tempo necessrio para extrao depende do grau de humificao da MO e das caractersticas do material inorgnico presente na matriz. Na amostra utilizada neste estudo, verifica-se a despolimerizao da MO presente na humina at 240 minutos, aps esse tempo no h aumento considervel no teor de MO extrada.

dos grupos hidroxlicos a carbonlicos de cetonas causando o rompimento do complexo AH-argila, havendo assim, liberao de impurezas de silicatos agregados estrutura do complexo para a frao insolvel (humina).

Figura 6. Espectros no IV de cidos hmicos (pH = 1,5) extrados de turfa em diferentes temperaturas (25, 50 e 75oC).

Figura 5. Influncia do tempo de extrao no teor de matria orgnica extrada de turfa.

Utilizando-se a razo turfa/extrator 1:20 (m/v) o rendimento de material orgnico extrado foi maior. Em razes maiores observou-se apenas aumento do teor de material inorgnico mas no no contedo de material orgnico extrado. A variao do tempo de extrao e das razes turfa/extrator no apresentaram diferenas significativas nos valores da razo E4/E6 das SH extradas. Temperatura de extrao A Tabela 4 lista resultados da razo E4/E6 e teores de AH e AF extrados em funo da temperatura de extrao. O aumento da temperatura no exerceu grande influncia no rendimento do material extrado. Entretanto, h reduo do teor de AH com o aumento da temperatura provavelmente devido ao rompimento de ligaes tipo pontes de hidrognio ou ster presentes na estrutura das molculas hmicas32. Tabela 4. Influncia da temperatura (25, 50 e 75oC) na extrao das SH de turfa. Temperatura de extrao (oC) 25 50 75 SH E4/E6 3,87 3,35 3,62 R AH E4/E6 3,94 4,10 4,56 AF R 77,13 79,57 83,82 E4/E6 3,02 3,22 3,35

As diferenas observadas nos espectros de cidos flvicos extrados a 50 e 75oC em relao ao espectro de AF extrado a 25oC (Figura 7) foram: alargamento da banda em 3600 3000 cm-1 (estiramento OH de lcoois e/ou fenis e/ou cidos carboxlicos), aparecimento de banda em 1720 cm -1 (estiramento C=O de cidos carboxlicos) e deslocamento/diminuio da banda referente ao estiramento C-O para regio de 1100 cm-1. Essas alteraes no espectro possivelmente indicam a converso de grupamentos hidroxlicos cidos carboxlicos devido oxidao durante o processo de extrao. A diminuio da banda na regio de 1000 cm-1 referente ao estiramento C-O tambm pode estar associada a degradao com a elevao da temperatura de carboidratos presentes na frao flvica.

Figura 7. Espectros no IV de cidos flvicos (pH = 1,5) extrados de turfa em diferentes temperaturas (25, 50 e 75oC).

22,87 20,43 16,18

R - rendimento (%) Comparando-se os espectros de AH extrados a 50 e 75oC, com o espectro de AH extrado a 25oC (Figura 6) verifica-se o desaparecimento das bandas em torno de 3750 cm-1 (estiramento OH de silicatos), 3450 cm-1 (estiramento OH de lcoois e/ou fenis) e 1030 cm-1 (estiramento CO de lcoois e/ou fenis e SiO de impurezas de silicatos). Essas diferenas sugerem que a elevao da temperatura de extrao pode causar oxidao
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O aumento dos valores da razo E4/E6 (Tabela 4) de AH e AF tambm mostram diferenas que inferem a reduo da condensao e do peso molecular, em funo da elevao da temperatura de extrao. Assim, os valores da razo E4/E6 e a anlise dos espectros obtidos na regio do infravermelho mostram que a elevao da temperatura da extrao causa alteraes estruturais tanto no AH como no AF. Essas modificaes foram discutidas com base na comparao dos espectros de infravermelho e visvel e esto de acordo com Pang, et al.33 os quais utilizando RMN 1H e 13C verificaram que o aumento da temperatura durante a extrao exerce influncia nas caractersticas estruturais do material extrado pelo favorecimento de processos oxidativos.

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Influncia da granulometria do solo A Tabela 5 lista os resultados referentes ao estudo da granulometria da turfa submetida a extrao. O rendimento bruto da extrao praticamente no variou com a granulometria da amostra de turfa. Entretanto, os teores de material orgnico e inorgnico extrados so diretamente influenciados pela granulometria da amostra. Ou seja, menor granulometria favorece a extrao de maior teor de matria orgnica e, conseqentemente, diminui o teor de matria inorgnica (MI) devido ao aumento da superfcie de contato da turfa com a soluo extratora. Tabela 5. Influncia da granulometria (0,21; 0,59 e 1,00 mm) da turfa na extrao das SH. Granulometria da turfa (mm) 0,21 0,59 1,00 R (%) 49,67 52,18 50,35 Substncias hmicas MO (%) MI (%) 31,34 28,59 25,43 68,66 71,41 74,57

R = rendimento (%); MO = matria orgnica (%); MI = matria inorgnica (%); CONCLUSES Os resultados mostraram influncia do tipo de extrator alcalino (NaOH e KOH), concentrao (1,0, 0,5 e 0,1 mol/L), tempo de extrao (60, 120, 240 e 480 minutos), temperatura de extrao (25, 50 e 75oC), e granulometria da turfa (0,21; 0,59 e 1,0 mm) nas caractersticas estruturais, rendimento e teor de cinzas das SH extradas de amostra de turfa. O extrator alcalino e sua concentrao influenciaram no rendimento, teor de cinzas, razo E4/E6, e teor de AH e AF extrados, mas no na presena dos grupos funcionais presentes na estrutura dos cidos. O teor de matria orgnica extrada (solvel em lcali) eleva-se at 240 minutos e o rendimento foi maior utilizando-se a razo turfa/extrator 1:20 (m/v). Entretanto, estes parmetros no influenciaram nas razes de absorbncias (E4/E6) das SH extradas. Altas temperaturas causam alteraes estruturais nos cidos devido oxidao e quebra do complexo hmico-silicato e, aumentando o teor de AF em detrimento do teor de AH. A diminuio da granulometria da turfa permite a elevao do teor de matria orgnica extrada devido ao aumento de sua superfcie de contato com o solvente extrator. As melhores condies para extrao das substncias hmicas da amostra de turfa em estudo foram: soluo extratora KOH (0,5 mol/L), tempo de extrao 4 horas, razo turfa/extrator 1:20 (m/v), temperatura ambiente (25 - 30oC), atmosfera de nitrognio, agitao mecnica e granulometria de 0,21 mm. A soluo extratora KOH (0,5 mol/L) apresentou vantagens em relao ao NaOH, para a amostra estudada, devido ao maior rendimento e reduo de contaminantes no processo de extrao. Este trabalho contribui para um melhor entendimento dos parmetros relacionados com o processo de extrao alcalina de SH e caracteriza a importncia da sistematizao do processo de extrao para melhor comparao entre resultados de amostras com caractersticas qumicas distintas coletadas em diferentes localidades. AGRADECIMENTOS Os autores agradecem a FAPESP (Proc. n 95/4682-9 e 97/ 10673-8) e CNPq por bolsas e suporte financeiro concedido. REFERNCIAS 1. Stevenson, F. J.; Humus Chemistry. Wiley & Sons; New York, 1982; p.198.

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