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XXVII Congresso Brasileiro da Cincia das Plantas Daninhas 19 a 23 de julho de 2010 - Centro de Convenes - Ribeiro Preto SP

ATIVIDADE MICROBIANA DE DOIS SOLOS SOB EFEITO DE SULFENTRAZONE, ISOXAFLUTOLE E OXYFLUORFEN MELO, C. A. D.1; TIRONI, S. P.2; MEDEIROS, W. N.3; FARIA A. T.4 TUFFI SANTOS, L. D.5; FERREIRA, L. R.6
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Universidade Federal de Viosa-MG.Tel: (37) 91980585.Email:chrisadinizmelo@yahoo.com.br Universidade Federal de Viosa-MG.Tel: (31) 38991164.Email:siumar.tironi@gmail.com 3 Universidade Federal de Viosa-MG.Tel: (37) 88256023.Email:wilkermedeiros@ yahoo.com.br 4 Universidade Federal de Viosa-MG.Tel: (31) 84465061.Email:autieresteixeira@yahoo.com.br 5 Universidade Federal de Minas Gerais.Tel: (38) 21017764. Email: ltuffi@ufmg.br 6 Universidade Federal de Viosa-MG. Tel: (31) 38991119. Email: lroberto@ufv.br

Resumo Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito do sulfentrazone, isoxaflutole e oxyfluorfen na atividade respiratria da microbiota, na biomassa microbiana e no quociente metablico em dois solos com diferentes caractersticas fsico-qumicas cultivados com eucalipto. Para isso, foi conduzido um experimento em ambiente protegido, com delineamento em blocos casualizados com quatro repeties. Dois solos, um argiloso e um argilo-arenoso, foram distribudos em vasos de 6 L e submetidos aplicao dos herbicidas sulfentrazone, oxyfluorfen e isoxaflutole nas doses de 0,5 kg ha-1, 0,72 kg ha-1 e 0,113 kg ha-1, respectivamente. Aps a aplicao foram transplantadas para os vasos mudas de eucalipto com aproximadamente 3 meses de idade. Decorridos 60 dias da aplicao dos herbicidas foram coletadas amostras de solos de cada vaso na camada de 1 a 10 cm de e distantes cerca de 5 cm do coleto das plantas de eucalipto para estimativa da taxa respiratria (TR), do carbono da biomassa microbiana (CBM) e do quociente metablico (qCO2) dos solos. Observouse reduo do CBM na presena dos herbicidas sulfentrazone e isoxaflutole, nos dois solos estudados. O oxyfluorfen alterou apenas o CBM do solo argilo-arenoso. A TR foi reduzida na presena do sulfentrazone no solo argiloso, enquanto que o isoxaflutole estimulou a respirao no solo argilo-arenoso. Maiores distrbios na microbiota do solo argiloso foram causados pelos herbicidas isoxaflutole e sulfentrazone, os quais apresentaram valores mdios de qCO2 47% superiores testemunha. No solo argilo-arenoso somente o isoxaflutole proporcionou elevado qCO2, demonstrando condies desfavorveis aos microrganismos do solo aps sua aplicao. Os trs herbicidas avaliados causaram efeito negativo na atividade microbiana dos dois solos, sendo que dentre eles o oxyfluorfen mostrou-se menos prejudicial. Palavras-chave: herbicidas, taxa respiratria, biomassa microbiana, quociente metablico Abstract This work aimed to evaluate the effect of sulfentrazone, isoxaflutole and oxyfluorfen in microbial respiration, microbial biomass and metabolic quotient in two soils with different physicochemical characteristics. The trial was conducted in a protected environment in a randomized blocks experimental design, with four replications. Two soils, a clay and a clay-sand were distributed in pots of 6 L and submitted the application of sulfentrazone, isoxaflutole and oxyfluorfen at 0.5 kg ha-1, 0.72 kg ha-1 and 0.113 kg ha-1, respectively. After applying these herbicides eucalyptus seedlings were transplanted to pots. After 60 days of herbicide application, soil samples were collected from layer 1 to 10 cm deep in each pot and distant about 5 cm from the collar of eucalyptus trees to estimate the respiratory rate (RR) of biomass microbial (MB) and metabolic quotient (qCO2) soils. It was observed in both soils reductive effect on MB with the application of sulfentrazone and isoxaflutole, compared the control. The application of oxyfluorfen only changed the MB of the clay-sandy soil. The RR was reduced under application of sulfentrazone in clay soil, while isoxaflutole stimulated respiration in the sandy clay soil. Major disturbances in clay soil microbes were caused by the herbicide isoxaflutole and sulfentrazone, which showed mean values of qCO2 47% higher than the control. In clay-sandy soil only isoxaflutole presents a high qCO2, showing unfavorable conditions for soil microorganisms after application. The three tested herbicides caused negative effect on microbial activity of two soils, and among them oxyfluorfen was less harmful. Key words: herbicides, respiratory rate, microbial biomass, metabolic quotient Introduo

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O emprego de indicadores microbiolgicos para averiguao da qualidade do solo tem-se mostrado eficiente para a avaliao de impactos dos cultivos agrcolas sobre o meio (ref.). Normalmente, pequenas alteraes na qualidade do solo esto associadas com mudanas em suas propriedades microbiolgicas, as quais apresentam alta sensibilidade a perturbaes advindas do manejo (Ttola et al., 2002). A utilizao de agrotxicos, em especial os herbicidas, pode influenciar a dinmica dos microrganismos do solo (Santos et al., 2005; Jakelaitis et al., 2007; Reis et al., 2008a), podendo apresentar efeitos malficos, benficos (Reis et al., 2008b) ou nulos (Pereira et al., 2008). Dentre os indicadores microbiolgicos de qualidade do solo, destacam-se a biomassa microbiana (BM), a taxa respiratria (TR) e o quociente metablico (qCO2). A biomassa microbiana do solo considerada a frao viva da matria orgnica e est diretamente envolvida na degradao da matria orgnica, na transformao e disponibilidade dos nutrientes e na degradao de agrotxicos no solo (Angers et al., 1993; Moormam, 1994). Altas TRs do solo podem indicar tanto distrbio ecolgico como alto nvel de produtividade do ecossistema solo (Islam & Weil, 2000). Os agrotxicos podem interferir positiva ou negativamente na atividade dos organismos do solo, o que indica, respectivamente, a metabolizao desses produtos pelos organismos e a capacidade dos agrotxicos intoxicarem a biota do solo (Santos, et al., 2005; Tuffi Santos et al., 2005; Vivian et al., 2006). O qCO2 representa a taxa respiratria por unidade de biomassa do solo, em que os maiores valores so atribudos a condies desfavorveis aos microrganismos, e os menores, maior eficincia destes na incorporao de carbono biomassa (Sakamoto & Obo, 1994). Os herbicidas sulfentrazone, oxyfluorfen e isoxaflutole so registrados para a cultura do eucalipto e comumente aplicados em pr-emergncia das plantas daninhas. Sabe-se que a utilizao excessiva de herbicidas pode causar impactos sobre ecossistemas aquticos e edficos, porm as informaes referentes ao impacto desses produtos na microbiota de solos florestais so escassas e devem ser investigados. Diante da importncia do uso de herbicidas no manejo de plantas daninhas na cultura do eucalipto, objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito do sulfentrazone, isoxaflutole e oxyfluorfen na atividade respiratria da microbiota, na biomassa microbiana (BM) e no quociente metablico (qCO2) em dois solos com diferentes caractersticas fsico-qumicas cultivados com eucalipto Material e Mtodos O experimento foi conduzido em casa de vegetao, nas dependncias do Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal de Viosa (UFV) e as anlises foram realizadas no Laboratrio de Herbicida no Solo do mesmo departamento e instituio. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados com quatro repeties. Dois solos, um argiloso e um argilo-arenoso, provenientes dos municpios de Viosa e Oratrios, ambos do estado de Minas Gerais, foram adubados conforme anlise de solo (Tabela 1) e distribudos em vasos de 6 L. Logo aps foram submetidos aplicao dos herbicidas sulfentrazone, oxyfluorfen e isoxaflutole nas doses de 0,5 kg ha-1, 0,72 kg ha-1 e 0,113 kg ha-1, respectivamente. Tabela 1. Resultados das anlises qumica e fsica das amostras dos solos provenientes dos municpios de Viosa, Virginpolis e Oratrios MG
Caracterizao Qumica Origem do Solo Viosa Oratrios pH 4,2 6,7 P K -- mg dm-3 -17,4 99 55,8 80 AL H + Al Ca Mg ---------------- cmolc dm-3 -------------2,0 11,55 0,9 0,6 0,00 1,16 4,7 0,8 Caracterizao Fsica Argila Viosa Oratrios Areia Grossa --------------------- dag kg-1 --------------------51 5 17 27 35 19 12 34 Silte Areia Fina Classe Textural Argila Argilo-Arenosa M.O. dag kg-1 6,1 1,6 P-rem mgL-1 26,8 31,7

Para aplicao utilizou-se um pulverizador costal com presso constante mantida por CO2, acoplado de barra com um bico tipo leque TT11002, com presso de trabalho de 250 Kpa e volume de calda de 150 L ha-1.

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Aps a aplicao dos herbicidas foram transplantadas para os vasos mudas padronizadas de eucalipto com aproximadamente 3 meses de idade. Foi realizada adubao de cobertura aos 15, 30 e 45 dias aps transplantio das mudas com 30 mL de soluo nutritiva preparada com o adubo Ouro Verde. Decorridos 60 dias da aplicao dos herbicidas, amostras de solos foram coletadas na camada de 1 a 10 cm de profundidade de cada vaso e distantes cerca de 5 cm do coleto das plantas de eucalipto e posteriormente acondicionadas em sacos plsticos, fechados frouxamente para possibilitar a respirao dos microrganismos e mantidos em refrigerador temperatura de 4 C por 2 dias, perodo em que foi quantificada a umidade do solo. Com essas amostras, foram estimadas a taxa respiratria (TR), o carbono da biomassa microbiana (CBM) e o quociente metablico (qCO2) dos solos. Na avaliao da taxa respiratria utilizou-se o mtodo respiromtrico de avaliao do C-CO2 evoludo do solo, no qual amostras de 150 g de solo mido, com 60% da capacidade de campo, foram incubadas durante 15 dias em frascos hermeticamente fechados. O C-CO2 liberado do solo foi carreado por fluxo contnuo de ar (isento de CO2) at outro frasco contendo 100 mL de soluo de NaOH 0,25 mol L-1. Estimou-se o C-CO2 evoludo a partir da titulao de 10 mL da soluo de NaOH com soluo de HCl 0,1 mol L-1, preenchendo-se novamente os frascos com 100 mL de soluo de NaOH 0,25 mol L-1. Como padres de comparao, indicando a qualidade do ar carreado, utilizaram-se frascos sem solo, ou seja, amostras denominadas branco em relao s demais. Aps o perodo de incubao, foi feita a anlise do carbono da biomassa microbiana, seguindo o mtodo descrito por Vance et al. (1987), modificado por Islam & Weil (1998). Foram retiradas duas pores de solo de cada tratamento (18 g), sendo uma submetida radiao de microondas por tempo previamente calculado (60 s + 60 s), substituindo a fumigao com clorofrmio. O CBM foi extrado das amostras irradiadas e no irradiadas de solo com adio de 80 mL de K2SO4 0,5 mol L-1; em seguida, as amostras foram agitadas por 30 minutos em mesa agitadora horizontal, permanecendo em repouso por mais 30 minutos, para decantao. Posteriormente, a fase superior foi filtrada em papel-filtro Whatman no 42. Foram adicionados 10 mL do filtrado em tubos digestores e a seguir adicionados os reagentes: 2 mL de soluo K2Cr2O7 0,0667 mol L-1; e 10 mL de H2SO4 concentrado. Aps o resfriamento, a soluo foi completada para 100 mL com gua destilada e adicionado o indicador de difenilamina (cinco gotas), procedendo em seguida titulao com soluo 0,333 mol L-1 de (NH4)2Fe(SO4)2 at a mudana de colorao para vemelho-tijolo. O CBM foi estimado pela diferena entre a amostra irradiada e a no irradiada. Com a relao entre os valores de C-CO2 e CBM, determinou-se o quociente metablico (qCO2), o qual representa a quantidade evoluda de CO2 por unidade de biomassa. Os dados obtidos foram submetidos anlise de varincia, e quando os efeitos foram significativos procedeu-se ao critrio de agrupamento de mdias Scott-Knott, a 5% de probabilidade. Resultados e Discusso Evidenciou-se, nos dois solos estudados, reduo do carbono da biomassa microbiana (CBM) nos tratamentos com a aplicao do sulfentrazone, oxyfluorfen e isoxaflutole, exceto no tratamento com a aplicao do oxyfluorfen em solo argiloso, onde o CBM no diferiu da testemunha sem herbicida (Tabela 2). Tabela 2. Carbono da biomassa microbiana (CBM) estimada de amostras de solo Argiloso e Argiloarenoso aos 60 dias aps aplicao (DAA) dos herbicidas isoxafutole, oxyfluorfen e sulfentrazone.
Solos Argiloso Argilo-arenoso -1 CBM (g CBM g solo) Isoxaflutole 126,67 b1 69,47 b Oxyfluorfen 200,70 a 115,79 b Sulfentrazone 97,89 b 115,79 b Sem herbicida 200,70 a 169,82 a C.V. (%) 12,63 21,62 1 Mdias seguidas pela mesma letra na coluna no diferem entre si pelo critrio Scott-Knott (P<0,05) Tratamentos

No solo argilo-arenoso observou-se reduo mdia de 59% no CBM na presena do isoxaflutole, oxyfluorfen e sulfentrazone, e reduo mdia de 56% do CBM do solo argiloso na presena do isoxaflutole e sulfentrazone (Tabela 2). A biomassa microbiana (BM) participa dos processos de degradao de herbicidas no solo, porm parte desta (organismos menos tolerantes) pode ser afetada e contribuir para a diminuio do CBM dos solos. Segundo Rodrigues e Almeida

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(2005) o oxyfluorfen um herbicida pouco solvel em gua (< 0,1 ppm) e por isso dificilmente lavado ou lixiviado no solo, ficando adsorvido matria orgnica das camadas superficiais, o que representa significativa vantagem em relao ao baixo potencial de impacto sobre a biota do solo. Entretanto, em solos de textura mais arenosa essa biodisponibilidade do oxyfluorfen pode ser considervel, vindo a afetar a microbiota do solo. A presena dos herbicidas pode alterar a BM do solo, porm essa apresenta resposta varivel e dependente do herbicida em questo, tipo de solo, da espcie de planta, da microbiota e suas interaes. Os maiores valores de taxa respiratria do solo (TR) foram observados no solo Argiloso em comparao ao solo Argilo-arenoso, possivelmente pelo maior teor de matria orgnica (Tabela 3). No solo argiloso somente o herbicida sulfentrazone provocou reduo da TR. Vivian et al. (2006) tambm observaram efeito negativo do sulfentrazone sobre a atividade microbiana (TR, CBM e qCO2) em Argissolo Vermelho-Amarelo cultivado com cana-de-acar. No solo argilo-arenoso o isoxaflutole estimulou a respirao, diferindo-se da testemunha e dos demais herbicidas, o que pode ser indicativo do maior estresse da biomassa microbiana (Tabela 3). Tabela 3. Taxa Respiratria (TR) estimada de amostras de solo Argiloso e Argilo-arenoso aos 60 DAA dos herbicidas isoxafutole, oxyfluorfen e sulfentrazone.
Solos Argilo-arenoso C-CO2 (g C-CO2 g-1 solo) Isoxaflutole 1087,78 a1 794,45 a Oxyfluorfen 1051,11 a 501,11 b Sulfentrazone 782,22 b 501,11 b Sem herbicida 1136,67 a 623,33 b C.V. (%) 12,52 15,75 1 Mdias seguidas pela mesma letra na coluna no diferem entre si pelo critrio Scott-Knott (P<0,05) Tratamentos Argiloso

De modo geral, os herbicidas podem influenciar de modo positivo ou negativo a microbiota do solo, podendo afetar duas ou mais caractersticas biolgicas do solo de modo divergente por exemplo, reduo da biomassa microbiana e acrscimo da taxa respiratria ou de modo convergente com reduo ou acrscimo de ambas. Essas condies mencionadas podem dificultar a interpretao correta dos efeitos de estresse sobre a biota do solo. Assim, para estimativas mais representativas desses efeitos, pode-se obter o qCO2, que relaciona a TR com a BM (Reis, et. al 2008a). Maiores distrbios na microbiota do solo argiloso foram causados pelos herbicidas isoxaflutole e sulfentrazone, os quais apresentaram valores mdios de qCO2 47% superiores testemunha. No solo argilo-arenoso somente o isoxaflutole apresentou elevado qCO2, demonstrando condies desfavorveis aos microrganismos do solo na sua a presena. Os solos submetidos aplicao de oxyfluorfen apresentaram menores valores de qCO2 indicando maior eficincia da BM na utilizao dos recursos do ecossistema, com menores perdas de C na forma de CO2 e, consequentemente, maior incorporao de C nas clulas microbianas (Tabela 4). Tabela 4. Quociente metablico (qCO2) estimado de amostras de solo Argiloso e Argilo-arenoso aos 60 DAA dos herbicidas isoxafutole, oxyfluorfen e sulfentrazone.
Solos Argiloso Argilo-arenoso qCO2 (g C-CO2 g-1 CBM) Isoxaflutole 8,58 a1 12,58 a Oxyfluorfen 5,29 b 5,40 b Sulfentrazone 8,28 a 3,52 b Sem herbicida 5,71 b 5,45 b C.V. (%) 19,16 42,26 1 Mdias seguidas pela mesma letra na coluna no diferem entre si pelo critrio Scott-Knott (P<0,05) Tratamentos

O herbicida oxyfluorfen o herbicida que menos afeta a atividade microbiana de ambos os solos estudados. O isoxaflutole causa reduo da biomassa microbiana e da taxa respiratria, e aumento do quociente metablico. O sulfentrazone apresenta-se mais prejudicial microbiota do solo argiloso do que do solo argilo-arenoso, com reduo da taxa respiratria e elevao do quociente metablico. Literatura citada

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ANGERS, D. A. et al. Tillage-induced differences in organic matter of particle-size fractions and microbial biomass. Soil Sci Am. J., v. 57, n. 2, p. 512-516, 1993. ISLAM, K. R.; WEIL, R. R. Microwave irradiation of soil for routine measurement of microbial biomass carbon. Biol. Fert. Soils, v. 27, n. 4, p. 408-416, 1998. ISLAM, K.R. & WEIL, R.R. Land use effects on soil quality in a tropical forest ecosystem of Bangladesh. Agric. Ecosys. Environ., v. 79, n. 1, p. 9-16, 2000. JAKELAITIS, A. et al. Atividade microbiana e produo de milho (Zea mays) e de Brachiaria brizantha sob diferentes mtodos de controle de plantas daninhas. Planta Daninha, v. 25, n. 1, p. 7178, 2007. GHANI, D. A. et al. Interactions between 14C-labelled atrazine and the soil microbial biomass in relation to herbicide degradation. Biol. Fert. Soils, v. 21, n. 1, p. 17-22, 1996. MORENO, J. L. et al. Effects of atrazine on microbial activity in semiarid soil. Appl. Soil Ecol., v. 35, n. 1, p. 120-127, 2007. MOORMAN, T. B. Pesticide degradation by soil microrganisms: environmental, ecological and management effects. In: HATFIELD, J. L.; STEWART, B. A. (Eds.). Soil Biology. Effects on soil quality. Boca Raton: CRC Press, 1994. p. 121-169. VANCE, E. D.; BROOKES, P. C.; JENKINSON, D. S. An extraction method for measuring soil microbial biomass C. Soil Biol. Biochem., v. 19, n. 6, p. 703-707, 1987. VIVIAN, R. et al. Persistncia de sulfentrazone em Argissolo Vermelho-Amarelo cultivado com canade-acar. Planta Daninha, v. 24, n. 4, p. 471-480, 2006. TTOLA, M. R.; CHAER, G. M. Microrganismos e processos microbiolgicos como indicadores da qualidade dos solos. In: ALVAREZ V., V. H. et al. (Eds.). Tpicos em Cincia do solo. 2.ed.Viosa, MG: Sociedade Brasileira de Cincia do Solo, 2002. p. 195-276. TUFFI SANTOS, L. D. et al. Exsudao radicular do glyphosate por Brachiaria decumbens e seus efeitos em plantas de eucalipto e na respirao microbiana do solo. Planta Daninha, v. 23, n. 1, p. 143-152, 2005. RODRIGUES, B. N.; ALMEIDA, F. S. Guia de herbicidas. 3. ed. Londrina: IAPAR, 2005. 591 p. SANTOS, J. B. et al. Atividade microbiana do solo aps aplicao de herbicidas em sistemas de plantio direto e convencional. Planta Daninha, v. 23, n. 4, p. 683-691, 2005. SAKAMOTO, K.; OBO, Y. Effects of fungal to bacterial ratio on the relationship between CO2 evolution and total soil microbial biomass. Biol. Fert. Soils, v. 17, n. 1, p. 39-44, 1994. REIS, M. R. et al. Atividade microbiana em solo cultivado com cana-de-acar aps aplicao de herbicidas. Planta Daninha, v. 26, n. 2, p. 323-331, 2008a. REIS, M. R. et al. Ao de herbicidas sobre microrganismos solubilizadores de fosfato inorgnico em solo rizosfrico de cana-de-acar. Planta Daninha, v. 26, n. 2, p. 333-341, 2008b. PEREIRA, J. L et al. Effects of glyphosate and endosulfan on soil microorganisms in soybean crop. Planta Daninha, v. 26, n. 4, p. 825-830, 2008.

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