FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS UNIVERS 1DM) COMPLUTENSE MADRID

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE

ESTUDIO
DE

DE GRUPOS

FUNCIONALES
EN (L.) LA

DE

MICROORGANISMOS

EDAFICOS

RIZOSFERA

&LXUJS. flT.TTrPTNOSL

GAERTN.

Jose Manuel Pozuelo Gonzlez

1991

FACULTAD

DE CIENCIAS BIOLOGICAS COMPLUTENSE

UNIVERSIDAD

MADE ID

ESTUDIO

DE

GRUPOS

FUNCIONALES EN (L.) LA

DE

MICROORGANISMOS DE

EDAFICOS

RIZOSFERA

AL.NiIS. flT.TTTTWO~A

GAERTN.

Memoria que para optar al Grado de Doctor en Ciencias Biolgicas presenta D. Jose Manuel Pozuelo Gonzlez

V~

Bc~

El

Director

Dr. D. Francisco Bermdez de Castro y Naya

Esta Memoria ha sido realizada en el Departamento de Ecologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Complutense de Madrid y en los laboratorios del Colegio Universitario S. Pablo (C.E.U.) baje la direccin del Prof. Dr. D. Francisco Bermdez de Castro y Haya a quien deseo agradecer la orientacin e inters que han hecho posible este trabajo. Quiero agradecer tambin la ayuda prestada al Dr. D. Nuno Henriques Gil por su colaboracin en los anlisis estadsticos y a la Dra.
Ma

Fe Schniitz por el apoyo en la

interpretacin del anlisis de ordenacin

-

Adems deseo expresar mi gratitud a mis compaeros de laboratorio Dr. Francisco Javier Gutirrez Maero. Francisco Llinares Pinel, Dolores MuflozMingarro y Agustin Probanza Lobo por su colaboracin desinteresada y constante en la realizacin de esta Memoria.

INDICE

Pgina
1 INTRODUCCION. 1 3

1.1. 1.1.1. 1.1.2. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5. 1.5.1. 1.5.1.1. 1.5.1.2. 1.5.1.3. 1.5.1.4. 1.5.1.5. 1.5.2. 1.6. II 2.1. 2.1.1.

La materia orgnica en el suelo Organizacin de las comunidades microbianas edficas que degradan la materia orgnica Influencia del media abitico en la degradacin de la materia orgnica Ciclo del nitrgeno Microorganismos del ciclo del nitrgeno Influencia del medio abitico en el ciclo del nitrgeno Influencia de la vegetacin en el ciclo del nitrgeno Interf ase razsuelo Caractersticas de la rizosfera Colonizacin de la rizosfera Interacciones entre los organismos en la rizosfera Efecto rizosfera y microorganismos del ciclo del nitrgeno Efecto rizosfera de las plantas fijadoras de nitrgeno Deposicin de restos vegetales.. Objetivos y plan de trabajo.. MATERIALES Y METODOS Caractersticas generales de la zona de muestreo Geologa

5 7 10 19 24 31 32 33 38 40 43 46 48 51 53 54 54

2.1.2.

Edafologa

54

2.1.3. 2.1.4. 2.1.5. 2.2. 2.3. 2.4. 2.4.1. 2.4.2. 2.4.3. 2.4.4. 2.4.5. 2.4.6. 2.4.7. 2.5. 2.5.1. 2.5.2. 2.5.3. 2.5.4. 2.6. III 3.1. 3.2. 3.2.1. 3.2.2. 3.2.3. 3.2.4. 3.2.5. 3.2.6. 3.2.7. 3.3. 3.3.1.

Hidrografa Clima Vegetacin Zona de muestreo Recogida y preparacin de las muestras Anlisis fsico-qumicos Medida de la humedad de las muestras Medida del pH Determinacin del nitrgeno total Determinacin del nitrgeno amonio Determinacin del nitrgeno nitrato Determinacin de carbono orgnico Textura Estudio de la densidad microbiana Preparacin de las suspensionesdiluciones de suela Preparacin de los medios de cultivo Condiciones de cultivo de los grupos funcionales analizados Clculo del NMP y de la actividad biolgica.... Tratamiento de la informacin. RESULTADOS Tendencias de variacin en el conjunto de observaciones Anlisis fsicoqumicos pH Carbono orgnico Nitrgeno total Relacin carbono/nitrgeno Nitrgeno-amonio Nitrgeno-nitrato Humedad Anlisis microbiolgicos Densidad de la microflora total....

56 57 58 59 64 65 66 67 67 68 68 69 70 70 71 71 71 72 74 77 78 89 89 93 97 100 104 107 111 126

126

3.3.2. 3.3.3. 3.3.4. 3.3.5. 3.3.6. 3.3.7. 3.3.8. 3.3.9. 3.4.

Densidad de la microf lora proteoltica Densidad de la microf lora amonificante Densidad de la microf lora nitrificante nitrosa Densidad de la microf lora nitrificante ntrica Actividad biolgica de la microf lora proteoltica Actividad biolgica de la microf lora amonificante Actividad biolgica de la microl lora nitrificante nitrosa Actividad biolgica de la microf lora nitrificante ntrica Anlisis de la covarianza...

130 134

138 142 158 162 166 170 184

IV U VI VII 7.1. 7.1.1. 7.1.2. 7.1.3. 7.1.4. 7.1.5. 7.1.6. 7.1.7. 7.1.8. 7.1.9.

DISCUSION CONCLUSIONES BIBLIOGRAFIA APENDICE Medios de cultivo y reactivos Extracto de tierra Solucin salina de Winogradsky Solucin de oligoelementos Medio para microflora total Medio para microorganismos proteolticos Medio para microorganismos amonificantes Medio para microorganismos nitrificantes nitrosos Medio para microorganismos nitrificantes ntricos Reactivo de Nessler

186 222 227 260 261 261 261 262 262 262 263 263 264 264 264

7.1.10. Reactivo de la difenilamina sulfrica....

INTRODUCCION

Los elementos

qumicos

fluyen

cclicamente

entre

los

seres vivos y la parte abitica de los ecosistemas. Las rutas por las que discurren los distintos elementos se agrupan bajo el nombre de ciclos biogeoquimicos <Hutchinson, y son esenciales para la circulacin de lo que soporte los travs de los como bjhite La ciclos 1979). mayora de las etapas que en conjunto constituyen los biogeognmicos tienen lugar en el suelo, 1968), y estrato estn terrestre (Ghilarov, ecosistemas por global de se pueden de la 1944 y

1950)

nutrientes a considerar y

un mecanismo

vida (Tolba

inferior del ecosistema mediadas por

poblaciones de microorganismos que

obtienen la

energa y los nutrientes necesarios para su desarrollo de las sustancias orgnicas presentes en el medio telrico. A travs de sus procesos un papel metablicos la microf lora en la circulacin edfica desempea cclica de los La las importante

nutrientes del suelo y comunidad microbiana que caractersticas comunidades Las

cierra los ciclos biogeoquimicos. habita en un de las suelo depende de

del mismo y

interacciones con otras

de seres vivos, manteniendo una interdependencia directas el e indirectas, entre de ambas los

muy estrecha con la comunidad vegetal que se desarrolla all. interacciones, comunidades microorganismos resaltan papel regulador

en la comunidad macroftica. la microecologa del suelo es

Un objetivo fundamental de en su composicin, en su

profundizar en la descripcin de las comunidades microbianas, dinmica y en las interacciones con la vegetacin y el medio.

1.1. La materia orgnica en el suelo La materia orgnica condiciona muchas de las propiedades del medio edfico que influyen en el sistema sueloplanta y por tanto afecta al crecimiento y desarrollo de la microflora telrica y de la comunidad vegetal (Fresquez y Lindemann, 1982>. La mera presencia de la materia orgnica en el suelo tiene un efecto muy beneficioso debido a que favorece el desarrollo de la estructura del suelo, adems la dinmica y las transformaciones de sus componentes representan el factor ms importante de influencia del medio edfico sobre la vegetacin. Tate (1985) destaca entre los efectos de la materia orgnica sobre las caractersticas del suelo: el aumento de la capacidad de cambio catinico, la combinacin con las arcillas que incide en la estructura del suelo, la actividad quelante de metales, la capacidad tampn que amortigua las variaciones de pH y el aporte de nutrientes para la microflora. El contenido de materia orgnica del suelo est determinado por dos procesos, aporte de materiales orgnicos y descomposicin microbiana. La entrada de materiales orgnicos depende de la incorporacin de restos y desechos vegetales: hojas, ramas, races, exudados radicales y productos del lavado de las hojas (Tiessen et al., 1984), as como los de origen animal, cadveres y excrementos. Hay numerosos organismos telricos que catabolizan los complejos de origen orgnico, pero los hongos y las bacterias desempean el papel principal. Por tanto la materia orgnica edfica es una fuente vital de energa y de elementos biognicos esenciales como carbono, nitrgeno, fsforo y

4
azufre (Jenny, 1980 y Sparling et al.. el crecimiento de los microorganismos. 1982) necesarios para

La degradacin completa de los sustratos orgnicos discurre a travs de un proceso mineralizador que se caracteriza por la transformacin de los restos animales y vegetales en formas inorgnicas que utilizan las comunidades vegetal y microbiana (Dalal, 1979). La acumulacin de materia orgnica y de nitrgeno se relaciona con una actividad microbiana ms intensa que disminuye segn desciende el aporte exgeno de dichos materiales (Stroo y Jencks, 1982). Una consecuencia de gran valor ecolgico es la aparicin de molculas orgnicas muy estables, las sustancias hinicas, que resisten en gran medida la accin de la mayora de los organismos telricos mineralizadores. Los compuestos hmicos muestran un rango variable de susceptibilidad a la accin degradativa de los microorganismos. Los cidos hmicos y flvicos presentan una Vida media prolongada, cuantificable en dcadas, centurias o milenios (Lynch, 1984). La materia hinica es imprescindible para el crecimiento y desarrollo de los microorganismos y de las plantas (Khandelwal y Gaur, 1970), supone una fuente de factores de crecimiento que incide en la actividad microbiana, adsorbe metabolitos inhibidores (Martin et al.. 1976) y aumenta la capacidad de cambio del suelo (Stevenson, 1965). Tisdal y Oades (1982) sealan que los cidos hmicos interaccionan con las arcillas y forman agregados estables. Tales complejos contribuyen al desarrollo de la estructura del suelo, pues definen el tamao y la disposicin de las partculas y de los poros, factores esenciales para la actividad de las comunidades de microorganismos y de plantas. La microf lora edfica y la comunidad macroftica tambin intervienen en la evolucin de la matriz del suelo. Las races de las plantas y las hifas de los hongos se asocian con arcillas y originan agregados de dimetro superior a lOiim

5 (Tisdal y Oades, 1982). Las bacterias, las races y las hifas producen polisacridos, principalmente muclagos, que forman complejos estables con las partculas del suelo (Chesire st al.. 1983). Esta accin cementante compensa el efecto de disgregacin y de dispersabilidad de los compuestos orgnicos cidos liberados por los hongos, por el sistema radical de las plantas y por los microorganismos rizosfricos (Reid y Goss, 1982; Reid st al., 1982).

1.1.1. Organizacin de las comunidades microbianas edficas que degradan la materia orgnica La produccin de nutrientes a partir de la materia orgnica depende en gran parte de la comunidad microbiana capaz de colonizar y desarrollarse sobre los restos orgnicos. En la organizacin de las comunidades microbianas edficas intervienen dos factores fundamentales: las diferencias en las estrategias de crecimiento y reproduccin y la tendencia de las comunidades a cambiar en funcin del tiempo. Las diferencias en las estrategias de crecimiento implican que los microorganismos manifiestan comportamientos distintos para utilizar afinidad elevada por crecimiento muy alta. organismos cuando en el
-

algunas fuentes de recursos, bien una el sustrato o bien una tasa de La primera condicin favorece a los suelo hay escasez de restos orgnicos

y la segunda potencia el desarrollo de la microflora en caso contrario, cuando se alcanzan niveles importantes de sustratos orgnicos (Struwe y Kjoller, 1986). La descomposicin progresiva de un conjunto de sustratos se asocia con su colonizacin por una comunidad de microorganismos que encuentran en la fuente de nutrientes su nicho, por lo tanto ste se define en virtud de la naturaleza

6 qumica de la materia orgnica y de las caractersticas del

medio fsico. Ambos factores evolucionan con el tiempo pudiendo variar de forma continua o intermitente (Swift y Heal, 1986). Los compuestos orgnicos que representan a la vez la base sobre la que se desarrollan los microorganismos y la fuente de energa y nutrientes se pueden compartimentar y constituir unidades de sustratos con limites no siempre ntidos. Por consiguiente, la materia orgnica edfica constituye un mosaico de unidades de sustrato colonizadas por comunidades de composicin diferente. La biodegradacin de cualquier complejo orgnico, a pesar de la heterogeneidad de compuestos que supone, es casi invariable, y aunque los materiales iniciales sean muy diversos y por ello las primeras etapas desintegradoras distintas, los pasos sucesivos implican un rango estrecho de productos de estructura simple y de rutas metablicas parecidas en muchos casos. Segn discurren las etapas degradativas se observan variaciones en las comunidades como reflejo de una seleccin de los organismos descomponedores (Wood y McCrae, 1978) y dicha seleccin conduce a un descenso gradual de la diversidad de especies en la estructura de las comunidades y a la aparicin de un mosaico de niveles de descomposicin (Newell, 1984). El sustrato inicialmente est constituido por compuestos

orgnicos de composicin compleja que se degradan por la accin conjunta de toda una serie de actividades enzimticas que catalizan reacciones diferentes (Burns, 1983). En la naturaleza son pocos los organismos que poseen la variedad necesaria de capacidades metablicas para mineralizar sustratos potenciales de estructura tan compleja. Por consiguiente en la mayora de las ocasiones el proceso degradativo es la suma de las actividades funcionales de

7 muchos organismos que colonizan un sustrato orgnico. Adems

las capacidades catablicas no son especficas y para cualquier reaccin hay numerosos organismos fisiolgicamente equivalentes. Los miembros de una comunidad con frecuencia establecen interacciones que modifican su eficacia para descomponer un sustrato. Las relaciones entre organismos son complejas y se pueden manifestar en un aumento de la actividad degradativa (Levi st al., 1968) o por contra en una inhibicin del proceso (Swift, 1978). Se han observado relaciones de complementariedad enzimtica (Selby. 1968), de sinergia entre enzimas (Wood y McCrae, 1978) y de regulacin enzimtica (Elancbette y Shaw, 1978). Las variaciones en la estructura y composicin de las comunidades que mineralizan la materia orgnica inducen alteraciones en la tasa de descomposicin, lo que representa una fuente de inestabilidad en las caractersticas del reciclado de los nutrientes de un ecosistema (Swift y Heal, 1986).

1.1.2. Influencia del medio abitico en la degradacin de la materia orgnica Las caractersticas del medio fsico y la naturaleza

qumica de los sustratos orgnicos condicionan la estructura de la comunidad microbiana mineralizadora y por tanto determinan el proceso degradativo de la materia orgnica. Los dos factores mantienen una relacin jerrquica respecto a la tasa de descomposicin. El medio fsico incide en la actividad catablica de la mcroflora mientras que la naturaleza de la fuente de compuestos orgnicos y las variaciones en la comunidad de microorganismos tienen un rango de influencia ms restringido (Swift y Heal, 1986). Los factores ambientales definen las caractersticas del medio en que se degrada la materia orgnica. Tales factores ejercen numerosos efectos interdependientes sobre la

actividad microbiana del suelo (Griffn. 1972) y modifican la tasa de crecimiento de la microflora as como su metabolismo e influyen en la colonizacin y en las transformaciones de los compuestos orgnicos. Las relaciones entre los factores ambientales son muy complejas y en ocasiones la valoracin de sus efectos sobre las poblaciones de microorganismos es difcil e induce a interpretaciones contradictorias que hacen necesario un conocimiento ms profundo de las interacciones entre los factores que alteran la actividad microbiana. Alexander (1980)
que modifican

considera que

los factores principales

sustancias orgnicas

la mineralizacin de las

aadidas al suelo son la humedad, la temperatura, el nivel de oxgeno, el pH y los elementos minerales del suelo. Los metales como el Cu <Kendrick, 1962) o el Zn (Strojan, 1978) o combinaciones de diversos metales (Bhuiya y Cornfield, 1972) inducen la acumulacin de la materia orgnica y un descenso de la actividad microbiana. El grado de inhibicin de la microflora que mineraliza los restos orgnicos varia segn la naturaleza de los elementos minerales presentes en el suelo (Tyler, 1981). Los sustratos orgnicos se pueden asociar con los minerales del suelo y formar compuestos organominerales que estabilizan la fraccin orgnica (Tiessen st al., 1984). Duchaufour (1976) detecta el efecto estabilizador del carbonato clcico y Tisdal y Oades (1982) observan un fenmeno similar con los xidos de
hierro.

Las transformaciones de los sustratos carbonados son ms rpidas en suelos neutros o prximos a la neutralidad. Ivarson (1977) indica que, cuando se aade limo a suelos cidos y se eleva el pH a valores que oscilan entre 6 y 7, la respiracin microbiana edfica aumenta del orden de dos a tres veces. En general se puede afirmar que a pH cido predominan los hongos, mientras que las bacterias son mas

competitivas en suelos neutros (Alexander, 1980). La humedad del suelo influye sobre la actividad de la microflora telrica y es uno de los factores que ms interviene en el control de la produccin de la biomasa en el medio edfico. La relacin entre el estado funcional de las comunidades de microorganismos y la humedad se debe a que sta determina la cantidad de oxgeno disponible para el desarrollo de la microflora edfica, pues cuanto mayor es la humedad del suelo menor es el oxgeno disponible (Allison, 1973). Las comunidades de microorganismos mineralizadores presentan respuestas muy diversas ante los niveles de agua del suelo, en funcin de las condiciones que definen el rea donde se desarrolla cada comunidad (Knight y Skujins, 1981). Wilson y Griffin (1975) encuentran poblaciones microbianas muy activas entre 8 y 30 bar y segn desciende la humedad detectan una actividad respiratoria menor. Los mismos autores en cultivos bacterianos puros observan que a partir de 3 bar disminuye rpidamente la capacidad metablica y a -20 bar es imperceptible. Las poblaciones microbianas responden a las variaciones en el contenido de agua a niveles tan bajos como -106 y -88 bar (t.Jildung st al., 1975), pero la humedad,
siempre que se mantenga por encima de un valor mnimo, no

ser un condicionante critico (Miller y Johnson, 1964). Los compuestos orgnicos se mineralizan mejor bajo condiciones de aerobiosis que en ausencia de oxgeno
(Gottschal, 1986), aunque (Bouwer se han detectado algunas y

excepciones en Tiedje, 1984).

la descomposicin de

compuestos aromticos y
1983; Shelton

alifticos halogenados

y McCarty,

La alternancia de ciclos hmedos y secos afecta tambin a la degradacin de la materia orgnica. Sorensen (1974) y Lund y Gokosoyr (1980) sealan un incremento en la oxidacin de la fuente de sustratos orgnicos en tales condiciones.

10

Otro factor ambiental que incide en la velocidad degradativa de los materiales orgnicos es la temperatura. Sain y Broadbent (1977) observan que la paja de arroz se oxida mejor segn asciende la temperatura desde 8C hasta encuentran que la tasa 250C y Choudhury y Cornfield (1978) de carbono mineralizado aumenta con la temperatura hasta cerca de los 700C. Jenkinson y Ayanaba (1977) observan una tasa superior del proceso degradativo en climas tropicales respecto a suelos localizados en climas fros.

1.2. Ciclo del nitrgeno El nitrgeno es uno de los macronutrientes en circulacin ms significativo en ecosistemas terrestres, tanto desde un punto de vista ecolgico como econmico. Junto con el agua y el fsforo, es el principal factor limitante de las plantas (Vitousek eit al., 1982) y, aunque elementos como el potasio y el fsforo aumentan la productividad primaria en
algunas circunstancias (Wigbt y Black, 1979), el nitrgeno es

el nutriente que ms eleva la produccin primaria (Risser y Parton, 1982). En la esfera econmica resalta la importancia del nitrgeno porque de l depende en gran parte la obtencin de alimentos, piensos para el ganado, fibras naturales y combustibles. En cualquier caso el nitrgeno
hidrosfera y

es

fundamental

en la

litosfera,

atmsfera,

biosfera. La

litosfera

supone la reserva ms importante ya que se concentra principalmente en las rocas gneas (16200x10v Tg). En la atmsfera se encuentra en proporcin inferior, mientras que en la hidrosfera y en la biosfera aparece en cantidades muy pequeas (Stevenson. 1982). Estos reservorios son una fuente de nitrgeno inerte y su biodisponibilidad es baja. La mayora de los seres vivos slo pueden utilizar el nitrgeno

11 combinado, por eso la fraccin orgnica edfica supone el potencial de nitrgeno disponible ms elevado, que Jenkinson (1990) cifra en 1.5xl0~ Tg. A pesar de que la mayora de los ecosistemas terrestres tienden a conservar un ciclo del nitrgeno cerrado, las prdidas de nitrgeno con frecuencia son importantes (Vitousek et al.,1982). Resulta difcil cuantificar estas prdidas, pues a las dificultades propias de los anlisis se une la variabilidad a lo largo del tiempo, debida a los cambios climticos y a la sucesin. Los datos que cuantifican las prdidas de nitrgeno son dispares. Rosswall y Panstian (1984) consideran que por volatilizacin se pierden anualmente 13 23 Tg, por lixiviacin alrededor de 30 Tg li/ao, a travs de los xidos de nitrgeno originados en la desnitrificacin 1 44 Tg N/ao y por erosin 2 20 Tg li/ao. Sderlund y Svenson (1976) estiman que por volatilizacin se pierden 113 244 Tg N/ao, por lixiviado 18 33 Tg li/ao y por desnitrificacin 107 161 Tg li/ao.
-

Las

transformaciones

del

nitrgeno

en

la

biosfera

consisten en una serie de reducciones y oxidaciones sucesivas entre los estados de oxidacin 3 y +5, que convierten el nitrgeno molecular en formas netabolizables por las plantas, animales y microorganismos. A nivel edfico en torno al 95% del nitrgeno que circula al ao se localiza en el sistema
suelomicroorganismosplantas (Rosswall, 1976).

Las

etapas son:

principales Fijacin,

que

constituyen

el ciclo

del y

nitrgeno

mineralizacin,

nitrificacin

desnitrificacin (fig. 1.1).

La fijacin biolgica es una propiedad exclusiva de ciertos procariotas. unos de vida libre y otros que viven en asociaciones simbiticas. El proceso consiste en una reduccin del nitrgeno atmosfrico hasta amoniaco,

12 asimilable por los st microorganismos en forma orgnica como

glutainina (Wolk

importante

al., 1976). Constituye la fuente ms de nitrgeno combinado de origen natural en los

ecosistemas (Sderluad y Svenson, 1976) que supone un aporte que varia entre 139 Tg li/ao (Sderlund y Rosswall, 1982) y 175 Tg N/afIo (Sevillano y Rodrguez-Barrueco, 1987) y junto con la fotosntesis constituye las etapas claves en produccin de los ecosistemas (Worthington, 1975). la

Vol a:III racin 4

*1

arcillas

Fig. 1.1. Ciclo del nitrgeno

13

deposita NH4~ y NO3- (Sasser y Binkley, 1989), y la adsorcin gaseosa de NR3 son otras vas de entrada del nitrgeno atmosfrico en el medio telrico, que introducen en los ecosistemas desde cantidades insignificantes hasta 50 kg N/ha.ao, en virtud de la situacin geogrfica y de la proximidad a la fuente de nitrgeno (Stevenson, 1986). Los depsitos vegetales y restos orgnicos, esencialmente de animales, representan desechos un aporte

La precipitacin,

que

considerable de nitrgeno y mantienen el balance del ciclo en el suelo. Los sustratos orgnicos sufren un largo proceso de degradacin, mediado por la microf lora edfica, que culmina con la transformacin de los restos orgnicos en nitrgeno inorgnico asimilable por los vegetales y por los propios microorganismos (Dalal, 1979). Este proceso mineralizador, esencial para los vegetales y a menudo factor limitante de la productividad primaria (Gillespie y Chaney, 1989), lo realiza la comunidad microbiana telrica, aunque no todas las transformaciones de los compuestos nitrogenados estn reguladas por microorganismos. Bernhard-Reversat (1977) indica que la cantidad de nitrgeno mineral que se produce cada ao oscila entre el 5 y el 10% del nitrgeno total del suelo, mientras que Alexander (1980) calcula una tasa de transformacin entre el 1 y el 4%. Smith et al. (1986) sealan que en suelos no fertilizados el nitrgeno necesario para la produccin primaria se obtiene principalmente a travs de la mineralizacin. Por ello esta etapa del ciclo del nitrgeno a nivel edfico es de vital importancia para la produccin vegetal. En el suelo existe una ruta simultnea e inversa a la mineralizacin que es la inmovilizacin de]. nitrgeno minera]. (Cochran st al.., 1980). La importancia de esta va radica en que los microorganismos hetertrofos utilizan el nitrgeno mineral y al competir con la comunidad vegetal disminuyen la

14 fertilidad del suelo. Smith y Patrick debido a la inmovilizacin, casi (1983) observaron que, aadido al

todo el N~NH4e

suelo se transforma en Norgnico despus de 56 das y datos similares encuentran Power y Legg (1984>. Hadas st al. (1989) observan un descenso del 13 26% en la mineralizacin a causa de la inmovilizacin y Hsieh (1988) indica que en zonas pantanosas el nitrgeno aadido en forma de nitrato amnico es inmovilizado durante ms de ocho meses.

Las transformaciones biolgicas del nitrgeno a travs de la mineralizacin e inmovilizacin constituyen una parte crucial del ciclo del nitrgeno en el suelo y suponen un flujo continuo entre formas orgnicas e inorgnicas de nitrgeno. Como consecuencia inmediata de la mineralizacin del nitrgeno orgnico se produce amonio, proceso que algunos autores denominan amonificacin. La ruta mineralizadora, segn las circunstancias del medio, puede continuar con una segunda etapa, nitrificacin, tambin biolgica (Azhar st al., 1986a), en la que el amonio (estado de oxidacin -3). forma relativamente inmvil de nitrgeno, se oxida a travs del paso intermedio de nitrito (estado de oxidacin +3), hasta nitrato (estado de oxidacin +5), forma aninica ms mvil. El paso de nitrgeno orgnico a nitrgeno amonio es la etapa limitante de la velocidad de conversin de nitrgeno orgnico en nitrgeno nitrato <Stanford aL al., 1975). La
nitrificacin es una va oxidativa que los microorganismos

realizan en dos etapas, pues no poseen el juego enzimtico completo capaz de producir nitrgeno nitrato a partir de nitrgeno amonio. En una primera etapa el amonio se oxida hasta nitrito y, posteriormente, el nitrito es oxidado a
nitrato. Ambos procesos son exergnicos y suministran energa tanto a la microflora a los nitrificante nitrosa, que produce que nitrito, como originan microbios nitrificantes ntricos,

nitrato. Mientras que la ltima

etapa ocurre en un

15

solo paso,
varios

la oxidacin

de N113

a NO2

sucede a travs

de

compuestos intermedios no identificados perfectamente

que difieren en su estado de oxidacin (Bremner y I3lackmer, 1981). En la nitrificacin tambin se origina N20 en un proceso biolgico que tiene lugar cuando se forman ambientes microaerofilicos (Ritchie y Nicholas, 1974; Vitousek et al., 1982). Las prdidas de nitrgeno par este camino pueden ser ms importantes que las causadas por la desnitrficacin (Bremner y Blackmer, 1981). Aunque la fuente principal de nitrgeno asimilable por las plantas es el nitrato (Wollum y Davey, 1975), los vegetales tambin utilizan el amonio como fuente de nitrgeno. Por ejemplo, en bosques de clima templado se ha observado que la forma de nitrgeno mineral que predomina en el suelo es el amonio (Keeney, 1980) y los rboles obtienen el nitrgeno como NNH4-- mediante la asociacin con hongos heterotrfos (Adams y Attiwill, 1982) en clara competencia con los microorganismos, incluida la microflora amonificante que emplea el sustrato de la mineralizacin como fuente de nitrgeno y de carbono. La competencia por el amonio se ampla con la poblacin microbiana nitrificante, mayoritariamente auttrofa (Jones y Ricbards, 1977), que lo utiliza como sustrato. Como consecuencia, el tamao y la tasa de renovacin de la biomasa microbiana influyen en la disponibilidad del nitrgeno para el crecimiento de las plantas (Andersson y Domsch, 1980). Los niveles de nitrgeno amonio tiles para la comunidad vegetal y para la microf lora
edfica dependen adems de varios procesos de naturaleza no

biolgica. Las arcillas fijan en las superficies interlamelares cantidades significativas de N-NH4~ que 2t Mg2- y Na-. El amonio reemplaza a cationes como Ca retenido no es susceptible de escapar del ecosistema por lixiviado e incluso representa un depsito de nitrgeno mineral que supone un aporte continuo de este elemento para el desarrollo de las plantas (Nommik y Vahtras, 1982).

16
Simn-Sylvestre y Calvet (1987) indican que el amonio

adsorbido por las arcillas no es sustrato para la nitrificacin y por tanto las arcillas modifican la cintica de este proceso. La unin electrosttica del nitrgeno amonio con las arcillas y con los coloides del suelo dificulta las prdidas por volatilizacin (Stevenson, 1986> que son importantes en suelos secos y bsicos, donde el equilibrio amonioamoniaco se desplaza hacia la forma neutra (Freney a al., 1981). La volatilizacin del amoniaco puede alcanzar basta un 47% del nitrgeno aadido al suelo en forma de fertilizante (De Datta, 1987).
El in nitrato que se produce en la nitrificacin, a

diferencia del amonio que se origina en la mineralizacin, no se une a las arcillas del suelo, por lo que constituye una
forma de nitrgeno mineral mvil que por lixiviado sale del

ecosistema y en ocasiones supone prdidas cuantiosas (Gillespie y Chaney, 1989). El nitrato es objeto de la actividad biolgica de otros microorganismos que habitan en el suelo. Hlackburn (1983) registra la existencia de procariotas que poseen el equipo enzimtico necesario para
reducir NO3 dando propios macrfita. lugar a NH3 que en es inmovilizado por con la los una

microorganismos

competencia

comunidad

Otros microorganismos

edficos llevan a cabo

reduccin desasimilatoria del nitrato que origina amonio, pero que en este caso no se incorpora a la estructura celular, sino que se excreta al medio favoreciendo la dinmica del nitrgeno amonio en el suelo. La reduccin desasimilatoria, a diferencia del proceso asimilatorio, no discurre en condiciones aerobias ni est regulada por los niveles de amonio y adems supone un aporte suplementario de energa en una ruta acoplada con la produccin de ATP (Yordy y Ruoff, 1981). La va desasimilatoria no solo suministra nitrgeno mineral al ecosistema sino que tambin reduce el nitrito hasta amonio y contribuye a disminuir los niveles de este in que en proporciones elevadas ejerce un efecto txico

17 (Yordy y Ruoff. 1981). El nitrito es una forma fcilmente

inmovilizable

del

nitrgeno

mineral

del

suelo

por

su

capacidad de reaccionar con la materia orgnica (Azhar st al.., 1986b), en especial con los compuestos fenlicos. Tales reacciones tienen lugar en todo tipo de suelos pero se ven favorecidas por un contenido elevado de materia orgnica y por la acidez del suelo (Smith y Chalk, 1980). Estos datos sugieren que la nitrificacin puede desempear un papel importante en la inmovilizacin del nitrgeno mineral del suelo en formas orgnicas que no integran las estructuras celulares, como corroboran Azhar aL al. (1986a), quienes observan, tras abonar un suelo de pradera, que el 55% del nitrgeno amonio aadido es inmovilizado en un plazo de dos meses. En condiciones anaerobias el nitrato puede servir como ltimo aceptor de electrones en la cadena respiratoria, en una reduccin desasimilatoria que genera ATP y que rinde formas gaseosas reducidas de nitrgeno como NO, N20 y N2, que escapan del ecosistema. Esta ruta de reducciones y oxidaciones de las formas minerales de nitrgeno que constituye la desnitrificacin es un proceso biolgico que Payne <1973) esquematiza con la siguiente secuencia como la va ms probable:

Ingrahas (1981) considera como microorganismos desnitrificantes en sentido estricto a aquellos que producen 142 a partir de NO3. Sin embargo hay numerosas bacterias sin la actividad enzimtica necesaria para realizar el ltimo paso y por tanto rinden como producto final N20, que puede escapar del suelo. En cada etapa de este proceso interviene una enzima distinta y son pocos los microorganismos que poseen la capacidad enzimtica para realizar todas las transformaciones, pero en cualquier caso en el suelo se

18

complementan las actividades desnitrificadoras parciales de la mnicroflora y se produce N2 que se libera a la atmsfera. La desnitriticacin y la reduccin desasimilatoria o

fermentacin del nitrato (Eroda, 1975) son dos procesos biolgicos importantes y el predominio de una u otra ruta reductora de nitrgeno nitrato en anaerobiosis depende de factores diversos, pero Tiedje st al. (1982) destacan los niveles de carbono disponible y de aceptores de electrones que hay en el suelo. A concentraciones elevadas de sustratos carbonados y bajas de aceptores de electrones se favorece la reduccin desasimilatoria en perjuicio de la desnitrificacin (Catanzaro st al., 1987). Ratyal st al.. (1988) consideran que entre el 16.8 y el 18.9% del nitrato producido en un suelo se pierde como dinitrgeno. Sin embargo Jagnow y Sbchtig (1983) aprecian que entre el 30 y el 50% del nitrgeno que se aplica como fertilizante se pierde a travs de la desnitrificacin y Mikkelsen (1987) eleva esta tasa hasta el 70%. Si se consideran todas las formas nitrogenadas gaseosas, las fugas se elevan basta 10 kg N ha- ao(Mosier st al., 1986). Este aporte de nitrgeno a la
atmsfera equilibra la prdida que se produce en la fijacin

biolgica del dinitrgeno y de ah la importancia geoqumica de la desnitrificacin. La mayora del nitrgeno molecular atmosfrico ha circulado al menos una vez a travs de la microf lora desnitrificante (Stevenson, 1986). El desarrollo normal de los ciclos biogeoquimicos es imprescindible para la conservacin de los recursos. Cualquier factor que perturbe su integridad destruyendo los mecanismos biolgicos de renovacin cclica induce a la alteracin de los ecosistemas, pues dependen de tales
transformaciones, y puede conducir a situaciones

imprevisibles y, en cualquier caso, no deseables. Actualmente, el hombre altera. directa o indirectamente, la velocidad de los ciclos e introduce otros paralelos con la

19

adicin de sustancias difcilmente biodegradables, rompiendo el equilibrio de los ecosistemas.

1.3. Microorganismos del ciclo del nitrgeno Una caracterstica comn de los ciclos biogeoquimicos a nivel edfico es que los microorganismos desempean un papel fundamental en las numerosas transformaciones que tienen lugar en el suelo. En cada una de las etapas del ciclo del nitrgeno interviene un conjunto de microorganismos de distintas especies, que desarrollan una actividad metablica similar. Esta propiedad permite englobar a los microorganismos implicados en grupos funcionales o fisiolgicos que despliegan su actividad en una etapa determinada. Tales grupos corresponden a las categoras de microorganismos siguientes: fijadores de dinitrgeno o diazotrficos, proteolticos, amonificantes. nitrificantes y desnitrificantes. Citamos los grupos funcionales segn la clasificacin propuesta en la 8~ edicin de Bergeys Manual of Determinative Bacteriology (1974), ya que su nomenclatura es la que se utiliza en las publicaciones actuales sobre temas afines al presente estudio y ste, por otra parte, no pretende profundizar en los datos relativos a las clasificaciones sistemticas de la microflora que puebla el medio edfico. Los microorganismos diazotrficos o fijadores de dinitrgeno atmosfrico constituyen un grupo que ha sido estudiado con gran detalle debido a su significacin ecolgica como responsable de la entrada biolgica de nitrgeno ms importante en los ecosistemas terrestres. Es un

20 grupo muy heterogneo, compuesto por microorganismos de

caractersticas muy diferentes y que desarrollan su actividad

funcional en condiciones distintas. La microl lora diazotrfica comprende organismos de vida libre y otros que actan asociados con plantas. En los primeros encontramos bacterias tanto auttrof es como hetertrofas. Gallon (1980) seala que Chlnrnhii,m Iimicnla, <hrnhnal-ii,m ivennsnm y Rhncin~piri11i.n ruibnim son microorganismos fotoauttrofos que fijan dinitrgeno. Tambin se encuentran microorganismos diazotrficos en la microl lora metanotrofa como MPthy1nRinn~ trirhn~pnriiim (Chen y Yoch, 1988), M~l-hy1nrnr<-iic capsulatns y Mnthy1nsinii~ sporinm (Colin Murrel, 1988). Entre la microf lora hetertrofa aparecen fijadoras de dinitrgeno aerobias obligadas caso de Azntnhprl-pr sp. (Drozd y Postgate. 1970) que, en contraste con otros
Peij~rinrkia,

fijadores de Derxia y
de a

cistos dotados 1969)

como Azntnmnnaq, es capaz de producir una pared suplementaria (Lin y Sadoff,

Azntphprtpriprppe

la

familia

resistentes

la desecacin.

El

gnero fln~i-ricii.im en los

rene a microorganismos suelos bajo condiciones y Wilson, 1949) pero

diazotrficos muy frecuentes tambin hay bacterias

de anaerobiosis estrictas (Rosenblum anaerobias y del gnero Bactilus (Line

facultativas fijadoras como las Loutt, 1971). Entre las cianobacterias,

grupo

primitivo de organismos.

podemos destacar Nostoc, Aulosira y Anabanna (Rinaudo st al..,

1971). Nnstnc sp. establece simbiosis con Cycadaceae (Tredici st al., 1989) y Anabaena que habita en los frondes de Aznhla
y forma una simbiosis de gran impacto agronmico en los

arrozales los

de

China, tambin

ya

que

supone

una

de

las

fuentes

principales de nitrgeno para los cultivos (Chu,

1979). Entre

lquenes

existen

sistemas

diazotrficos,
Castro aL al.,

estudiados por numerosos autores (Bermdez de

1991), como Lobarta pulmonaria que tapiza las partes inferior

21 y
un

media de los troncos de

aporte significativo

hayedos y robledales
de nitrgeno en

y representa
los bosques

caducifolios de zonas templadas (Mller aL al., 1989). La relacin ms estudiada y que mejor se conoce es la establecida entre leguminosas y Rhiznbium, de cuya actividad simbitica, segn Hardy y Holsten (1972), surgen 90 millones de toneladas de nitrgeno cada ao, aunque el grado de efectividad de esta asociacin vara con numerosos factores (Campbell, 1985). Existen adems gran nmero de simbiosis entre plantas criptgamas y fanergamas con bacterias, como la formada entre noleguminosas y actinomicetos del gnero Ejrankia (Becking, 1974) que frecuentemente se desarrolla en suelos pobres donde actan como sistemas colonizadores (Bermdez de Castro y Schmitz, 1990), aunque otros autores les confieren un papel pionero (Campbell, 1985). Los microorganismos proteolticos fragmentan las protenas en unidades menores hasta aminocidos libres (Anderson, 1978). Esta etapa se puede considerar como un primer paso dentro del complejo proceso de la degradacin de la materia orgnica, en el que interviene una amplia variedad de microorganismos con actividades enzimticas dispares y especficas para cada sustrato orgnico (Lada y Jackson, 1982). La microf lora proteoltica acta en las etapas iniciales de la mineralizacin de los compuestos orgnicos nitrogenados y a continuacin participan los microrganismos amonificantes que rinden amonio como producto final del proceso degradativo (Anderson. 1978). Hay que tener en cuenta, adems, que proteolisis y amonificacin son dos procesos sucesivos que ti siti estn asociados, pues existen estirpes de microorganismos que son, a la vez, proteolticos y amonificantes. Alexander (1980) seala actividad proteoltica en hongos, bacterias aerobias, anaerobias estrictas y facultativas, lo que refleja un grupo funcional
muy diverso y heterogneo. En especies de
Pgpn~-~mnnpc

Bacillus.

(lnstridiim,

Serratia y Mirrnrnrriis

hay bacterias

22
que degradan fcilmente protenas puras (Alexander, 1980). En

los gneros Altprnaria, A~p~rgi1lii~, Rhiznpus hay hongos que presentan (Garret, 1963).

Munor, enzimas

Ppn---illiiim

proteolticos

Los amonificantes, que liberan amonio como producto final de la mineralizacin, constituyen un grupo fisiolgico que, como los anteriores, es muy dispar. Son numerosos los hongos y bacterias que atacan alguna forma de nitrgeno orgnico liberando amonio y la velocidad de descomposicin de los sustratos nitrogenados vara con los gneros y especies (Clarck, 1967). La mayora de las bacterias hetertrofas del
suelo liberan amonio cuando utilizan compuestos orgnicos 1986). nitrogenados como fuente de carbono (Alef y Kleiner,

Los microorganismos amonificantes son tanto aerobios como anaerobios y hay algunos capaces de formar esporas de resistencia viables tras periodos adversos, bien por falta de humedad, carencia de nutrientes o condiciones desfavorables de aerobiosis o de anaerobiosis (Alexander, 1980).

Focht
bacterias reducidas

y
de

Verstraete
y nitr6geno y

(1977)
hongos

sealan
pueden

que
y

numerosas
formas

hetertrofas

oxidar

producir nitrito

nitrato. Sin

embargo las bacterias nitrificantes que predominan en la naturaleza son auttrofas (Kelly, 1978) y quimiol.ittrofas. Las bacterias nitrificantes. tanto nitrosas como ntricas,
pertenecen amonio hasta a la de cinco nitrgeno familia gneros nitrito y Nttrobacteriaceae, que oxidan el con microorganismos con de microorganismos nitrgeno

cuatro

hasta nitrato (tabla 1.1). Entre los primeros, NitrngnmnnaR sp. tiene actividad superior, mientras que en el segundo caso Nitrnh~r1-pr sp. son las bacterias ms activas. Numerosos autores indican que las bacterias
responsables

gneros que oxidan

ste ltimo

nitrificantes

auttrofas

son

las

nicas

de este proceso oxidativo en

la mayora de los

23
ecosistemas (Kelly, 1978; Alexander, 1980). Solo en aquellos

hbitats donde el crecimiento autotrfico est inhibido, la microf lora hetertrof a puede aumentar la concentracin de nitratos en el suelo. Las bacterias de la familia Nitrnhsrl-oriarpae, a diferencia de los microorganismos del grupo aaionificante, son aerobias formas de resistencia. TABLA 1.1. y en ningn caso se conocen

Gneros principales
nitr ficantes

de bacterias

Oxidantes de amonio
Mi trn~nmnnpc~
Ni

Oxidantes de nitrito
Ni trnhprtpr

trngnhnl

is

MI.trospi.ra
Ni trnrnrri,c

Ni trnsn~pi

ra

Ni
Ni

trngnrnrr,,~ trngnvi brin

Njipina

La reduccin de los compuestos oxidados de nitrgeno hasta formas gaseosas que pueden salir del ecosistema es un
proceso Segn que solo Jeter e realizan las bacterias (Ingraham, de ms 1981). de 70 Ingrahaz (1979) las bacterias

gneros son capaces de reducir alguna forma de nitrgeno combinado. La mayora de las bacterias reductoras nitrgeno son aerobias facultativas, pero tambin las hay anaerobias estrictas (Van microorganismos
hetertrof os,

Gent-Ruyters st al.., 1975)Los desnitrificantes son fundamentalmente

pero algunas especies son auttrofas

(Firestone, 1982). La microf lora desnitrificante, al igual que los grupos fisiolgicos antes citados, es muy heterognea, con microorganismos que pueden desarrollarse en circunstancias muy diferentes. Es importante recordar que existen microorganismos de los gneros mencionados anteriormente que renen el juego

24 enzimtico indispensable para realizar ms de una actividad funcional y por tanto forman parte de varios grupos fisiolgicos, por lo que son bacterias que pueden desempear un papel clave en la dinmica del ciclo del nitrgeno. Es el caso de Azn~piri11iim, que agrupa bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico como A. fl.pafarum que adems puede actuar como bacteria desnitrificante (Neyra aL al.., 1977). flradyrhiznhiiim japnninim es diazotrfica y puede crecer utilizando el hidrgeno como fuente de energa (Kimou y Drevon, 1989) y tambin manifiesta una actividad reductora de compuestos oxidados de nitrgeno (Zablotowicz st al., 1978). BaniJJ.ns sp. suma la actividad amonificante a la accin proteoltica y Garca (1977) considera que son las bacterias que ms contribuyen al proceso desnitrificante en ambientes naturales. Otro ejemplo similar es Pspndnmnnas sp., que comprende bacterias muy abundantes en el suelo, sobre todo en la rizosfera, con especies que se distribuyen en los grupos de microorganismos proteolticos, amonificantes y
desnitrificantes. Por ltimo se debe mencionar <lnstridiiim

sp. que agrupa bacterias anaerobias tambin muy abundantes en el suelo en condiciones normales (Tiedje st al., 1984). A este gnero pertenecen microorganismos fijadores de nitrgeno, hay otros con actividad mineralizadora muy intensa capaces de fermentar
amonio, e incluso

carbohidratos, protenas
tambin se

y de

liberar
bacterias

encuentran

desnitri 1 icantes.

1.4. Influencia del medio abitico en el ciclo del nitrgeno Muchos factores abiticos que definen las
en la

caractersticas de

los ecosistemas terrestres inciden

circulacin y en las prdidas de nutrientes determinando autorregulacin de los ciclos biogeoquimicos.

la

25 La fijacin del nitrgeno atmosfrico es un proceso que realizan los microorganismos poseedores de la enzima nitrogenasa que sufre una inhibicin irreversible cuando se expone a la accin del oxgeno (Wong y Burris, 1972). Los microorganismos diazotrficos que obtienen energa mediante un metabolismo aerobio superan este problema desarrollando sistemas protectores que les permiten mantener la enzima en un ambiente anaerobio <Vjeisz y Sinclair, 1987; Silvester aL
al., 1988). Este problema no se plantea con la microf lora

reductora del nitrgeno atmosfrico anaerobia obligada, como <lngI-ridi.imn, que solo fila nitrgeno en condiciones anaerobias (Knowles, 1978). Magdoff y Bouldin (1970) estudiaron este proceso en suelos encharcadas y sealaron que la fijacin aerobia y la anaerobia son perfectamente compatibles en el mismo suelo, pues se forma un mosaico de microambientes aerobios y anaerobios que permite el desarrollo de ambas microl loras. Los mismos autores reflejan la necesidad de una fuente de energa abundante para que se realice la actividad diazotrfica. En esta lnea Child (1981) indica que los microorganismos fijadores metabolizan grandes cantidades de carbono orgnico, mientras que Blackburn (1983) observa que los fijadores libres fottrofas son reductores muy eficaces y Davey (1983) detecte que la tase de fijacin de las cianobacterias en oscuridad se reduce del orden de 100
veces
-

El

intervalo

idneo

de

pH

para

los

microorganismos

diazotrficos es amplio, aunque en general se admite que la fijacin libre est inhibida a pH cido (Evans st al., 1980; Francis, 1982). Velasco y Lozano (1979) en estudios sobre
cambios sinecolgicos de la microflora ante un telrica observan que descenso del pH predomina C1n~1-ridi~,m frente a Azntnhart~r, pues la tolerancia del primero a la acidez

permite su proliferacin, mientras que Azotoharter requiere suelos prximos a la neutralidad (Granhal, 1981).

26 Como vimos en el apartado 3. la microf lora edfica que degrade los compuestos orgnicos para rendir nitrgeno mineral constituye un grupo complejo, el ms heterogneo de todos los que intervienen en el flujo de nitrgeno en el suelo. Por esto la actividad mineralizadora se manifiesta en condiciones ambientales muy diversas, aunque por supuesto la efectividad del proceso oscilar segn los microorganismos predominantes y las circunstancias del hbitat en que se localizan. La degradacin de los sustratos proteicos varia segn la temperatura del medio. OBrien (1972) registra cambios significativos en la actividad proteoltica que se incrementa del orden de tres veces cuando la temperatura se eleva de 200C a 37oC. El sustrato tambin determina la accin proteolitica de los microorganismos, como sugieren Gutirrez Maero y Bermdez de Castro (1983) cuando estudian las fluctuaciones de los grupos funcionales del ciclo del nitrgeno y observan que la actividad proteoltica aumenta con la concentracin de materia orgnica. Risser y Parton (1982) consideran que la humedad y la temperatura son los factores abiticos primarios que influyen en la mineralizacin del nitrgeno en el sistema sueloplanta. El intervalo de humedad durante el cual los microorganismos amonificantes se muestran activos es muy amplio (Miller y Johnson, 1964). Los niveles ptimos se sitan entre 0.5 y 0.15 bar, aunque en suelos saturados la actividad es considerable. El papel de la humedad en la amonificacin resalta en el trabajo de Stainford y Epstein (1974), quienes en suelos secados al aire aprecian que el 80-90% de la transformacin de nitrgeno orgnico en nitrgeno mnineral ocurre gracias a la humedad retenida en el complejo poroso del suelo. Moorhead st al. (1988) en experimentos de laboratorio observan tasas superiores de mineralizacin segn se eleve le humedad de la materia orgnica que se aade al medio de incubacin. En suelos con bajo contenido en agua la microf lora no se desarrolla

27 plenamente y la produccin de nitrgeno minera]. decrece (Jones y Woodmansee, 1979). Sin embargo hay microorganismos que permanecen activos durante estos periodos y continan degradando el sustrato, como reflejan Gonzlez Vzquez y Gutirrez Rueda <1983), quienes detectan una poblacin amonificante ms alta en verano que en otoo, en suelos de bosque repoblados con Pinus pinastar Ait. Prez Hernndez st al (1989) encuentran que la microflora asonificante es ms elevada en verano que en primavera, en suelos de ribera poblados con Alnns gflxtinnsa (L.) Gaertn. La actividad amonificante es ptima dentro de un rango de temperaturas similar al que se registr para la proteolisis. Entre los 50 y 600C no se observa mineralizacin, basta los 400C aumenta progresivamente (Choudhury y Cornfield, 1978) y por debajo de 35oC disminuye la actividad microbiana (Stanford st al., 1975). El pH es otro factor a considerar. En suelos tropicales la tasa de amonificacin aumenta segn disminuye el pH. En el intervalo de pH entre 5.5 y 6.0 Sahrawat (1982) seala la actividad mxima, incluso a pH 4.4 se mantiene en unos niveles considerables. Lozano y Velasco (1972) registran resultados similares en suelos de clima templado poblados con Binus zadiata E. Don. Hadas st al. (1986) detectan que el nitrgeno total disponible en el suelo y la mineralizacin estn asociados. Vlassak (1970) observa que el nitrgeno total disponible afecta a la actividad mneralizadora. Delphin (1986) y Adams y Attiwil (1982) registran el mismo efecto, e incluso por experiencias de laboratorio sealan que en presencia de un sustrato adecuado la tasa de mineralizacin mxima se alcanza en un plazo corto de tiempo, que oscila entre los 4 y los 16 das. La estructura fsica del suelo, como citaron Stanford y Epstein (1974). influye en el proceso de mineralizacin del nitrgeno, pero no solo a travs del grado de humedad, sino

28

tambin mediante 1986).

las asociacines organominerales

(Delphin,

Las condiciones que determinan los hbitats ptimos para la actividad nitrificante son ms estrictas que en los restantes grupos fisiolgicos, ya que la nitrificacin es una etapa que realiza un grupo restringido de bacterias. Focht y Verstraete (1977) consideran que los parmetros ms importantes que controlan la nitrificacin son: pH, humedad, presin parcial de oxigeno y temperatura. A ellos podramos aadir textura, contenido de materia orgnica, concentracin de dixido de carbono y capacidad de casbio del suelo (Mahendreppa st al., 1976). Los niveles de carbono orgnico y de nitrgeno total afectan a los potenciales de nitrificacin que muestran una correlacin negativa con el cociente C/li (Coats aL al., 1976). Otro factor que acta sobre la actividad nitrificante es la concentracin de amonio (Montagnini y Buschbacher, 1989). La concentracin de sustrato mnima en que tiene lugar la nitrificacin segn Verstraete (1981) es de 10 ppm, y por el contrario, niveles de asonio que sean superiores a 800 ppm inhiben el desarrollo de la microf lora nitrificante auttrofa (Jones y Hedlin, 1970), aunque bJetselaar st al. (1972) indican valores lmites prximos a 3000 ppm. Probablemente la disparidad entre ambos datos refleje la influencia de otros factores abiticos, como el pH que modifica el efecto de concentracin de amonio (Montagnin y Buschbacher, 1989). El pH es el factor que manifiesta un control la

ms

estricto sobre los microorganismos que oxidan el NNH...(Dommergues st al., 1978). El intervalo idneo de pH para Nil-rnhartpr es de 6.2 a 7.0. mientras que para Nitrngnmnnp~ la actividad mxima se (Alexander. 1980). A pH
auttrofa desciende

encuentra a pH inferior a 5.0 la accin

superior a 7.6 la nitrificacn

al.., 1988).

drsticamente

(Katyal st

mientras

que

se

mantiene

hetertrofa

que

es

29

considerable

en

suelos

cidos

con

pH

entre

3.0

5.4 la

(Sahrawat, 1982). Este ltimo autor destaca que nitrificacin auttrof a ptima ocurre entre 6.0 y 7.5.

Seifert (1972) aprecia el efecto de la humedad del suelo y considera que un contenido entre 1/2 y 2/3 de capacidad de retencin de agua es el ms favorable para que se forme nitrgeno nitrato. Reichman st al. (1966) encuentran una relacin directamente proporcional entre la nitrificacin y la humedad, dentro del intervalo comprendido entre -15.0 y 0.2 bar. El oxgeno es un requerimiento obligatorio para todas las bacterias nitrificantes auttrofas, pues son aerobias estrictas y necesitan una aireacin adecuada del suelo (Alexander, 1980). Tate (1985) sugiere que los microorganismos nitrificantes se dispondran sobre la superficie de las partculas del suelo de tal nianera que su actividad evitara la difusin del oxigeno hacia el interior de las partculas, lugar donde ocurriran otras etapas del ciclo del nitrgeno, como la desnitrificacin, proceso que realizan microorganismos que se desarrollan en los espacios deficitarios en oxigeno (Pocht, 1979). Niemiera y Wright (1987) detectan en laboratorio la nitrificacin mxima entre 20 y 300C, datos que corroboran tambin Malhi y McGill (1982). Sin embargo Bremner y Blackmer (1981) registran la actividad idnea entre 30 y 37C y Verstraete (1981) ampla el intervalo a 25-400C. A temperaturas superiores a 400C e inferiores a 100C desciende la oxidacin de amonio de forma muy acusada (Niemiera y Wright, 1987). Como la nitrificacin es tan escasa a temperaturas bajas. conviene usar en proporcin menor los fertilizantes amoniacales en los meses fros, ya que se puede acumular el amonio y ejercer un efecto txico sobre los cultivos de plantas de inters agrcola (Niemiere y Wright, 1987). Pero Malhi y McGill (1982) postulan que existe un control climtico sobre las relaciones temperaturaactividad

30

en la nitrificacin, producindose en climas fros adaptaciones de los microorganismos para mantener la actividad a temperaturas bajas. En este sentido Gonzlez Vzquez y Gutirrez Rueda <1983) encuentran mayor densidad de microorganismos ntricos en otoo que en verano y la mcrof lora nitrosa no aparece en los suelos que estudian en verano. Prez Hernndez st al. (1989) observan en suelos de ribera que la densidad y actividad de las poblaciones nitrificantes, tanto nitrosa como ntrica, disminuye durante el verano, aunque las diferencias con las dems estaciones no son significativas. La desnitrificacin depende de numerosos factores abiticos y. a pesar de que la produccin de compuestos de nitrgeno en forma gaseosa es consecuencia de la actividad cometablica de una poblacin de microorganismos muy heterognea, algunos de estos factores ejercen un control estricto sobre la microflora desnitrificante. Tal es el caso del oxgeno que se considera como el principal regulador de los procesos desnitrificantes en el suelo (Focht, 1979). El rango de concentracin de oxgeno en que ocurre la desnitrificacin vara entre 0.7 pg/ml (Goering y Cline, 1970) y 2 pg/ml (~beatland st al., 1959). En ntima relacin est la humedad del suelo, pues el contenido de agua condiciona la presin parcial de oxgeno. Por tanto la lluvia influye en esta actividad que, segn Craswell (1978), manifiesta un aumento importante con 2030 mm de precipitacin. Los datos acerca de la temperatura ideal para la actividad desnitrificante son muy variables. Colbourn y Dowdell (1984> registran actividad desnitrificante nula a 00C y mxima en torno a los 400C. Nmmik (1956) y McKenney st al. (1980) sealan los 65C como temperatura idnea. El margen de pH es amplio. Entre 3.5 y 11.2 se detecte actividad (Prakasas y Loehr, 1972) aunque la desnitrificacin mxima corresponde a suelos alcalinos y se observa como aumenta con el pH entre valores de 3.8 y 9.0 (George y Antoine, 1982).

31

La concentracin de nitratos (Breitenbeck y Bremner, 1987), como sustrato de la actividad desnitrificante. y los niveles de carbono orgnico en el suelo (Starr y Parlange, 1975), como sustrato orgnico oxidable, tambin limitan este proceso y el segundo factor ms que el primero regula el grado de actividad desnitrificante (Limmer y Steele, 1982).

1.5. Influencia de la vegetacin en el ciclo del nitrgeno La vegetacin es uno de los factores ms importante que incide en la dinmica de las comunidades microbianas del suelo y que acta como regulador de la microf lora edl ita (Remacle y De Leval, 1975). El papel fundamental de la comunidad macroftica se debe al aporte de materia orgnica mediante la deposicin de las hojas y de otros restos vegetales, tambin por el lavado de las hojas a travs del agua de lluvia, as como por la liberacin sustratos carbonados (Franklin y bJaring, 1980). radical de

Por efecto dosel las plantas promueven el desarrollo de microclimas, regulan la intensidad y la frecuencia de los ciclos de humedad y secado en el suelo (Canipbell st al..., 1971) y modifican la composicin florstica, la diversidad, el pH. los niveles de nitrgeno y los cationes de cambio del suelo (Gonzlez-I3ernldez st al., 1969). Las races inducen cambios en la estructura del suelo, en los niveles de humedad, de aireacin y de nutrientes del medio telrico, e incluso determinan la composicin inica de la zona de contacto razsuelo (Turner y Franz, 1985). La vegetacin tambin dificulta la erosin del terreno y disminuye les prdidas de nutrientes en el ecosistema (Vitousek st al.
1982).

32

1.5.1. Interfase raz-suelo La raz se puede considerar como la interfase entre la vida terrestre y el sustrato mineral que aporta un nmero elevado de elementos esenciales (Epstein, 1972). El estudio de la interaccin entre el sistema radical de una planta y su inmediato entorno edfico es tcnicamente difcil e implica un enf oque multidisciplinario para evaluar los factores que influyen sobre las caractersticas de la zona de contacto directo entre suelo y raz. La estructura del suelo es un factor fundamental que influye sobre las condiciones en que se desarrollan las races y por tanto define en parte la interfase razsuelo. La porosidad, las caractersticas fsicoqumicas de los agregados que constituyen la estructura del suelo y la estabilidad de ste determinan el grado de resistencia mecnica al crecimiento de las races. El efecto es recproco ya que el aparato radical de la planta determina parcialmente la composicin mecnica y mineral del suelo de varias formas: acelera la disgregacin de los minerales, sobre todo en las fracciones de arcillas menos voluminosas (Sarkar nt al., 1979), modifica el estado de agregacin del suelo a travs de interacciones fsicas, qumicas y biolgicas (Harris st al-. 1966) y altera las uniones fsicas de las partculas del suelo mediante la liberacin de sustancias orgnicas radicales sobre todo polisacridos (Monroe y Kladuko. 1987) aumentando la estabilidad de los agregados telricos (Reid y Goss, 1980). La dinmica compleja de la interfase razsuelo se desarrolla en una zona tridimensional donde interrelacionan poblaciones dispares de organismos, que se extienden en

33

profundidad en el crter de en el suelo mineral. Los importante de este sistema y la rizosfera, que se define sistema radical de cualquier y actividad que difiere rizosfrico. pesar de que ms prxima

las races y en sentido opuesto microorganismos son una parte desempean un papel esencial en como la zona del suelo donde el planta incide sobre la poblacin

microbiana. Es una zona sin lmites definidos, fsica, qumica y biolgicamente del suelo no En la rizosfera se pueden distinguir dos zonas a el lmite entre ambas es difuso. La primera, la a la raz, se caracteriza por un enriquecimiento

de compuestos orgnicos. La zona siguiente recoge la influencia de las races sobre las presiones parciales de oxigeno, dixido de carbono y otros gases (Klemedtson st al., 1987b). La interaccin entre microorganismos y races es intensa en la zona superficial de las races, regin denominada rizoplano, y en algunos casos se extiende a las capas corticales y epidrmicas de la raz formando la endorri zosf era
-

1.5.1.1. Caractersticas de la rizosfera El medio que forman las races para la comunidad microbiana es muy inestable. Las races cuando crecen cambian y evolucionan creando muchos tipos de hbitats; por ello determinan la densidad y diversidad de la comunidad bacteriana rizosfrica junto con las condiciones fsico-qumicas del medio edfico. El suelo de la rizosfere difiere del suelo no

rizosfrico debido no solo al efecto de la microflora sino tambin a que el crecimiento de las races provoca alteraciones profundas que modifican las caractersticas mineralgicas y mecanicas (Sarkar st al., 1979) y adems las races liberan cantidades apreciables de materia orgnica.

34

El intercambio gaseoso en la rizosfera es muy complejo y los niveles de oxgeno y de dixido de carbono dependen de la actividad de las races, de los organismos del suelo y del potencial de agua en la interfase razsuelo (Campbell, 1985). La captacin de agua por las races condiciona la presin parcial de oxgeno del suelo que las rodea y cualquier cambio en el contenido de agua influye profundamente en la tasa de difusin de oxigeno (Currie, 1984). Concentraciones bajas de oxgeno en el entorno edfico de las races pueden estimular la liberacin de materias orgnicas del aparato radical de las plantas (Crawford, 1978). La transpiracin condiciona un flujo elevado de agua desde el suelo hacia la superficie radical, pero el potencial de agua del suelo que rodea las races vaca muy poco del potencial del suelo libre de ellas (Campbell, 1985). Este flujo de agua transporta algunos elementos qumicos hacia la superficie radical, que bien se absorben en su totalidad (Mn2--, Caz-, K~-, 14, P) o bien se acumulan en el entorno edfico de las races (Al3-~, Cl- y Nafl (Prenzel, 1979). Los compuestos orgnicos que producen las plantes regulan e). pH del medio rizosfrico a travs de los cidos orgnicos liberados (Qades, 1984). La accin de las races sobre el pH del suelo tambin es consecuencia del balance de cationes y aniones que absorben las plantas, en un proceso en que se liberan Ht OH- o LICOr (Kirkby, 1981). Gutirrez Maero y Bermdez de Castro (1983) encuentra que Myrica qale L. induce una acidificacin del suelo bajo su dosel, y Schmitz st al. (1990) observan que el pH del suelo bajo EIanagnus angustifnhta L. es ligeramente superior al de fuera del dosel. Las variaciones del pH influyen en los niveles de fsforo soluble en la rizosfera (Tate, 1985). El sistema radical modifica tambin la disponibilidad del fsforo en su entorno por medio de los exudados que pueden formar complejos fosforados solubles (Barber, 1968) o quelatos que compiten

35

por los fosfatos adsorbidos en la ceolinita y en los xidos de aluminio (Nagarajah st al.. 1970). La materia orgnica es el factor principal que incide en las caractersticas del sistema razsuelo y representa una de las diferencias ms importantes entre el suelo rizosfrico y no rizosfrico. El espectro de materiales orgnicos en esta zona es muy amplio y constituye los sustratos potenciales para el desarrollo de los microorganismos telricos (Krotzky st al.,1986). Las races muertas aportan cantidades significativas de compuestos orgnicos y de nutrientes al suelo (Joslin y Henderson, 1987) que influyen decisivamente sobre la biomasa, en la dinmica del ciclo del nitrgeno (McClaugherty st al.. 1984) y en la produccin primaria neta de los ecosistemas forestales (McClaugherty aL al., 1982). Las races vivas tambin contribuyen al desarrollo de los microorganismos mediante la liberacin de sustratos orgnicos (Janzen y Bruinsma, 1989). Algunas de estas sustancias ejercen un efecto opuesto sobre los organismos de la interfase razsuelo <Tang st al., 1987), como los tiofenos que son inhibidores alelopticos (Campbell st al.. 1982). insecticidas (Arnason st al., 1981). nematicidas (Gommers st al., 1980), germicidas (Wat st al., 1980) y citotxicos (Vamamoto st al., 1979). En general estos productos, que desempean un papel similar a las ecomonas (Whittaker. 1970), son de nomenclatura confusa y durante mucho tiempo se denominaron exudados (Rovira y McDougall, 1967), aunque hoy se pueden reconocer segn la clasificacin de Rovira st al. (1979) que los agrupe en exudados, secreciones, muclagos, mucigeles y usados. La estructura quimica de estos aportes orgnicos de origen radical es muy diversa. Se identifican hidratos de carbono, tanto monosacridos como polisacridos, aminocidos, enzimas, cidos orgnicos, nucletidos, vitaminas, hormonas (Rovira. 1965) y polifenoles (Swift. 1978). La composicin de

36

los exudados depende de la planta que se estudie Egereat, 1979) y de su edad (Campbell st al.., 1982).

(Van

Es difcil estimar la proporcin en que se encuentran tales productos. Los datos experimentales reflejan variaciones entre los niveles de materiales liberados bien en cultivos axnicos o bien a partir de plantas crecidas en presencia de microorganismos. Bajo condiciones axnicas las races liberan un 78% menos del carbono fijado fotosintticamente que en cultivos con microorganismos (Barber y Martin, 1976), donde se libere el 17% del carbono fijado por la planta (Martin, 1977). Estos productos suponen un 20% del peso seco de toda la planta y provienen del carbono translocado a las races, que en un 39% se libere al suelo por lisis de las clulas radicales y no por exudacin a travs de las paredes celulares intactas (Martin. 1977). Barber y Lynch (1977) sugieren que los microorganismos rizosfricos favorecen el aporte de sustratos utilizables por ellos mismos, bien porque los microorganismos formen sustancias que estimulan la exudacin o bien de forma indirecta porque al usar los exudados evitan que se concentren y promueven su difusin. Respecto al aporte de compuestos nitrogenados. Janzen y Bruinsma (1989) observan en trabajos de laboratorio con tniticnm aestivnm L. que el sistema radical libera al medio edfico entre el 25 y el 32% del nitrgeno absorbido en forma de NH3 por la parte area de la planta. Los microorganismos metabolizan con sustancias solubles, azcares y aminocidos, facilidad les y provocan un

cambio cualitativo importante en la rizosfera por el aumento de C02 y de los productos que resultan de su metabolismo. Adems los niveles de compuestos no difusibles en torno a la raz aumentan y la microf lora que coloniza utilizarlos (Leppard, 1974). Las bacterias las races puede son ms eficaces

37

que los hongos utilizando como sustratos los compuestos orgnicos de peso molecular bajo. Estas sustancias constituyen una parte importante de los exudados radicales y son poco abundantes en las primeras etapas descomponedoras de los restos vegetales muertos. Por el contrario los hongos metabolizan fcilmente los polmeros de peso molecular elevado muertos que son muy abundantes en los restos vegetales y por tanto son ms eficientes en los estadios

iniciales de la mineralizacin de las races muertas (Nakas y Klein, 1980). Tales caractersticas metablicas justifican que las bacterias dependan de los exudados radicales y los hongos de las clulas de las races muertas. La humedad del suelo influye en la composicin y en los

niveles de los materiales orgnicos que excretan las races (Martin, 1977). En situaciones de estrs hdrico aumenta la cantidad de carbono orgnico en el suelo que rodea la raz. El incremento del aporte orgnico se refiere sobre todo a los materiales solubles en agua que proceden en primer lugar de la autolisis de las clulas de los tejidos radicales y en menor grado de la produccin de muclagos de peso molecular bajo (Martin. 1977), adems la desecacin del suelo afecta a la viabilidad de fuente adicional
1980).

las races jvenes que de sustratos carbonados

constituyen una (Nakas y Klein,

Otros factores como la temperatura (Martin, 1977), la intensidad de la luz que incide sobre las plantas (Peterson, 1961), los tratamientos con productos qumicos de uso agrcola (Hale y Moore. 1979), la accin abrasiva del medio telrico (Kepert et al., 1979) y la disponibilidad de nutrientes, tambin alteran la naturaleza y la cantidad de los exudados radicales (Bowen, 1969). Graham et al. (1981) y Turner y Newman (1984) observan un aumento de la exudacin de aminocidos y azcares a causa de los niveles muy bajos de fsforo, sin embargo Rovira y Ridge (1978) registran que la

38

deficiencia

de fsforo

reduce

la liberacin

de compuestos

carbonados en raices de plantas jvenes de trigo. Los niveles de nitrgeno, tanto en forma amoniacal como en forma de nitrato, y el pH influyen tambin en los exudados radicales <Huber y Watson, 1974).

1.5.1.2.

Colonizacin

de la rizosfera

La comunidad microbiana en esta regin hipogea suele ser abundante, muy superior a la del suelo alejado de las races (Cur, 1982). Los datos experimentales son numerosos y en su mayora registran valores para la relacin R/S (densidad de bacterias en la rizosfera/densidad de bacterias en suelo sin races> que oscilan entre 2 y 25 (Asad st sIL., 1985), aunque en ocasiones son mayores de 100 (Bazin a al., 1990).

En la rizosfera se desarrollan poblaciones de organismos de vida libre, simbiticos y parsitos. La microf lora telrica comprende bacterias y hongos. Los hongos predominan en el suelo carente de races (Newman, 1985) y tambin en la biomasa del entorno radical (Shields a al., 1971) aunque en ocasiones las bacterias rizosfrices alcanzan una biomasa superior a la de origen fngico (Newman, 1985). El aspecto ms importante reside en el estado fisiolgico y en el grado de actividad de los distintos tipos de microorganismos. Sderstrom (1977) determin que solo entre el 1 y el 5% de la biomasa fngica fue capaz de hidrolizar diacetato de fluorescena, lo que representa una actividad baja y real.za el papel de la poblacin bacteriana en la rizosfera. Los estudios ecolgicos de la colonizacin microbiana indican que las bacterias se distribuyen irregularmente en el rizoplano en funcin del tipo de planta, del suelo y de las especies de microorganismos (Asanuma et al.. 1979). Las

39

bacterias se
fibrillas

unen a los polisacridos o glicoproteinas de la

que constituyen una nmero de matriz delgada de los organismos (Elliot st mucilaginosa

superficie radical

que englobe gran

al., 1979). Ligados a esta capa microorganismos se localizan de forma

preferente

en

las

uniones intercelulares (Boyen, 1979) y en los sitios de alta exudacin recubriendo solo el 10% de la superficie radical (Boyen 1981). Sin embargo Bennet y Lynch (1981) observan microcolonias que se desarrollan por igual en la superficie de las clulas epidrmicas y en las zonas de contacto entre clulas. Entre las rizobacterias (bacterias de la zona rizosfrica) saprfitas predominan las Gram negativas y entre stas Pgpiic1pmnn~g sp. (Alstrm. 1987), pero Arhrnmnhpnl-pr sp., A1r~1igpnpc sp., mardia ~ F.ntprphprtpr sp. y F1avnhani-csriim sp. estn presentes en numero elevado (Brown. 1972). La mayora de las PRpndnlnnnag aisladas del suelo rizosfrico son Pg~,,dnmpnp~ f1iiprnqrpn~ (Burr y Caesar, 1984). Por el contrario en suelos sin races las bacterias ms abundantes son las Gran positivas (Chan st al.. 1963).
El efecto

rizosfera influye Bowen y

en el tiempo

degeneracin

de y

las

bacterias.

Pgp,,cinmpnps

sp. se
sp.

Foster (1978) observan que reproducen en suelos sin races cada 77 h las 100 11. En la interf ase sp. tiene una generacin cada 5.2 h y

Hacflhins

sobrepasan

sueloraz Pspi,dnmnnag Bacfllns sp. cada 39 h.

Mencin micorrizas. de sustratos

especial requieren las fijadores ambos casos carbonados de y de En

simbiosis entre races y y entre a cambio races un y

microorganismos

nitrgeno obtienen

las plantas representan la fuente aporte y principalmente nitrgeno

significativo

nutrentes,

fsforo. Tambin se establece la simbiosis entre plantas noduladas con bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico y

40

micorrizas (Azcon st al., 1979).

1.5.1.3.

Interacciones entre los organismos en la rizosfera organismos que habitan en la

Las interacciones entre los

rizosfera son complejas, reflejan la existencia de poblaciones muy dinmicas y heterogneas e influyen en la densidad y diversidad de las poblaciones de bacterias en la comunidad rizosfrica. A continuacin citamos algunos ejemplos que aparecen en la bibliografa relativos a la gran variedad de interacciones que se pueden establecer en esta zona. La actividad depredadora a cargo de los protozoos (Wiggins y Cur, 1979) que se observa en la rizosfera es por lo general intensa debido a la mayor densidad bacteriana y desempea un papel importante en el control de las poblaciones de microorganismos. Entre Baciflus sp. y cianobacterias aparece un antagonismo mediado por la liberacin de productos derivados del metabolismo bacteriano (Wright y Thompson, 1985). Chan st al. (1963) indican que ciertas bacterias liberan productos de su metabolismo que actan como antibiticos para los microorganismos prximos. Dichos productos del metabolismo bacteriano pueden inhibir, favorecer o no afectar el desarrollo de los hongos en la rizosfera y este efecto depende de los hongos y bacterias que interaccionen. En experiencias de laboratorio Bowen y Theoderou (1979) encuentran que BactLlns sp. estimula la
colonizacin de las races por Telepbora i-prrpgtris e inhibe
Piqnlith,ig tinrtnri1~

el crecimiento de Los

microorganismos

de

las

rizosferas

de

plantas

prximas interaccionan

entre si y la rizosfera de una planta

puede influir en la de la otra. La microt lora de la rizosfera de Anthprpnthi,m sp. inhibe la actividad de las micorrizas de

41
TrifnIinm

sp., hecho este

ltimo muy importante, ya que

las

micorrizas en la interfase razsuelo alteran

el crecimiento

de la planta (Barea y Azcon, 1983). Sin embargo la poblacin rizosfrica de Lolum sp. no modifica la comunidad de la rizosfera de TrifoJAnm sp. (Christie st al., 1978). Lawley st al. <1983) registran que el porcentaje de Bacillus spp. en la rizosfera de LcLium perenne L. desciende de forma bajo la influencia de TrittLtum repens L. y Elantaga 1~n-pn1a1-p L. Bennet y Lynch (1981) indican que en la interf ase sueloraz de plantas de trigo, entre flirtnhartnriu,m sp. y Mycoplasma sp. se establece una competencia fuerte por los mismos nutrientes. Sin embargo cuando ambos microorganismos se inoculan en la rizosfera de plantas de maz la poblacin de Ci,rtnhprtprii,m sp. aumenta de forma significativa, bien porque Mycnplasma sp. estimula el flujo de exudados radicales distintos a los que se excretan en ausencia de este microorganismo o bien porque Sycnplasma sp. elabora metabolitos que actan como factores de crecimiento de Ciirtnhprtprii,m sp. Los mismos autores observan un efecto antagnico entre Pcpi,cinmnnpg sp. y fl,rtnhartnrii,m sp. en la rizosfera del trigo. Por lo tanto el efecto no solo depende de las especies microbianas en cuestin sino tambin de la especie vegetal, establecindose una relacin recproca. Los exudados radicales son fuentes de nutrientes esenciales en las interacciones entre microorganismos como sealan Elad y Baker (1985), que observan que Pseudnmonas sp.
incrementa su accin inhibitoria sobre Eusartum sp. cuando DArcy aumentan los niveles de productos de origen radical.

significativa

Lameta (1986) encuentra en los exudados radicales de la soja compuestos polifenlicos. isoflavonoides que se hallan a nivel rizosfrico en una concentracin de l0~v a lO6M y que tienen un efecto importante sobre la microflora de la rizosfera. Uno de estos compuestos, el cumestrol. favorece en un 30% el crecimiento de Rratlyirhizobium 4aponicum USDA 138 e

42

inhibe en torno al 20% el desarrollo de Pgpi,dnmnnp~ sp. (DArcy Lameta y Jay, 1987). Este hecho supone que los rizobios sean ms competitivos en proximidad al aparato radical (Kosslak st al. 1983) y que por tanto el proceso de nodulacin se vea favorecido (Hossain y Alexander, 1984).
,

La microf lora rizosfrica incremente la resistencia de la planta husped a las alteraciones de origen patgeno y constituye un control biolgico de la actividad de los parsitos que proliferan en la zona de contacto entre las races y el suelo <Burr y Caesar, 1984). Las bacterias pueden inducir la lisis de las bifas de algunos hongos patgenos como fla~iimannnmyrn~ graminis o como Phytophthnra rinnamnni y en experiencias de laboratorio se ha observado que plantas de leguminosas noduladas con RhiznltLum son ms resistentes a Phytnphthnra mPga~pPrma que plantas sin nodular (Campbell, 1985). El efecto de las rizobacterias (Suslow st al.. 1979) sobre las plantas est unido a su capacidad de colonizar, sobrevivir y producir metabolitos activos como consecuencia de su desarrollo en asociacin con las races. Pgpi,dnmnnpg sp. y Serratia sp. son las bacterias principales que inciden en el desarrollo de las plantas (Gerhardson st al., 1985). Pgpiicinmpnpg sp. altere el crecimiento de las mismas e inhibe numerosos
Serratia

patgenos de
sp. tambin

las plantas
dificulte
1985).

(Burr y

Caesar, 1984).
de hongos

el

desarrollo

patgenos (Sneh st al.,

Muchos

microrganismos

rizosfricos

pueden

producir

sustancias anlogas a las hormonas de las plantas que actan como factores de crecimiento (Beck y Gilmour, 1983). Ciertas bacterias producen y liberan etileno (Swanson st al., 1979) que se comporta como un factor importante del desarrollo de las plantas (Roberts y Tucker, 1985). Bacterias del gnero Azn~piri11uiin producen en la rizosfera de plantas de trigo

43

sustancias estimulantes del crecimiento diferentes al etileno (Kapulnik st al., 1985). En otras ocasiones las rizobacterias desprenden sustancias fitotxicas que inhiben el crecimiento de las plantas (Fredrickson y Elliot, 1985). La cepa S241 de P~piicinmnnpg flu,nrpgrpng libere niveles elevados de HCN que dificultan el desarrollo del aparato radical de plantas de Lantuca satixe L. var. Sativa cv. Montana y de Ehaseolus 3nhlgaris cv. Bonita, que se manifiesta a los 28 das de cultivo en un descenso del peso seco de las plantas del 49.2 y del 52.9% respectivamente (Alstrm y Burns, 1989). Bolton y Elliot (1989) observan que Pq0,ldnmnnas sp. produce en la rizosfera de Triticnm aestixum L. una toxina que inhibe el sistema radical y su colonizacin por otros microorganismos. Las cepas RCl, B8 y NTl5 de P~p,,dnmnnag sp. liberan una toxina que acta selectivamente sobre las races de plantas diferentes (Fredrickson st al., 1987) y que presenta tambin una actividad antibitica especfica pues inhibe el crecimiento de flpntric-hiim candidnm, Fcphprirhip cali. (ClA),
Erwinia
<25108)
rhry~ant~mi

(W3CHl)

Pgpuidnmnna~

gplpnpc-ppriim

pero no afecta a Bacillus snibtilis y Pgp,,dnmnn~g syr.ingae bv syningae (H301D) (Bolton st al.., 1989). Este
comportamiento puede suponer una ventaja competitiva en la colonizacin del rizoplano de determinadas plantas.

La microflora de la interfase sueloraz interviene tambin en la disponibilidad y en la captacin de nutrientes

para las plantas (Powell,
1982).

1.5.1.4.

Efecto rizosfera y microorganismos del ciclo del nitrgeno

El

efecto

rizosfera

sobre

los

microorganismos

que una

intervienen en las etapas

atencin particular.

del ciclo del nitrgeno exige

44
Las bacterias libres fijadoras de nitrgeno atmosfrico aportan al medio edfico cantidades importantes de nitrgeno por lo que constituyen un punto clave en la produccin de los ecosistemas <bJorthington, 1975). La interfase razsuelo es un lugar ptimo para el desarrollo de la microf lora diazotrf ita porque suministra abundantes sustratos carbonados que suponen una fuente esencial de energa para la actividad nitrogensica. Arima y Voshida (1982) observan mayor densidad microbiana en el entorno radical de especies como: Sagztttaria trifalia L., Oryxa satisa L. cv. Koshihikarsi, Coiz Ma-Yuen Roman y Juncus ettusus L. Otras asociaciones rizosfricas fijadoras de nitrgeno importantes son las estudiadas por lllassak (1975) en bosques de zonas templadas, Dbereiner (1976), Krotzky st al. (1986), Rao y Venkateswarlu (1985), en gramneas tropicales asociadas con AznQpirillinn sp.., Beck y Gilmour <1983) en flLriti.cum aestinnn cv. Nugaines y Reo st al. (1984) en arroz.

De gran importancia son las asociaciones que estimulan la actividad diazotrfica en la rizosfera de 11 plantas
pertenecientes Ch~nnpndi arpap, a las familias: Composit.ae, finsacean,
Snl anareap Krpnipri arPap, 7.ygnphyl 1 arpap,

Oleacean, Bataneas, T.iliprppp y Enaneas, pues habitan en suelos pobres de zonas ridas de Norteamrica con contenidos bajos en sustratos para la microf lora hetertrofa <Farnworth st al., 1978). Tambin se ha detectado actividad nitrogensica en la rizosfera de muchas plantas entre las que destacamos Ammopbhta sp. en Africa (Abdel Wahab, 1975) y Eragrostis sp. en Asia (Nioh. 1979). incremento de la actividad fijadora de nitrgeno atmosfrico en la zona de contacto razsuelo no solo puede deberse a una mayor disponibilidad de sustratos carbonados sino tambin a la estimulacin quimiotctica del movimiento de las bacterias microaerfilas hacia las zonas bajo la
El

influencia

de las

races,

a causa

del dficit

de oxgeno

45

motivado por la respiracin de las mismas (Erar, 1972) y al mayor contenido en agua del suelo en esta zona (Harak a al., 1983). Werner st al. (1982) y Krotzky st al. (1983) encuentran en la rizosfera ciertos compuestos orgnicos, algunos aromticos, procedentes de la exudacin radical que activan la nitrogenasa sin ser un sustrato. En la mayora de los sistemas de fijacin asociativa estudiados, el nitrgeno fijado por este mecanismo no representa una fuente significativa de nitrgeno para el desarrollo de las plantas en cuya rizosfera prolifera la poblacin diazotrfica (Giller st al., 1988), pero supone una entrada importante para el ecosistema y contrarresta las prdidas por lixiviado y desnitrificacin (Campbell, 1985). Las plantas en general actan sobre la microf lora edfica mineralizante. Destacan los estudios realizados por Adams y Attiwill (1982) sobre la influencia de Acacia dsalbata L ink.. Eucafljptns regnans 2. Muel 1, E ofrliunta LHabit y Binus radiata D. Don en la capacidad mineralizadora en suelos de bosque; por Robertson y Vitousek (1981) sobre los factores que regulan la nitrificacin en la sucesin primaria y secundaria; por Vitousek st al. (1982) sobre la
-

movilidad

la nitrificacin en ecosistemas de bosque, y por Turner y Franz (1985) sobre la nitrificacin y la mineralizacin bajo el dosel de Tsuga hPtornphylla Sarg. y Tbigiia plicata D. Don. Parece que en la rizosfera no se dan las condiciones idneas para la nitrificacin pues las concentraciones altas
de sustancias de poder energtico elevado favorecen los

del nitrato y

organismos hetertrofos que inmovilizan el establece una competencia no solo entre

nitrgeno. Se la microl lora 1987a). Los por varios

hetertrofa y nitrificante sino tambin con las races por el

amonio disponible en el suelo (Klemedtson st al..,

efectos inhibidores de las races sobre la

microflora que

oxida

el amonio

y el

nitrito han

sido citados

46

autores

(Rice

Pancholy,

1972;

Jordan

st

al..

1979;

Montagnini y

Buschbacher,

1989) y

sin embargo hay

datos de

efectos favorables sobre la nitrificacin en ecosistemas agrcolas (Molina y Rovira, 1963).

suelos

de

Las races afectan a la poblacin desnitrificante al inducir cambios fsicos y qumicos en el suelo, en especial de las concentraciones de nitratos, oxgeno y carbono orgnico disponible (Klemedtson st al., 1987b). En general, en la interfase razsuelo se observa una disponibilidad baja de oxgeno como resultado de la respiracin radical (Brar, 1972), de la densidad elevada de la microf lora heterotrfa (Fillery, 1983) y del mayor contenido en agua del suelo <Harak st al., 1983). Por tanto, en estas condiciones los microorganismos desnitrificantes encuentran un ambiente idneo para su desarrollo. As Mikkelsen (1987) observa que se estimula la tasa de desnitrificacin en la rizosfera del arroz. Adems el hbitat rizosfrico favorece la desnitrificacin a travs de la concentracin mayor de compuestos carbonados y de nitratos <Smith y Tiedje, 1979). Woldendorp (1962) indica que los aminocidos liberados por las races suponen un sustrato muy valioso para la microflora
desnitrificante y Bailey y Eeauchamp (1973) observan que la

desnitrificacin se eleva

de forma

significativa cuando

se

incuban suelos a los que se aaden macerados de maz.

1.5.1.5. Efecto rizosfera de las plantas fijadoras de

nitrgeno

La rizosfera de plantas noduladas fijadoras y Foster y Rovira (1978) registran una

de nitrgeno elevacin,

atmosfrico constituye un caso particular. Van Egeraat (1979) especialmente acusada en especies actinorrizas, del nmero de

poblaciones microbianas y de la microflora total a medida que los recuentos se efectan a menor distancia de la raz.

47

Las plantas actinorrizas ejercen una influencia notoria sobre los microorganismos cercanos a sus races. As, Alnns rubra Bong. estimule el crecimiento de Str~ptnmyre~ sp., Ppninilli.im sp. y A~p~rgi11ii~ sp. e inhibe hongos fitopatgenos como Borla welri y Famas annnsus <Bollen y Lu, 1968; Tarrant y Trappe, 1971), gracias a las excretas radicales ricas en compuestos nitrogenados, polifenoles, aminocidos y taninos. Igualmente se ha visto que A. incana (L.) Moench favorece el crecimiento de los microorganismos amonificantes y nitrificantes en los bosques europeos (Danire aL al., 1986). Bermdez de Castro st al. <1984) indica que A. gintinosa <L.) Gaernt. estimula el desarrollo de la microflora nitrificante, y resultados similares se observan bajo Myzica gala L., que tambin favorece el crecimiento de los microorganismos proteolticos, amonificantes, desnitrificantes y diazotrficos (Bermdez de Castro y Gutirrez Maero, 1987). En los ndulos de las plantas actinorrizas se han encontrado auxinas (Silver el al., 1966 y Dullart, 1970) y citoquininas (Bermdez de Castro y Rodrguez-Barrueco, 1976 y RodrguezBarrueco nt al., 1979) que se liberan al suelo y, junto con los productos nitrogenados que se desprenden en la necrosis nodular, pueden regular el equilibrio de las
comunidades microbianas <Leaf el al., presentes en el hbitat rizosfrico 1959). A su vez el consumo de oxgeno por parte

de los microorganismos importancia vital en el

rizosfricos puede tener una rendimiento de la fijacin de

nitrgeno, ya que, adems de estimular la exudacin de compuestos orgnicos, lo que en definitiva supone una prdida de fotosintatos a nivel radical, se ha comprobado que los niveles de oxgeno en la rizosfera tienen una influencia decisiva sobre el ARA de las plantas fijadoras (Silvester el al., 1988), pues una restriccin en el flujo de oxgeno del
suelo hacia los ndulos trae como consecuencia una limitacin para producir la energa necesaria para la fijacin del

48 nitrgeno. El problema resulta difcil de estudiar ya que los ndulos parecen tener mecanismos adecuados para amortiguar cambios bruscos en la concentracin de 02 y adecuar el rendimiento de la cadena de transporte electrnico al oxgeno disponible, de manera que el rendimiento de la nitrogenasa permanecera a largo plazo ms o menos constante. Estos estudios sugieren la importancia que el ambiente rizosfrico tiene sobre la fijacin simbitica de nitrgeno.

1.5.2.

Deposicin de restos vegetales

vegetales representan la entrada de energa

Los restos

ms importante para la microf lora hbitats (Struwe y ICjoller, 1986).

telrica

en

numerosos

El estudio de los materiales orgnicos de origen

refleja

la

existencia

de

compuestos

muy

vegetal variados, de
la

complejidad dispar y con

grados distintos de labilidad a

accin mineralizadora de los microorganismos edficos. Haider (1986) indica que la microf lora del suelo mineraliza alrededor del 6070%. e incluso ms, de los sustratos
orgnicos depositados por las plantas en el intervalo de un

ao. La descomposicin est controlada por factores diversos (Sharma y Ambasht, 1987), pero la naturaleza de la fuente de
sustratos influye de forma significativa Los en el proceso

degradativo (Berg y Staaf, 1980). contienen lignina en proporcin lentitud <Schwintzer. 1984). Los muy elevado de resistencia a la
microflora telrica (Rice. 1979). polifenlicos cados al que por lo se son

residuos vegetales que

elevada se descomponen con taninos muestran un grado actividad degradativa de la

acumulan los en los suelos los compuestos vegetales sobre la

que se

Lignina, taninos y, en general, encuentran en

restos inciden

suelo

importantes porque

actividad
Olson y

de los Reiners

microorganismos edficos. En (1983) observaron que los

particular compuestos

49

polifenlicos inhiben la actividad nitrificante. La deposicin de hojas y de otros restos vegetales de les plantas que fijan nitrgeno supone una fuente de energa y nutrientes esencial para el desarrollo de la microf lora hetertrof a del suelo as como una va de entrada de nitrgeno de gran relieve para el ecosistema, sobre todo porque este macronutriente se libere en las primeras semanas de descomposicin (Berg y Staaf, 1981). Para Hunt st al. (1988) el lecho de hojarasca regula la tasa de mineralizacin y por ello incide en la produccin primaria de los ecosistemas. Franklin y Waring (1980) calculan que las cantidades de fragmentos de troncos bosques de conferas puede exceder de alcanzar entre el 10 y el 25% de la embargo estos fragmentos se descomponen cados al suelo en 500 t ha ao y biomasa total. Sin con lentitud a causa

de la proporcin tan baja en nutrientes como nitrgeno y fsforo (Cowling y Merril, 1966). Woodmansee st al (1978) encuentran, al analizar la distribucin del nitrgeno en un pastizal semirido, que los restos de plantas depositados en el lecho de hojarasca y las races muertas contenan el 6.5% del nitrgeno total. caractersticas abiticas y biticas del sustrato influyen en la descomposicin de las hojas cadas. Aranda st al. (1990) observan que el cociente C/N desciende
durante el proceso degradativo del lecho de hojarasca de tres

Las edfico

choperas de Eopulus nigra

riqueza de nutrientes de

L. y encuentran diferencias en
la hojarasca

la

segn el microclima. la

pues

la variabilidad y la cantidad

de los micronichos donde

compiten las comunidades tase de degradacin suelo. Silvester

microbianas edficas inciden en

de las hojas cadas en la superficie del

(1977) realiza

una

revisin

de trabajos

de

diversos autores, en los que aparecen datos sobre los niveles

50

de nitrgeno en hojas de plantas actinorrizas y de otros rboles asociados. Las hojas cadas de especies europeas, americanas y asiticas de Alnns contienen por lo general porcentajes dobles de nitrgeno que las hojas cadas de otras especies como Betula sp, Tilia cardata Miller, Atar plManniti0st L., Carylus aval.lana L., Pinus gi1v~ctric U., Picea sp. y Tsnga sp. Otra planta actinorriza Hyrica galLe L. contiene en torno al 1.69% de nitrgeno (Schwintzer, 1984), que supone una riqueza inferior a la de A. glutinosa <Bocock, 1964) y semejante a la de A. ruina (Edmons, 1980). Mientras que la degradacin completa de las hojas de aliso se realiza en menos de un ao (Danire at al., 1986), la descomposicin de las hojas de M. gala es ms lenta debido a su elevada proporcin de lignina. El contenido en nitrgeno total del lecho de hojarasca de ciertas plantas actinorrizas proporciona valores de 30157 kg de nitrgeno ha ao en A. ruhra Bong... 183 kg ha- ao en EZLaeagnns nrinntaliq y 290 kg ha- ao en C~iiarina littnrflic~. El aporte de nitrgeno por estas vas en suelos donde las plantas actinorrizas aparecen como dominantes es considerable. A continuacin se mencionan algunos ejemplos y las cantidades de nitrgeno que proporcionan: Alnns 36-325 kg N ha ao-; Coriana. 192; Hippopflae, 56197; Casuarina, 58; Caanothus, 60-140; flryas,12 (datos recopilados por Bermdez de Castro,
1981). Otra especie actinorriza, YA. gale aporta entre 9 y 34

kg N
al.,

ha- ao- (Bond,

1990). Esta circunstancia al lavar las

1951; Schwintzer, 1919)

y Elasagnus

angii~1-ifn1ia

L. 34.5 kg N ha-

ao- (Bermdez de Castro st

se

refleja tambin

en

el

agua de les zonas

lluvia, que

superficies externas de

areas de las plantas, arrastra nutrientes hacia el suelo. El agua de lluvia que ha lavado hojas, ramas y troncos de aliso contiene de dos a diez veces ms nitrgeno que el agua cada
lejos de los rboles (Bollen y Lu, 1968).

51

Las

caractersticas abiticas

biticas del

sustrato

edfico influyen en la descomposicin de las hojas cadas. Aranda st al. (1991) observan que el cociente C/N desciende durante el proceso degradativo del lecho de hojarasca de tres choperas de Enpnlus nigra L. y encuentran diferencias en la riqueza de nutrientes de la hojarasca segn el microclima, pues la variabilidad y la cantidad de los micronichos donde compiten las comunidades microbianas edficas inciden en la tasa de degradacin de las hojas cadas en la superficie del
suelo.

1.6. Objetivos y plan de trabajo Como se ha explicado en los apartados anteriores, la interaccin entre el sustrato edfico y las plantas actinorrizas inducen alteraciones en las comunidades microbianas que intervienen en el ciclo del nitrgeno. Con el fin
procesos el

de alcanzar

una comprensin mayor

se sumariza en

de dichos
los puntos

presente trabajo

siguientes: 1. Estudio
sobre la

del

efecto
las

que
de

induce
los

A.

glutnns.a

L.
que

(Gaertn.) caracterizan

variables

fsicoqumicas compuestos

dinmica

orgnicos

nitrogenados en el suelo.
2. Estudio del la efecto densidad y que induce A. glutinosa L. las

(Gaertn.) sobre

actividad

biolgica de

comunidades proteoltica, amonificante, nitrificante

y nitrificante ntrica.

nitrosa

3. Estudio del (Gaertn.) sobre las

efecto rizosfera de A. glutinosa L. variables fsicoqumicas, los grupos

52

fisiolgicos de microorganismos antes citados de la microf lora total.

y la densidad

4. Estudio del efecto rizosfera de plantas de A. glntinnsa L. (Gaertn.) en estado arbustivo y en estado arbreo sobre las variables abiticas y las comunidades de los microorganismos referidos. 5. Estudio de la variacin estacional de las variables fsicoqumicas y de los microorganismos que transforman los compuestos orgnicos nitrogenados en formas de nitrgeno inorgnico asimilable por las plantas. Para constatar estos apartados el plan de trabajo incluye el anlisis en muestras de suelo de las variables fsico-qumicas, de la densidad de la microf lora total, de la densidad y actividad biolgica de los microorganismos proteolticos, amonificantes, nitrificantes nitrosos y nitrificantes ntricos. Con el fin de evaluar el efecto de los alisos y de su

estado de desarrollo se recogieron las muestras de suelo en una aliseda poblada por ejemplares arbustivos y rboles, y
como controles de referencia en una chopera y en un bosquete

con numerosos sauces, vegetacin arbrea

-

as

como

en

dos

zonas

libres

de

El

muestreo se realiz bajo dosel, en

la rizosfera y en

el

rizoplano de las plantas para

determinar el papel de las

races. Las muestras se recogieron en las cuatro estaciones del

ao a fin de observar la variacin estacional.

MATERIALES Y METODOS

54

2.1. Caractersticas generales de la zona de muestreo El estudio que recoge esta Memoria se realiz en un bosquete de Alnns glutinosa L. (Gaertn.) situado en la ribera del ro Sorbe, cerca de su desembocadura en el Henares, en e]. trmino municipal de Humanes (Guadalajara), coordenadas UTM 30TVL882217 (figura 2.1.).

2.1.1. Geologa
La zona de estudio se encuadre en una extensa rea de relleno del Mioceno, donde la erosin de las aguas desmantel el nivel de las calizas pontienses, que de manera excepcional se conserva en forma de cerros testigos (Cerro de la Muela,
Cerro del Colmillo, etc.). La litologa yesferas todo, algunas del que se tpica la constituyen los y del un paisaje es yesos y Oligoceno, de lomas, margas sobre

Mioceno Sarmatiense entremezclan en ms

que en
por

situaciones

abruptas

interrumpido

conglomerados, areniscas, yesos y calizas del Oligoceno. La

niveles

representacin del

Cuaternario, comprende
a lo largo

distintos

de terraza y diluvios

del Henares y sus

afluentes.

2.1.2. Edafologa

Sobre
situaciones

terrenos la que,

del
la

Oligoceno
primera

se
sobre

distinguen
el

dos se han

definidas:

Oligoceno

Inferior, en

a partir de

margas yesferas,

55

desarrollado Entisols y la segunda, sobre el Oligoceno Superior, formado por areniscas y margas yesosas coronadas por calizas duras con fuerte buzamiento, que han dado lugar a Inceptisols asociados con Entisols.

Fig. 2.1

Situacin del rea de estudio

56 En los valles y en las primeras terrazas de los ros son frecuentes los suelos formados sobre sedimentos fluviales de gran heterogeneidad. Tales suelos, en general poco evolucionados se clasifican como Xerofluvents (Ministerio de Agricultura, 197lb). En general son suelos que han sufrido una amplia desintegracin qumica, con formacin de arcillas iliticas y caolinticas, por lo que su capacidad de cambio es realmente baja. Estas arcillas suelen estar saturadas por iones calcio y tambin puede darse el caso, por especiales condiciones topogrficas, que se presenten arcillas montmorillonticas de neoformacin, lo que implica una variabilidad sustancial en el valor agronmico de estos suelos (Mapa de Suelos de la Provincia de Guadalajara, 1970).

2.1.3. Hidrografa
El es el principal ro que recorre Henares, que el Noroeste de Guadalajara entrega sus estiaje en 1977a). aguas al

prximo a Humanes

canal

del mismo

nombre. En
muchos de

este
ellos

rea los

cursos de

agua
en

presentan acusado,

un rgimen quedando

pluvial con un

verano muy En la zona

prcticamente secos

dicho periodo (Ministerio de Agricultura,

de

muestreo esto

no ocurre

pues el

caudal del
por una

ro Sorbe,

afluente

del Henares,

est regulado

presa situada

aguas arriba.

el ms sinuoso de la red hidrolgica del Tajo y el de mxima pendiente. Por su anchura media de 10.9 a se considera como un ro estrecho (Cataln, 1965). En su curso alto es de carcter torrencial y en su zona media va encajonado abrindose camino por pizarras y arcillas

El ro Sorbe es

57

silricas. En las cercanas de la desembocadura discurre por un paisaje de parameras, a travs de un cuaternario diluvial cuyos materiales remueve fcilmente.

2.1.4. Clima Segn Forteza del Rey en su libro Caracterizacin

(1981), esta

Agroclimtica de un clima

la Provincia

de Guadalajara y un clima

zona se encuentra prcticamente

mediterrneo templado

en la isolinea que

delimita duracin, seco, lo

mediterrneo

continental templado. El rgimen de humedad, la intensidad y situacin estacional del periodo califican como mediterrneo seco.

Las caractersticas climticas de la regin Noroeste de Guadalajara se exponen en la tabla 2.1 y el diagrama climtico de la estacin de Humanes aparece en la figura 2.2. Tabla 2.1. Caractersticas climticas de la zona de
muestreo (Forteza del Rey, Temperatura media anual Temperatura media del mes ms fro... Temperatura media del mes ms clido. Duracin media del periodo fro 1981) 13W

4W
23W

Duracin media del periodo clido....

6 meses 2 meses Duracin media del periodo seco 4 meses Precipitacin media anual 458.3 mm Precipitacin media otoo 134.3 mm Precipitacin media invierno 137.0 130.9 mm Precipitacin media primavera Precipitacin media verano.. 56.1 mm 825.2 Evapotranspi racin potencial media anual 178.4 mm Evapotranspi racin potencial media otoo Evapotranspi racin potencial media invierno.. ..31.l mm Evapotranspi racin potencial media primavera. .167.6 mm Evapotranspi racin potencial media verano.... .448.2 mm

58

2.1.5. Vegetacin

Segn los autores del Mapa de Cultivos y Aprovechamientos de Jadraque (1977) en el trmino municipal de Humanes se pueden distinguir zonas con diferentes utilidades: labor intensiva sin arbolado (barbecho blanco), mosaico de labor y viedo, mosaico de labor y matorral, labor intensiva con arbolado de encina, olivar, viedo, mosaico de olivar y matorral, pastizal. pastizalmatorral, matorral, matorral con arbolado de encina y choperas de ribera acompaadas frecuentemente por Saliz sp.. Eraxinus angn~tifn1ia Vah y Alnns glutinnsa (L.) Gaertn.

HUMANES

(146<~,I
16.53

<10,l0J

510

4~590

36.480

I4.O5~
3.230
950

Fig. 2.2 Diagrama climtico de la zona de Humanes (Forteza del Rey, 1981)

59

La vegetacin natural de

la comarca

que recoge el

rea

de estudio es tpica de la formacin Durilignosa (bosques esclerfilos) con caractersticas ms o menos continentales y se encuadra sintaxonmicamente en la serie mesosupramediterrnea de la encina (Jnnipe.ro
j~Q~fr~

rntiindifnhiap

sigmstum).

Sin embargo en los

mrgenes de los ros el curso de agua y en menor grado clima general de la regin condicionan la existencia geoseries riparias. En el contexto de esta geoserie, vegetacin de las orillas del ro Sorbe a su paso por

el de la el

trmino de Humanes responde a la serie supramediterrnea riparia del aliso (GaLio hrntpriani-Alnto glutinosas sigmetum) que se caracteriza porque la clmax edfica es una formacin silvtica umbrosa, caducifolia, riparia e higroftica en la que domina el aliso (A. glutinosa) y que la
mayora de las veces est junto a agrupaciones de sauces

La serie destaca tambin por la presencia de Galiiim hrntpripnnm Baiss. & Reuter que se extiende por los mrgenes del cauce de agua (Fuente, 1985). Entre sus etapas
seriales se puede encontrar el zarzal higrfilo (RnboRosetnm rnrymhif~ran frangn1~tn~nm ami.) que cubre grandes superficies.

(Sauz sp.).

2.2. Zona de muestreo Es un rea prxima al ncleo urbano

por eje labor y central el ro Sorbe. Est este por la delimitada al

de Humanes que tiene

terrenos de local que carretera

rodeada de

comunica Humanes con Cogolludo, al oeste por una fbrica de harina abandonada, al norte por una zona antropomorf izada con urbanizaciones de casas de campo y al sur por una pista que delimita los terrenos de labor (figura 2.3).

61 diversas herbceas, anuales y vivaces, entre las que destacan

por su presencia mayor: Urtica nrens L., Scirpus bnlngchnpnng L. Geranlina rnhprtipniim L. MeJAiIa glipvppl0ng Ehrh. Buibus ,,lmi Fn] inQ Schott, Rrarhypndinm ~y1vatiriim (Huds.) Beauv.
, , ,

Dapflne Qflid.LIflhI L., Snlanmn ,ii,lrpmprp Galliun hrntpripniimn Baiss. & Reuter.

L., Boa

nerunralis

L. y

La continuidad de la aliseda se interrumpe en pequeos claros debidos a la deforestacin y por la presencia de una mancha de 40 m de longitud de Ebragmites communis Trim y Typba latifriLia L. que tambin aparece en la lengua de ro que separa la orilla derecha de una isla poblada por matorrales de aliso que surgieron espontneos a partir de semillas tradas por el agua y el viento y ocupan una extensin de 93 m de longitud y 20 m de ancho, que representa la zona 2 (Z 2), con un suelo francoarcilloarenoso (47.4 % de arena, 28.9 % de limo y 23.7 % de arcilla). La edad de las plantas oscila entre 5 y 8 aos, la altura media es de 3 m y la circunferencia media a 1.30 m es de 16 cm. Entre los
matorrales de aliso crecen Scirpus
rnhprti~niim L. Lotus mmmii al-ng hnlngrhnpni,g L.
,

L., Garanium Melintus alba Medicus

y Trifnti.um repena U., como especies de mayor cobertura.

En los alisos, tanto viejos como jvenes, se observaban

ndulos en buen estado y con actividad nitrogensica. Cercano a los alisos terreno sin rboles, se ms jvenes, aunque separado por un extiende un bosquete de chopos

clnicos (Populus x bybrida Moench 1-214 clnico) constituido

por

ejemplares de

6 a

8 aos

de edad,

entre 5

y 6

m de

altura, con una circunferencia

media a 1.30 m de 18 cm y una

densidad
los 44

de 0.4 rboles/a2.
anchura y los

Es la zona 3

(Z 3) que alcanza

116 in francoarenosa (arena 65.8 %. limo

m de

de longitud, con textura 18.4 % y arcilla 15.8 %).

62

Entre los chopos se observan ejemplares de Bronnis diandrus Roth, Boa pratensis L., Axena stertlis L., Snlannm dulcamara L., Blantago major L., Sangiiignrha minor Scop., Galium hrnl-nrian,im Baiss. & Reuter, Geraninm rnhprtipnnm TrifnIinm pratense L., Vida sativa L. y Ononis natriz L.. En el tramo prximo a la carretera local alternan los alisos con chopos (Bopulus alba L.), chopos clnicos (Bnpu.lus
x bybirida Moench 1-214 clnico), sauces (Sauz alba L.) y

fresnos (Eraxinus angiis~tifnhia Vah) que conforman un bosquete denso silvtico y umbro donde predominan los sauces. Adems aparecen con gran cobertura, zarzales de Rubus iilnifnIii,g Schott. En menor medida se encuentran Crataegus
monog~sna zulgaris Jacq., C.l.imatis M.italha U., Rosa sp., Senado

L. El suelo del bosque, zona 4 (Z 4), es de textura francoarenosa (57.9 % de arena, 26.3 % de limo y 15.8 % de arcilla) y tiene un contorno irregular con 150 m de longitud y 40 m en la zona ms ancha que disminuye hacia los extremos y desaparece a 50 m del puente
que cruza la carretera local. En la zona sur se observa un desmonte en ladera sobre la se extiende de oeste a antes descritas. este en paralelo representa la

L. y LEan nnmnralig

terraza fluvial que

al cauce del ro y
las cuatro zonas (Z 5) de zona 5

delimita la regin arbolada que comprende

La ladera

suelo francoarcillolimoso (con 13.4

% de

arena, 47.0 % de limo y 39.6 % de arcilla), carece de rboles y esta dominada por vegetacin de terfitos: Bramus ramosus Hudson (Zerna r.). Lalisim sp.; camfitos como Tbymus
masd-irhina L. y

nanofanerfitos:

flaphne gnidium L.,

Osyri.s

alba L. y Retama

spherncarpa (L.) Boiss.. En de Snirpus

algunos puntos

la flora
rodales

de la chopera asciende por

densos

la ladera encontrndose L. y de fiubus

holosehoenus

ulmifalius Schott.

63

Z 1 Aliseda arbrea
Z 2 Matorral de aliso

Z 4 Sauceda Z 5 Ladera
Z 6 Pastizal hmedo

3 Chopera Fg. 2.4

Localizacin de las zonas de muestreo

Entre los matorrales de aliso y el bosquete de chopos se encuentra un rea, zona 6 (Z 6), que discurre en paralelo al
cauce del rio a lo largo de 230 m y de anchura irregular que

en

su punto mximo llega a los 25 m mientras que en la zona ms estrecha se extiende 10 tu. Es un suelo francoarenoso (73.7 % de arena, 15.8 % de limo y 10.5 % de arcilla) donde se desarrolla un pastizal hmedo de composicin florstica anloga al sotobosque de la chopera. Adems aparecen otros elementos como Genista scnrpius (L.) DC. e Hypencum
p.enforatum L.

64

Las seis zonas definidas se indican en la figura 2.4.

2.3. Recogida y preparacin de las muestras Las muestras se recogieron entre el otoo de 1985 y el

verano de 1986. Para ello se eligieron las pocas ms representativas de las cuatro estaciones del ao en funcin de los datos climatolgicos de la regin en los ltimos aos. en las seis zonas citadas donde se recogieron las muestras que se usaron en los anlisis fsico-qumicos y microbiolgicos. Las seis zonas se dividieron en cinco subzonas. En cada subzona de Z 5 y Z 6 se recogieron aleatoriamente cuatro fracciones de tierra. En las subzonas con rboles se eligi uno al azar (en la zona cuarta solo se consideraron los sauces) y se recolectaron las fracciones del rizoplano, de la
rizosfera y del dosel orientadas en los cuatro puntos cardinales (figura 2.5). El rea de estudio descrita se dividi

Para realizar el muestreo de las zonas 5 y 6 y del dosel de los rboles se procedi a retirar la capa superficial de hojarasca con una azada previamente flameada a fin de mantener las condiciones aspticas. Posteriormente en los 15 primeros centmetros se recolectaron las cuatro fracciones de suelo que se trasladaron al laboratorio en bolsas de plstico nuevas conservadas entre O y 4W. En el laboratorio se mezclaron las cuatro fracciones de cada subzona para constituir una rplica y homogeneizar las muestras. Por ello
en todas las zonas se dispuso de cinco rplicas para confrontar los resultados mediante las pruebas estadsticas

65

que se describen posteriormente. En las muestras de la rizosfera se procedi de forma similar, las races se recogieron al azar en los 15 cm primeros y segn el mtodo de Lawley et al. (1983) se agitaron para desprender el suelo adherido y luego se lavaron con agua estril. El rizoplano se recolect, una vez obtenidas las muestras de la rizosfera, mediante agitacin magntica durante 20 minutos de 10 g de races en 100 ml de agua destilada y estril con 25 g de perlas de vidrio de 2 mm de diametro (Sivasithamparam et al., 1979). Las muestras destinadas a los anlisis fsicoqumicos, excepto las fracciones en que se determinaron la textura y la humedad, se secaron a 55W a fin de evitar prdidas significativas de nitrgeno inorgnico, se tamizaron luego por una malla de 2 mm y se almacenaron en frigorfico entre 2
y 4W

en recipientes suelo

de que

vidrio con

cierre sobre

hermtico. El papeles de

anlisis microbiolgico de las mismas muestras se realiz con

fracciones de
filtro

se extendieron

hasta su

completo secado.

Despus se

tamizaron por pero en ningn

mallas de 2 mm y 0.2 mm de luz. Se almacenaron en recipientes de vidrio cerrados con algodn entre 2 y 4W, caso se conservaron ms de 72 h en el refrigerador.

2.4. Anlisis fsicoqumicos

Se

determinaron

humedad, pH.

nitrgeno

total, amonio,

nitrato, carbono orgnico y textura.

66

2.4.1. Medida de la humedad de las muestras Se realiz por el mtodo gravimtrico. Las muestras de tierra destinadas a este fin se trasladaron al laboratorio en recipientes hermticos. Posteriormente, se pesaron en balanza de tres Despus cifras decimales y se secaron en estufa se volvieron a pesar en das sucesivos a 110W. hasta la

obtencin de una pesada constante.

~
z1
2 1. Aliseda arbrea 2 2. Matorral de aliso 2 8. Chopera

ZS Z2 zo za
Z4

Do
Ap; rizoplano Rl: <melera Da: dosel

2 4. Sauceda
Z 6. Ladera Z 6. PastIzal hmeda

&

$il?i

Fig. 2.5

Localizacin de las muestras respecto al sistema radical de las plantas

67

2.4.2. Medida del pH Se tierra durante CRISON modelo realiz frente a agua destilada. Se mezclaron 20 g de y 20 ml de agua destilada por agitacin vigorosa 20 minutos. Despus se midi con un peachmetro digit 501 provisto de un electrodo combinado de vidrio Radiometer GI< 2401 C.

2.4.3. Determinacin del nitrgeno total Se realiz la digestin de las muestras de suelo segn el mtodo de Kjeldhal (1883) y a continuacin se evalu el
in amonio producido.

La muestra de suelo se sec en horno a 550C hasta peso constante en las tres primeras cifras decimales. A 0.2 g de la muestra de suelo se aadieron 25 ml de H 2504 concentrado y 10 g de catalizador (K2S04 y CuSO~., 15:0.5). La mezcla se mantuvo a 500W durante 1 h para que el cido oxidara los distintos componentes y todo el nitrgeno de la muestra pasara a (NH4)=SO~.. Una vez fro se extrajo 1 ml del lquido digerido y aadieron 5 se diluy con 45 ml ml de NaOH 10 M y se de agua destilada. agit para facilitar Se la

sustitucin del amonio. El amonio liberado se determin con un electrodo especifico, modelo ORION 95-10-00 conectado a un
mv/pHmetro CRISON digit 501. Los datos obtenidos el. fin de transformarlos solucin estandar de se llevaron a una recta patrn con

en unidades de nitrgeno 100 ppm de NH4Cl. Los

total. La valores

recta patrn se traz a partir de diluciones sucesivas de una

correspondientes se ajustaron

a una recta

por el mtodo

de

68 los mnimos cuadrados.

2.4.4. Determinacin del nitrgeno amonio El mtodo utilizado fue similar al descrito se en el

apartado anterior, aunque en este digestin previa de las muestras.

caso no

realiza la

Se parti de 5 g de suelo a los que se aadieron 45 ml de agua destilada y 5 ml de NaOH 10 M. La mezcla se agit y el amonio liberado se determin con un electrodo especfico para este in, modelo ORION 95-10-00 conectado a un mv/pHmetro CRISON digit 501. Tambin se traz una recta patrn a partir de diluciones sucesivas de una solucin estndar de 100 ppm de NH4Cl como fuente de amonio. Los valores correspondientes se ajustaron a una recta por el mtodo de los mnimos cuadrados.

2.4.5. Determinacin del nitrgeno nitrato (1970). Se basa en el empleo de una solucin extractora del in nitrato.
Se tomaron 4 q de suelo y se disolvieron en 20 ml de 20 dej Se utiliz el mtodo de Milham aL al.

solucin extractora. Mediante difundan hacia el medio

agitacin vigorosa durante acuoso. La solucin se

minutos se consigne que los nitratos contenidos en la muestra

sedimentar y se procedi a medir el nivel de nitrato.

Se emple,
CRISON

como en

los casos anteriores,

un electrodo

un mv/pllmetro
especfico para

digit 501

provisto de

69 nitrato ORION 900200. La recta 93-07-00 y de un electrodo de referencia

patrn

se

realiz

partir

sucesivas de una solucin estndar de 200 solucin extractora. Los valores obtenidos se ajustaron recta por el mtodo de los mnimos cuadrados.

de diluciones ppm de RNO3 en a una

La

composicin

de

la

solucin

extractora 16.66 g 1.24 g 4.67 g

2.43 g 1000.00 ml

es

la

siguiente:

A14S04)3.18 H20
H3B03 Ag2SO4 N11450311

Agua destilada

2.4.6. Determinacin de carbono orgnico Se utiliz el mtodo de Walkley y Black (1934) modificado. Se basa en la oxidacin del material del suelo fcilmente oxidable con dicromato potsico. La muestra de suelo se trat con exceso de oxidante y la proporcin gastada del mismo se determin por retroceso con una solucin valorada de sal ferrosa. A 1 g de tierra secada previamente en estufa a 55W hasta pesada constante en las tres primeras cifras decimales se le incorporaron 15 ml de K2Cr=O, 1 N y 20 ml de H2SO-. concentrado, agitando la mezcla durante un minuto para
dejarla reposar despus durante 30 minutos. A continuacin se diluy la solucin con 200 ml de agua destilada, con final de
(y/y)

el la para

objeto de hacer ms

facilitar la patente

observacin y 20

del punto al 50% gotas de

titulacin. Se

aadieron 25 el viraje

ml de H3P04

difenilamina

70

sulfrica retroceso.

como indicador

y se

valor con

FeBO4 0.5

N por

Simultneamente se realiz una prueba control sin suelo y con los mismos reactivos, a fin de considerar tambin los productos oxidantes de los reactivos. porcentaje de carbono orgnico de la muestra de suelo se obtuvo teniendo en cuenta que 1 ml de la solucin de K2Cr=O-, equivale a 0.003 g de carbono y que el mtodo es efectivo en un 75%, por lo cual el factor de correccin al 100% es 1.33 (Garca, 1981).
El

2.4.7. Textura

La textura del suelo se determin por el mtodo Bouyoucos, basado en la dispersin de las partculas en un medio lquido, utilizando una solucin acuosa de metafosfato sdico y carbonato
obtener una

sdico en

concentracin suficiente
de sodio. Previamente

para
la

concentracin

0.5 N

materia orgnica de la muestra se elimina con perxido hidrgeno, filtracin y lavado con agua. Mediante densmetro de Bouyoucos se comprueba la densidad de suspensin a determinados tiempos y aplicando la ecuacin
Stokes se (Day, 1965).

de el la de

obtiene el dimetro de las partculas sedimentadas

2.5. Estudio de la densidad microbiana

Se estudiaron por el mtodo de diluciones de suelo (Pochon y Tardieux,

grupos funcionales: microflora

las suspensiones 1962) los siguientes

total,

microorganismos

71 proteoliticos, microorganismos amonificantes, microorganismos nitrificantes nitrosos y microorganismos nitrificantes ntricos.

2.5.1. Preparacin de las suspensiones-diluciones de suelo Se procedi a elabarar un banco de diluciones sucesivas partiendo de 10 g de suelo. Para ello, se deposit la tierra en un mortero estril y se tritur finamente. Se agregaron 20 ml de agua destilada estril continuando con la trituracin de la muestra, que se homogeneiz y trasvas a un erlenmeyer
estril, lavando varias veces el mortero con pequeas

fracciones de agua destilada tambin estril, hasta completar en el erlenmeyer 100 ml. Las siguientes diluciones se obtuvieron a partir de la suspensin de 10-.

2.5.2.

Preparacin

de los medios de cultivo

Todos los medios de cultivo empleados en el anlisis de los distintos grupos funcionales (ver apndice) se elaboraron segn las tcnicas de Pochon y Tardieux (1962), excepto el medio para proteolticos, en cuya preparacin se utiliz el medio de cultivo Difco para proteolticos enriquecido con
solucin salina (5 ml/l).

2.5.3. Condiciones de cultivo de los grupos funcionales analizados

Las distintas comunidades estudiadas se inocularon en los medios de cultivo mediante cantidades variables de las suspensionesdiluciones de suelo, segn la densidad relativa

72

previsible de los diferentes grupos y la posibilidad de contaminacin qumica del medio de cultivo a travs del inculo que pudiera falsear el anlisis de los metabolitos durante la lectura de los resultados. El nmero de rplicas por dilucin y el de diluciones se escogi en funcin del nmero de microorganismos de cada grupo que normalmente pueblan los suelos, considerando, sin embargo, un amplio margen de posibles variaciones (Tabla 2.11).

Tabla 2.11 Grupo funcional

Condiciones de cultivo para los grupos funcionales anal izados Inculo (m) 1 0.5
1

Nmero de rplicas 5 3
3

Diluciones

Temperatura (0C) 28 28
28 28 28

Microflora total Proteolticos

Amonificantes

l0~a lolo 10--a lOa

10-a l0-~

N. nitrosos
N. ntricos

5
5

2.5 2.5

l0-a 106 10-a 106

2.5.4. Clculo del NMP y de la actividad biolgica

El NNP de microorganismos se evalu segn el mtodo de McCrady (1918). Para ello se calcul el nmero caracterstico
en funcin prueba, pero indirecto de los estima tubos positivos teniendo para la que, que aparecieron que de este aparicin en cada mtodo siempre en cuenta

resultados

positivos, basta con un nico microorganismo por inculo. Como indicativo de la actividad biolgica utilizamos 1987). un

parmetro denominado T50 (Gutirrez Maero.

73 Para evaluar el T50 es necesario confrontar el tiempo de incubacin con el crecimiento bacteriano expresado en unidades del ndice de dilucin medio lmite, ID = Mm, donde N representa el nmero total de tubos positivos y dudosos y
n, el nmero de rplicas por dilucin. A los tubos positivos

se

les da el valor

1 y 0.5

a los dudosos.
5, 7, 9.

Las lecturas se
el caso

efectuaron los das 1, 2, 3, 4,

11 y 15 en

de los microorganismos proteolticos y amonificantes. Para las microfloras nitrificante nitrosa y ntrica las lecturas se realizaron los das 10, 20, 30, 40 y 50. El resultado son curvas de tipo acumulativo que pueden transformar en rectas susceptibles de un anlisis
regresin lineal

se de

tomando el crecimiento en unidades Probit y

el tiempo en log (da+l). El mtodo de transformacin en unidades Probit ha sido descrito por Fisher y Yates (1963). En resumen este procedimiento consiste en cambiar cada valor del crecimiento por el correspondiente porcentaje del crecimiento final y realizar luego un cambio a unidades de
desviacin tpica.

Con los datos transformados se calculan las rectas de regresin del crecimiento sobre el tiempo segn los mtodos
usuales de mnimos Torne, de correlacin cuadrados (Sokal y Su nivel de de Rohlf, 1979; Steel y 1980) cuyo ajuste se expresa a travs del coeficiente (r). significacin libertad, depende que es nmero grados de

exclusivamente del ha estabilizado.

funcin del nmero de das en los cuales el crecimiento no se

En estas rectas se calcula el tiempo que se tarda en alcanzar el crecimiento medio bacteriano (5 unidades Probit), que debe coincidir con el punto de inflexin de la curva acumulativa, que es el T50. Es importante sealar que la

74

ventaja de este parmetro como medida de la actividad estriba en que su valor no est influenciado por el valor del crecimiento final y no est directamente relacionado con el NP, que se analiza independientemente. El T50 es una prediccin de la variable independiente (tiempo) a partir de la dependiente (crecimiento). Segn Sokal y Rohlf (1979), el intervalo de confianza para este tipo de predicciones no es simtrico, lo que podra dificultar posteriores anlisis. Sin embargo, dado que la magnitud de los errores obtenidos es bastante baja, lo es tambin dicha asimetra. Adems este ligero sesgo es ciertamente independiente de los factores a comparar. Por estos motivos se ha considerado que la pequea asimetra terica no constituye un impedimento para contrastes paramtricos como lo es el anova.

2.6. Tratamiento de la informacin En el presente estudio hemos trabajado con variables

fsico-qumicas y con variables biticas como el iMP y la actividad biolgica. La evaluacin de estas variables est expuesta a posibles errores experimentales, si bien los mtodos empleados son de uso bastante generalizado por lo que
su eficacia y sus limitaciones estn suficientemente

probadas. El error experimental, en estos casos es aleatorio, por lo que la distribucin de mediciones para una variable
determinada para y sus el errores uso de se pruebas pueden considerar para como el aleatorios, o por lo menos, lo suficientemente parecidos como permitir paramtricas

contraste de las hiptesis formuladas.

Los factores estudiados son las estaciones del ao, la

proximidad al

sistema radical de

las plantas y la

zona con

vegetacin leosa y si sta es diazotrfica.

75

Para la comparacin de los datos, tanto biticos como abiticos, se ha utilizado el anlisis de la varianza (anova) bidireccional con rplicas y tres factores de variacin (Sokal y Rohlf, 1979). Cuando dichos factores ini luyen significativamente al nivel del 95 (*) o 99 % (t*), se
procede a la comparacin de los valores medios mediante el

test estadstico LSD (mnima diferencia significativa) (Sokal y Rohlf,1979). Los datos fsicoqumicos se agruparon en tres matrices de informacin que se sometieron al anlisis de la varianza y LSD con objeto de evaluar las diferencias entre la rizosfera y el dosel de las plantas y de cada una de ellas respecto a las reas control. En la primera se consideran los resultados de la rizosfera y del dosel de las cuatro muestras recogidas bajo los alisos, chopos y sauces. La segunda se refiere a los
valores de la rizosfera y de las dos zonas sin vegetacin

arbrea. La

tercera comprende los

datos del dosel y

de las

dos zonas control. Los datos microbiolgicos se agruparon en cuatro

matrices. En la primera se prescindi de los datos de las zonas 5 y 6. Los valores del rizoplano y de ambas zonas
carentes de rboles constituyen la segunda matriz. Las la

matrices tercera
reemplazando los rizosfera y del determinar las los controles.

cuarta

se realizaron
del las plantas

como

la
los

segunda
de

resultados dosel de

rizoplano por zonas,

respectivamente para rizoplano,

diferencias entre las tres

rizosfera y dosel y posteriormente

entre cada una de ellas y

De esta

manera

se consiguen

matrices equilibradas
el efecto de

que
la

permiten apreciar

la variacin estacional,

76

vegetacin,

las diferencias sobre cada

entre

plantas y tanto

el impacto del bitica como

sistema radical abitica.

variable,

Adems, con el propsito de comprobar si dos variables son independientes o covaran, se han hecho anlisis de covarianza segn Sokal y Rohlf (1979). Este mtodo permite comprobar si una variable covara con otra o si la correlacin entre ambas est alterada por efecto de las fuentes de variacin que influyen en ellas. Tambin se han considerado los valores medios de los

datos, tanto fsico-qumicos como biticos y se ha empleado el anlisis de componentes principales (llarman, 1967), con el fin de descomponer la varianza total de la muestra en una serie de factores de variacin, donde quede reflejada la importancia de cada una de las variables, as como la
influencia del conjunto de variables en la dispersin de las

muestras analizadas.

RESULTADOS

78

3.1. Tendencias de variacin en el conjunto de observaciones Los anlisis de las variables biticas y abiticas, la de

realizados tal y como se ba descrito en el captulo anterior,

han permitido su estudio individualizado para determinar relacin entre su variabilidad y los factores objeto
estudio en el presente trabajo. Previo a este

anlisis

detallado, con los datos obtenidos se ha procedido a determinar las tendencias de variacin que muestra el conjunto de observaciones y las variables que ejercen mayor peso y que por tanto caracterizan los diferentes grupos de observaciones. Para ello se ha utilizado el anlisis de componentes principales. El anlisis de ordenacin
en

se

ha

efectuado
los

con

dos
se

estructuras diferentes

funcin de

procesos que

quieren observar y por ello presentan efectuadas datos en el de las

se han realizado dos matrices de observaciones que fsicoqumicas da como y variables lo que

datos. En la primera se incluyen todas las microbiolgicas

(por tanto no se consideran las observaciones rizoplano) resultado una

matriz de variables

x etapa de muestreo x

zona x proximidad

al sistema radical que refleja las tendencias de variacin que se deben al efecto de las tres fuentes de variabilidad citadas sobre las muestras que se han analizado. La segunda matriz se centra en las variables microbiolgicas a nivel del rizoplano, de la rizosfera y del dosel, con el fin de diferenciar la interrelacin entre la microbiolgica y las tres fuentes de variabilidad.
El anlisis de componentes

comunidad

principales realizado

sobre

la

matriz

de

16

variables (abiticas

biticas)

40

observaciones permite

representar las muestras en un espacio

79

Tabla 3.1 Porcentaje EJE 1 2 3

de absorcin de varianza por los ejes % Varianza 51.99 15.98 8.50 % Acumulado 51.99 61.97 76.47

Tabla 3.11 Factores de carga de las variables en ls tres primeros ejes Variable pH C orgnico N total C/N N-Amonio
NNitrato Humedad NMP Mt NMP P

EJE 1 0.17 0.28 0.30 0.16 -0.31

0.06 -0.25 0.32 0.33

EJE 2 0.36 0.11 0.10 0.09 0.06

0.56 -0.06 0.11 0.08

EJE 3 0.36 0.36 0.15 0.31 0.02

0.05 0.47 0.19 0.11

NMP NNP NMP T50 T50

A No Ni P A

0.33 0.14 0.29 0.24 0.29

0.21 0.02

0.03 0.42 0.27 0.21 0.02

0.06 0.45

0.17 0.45 0.008 0.12 0.26

0.18 0.04

T50 No TSO Ni

Mt = Microflora total;

Microflora Proteoltica;

A = Microf lora Amonificante; No = Microf lora Nitrificante Nitrosa; Ni = Microf lora Nitrificante Ntrica

80

Fig. 3.1

Anlisis de las variables biticas debida al rizoplano.

componentes principales efectuado con y abiticas, eliminada la variabilidad

a) Espacio definido por los tres ejes primeros que ordenan las observaciones segn su proximidad al sistema radical.
O Rizosfera S Ladera

ODosel

O Pastizal

hmedo

b) Espacio definido por los ejes 1-2. Muestra tres grupos de observaciones que corresponden a los datos de la aliseda y de los controles. Aliseda arbrea Rizosfera Dosel Matorral de alisoRizosfera Dosel Laderas Pastizal Chopera Sauceda
U Rizosfera Dosel U Rizosfera

Dosel humedo

c) Proyeccin de las observaciones en plano de los ejes 12. Las agrupaciones definen la variabilidad estacional. O Otoo
1

Invierno

Primavera

V Verano

En las tres figuras se ejes.

indican las. variables que definen los

a>

Nitrato NMP NO

QN

2
eje2 O

-2
-4
TaO Ni TGO P NMP p NMPA4.5 NMP MI T50 A NMP Ni TaO P

eje 1

b)

eje 2*
14~ Nitrato NMP No

U.
NMP 5

/1WS@:

e
e. e s e e e
TBO P T50 A

NMPAU
NMP MI

MM.
Tao ni Tao p

c)
eje *4
.

2* y p

Nitrato NMF No

o ov o
NMP 1 NMP A NMP Mt

y p

AP
pi

ojal
NMP Ni TSO P TSO A

o o
p p

uP1
y p y p

T60 Ni

TaO 5

82

definido por tres y por dos ejes principales que absorben un porcentaje de varianza acumulado del 76.47% y 67.97% respectivamente (tabla 3.1) y por tanto la ordenacin se refiere a estos ejes principales. Los factores de carga de las 16 variables en los tres

ejes se exponen en la tabla 3.11. Las variables de mayor peso en la dispersin de las muestras en el eje principal 1 son la actividad de la comunidad amonificante, la densidad de microorganismos nitrificantes ntricos y la actividad de la microf lora proteoltica (hacia el extremo positivo) y el iMP de microorganismos proteolticos, amonificantes y microf lora total (hacia el extremo negativo). En el eje 2 las variables de ms influencia son en el polo positivo la concentracin de nitrgenonitrato, la densidad de microorganismos nitrificantes nitrosos y el pH, mientras que en el extremo negativo destacan las bajas actividades biolgicas de los grupos nitrificante ntrico y proteoltico. En el eje 3 son la humedad y el NMP de microorganismos nitrificantes nitrosos (hacia el extremo positivo) y el pH y el NMP de microl lora total <hacia el extremo negativo), aunque la distribucin de las muestras en la figura 3.la indica que este eje no
representa marcada. En la figura 3.la se observan tres reas bien una tendencia de variacin suficientemente

delimitadas

que corresponden a las observaciones localizadas la rizosfera, en el dosel y en las dos

de vegetacin arbrea. La nube de puntos

respectivamente en
zonas carentes de

las muestras rizosfricas est desplazada hacia el eje 2. lo que indica que la zona rizosfrica se caracteriza por altas contribuciones en el extremo negativo del primer eje de los
grupos de microorganismos proteolticos, amonificantes y

83

microflora total. El conjunto de muestras de las zonas control se encuentra prximo al eje 3. que coincide con el extremo positivo del eje 1, y por tanto las muestras sin vegetacin arbrea se caracterizan por la densidad de microorganismos nitrificantes ntricos, la actividad de la microf lora amonificante y en menor grado la actividad proteoltica. La concentracin de nitratos, la actividad de los microorganismos nitrificantes ntricos y la densidad de la microflora nitrificante nitrosa con factores de carga tajos en el eje 1 se pueden considerar que identifican las observaciones del dosel que se localizan en la zona media del eje 1. En las tres reas citadas se diferencian otras dos tendencias de agrupacin de las observaciones (figuras 3.lb y 3.lc). La segunda tendencia (figura 3.lb) se refiere a las observaciones de las zonas de muestreo y nos permite separar las muestras de la aliseda de las muestras de la zonas de los chopos y de los sauces, dentro de las reas descritas en la figura 3.la. Por tanto la variacin que induce el sistema radical de las plantas tiene mayor peso en la ordenacin de las observaciones que la zona. En estas condiciones las
muestras de la rizosfera de los alisos ordenadas y en el extremo negativo del eje 1 se caracterizan por la densidad de microorganismos proteolticos, amonificantes microflora total. Los elevados pesos de la actividad amonificante, de la densidad de microorganismos identificar estos nitrificantes ntricos caractersticos del y de la

actividad proteoltica en el polo positivo grupos como los chopos y de los sauces. En la zona la figura 3.lc se aprecia en las dosel y de

del eje 1 permite dosel de

nubes de puntos de que las

rizosfrica, del

los controles

observaciones de otoo aparecen desplazadas

hacia el extremo

84 negativo del eje 1, por el contrario las muestras de invierno se orientan hacia el extremo negativo del eje 2. Esta tendencia, basada en la variacin estacional, no est muy marcada y por tanto podemos indicar que la variabilidad estacional se encuentra eclipsada por las variaciones que se deben al sistema radical y al efecto zona. El anlisis de los componentes principales de las observaciones de la matriz de los datos exclusivamente microbiolgicos del rizoplano. de la rizos era y del dosel de las zonas pobladas con alisos, chopos y sauces se representan
en un espacio definido por dos ejes que en conjunto absorben un 76.41% de varianza (tabla 3.111).

La representacin

grfica (figura

3.2a) indica que

las

observaciones se localizan Las muestras del dosel se eje 1 que se caracteriza

amonificante, la

en dos zonas claramente definidas. agrupan hacia el polo negativo del por la actividad de la microflora
de los microorganismos

densidad

nitrificantes nitrosos y con menor peso relativo la actividad

proteoltica (tabla 3.1V). Las

de la rizosfera tienden a uno que presenta de la la amonificantes, microorganismos

observaciones del rizoplano y

de los total microorganismos y de los con mayor

ocupar el extremo positivo del eje densidad microflora

proteoliticos como

las variables

peso entre los factores de carga. En la figura 3.2b se aunque es las observa una segunda tendencia de se debe a la

ordenacin que manifiesta zona de muestreo, de la rizosfera

la variabilidad que

menos patente que la descrita en muestras del rizoplano y de la aliseda se

el prrafo anterior. As, entre las

observaciones

85

Tabla 3.111 Porcentaje EJE 1

2

de absorcin % Varianza 64.69

11.12

de varianza

por los ejes

% Acumulado 64.69
76.41

Tabla 3.1V Factores de carga de las variables en los dos ejes

primeros Variable EJE 1 EJE 2

NMP iMP iMP NMP iMP T50 TSO

Mt P A No Ni P A

T50 No T50 Ni

0.40 0.38 0.40 0.35 0.35 0.26 0.35 0.23

0.20

-0.10 -0.15 0.09 0.06 0.24 0.43 0.29 0.46

0.65

Mt = Microf lora total; P Microf lora Proteolitica; A = Microf lora Amonificante; No = Microf lora Nitrificante Nitrosa; Ni = Microf lora Nitrificante Ntrica

86

distribuyen hacia el extremo positivo del eje 1 y aparecen definidas por la densidad de los microorganismos amonificantes, de la microf lora total y de la microf lora proteolitica. Sin embargo las observaciones del dosel de los alisos se localizan prximas a la zona media del eje 1.
orientadas hacia el polo negativa,

y se caracterizan por los factores de carga ms bajos que corresponden a la actividad de los microorganismos proteolticos. La presencia de los TSO de los microorganismos nitrificantes con bajos pesos en el extremo positivo del eje 1 identifica a estos microorganismos como caractersticos del rizoplano y de la rizasfera de los chopos y de los sauces. Mientras que las observaciones del dosel de los chopos y sauces aparecen en el extremo negativo del eje 1 donde la actividad de la comunidad amonificante y la densidad de microorganismos nitrificantes nitrosos son los factores de carga de mayor peso relativo.
Al igual que suceda en el anlisis una de componentes biticos, tendencia las de

principales de la matriz variaciones variacin

de datos abiticos y representan

estacionales no

marcada. Solo las observaciones que corresponden a se diferencian porque tienden a ocupar

la etapa de invierno una los

el extremo positivo del eje 2 (figura 3.2c). Este eje absorbe varianza muy inferior al eje 1 microorganismos nitrificantes (tabla 3.3) y su extremo ntricos, nitrosos y positivo se identifica por la contribucin alta de los T50 de proteolticos.

87

Fig. 3.2 Anlisis de componentes principales de las variables biticas de las observaciones del rizoplano, rizosfera y dosel de los alisos, chopos y sauces. a) Proyeccin de las observaciones en el plano definido por los ejes 12. Se diferencian dos grupos: uno formado por el dosel y otro por el rizoplano y rizosfera. Aliizoplano
El Rizosfera

Oflosel

b) Espacio definido por los ejes 1-2 que diferencia las observaciones que corresponden a la aliseda de las que se localizan en la chopera y sauceda. Aliseda arbrea Aliizoplano Rizosfera Dosel
Mlii zosfera

Chopera Aliizoplano Uliizosfera Dosel Sauceda Aliizoplano aliizosfera Dosel

en el plano definido

Matorral de alisoliizoplano Dosel

c) Ordenacin de las observaciones O

por

los ejes 12 que refleja la variacin estacional. Otoo 1 Invierno

Y Primavera

Verano

En las tres figuras se ejes.

indican las variables que definen los

a)

o o o o
iMP NO 00 A TSOP ~

o o o o

jee2. TIO NI
760 P

u 00
A
A

88 o
IIMF A
NMP MI NMP 5

Am
A

o o o o
*4*45 NI

e e
NMP No TSOA 60 5

Uu

u.
U A
eJ 1*
NMP A iMP MI

e
*4*45 Ni NMP 5

eje 2*
TaO Ni

rrao No TGO P
y

o
P

y
p

y
*4*45 No
50 A

lo
5>

5>

TGO 5

o o
5>

Pp ~I IP P

~
Ov 5>

o
5>

eeit
*4*45 A NMP Mt NMP 5

y
5>

y VV y

o
y

NK4P NI

HMP 5

89

3.2. Anlisis
Para

fsico-qumicos
mejor las vas edficas

por las que circula el nitrgeno y determinar las condiciones del medio en que se desarrollan los microorganismos mineralizadores se
entender

procedi a realizar los anlisis fsicoqumicas citadas anteriormente.

El conocimiento de los radical, as como de su valores de evolucin

de

las

variables

tales variables y temporal, contribuye

de a

las diferencias espaciales que presentan respecto

explicar las variaciones en la los de microorganismos.

al sistema

densidad y en la actividad de

Los resultados de las pruebas estadsticas (ANOVA y

de cada variable

LSD)

analizada se expresan al final del captulo

en las tablas 3.XII a 3.XXI.

3.2.1. pH

En todos los suelos examinados se ligeramente bsico (tabla 3.V). Los

aparecen cerca de los la rizosfera de la mientras que aliseda arbrea

observa un resultados
en

carcter extremos
7.17, bajo el

alisos. El pH ms bajo elevado.

se registra en invierno,

el dato ms

8.27. se observa

dosel de los matorrales de aliso en verano. En la hallan los aliseda, figura 3.3 suelos se aprecia que. bajo y los ms rizosfera de los chopos, cidos en se la

ms bsicos

fundamentalmente en la

los alisos de

porte arbreo. El anlisis de la varianza de los datos de las

90

Tabla 3.V Resultados medios del pH. Se indica la media de cinco rplicas su error estndar
ZA Z2 7.990.02.
6.140.01

Z3

Z4

25

Za

R4
Do

7.880.02
7.960.01

8.100.02 6.090.01. e. iio.oi .. 8. 140.01 6.050.01 7.940.03 6.050.05

.

6.040.01
7.690.02.

RE. .7.170.02. 7.490.01 Do 7.900.03 7. 960.02

7.970.02
6.060.02 7.950.01

Rl Po
Do
.

7.610.02
7.960.02

7.770.02
7.960.02

8.060.02. 6.110.01 8.200.02 8.200.01

6.020.01. 6.070.01 8.140.02.

..

6.020.03.

7.990.02

V Rl

7.990.03. 6.120.0.1

8.110.01 6.270.01

8.150.02

6. 060. 01

8.050.01

p Pirosfera

Z 1 22 3 Z 4 5 6

Alisada arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hsiedo

6.4
8.2

Rf Ri2osiera fo Dosel O 1 P V Otoo Invierno Pri~avera Verano

a
7.8

7.8
7.4

7.2 1

1 Dosel

AliStda ~bO.

B.ua.d.

Ltd.,.

pastin

Fig. 3.3 Variaciones entre las zonas y las estaciones de los resultados medios del pH

91

4.4 0*

44

4.a

o
VA 7.4
.4 7* 7 01

ePA~
FA 7.4
- -

rs 1

Alcedo arbarea

Matorral do alIso

0.4 es

0.4

0J

o
YA 7.0
74 7.2

o
VA

?.0
ti TI

0 Chopors

Sauceda

-~

Rzoefer.

a- Doec

Otoo

Invierno ; P

Primavera

Verano

Fig. 3.4 Variaciones entre la rizosfera y el dosel de los resultados medios del pH

92

fracciones de suelo del dosel y de la rizosfera (tabla 3.XII) indica que las diferencias entre zonas no se deben al azar (pcO.Ol, F=274.6). En el cuadro de comparacin entre medias (tabla 3.XV) se observa que todas difieren significativamente entre s (p<O.Ol), a excepcin de la chopera y sauceda. En los ANOVA de las zonas rizosfrica (tabla 3.1(111) y del dosel (tabla 3.1(1V) con los controles se aprecian diferencias significativas (p<O.Ol, F=208.6 y F=39.3 respectivamente). Los cuadros de comparacin entre medias de ambos grupos de observaciones indican que las diferencias con respecto a las zonas 5 y 6 son significativas en todos los casos excepto la rizosfera de los sauces y el dosel de los alisos ms desarrollados. Al comparar la chopera y la sauceda tanto a nivel rizosfrico como de dosel no se detectan diferencias significativas, sin embargo las rizosferas de ambas zonas y de los alisos presentan variaciones (p-cO.Ol) e igual ocurre con las muestras del dosel (p-cO.Ol). Las variaciones
(p<O.0l) y las

estacionales
tanto si del dosel

(fig.
se consideran (F=335.l) con

3.3)
solo como en las

son
las el

significativas agrupamiento de

fracciones rizosfricas

zonas

sin arbolado

muestras cuadros

rizosfricas (F=298.l) y del de comparacin entre medias se estacin el pH es ms elevado. La sauces. que tercera del fuente sistema de

dosel (F=91.2). En los

observa que el invierno es la de esto el momento en que

con pH menor y la poca

variabilidad de los

es

la

zona

de y

influencia

radical

alisos, chopos

La grfica 3.4 representa

estos datos. En todos los es mayor Los anlisis de la son significativas

casos la concentracin de la del dosel sealan varianza

protones de la rizosfera diferencias

de las mismas plantas. que estas

(pc0.01) entre ambas zonas y que

las interacciones entre las

93

tres fuentes de todos los casos.

variacin

son

significativas (p<O.0l)

en

3.2.2.

Carbono orgnico de carbono orgnico de las fracciones de se expresa en tanto por ciento (tabla 3.VI). ms elevado,
rboles de

El contenido

suelo analizadas El resultado

de los

5.12 %,
aliso en

se encuentra
invierno.

en la
Por el

rizosfera

contrario, las fracciones de suelo del pastizal de verano registran el porcentaje inferior de carbono orgnico, 1.07 %. La figura 3.5 representa las variaciones entre zonas en la rizosfera y en el dosel, durante las cuatro estaciones. Cerca de los alisos ms desarrollados se observan los niveles
ms altos de carbono orgnico y en la zona poblada con los en chopos las concentraciones ms bajas de vegetacin arbrea, que son los controles sin rboles. Cuando se agrupan los datos de la el anlisis de la varianza significa rizosfera y del dosel, que las diferencias las cuatro zonas con

superiores a los encontrados

entre zonas
F=138.4. resultados diferencias

no se deben
de la

al azar
y

(p<O.Ol) con
del dosel con se

un valor

de

En el ANOVA de las zonas libres de arbolado con los rizosfera encuentran valores de significativas (p<0.Ol) unos

F=253.l y de F=142.4 respectivamente (tablas 3.XIII y 3.XIV). Los cuadros de comparacin de medias (tabla 3.XVI) carbono

sealan que la zona de los alisos es la

ms rica en

94

Tabla 3.VI Concentraciones medias de carbono orgnico (%). Se indica la media de cinco rplicas su error estndar
.21
O. RE Dc 4.770.17 4.410.20

22
3.200.13

23
2.670.16

.24
3.230.09

-z s

26

3.020.17
3.490.12 3.270.08

.2.450.09.
2.910.07 2.640.07

2.910.21
3.790.10 3.120.21. 2.900.10.

1.710.07

1.390.10

1 P
Y

RE
Do

5.120.17 4.670.12

2.160.07

1.910.06

RE
Do

4.090.19 3.070.12 3.260.2~. 2.930.16

3.790.21 3.120.21 e e
.4 2.660.13 2.760.16

2.540.12. 2.310.09.
2.460.13.

2.760.16 2a30.Oa. 2.730.14

1.560.12..

1.150.09

RE Da

2.210.09

1.470.10

1.070.05

a
2
1 0

p Alzosfera

1 22 3 4 25 26

Aliseda arbrea t4atotral de aUso Chopera Sauceda Ladera Pastizal h~iedo

e
8

Rf Rizosfera Do Dosel O 1 P y Otoo Invierno Prhiavera Verano

.4

a
2

1 Dost

Ng.

Alteada arbna Matorral da ale. C Ohope<a ~ Sauceda ~J lAdera ~ paetital 3.5 Variaciones entre las zonas y las estaciones de las concentraciones medias de carbono orgnico (%)

95

a. e. aa.
o E Aliseda arbrea Y

4.

4.

ao 1
M.to,ra de aliso

fi

e.
4-

a.
4-

aa

a-

o Asucede

cnop.ra

~-

Rizcefera

a.

Otoo

Invierno ; P

Primavera ; V

Verano

Fiq.

3.6 Variaciones entre la rizosfera y el dosel de las

concentraciones medias de carbono orgnico (%)

96

orgnico y que no hay variaciones significativas suelos de los alisos arbustivos y de los sauces. Las variaciones estacionales aparecen

entre

los

en la figura 3.5.

Los ANOVA reflejan diferencias significativas (p<0.01) con una F=39..5 para el caso de las muestras rizosfricas y del dosel (tabla 3.1(11), mientras que en el agrupamiento de las zonas sin vegetacin leosa con las fracciones de la rizosfera se obtiene un valor de F=35.5 (tabla 3.1(111) y en relacin al dosel, F=30.8 (tabla 3.1(1V). Tanto en la rizosfera como en el dosel, los niveles de carbono orgnico varan de forma similar durante todo el ao y en los cuadros de comparacin entre medias aparece el invierno como la poca de concentracin ms alta de carbono orgnico, que desciende en primavera y verano sin que significativas entre ambas estaciones. existan variaciones

El contenido de carbono orgnico en la

rizosfera y en el

dosel de
grficas

cada zona se
manifiestan

refleja en
que la

la figura 3.6.
es

Todas las
con de la la

rizosfera

la regin

niveles ms elevados de

carbono orgnico. El anlisis

varianza confirma que el contenido de carbono orgnico de rizosfera y del dosel difieren en un 99% (F=27.5). Las interacciones entre los significativas excepto la cuando se observa del dosel

factores de variacin no son de las muestras

interaccin estacin-zona (p<0.0l) por otra cuando se consideran

por una parte el conjunto

y de la rizosfera y

los datos de las zonas 5. 6 y del dosel.

97

3.2.3.

Nitrgeno total aparecen en la tabla de nitrgeno total por

niveles de nitrgeno total 3.VII y se expresan como miligramos gramo de suelo analizado. La fraccin de suelo que

Los

contiene menos nitrgeno total

se recogi en primavera en el pastizal hmedo (0.95 mg/g). La concentracin ms elevada se registra en otoo en la
rizosfera de los rboles de aliso (5.18 mg/g). Las variaciones entre la figura 3.7. Se registra 3.2.2.)
.

las seis zonas de carbono

se representan orgnico

en

observa una evolucin similar a contenido

la que se (apartado alisos,

en

el

Los resultados ms altos aparecen bajo los

y los inferiores en la ladera y en el pastizal. de la varianza sealan que existen azar (p<0.Ol) entre las zonas 5 de la rizosfera y del dosel las zonas, tanto si se (F=250.9).

Los anlisis

diferencias no debidas al renen los datos como si se asocian con

y 6 (F=614..4 para las

fracciones rizosfricas y

F= 349.6 para el suelo del dosel). Los cuadros que de comparacin de medias (tabla zonas 3.XVII)

establecen niveles de

las alisedas a los

son las

con proporcin En la el caso los casos

mayor de nitrgeno total y que entre los chopos se encuentran menores detectados entre los sauces. que en comparacin de las muestras rizosfricas con las zonas libres arbolado se observa la misma tendencia anterior e igual ocurre en los doseles. En todos

las fracciones de suelo del pastizal y de la ladera presentan concentraciones significativamente menores.

98

Tabla 3.VII Concentraciones

21

de

nitrgeno

total

indica la media de cinco rplicas su error 24 Za Z2 23

4.700.09
3. 750.06

(mg/gr Se estndar

RE Do RE Do.RE

5.160.13 4.260.06 4.660.07 4.040.04

3.690.1.1 2.820.05 3.570.13 2.65*0.08.

3. 86ct.o6.
3.140.06

4.040.04

2.890.06 3.850.05 2.810.06

2. 560.07

1.880..05 1. 660. .10

1. 400..14
1.210.06

1
P
Y

4.440. 05 3.640.08
2.690.09 2.390.08

3.800. 04 2.840.07
2.330.06 1.740.05

Do
Rf

2.500.05 2.730.09 2.640.07

1.160.09

0.950.07

2. 990. 07
2.500.16.

2.480.12
1.790. 10

Do

1.370.15

1.220.07

e
4

3
2

o
o Pirosfera
6 5> y

1 Aliseda arbrea 22 Matorral de aliso Z 3 Chopera 24 Sauceda 3 Ladera Z 6 Pa~tizal hedo Rf Rizosfera Do Dosel O 1
P

a
4

3
2

Otoo Invierno P:iaanra Verano

o
0
1

Dosel

O
~

Aliseda .rb<sa flaucada

Met.r,sI de aliso

Chopera PastIzal

~B

Lsde*.

Fig. 3.7 Variaciones entre las zonas y las estaciones de las concentraciones medias de nitrgeno total (mg/g)

99

e
a.
4

.4
4

e
t

el

a-

Aliseda arbrea

1 Matorral de aliso

e
a. a.
4.

a5-

8~

a
1-

o Cho~ra

1~

Sauceda

Rizcefer.

---

Dosel

Otoo ; 1

Invierno ; P

Primavera

; 3/

Verano

Fig. 3.8 Variaciones entre la rizosfera y el dosel de las

concentraciones medias de nitrgeno total (mg/g)

100
La grfica 3.7 refleja las variaciones estacionales. Los

anlisis de la varianza indican que tales diferencias no se deben al azar (p<0.0l) con valores de F=496.9 en el agrupamiento rizosferadosel, de F=234.7 cuando se considera el conjunto rizosferazonas sin vegetacin leosa y de F=157.2 en el caso doselzonas sin rboles. Los cuadros de comparacin de medias sealan que el otoo es la poca del ao en que se alcanzan niveles ms altos de nitrgeno total. En invierno los resultados son inferiores y en verano y primavera se encuentran las concentraciones ms bajas. Las diferencias fracciones de suelo
3.8.

entre la regin rizosfrica y las del dosel se representan en la figura

la proporcin de nitrgeno

En

las

cuatro estaciones

total alcanza los resultados mayores en la zona rizosfrica. El anlisis de la varianza seala que la variacin entre ambas zonas no se debe al azar (p<O.Ol y F=501.0).
Las interacciones entre las tres fuentes de variacin

que se estudian, son significativas (p<O.Ol) en todos los casos salvo la interaccin zonasistema radical cuando se analiza el conjunto de datos rizosferadosel, lo que indica que en la rizosfera la concentracin de nitrgeno total es significativamente mayor que en el dosel.

3.2.4. Relacin carbono/nitrgeno Los resultados de la relacin carbono/nitrgeno carbono orgnico suelo analizadas y valor los ms bajo. de matorrales se y de se 6.81. aliso

determinan a expresan en a

partir de la la tabla

los datos de 3.VII. de El

nitrgeno total de corresponde

las fracciones de rizosfera

101 recogida en otoo, y la relacin carbono/nitrgeno mxima, 14.9, se registra en el pastizal en invierno. Las variaciones entre zonas se representan en la figura 3.9. Los resultados ms elevados se observan en las zonas 5 y 6. Entre las zonas pobladas con rboles los alisos ms desarrollados presentan la relacin carbono/nitrgeno superior. Estas variaciones son significativas (pcO.0l) (tablas 3.311, 3.3111 y 3.31V). En los cuadros de comparacin de medias (tabla 3.311111) se aprecia que, si consideramos solo los valores de las zonas con plantas, la relacin carbono/nitrgeno mnima corresponde a las fracciones de suelo de las zonas con matorrales de aliso y chopos. Si los datos de la rizosfera se reunen con las zonas 5 y 6, el cuadro de comparacin entre medias sela que los controles sin rboles tienen las relaciones carbono/nitrgeno ms elevadas. Estos resultados se repiten cuando se comparan las medias de las zonas sin rboles y de las fracciones de suelo recogidas bajo el dosel. Las variaciones estacionales (grfica 3.9) son significativas en todos los casos (p<O.Ol). Entre las cuatro primeras zonas, tanto en la rizosfera como en el dosel, la primavera es la poca del ao en que los niveles son mayores y sin embargo en la ladera y en el pastizal la relacin carbono/nitrgeno es mayor en el invierno. Las tablas de comparacin entre medias indican que en la primavera se obtienen los datos ms altos y en el otoo el cociente carbono/nitrgeno desciende de forma significativa. En el anlisis de la varianza de los rizosfera y del dosel se advierten diferencias azar (p<O,Ol y F=62,7). Los valores aparecen 3.10. donde se aprecia que en las zonas 1, 2, datos de la no debidas al en la grfica 3 y 4 durante

102 Tabla 3.VIII Resultados de la relacin C/N. Se indica la media de cinco rplicas su error estndar
ZI O RE Dc 9.240.42 10.330.50 .12 6.610.22 5.020.33

z.

Z4 7.990.16 10.020.~6 9.610.15 11.030.56 11. 230.09 12.. 250.54 10.720.1.7 10.290.29

..Z5

A 6

6.970.50 7.760.20

9.100.26
13.190.55

10.130.36
14.900.16

Rl
ha

10.490.26.
12.060.26

7.660.30.
9.010.35

7.670.24..
10.030.35. 10.890.38 13.320.20. 10.040.31. 12..390.20
.

.P.

Rf
Do

11.060.24. 10.740.69
11.570.06. 12.550.44 9.630.36. 11.080.39

13.490.43

12.4.90.53

Rf
Dc

10.600.49
11.030.66

11.O70.55~

9.770.12

14

la

lo

o
Rizoslera

1 Aliseda arbrea 2 Matorral de aliso Chopera 24 Sauceda 25 Ladera 6 Pastizal hniedo Rf Hizosfera Do Dosel

14

O
12

P y

Otoo Invierno Priniavera Verano

10

1 Dosel

Ml ~ Sauceda

brse

Matorral de aliso

Chapar.

tau.,.

Fig. 3.9 Variaciones entre las zonas y las estaciones de los resultados medios de la relacin C/N

103

14~

2 -

I2

la

la

ae,

a,

AIs.d.a,b&n

MitorflJ da .JIso

$4

la

la

lo

lo

a
e.

a e
1 P y

Chance

Saucada

Pirosfera

Dosal

Otoo ; 1

Invierno

Primavera ; y

Verano

Fig. 3.10 Variaciones entre la rizosfera y el dosel de las resultados medios de la relacin C/N

104

todo el ao la proporcin carbono/nitrgeno es ms elevada bajo el dosel, excepto en las fracciones de suelo de la sauceda de la temporada estival. La interaccin de los dos primeros factores de variacin, estacin y zona, siempre es significativa (p<O.Ol), pero no as las interacciones restantes (tablas LXII, 3.XIII y 3.XIV).

3.2.5. Nitrgeno-amonio Los niveles de nitrgenoamonio de las fracciones de suelo analizadas se detallan en la tabla 3.IX y se expresan en pg de nitrgenoamonio por gramo de suelo. Las concentraciones oscilan entre 56.03 pg/g en la rizosfera de los alisos arbreos recogida en otoo, y 13.21 pg/g en las fracciones de suelo de invierno del pastizal. Las diferencias en los niveles de nitrgenoamonio cuando la fuente de variacin es la zona se representan en la grfica 3.11. Los anlisis de la varianza indican que las variaciones en ningn caso se deben al azar con una probabilidad superior al 99%. El cuadro de comparacin entre medias (tabla 3.XIX) de las cuatro primeras zonas expresa que no hay diferencias entre los chopos y los sauces, que son las dos zonas con niveles ms bajos de nitrgenoamonio, mientras que ambas alisedas tienen cantidades superiores. Si se comparan las zonas de las fracciones rizosfricas y de las zonas 5 y 6, aparece el nitrgenoamonio en proporcin mayr en las muestras de la zona rizosfrica. El cuadro de comparacin de medias de los datos del dosel y de las zonas libres de vegetacin leosa refleja que no hay variaciones

Tabla 3.IX Concentraciones medias de nitrgeno-amonio (pg/g>. Se indica la media de cinco rplicas su error estndar

z.
O 94 fla 94. 56.031.52

Z.2.

23

24
35.781.43 .25.691.25
. -

52.681.hl 35.551.01 36.361.26 39.911.51 25.781.38

37.421.21 35. 471. 35

19.900.58

..

18.670.43.

2.

Do P Y 94
Do

31.701.54 31.161.41 54.541.91

38.911..-66

21.811.44 17.171.58

21.001.25 19.200.92

14.14O.68~. 13.~210.34~

51.271.49 35.091.33 34.691.49 45.861.58 26.550.95 26.121.25

19.84.54~

.16.570.42

94
Dc

46.952.16. 45.861.58 23. 771. 56 28. L41.AS 35.131.79 33.271.77 21 501.69 21 950.78

15.820.50

15. 570. 59

1 Rlzosfera

1 2 3 24 2 5 6

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hmedo

60

R Rizosfera Do Dosel O

60

1
40

P V

Otoo Invierno Primavera Verano

30

20

lo

1 Dosel

Allaed arbrea ~ Sauceda ~

Matorral de all. Ladera ~

Chap... PastIzal

Fig. 3.11 variaciones entre las zonas y las estaciones de las concentraciones medias de nitrgenoamonio (pg/g)

106

GO

ea
00~

Co

40

40

00

80

0-

lo

lo 0 1 P y 0 1 p y

Aflssda trb&ea

Matorral de aliso

ea so
4*

ea
CO
-

SC

so-

20

So -

lo. o 1~ y

lo o p y

Chonra

8auoeda

fliroefera

~-~---

Dosel

Otoo

Invierno ; P

Primavera

31

Ve rano

Fig. 3.12 Variaciones entre la rizosfera y el dosel de las concentraciones medias de nitrgenoamonio (pg/g)

107 entre la chopera y la sauceda, ni aliso y los de porte arbreo. entre los matorrales de

La figura 3.11 corresponde a las diferencias estacionales. En las dos grficas los resultados menores se encuentran en invierno. Los anlisis de la varianza recogen las variaciones como significativas <p<0.Ol) con valores de F=91.4 para el conjunto de las cuatro primeras zonas, de F=106.8 para las zonas 5 y 6 y las fracciones rizosfricas, y de F=35.8 para el dosel y las zonas 5 y 6. En los tres casos las tablas de comparacin entre medias indican que el otoo y la primavera no difieren de forma significativa en la proporcin de amonio, y son los resultados ms elevados de todo el ao. En el verano descienden las cantidades de amonio y en invierno aparecen las concentraciones inferiores. Las diferencias a lo largo del ao entre la rizosfera y

el dosel de las distintas plantas se representan en la grfica 3.12. La rizosfera es la zona de contenido mayor de nitrgenoamonio. El anlisis de la varianza con una F=240.9 confirma que las diferencias son significativas con una probabilidad del 99%. Las interacciones zonasistema radical (F=6.2) y estacin-sistema radical (F=ll.3) tambin son significativas.

3.2.6. Nitrgeno-nitrato Los datos de la nitrgenonitrato por tabla gramo 3.K de expresan los pg suelo analizado. de Las

concentraciones oscilan entre 0.92 pg en el pastizal durante el invierno y 19.90 pg en el dosel de la sauceda durante el verano.

108 El primer factor de variacin que se estudia es la zona. Las variaciones en los resultados se representan en la figura 3.13. En el pastizal y en la ladera se observan resultados muy bajos y las concentraciones mayores corresponden a las zonas con chopos y sauces. Los ANOVA de las muestras rizosfricas y del dosel (F=1697.7), de las zonas 5 y 6 junto con la rizosfera (F=4468.l) y del dosel junto con las zonas 5 y 6 (F=9083.5) confirman que las diferencias no se deben al azar con una significacin del 99%. En las tablas de comparacin entre medias (tabla 3.XX) no aparecen diferencias entre ambas zonas sin vegetacin leosa, donde los niveles de nitrato son los ms bajos de todas las fracciones de suelo. Entre las zonas 1, 2, 3 y 4 hay variaciones significativas y las concentraciones ms altas se encuentran en la sauceda. La variacin estacional (figura 3.13) es significativa (pCO.0l) en los tres anlisis de la varianza. Las tablas de comparacin entre medias indican que los datos ms elevados se alcanzan en el verano y por el contrario el invierno es la poca del ao en que se detectan las concentraciones menores de nitrato. Las diferencias entre la rizosfera y el dosel de las plantas se expresan en la figura 3.14. Se aprecia que el dosel alcanza concentraciones de nitrato superiores a las rizosfricas. El contraste es mayor en las alisedas. El anlisis de la varianza refleja que estas diferencias son significativas <p-cO.Ol). Las interacciones entre los tres factores de variacin difieren de forma significativa (p<0.O1) en todos los casos.

109 Tabla 3.X Concentraciones medias de nitrgeno-nitrato (pg/g). Se indica la media de cinco rplicas su error estndar
ZA Z 2. Z3 Z4 Z5

Rl Do 94 Do RE Do RE ha

9.700.34 15.250.16

7.610.13 15.350.16

15.880.21 15.650.12. 18.110.21. 18.520.20 17.900.11 18.150.16 15.020.36

1.300.03

1.100.03

6.720.15. 6.530.22 16.000.10 12.92O..22. 13.030..17~ 16.930.19 9.890.28 14.760.25 7.240.21 14.680.20 14.860.25 18.210.15

1.020.04

0.920.02

18.690.21
17. 790.21 19.900.21

1.090.03

0.980.02

10.790.11.. 6.740.25.. 16.000.26 16.940.09 15.760.14 19.380.19 20

1.. 340.04.

200.03

lo

lo

o
o Rmelera
20

21 22 23 24 23 26

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hmedo

Rf Rizosfera Do Dosel O 1 V Otoo Invierno Primavera Verano

lo

lo

o o
0 1 Doeel P 4

AMaada arbrea Sauoda

Matorral da aliso

Chopera

Efl

Ladera

Pastizal

Fig. 3.13 Variaciones entre las zonas y las estaciones de las concentraciones medias de nitrgeno-nitrato (pg/g)

lo

lo

lo

y-

hUsada arbs.

Matorral di aliso

SO

aO

lo

16

lo

lo

O.

o Cttopts

huosde

Riroefra

0*5.1

Otoo ; 1

Invierno ; P

Primavera

31

Verano

Fig. 3.13 Variaciones entre las zonas y las estaciones de las concentraciones medias de nitrgeno-nitrato (pg/q)

111

3.2.7. Humedad El nivel de humedad de las fracciones de suelo se expresa en tanto por ciento en la tabla 3.XI. Los resultados oscilan entre el 3.71% del dosel de la chopera durante el estio y el 40.20% de la rizosfera de los alisos ms jvenes en invierno. Las variaciones entre zonas aparecen en la figura 3.15. Durante todo el alio las dos alisedas mantienen el grado de humedad ms elevado. Los anlisis de la varianza registran que las diferencias no se deben al azar (p<0.Ol) y los cuadros de comparacin entre medias <tabla 3.XXI) concretan estas variaciones e indican que entre los matorrales de aliso est la humedad mxima. En las zonas 3. 5 y 6 el porcentaje de humedad desciende hasta los niveles ms bajos. Los ANOVA tambin sealan diferencias significativas entre estaciones (p<O.Ol). La variacin estacional se recoge en la figura 3.15. Las grficas y los cuadros de comparacin entre medias muestran que en el verano el suelo est ms seco; la humedad aumenta en la primavera y en el otoo, estaciones que no difieren de forma significativa, y en el invierno el nivel de humedad es muy superior. Entre la rizosfera y el dosel se advierten tambin La

diferencias no debidas al azar (p<0.Ol y F=20.l). rizosfera es la zona con mayor humedad (figura 3.16).

Las interacciones entre los tres factores de variacin solo indican diferencias significativas en el caso estacin-zona (p<0.Ol y F=33.6).

112 Tabla 3.2(1 Porcentajes medios de humedad (%?J. Se indica la media de cinco rplicas su error estndar
2.1
O RE Dc
RE

22

23

24

.2.5

26

33.780.32 35.640.35.
33.060.45 39.780.90 39.000.99 34.650.51 40.201.12 39.531.06.

5.310.14. 4.600.17

12. .700k 17 11.760.28,,

6.560.16

4.460.24

8.460.16. 2L180...30
7.670.20. 20.260.30 5.960.3t 14.500.41..
. -.

Dc P

.9.470.39

7.650.21

ef
Do RE Do.

32.900.82.. 36.070.81
32.010.61 35.010.80

5.190.30 13.490.40
5.270.10 3.710.12 9.170.14 6.490.22.

7.240.21.

5.040.25

25.600.13 26.100.22
24.300.24 50 25.390.15

5.800.08.

5.690.12.

40

30

20

lo

1 22 23 24
o
i
p y

o R1zo81era
80

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda 25 ladera 26 Pastizal hniedo Rf Rizostera Do Dosel O 1 P y Otoo Invierno Priniavera Verano

40

30

20

lo

o Dosel

Aliseda arbrea S.uo a da ~

Matorral de aliso Ladera

~ ~

Chopera PaaIltal

Fig. 3.15 Variaciones entre las zonas y las estaciones de los porcentajes medios de humedad (%)

113

a.

a.

40

So
SO

SO

o
lo

lo

o. 0 1 P

AIssda srbds@a

Mstorrai ds aliso

SO

do

SC

SO

lo

Chopera

Saucd.

RIza*hr<

Dosel

Otoo ; 1

Invierno ; P

Primavera ; 31

Verano

Fig. 3.16 Variaciones entre la rizosfera y el dosel de los porcentajes medios de humedad (%)

114

Tablas 3.111 a 3.11V.

Significacin de los ANOVA (F) de las variables fsicoqumicas

115 Tabla 3.1111 ANOVA de las variables fisico-guimicas de rizosfera y dosel. Se indica la F y la significacin FUENTES DE VARIACION 1 pH 335.1 (**) 2 274.6 (**) 138.4 (**) 250.9 (**) 12.5
(t*)

3 462.9 (**) 27.5 (**) 501.0 (**) 62.7 (**) 240.9 (**)

4 30.6 (**) 4.8 (**) 6.5 (**) 6.3

<*t)

5 87.5 (**) 1.9 (NS) 1.5 (NS) 2.3 (NS) 6.2 (**) 226.0 (**) 0.01 (NS)

6 74.9 (**) 0.04 (NS) 11.9 (**) 0.7 (NS) 11.3 (**) 14.1 (**) 0.1 (NS>

7 16.5 (**) 0.8 (NS) 3.0 (**) 1.3 (NS) 1.1 (NS) 8.2 (**) 0.09 (NS)

C orgnico

39.5 (**) 496.9 (**) 72.7 (**) 91.4 (**)

N total

C/N

Namonio

241.5 (**)

0.4 (NS) 22.7 (**) 33.6 (**>

Nnitrato

123.4 1697.7 2903.8 (**) (**) (**) 480.9 4607.4 (**) (**) 20.1 (**)

Humedad

Fuentes de variacin: 1 Estacin 2 Zona 3 Sistema radical 4 Interaccin Estacin Zona 5 Interaccin Zona Sistema radical 6 Interaccin Estacin Sistema radical 7 Interaccin Estacin Zona Sistema radical
-

Significacin:

**

NS

p<O.0l no significativo

116

Tabla 3.11111

ANOVA de las variables fsico-qumicas de la rizasfera y de las zonas sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

pH

298.1 (**)

208.6 (**)

34.2 (**)

C orgnico N total
C/N

35.5 (**) 234.7 (**)

65.1 (**)

253.1 (**) 614.4 (**)

36.9 (**)

1.4 (NS) 11.2 (**)

11.3 (**)

Namonio
Nnitrato Humedad

106.8 (**)
41.5 (**) 284.3 (**)

385.5 (**)
4468.1 (**) 3055.5 (**)

3.9 (**)
22.8 (**) 28.6 (**)

Fuentes de variacin: 1 Estacin

2 Zona
3 Interaccin Estacin Significacin: p<O.Ol

Zona

**

NS

no significativo

117

Tabla 3.111V ANOVA de las variables 1 isico-guimicas del dosel y de las zonas sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

pH C orgnico
N total C/N Namoni o Nnitrato Humedad

91.2 (**) 30.8 (**)

157.2 (**) 46.9 (**) 35.8 (**) 127.3 (**) 277.0 (**)

39.3 (**) 142.4 (**)

349.6 (**) 4.6 (**) 163.9 (**) 9083.5 (**) 2719.1 (**)

5.4 (**) 2.8 (**)

9.6 (**) 8.5 (**) 0.5 (NS) 13.9 (**) 25.9 (**)

Fuentes de variacin:
1 Estacin 2 Zona 3 Interaccin Estacin Significacin: Zona

**

p<O .01
no significativo

NS

118

Tablas 3.1131 a 3.11111. Significacin de las diferencias de las variables fsicoqumicas entre las estaciones del ao y las zonas de muestreo.

En cada tabla se presentan tres apartados: a) Significacin de los rizosfera y del dosel. datos de las observaciones de la

b) Significacin de los datos de las observaciones de las zonas sin rboles y de la rizosfera de las zonas arboladas. c) Significacin de los datos de las observaciones zonas sin rboles y del dosel de las zonas arboladas. de las

En todas las tablas los resultados medios de las observaciones se disponen en orden creciente de izquierda a derecha y de arriba hacia abajo. Significacin:
**
*

p<O.Ol

NS

p<O.O5 no significativo

119

Tabla 3.1131 Significacin de las diferencias entre los resultados medios de pH a)

Z2 Z4 Z3

** ** ** ** **

o
NS
Z4 y P O

Z1

Z2

Z2
b)

** ** ** ** ** ** ** ** ** * ** **

ze
Z5 Z4 Z3

P **

IIL~
Z5 Z4

NS

** ** **

y **

Z1

Z2

Z6

Z6
c)

Z5

Z2 Z4 Z3 Z1 Z6 Z5 Z2 Z4

p **

**

** ** **

y **

Z 1 Aliseda arbrea
Z 2 Matorral de aliso Z 3 Chopera

Z 4 Sauceda Z 5 Ladera
Z 6 Pastizal hmedo

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

120

Tabla 3.11311 Significacin de las diferencias entre las concentraciones medias de carbono orgnico a)

Z4 Z.2 z1

**

P NS

o
** Z2 y p O

**~** Z3 Z4

ZS
b)

Zt3 Z2 Z4 Z1 Ze Z5 Z3 Z2 Z4 y p p NS
** **

o **

a)

Z5

za
Z4 Z2

NS
**

z1 Z6 Z5 Z3 Z4 Z2

**

**

**

Z 1 Aliseda arbrea z 2 Matorral de aliso 2 3 Chopera

Z 4 Sauceda Z 5 Ladera Z 6 Pastizal hmedo

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

121 Tabla 3.113111 Significacin de las diferencias entre las concentraciones medias de nitrgeno total a)

Z4~ ** Z2
Zil

y
** **

**

** ,**

o
P y

Z3

Z4

Z2

Z5
b)

z3 Z4
Z2 y

z1
Z6 Z5 Z3 Z4 Z2

o
p y

c)

Z5
Z3 y **
** ** ** **

Z4
Z2 Z-1 ZG Z5 Z3 Z4 Z2

**

Z 1. Aliseda arbrea Z 2 Matorral de aliso Z 3 Chopera

Z 4 Sauceda Z 5 Ladera Z 6 Pastizal hmedo

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

122 Tabla 3.1131111 Significacin de las diferencias entre los resultados medios de la relacin C/N

a)

Z3 Z4 Z1 Z2 Z3 Z4 y P

b)

Z2 Z4 Z1 Z6 ZS Z3 Z2 Z4 Z1 Z6 P o y y

a)

Z3 Z4 Z1 ZO Z5

NS NS
** ** **

NS NS NS
*

NS NS
*

y ** NS NS
Z1
II

**

** ** **

NS Z6

P ** o

Z2

Z3

Z4

Z 1 Aliseda arbrea Z 2 Matorral de aliso

Z 3 Chopera

Z 4 Sauceda Z 5 Ladera Z 6 Pastizal hmedo

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

123 Tabla 3.11111 Significacin de las diferencias entre las

concentraciones medias de N a)

amonio

Z4 Z2 Z1

NS
** **

y ** p
** ** **

o
Z3 Z4 Z2

NS p

b)

Z5 Z3 Z4 Z2 Z1 ZO Z5 Z3 Z4 Z2 y ** p ** o **
** **

NS p

c)

Z5 Za Z4 Z2 Z1 Z6 Z5 Z3 Z4 Z2 y P o y
Z4 Sauceda Z5 Ladera Z6 Pastizal hmedo

Z 1 Aliseda arbrea Z 2 Matorral de aliso Z 3 Chopera

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

124 Tabla 3.1111 Significacin de las diferencias entre las

concentraciones medias de N a)

nitrato

Z1 za Z4
Z2 Z1

za

z5
b) Z2

z1 za Z4 Z6 Z5 Z2 Z1 Z3

o
y

cl

ZS

Z2 z1 Z3 Z4 Z6 ZS Z2 Z1 Z3 P o
y P O

z 1 Aliseda arbrea 2 2 Matorral de aliso z 3 Chopera

Z 4 Sauceda 2 5 Ladera Z 6 Pastizal hmedo

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

125

Tabla 3.XXI Significacin de las diferencias entre los porcentajes medios de humedad a)

Z4 z1 Z2 Z3 Z4 Z1

**

p **
**

NS
** **

Z3
b)

Z5 Z4
ZA Z2 o P

Z6

Z3

ZS

Z4

Z1

c)

Z6

Z5 Z4 Z1 22
Z3 za Z6 o
P

Z4

zi

z z z

1 Aliseda arbrea 2 Matorral de aliso 3 Chopera

Z 4 Sauceda
Z 5 Ladera Z 6 Pastizal hmedo

O Otoo; 1 Invierno; P Primavera; 31 Verano

126

3.3. Anlisis microbiolgicos. A continuacin se detalla el estudio de las comunidades de microorganismos edficos que desempean un papel fundamental en la degradacin de la materia orgnica nitrogenada al mineralizar el nitrgeno dentro de los ecosistemas terrestres. Los anlisis se dirigen a dilucidar
el tamao y la actividad de dichas comunidades en las

fracciones de suelo donde fsicoqumicas citadas, estacionales y espaciales. Se incluye un anlisis

total a fin de conocer

se determinaron las variables estudiando las variaciones

de la
la

densidad de la

microf lora
de las

proporcin

relativa

poblaciones

que se estudian.

3.3.1. Densidad de la microf lora total

El nmero ms probable de microorganismos totales en fracciones entre 62x10 los de suelo analizadas es del orden de microorganismos/g de rboles de aliso las 10

suelo (tabla 3.XXII). Los datos oscilan en el rizoplano los 0.54x10 en

microorganismos/g de suelo en el otoo y

de
el

pastizal durante

el invierno, que representa el

0.87% de la

densidad mxima bajo los alisos. En las cuatro estaciones al sistema radical los y en las tres zonas altos referidas

resultados ms

se registran

entre los alisos sobre todo en la zona 1, aunque entre los chopos y los sauces el Nl4P es elevado. La densidad desciende en los controles sin vegetacin Leosa, con diferencias
escasas entre ambos (figura 3.17). El anlisis de la varianza

Tabla 3.111111 Densidad media de la microl lora total (riO)

22

23

Z4

25

26

.0

Rp Rl Do

62.008.79 60.006.37 7.601.12

51.0010.9 50.0010.5 5.201.13

31 607.49 32. 504.00 30.306.52 32.004.60 4. 391.04 4.521.51 19.603.66 16.203.57 2.460.59 21. 806.27 19.905.16 2.840.72 27. 503.87 25.204.34 3. 630.94 22.604.51 22.905.45 2.660.65

1.130.15

0.960.20

Rp Rl
Da

32.005.40 30.504.15 30.409.31 26. 906.06

5.501.01 4.200.76

0.860.14

0.540.09

Rp 54.0010.5 Rt~- 53.009.44 Dc 6.400. 79 Rp Rl Da 37.509.43 35.6011.5 5.701.01

42. 005.40 26.906.09 41.407.67 25.705.86 5. 000.81 3.340.61 33.405.67 31.607.65 4.400.71 23.605.21 22.005.54 2.790.48

0.950.10.

0.700.12

0.940.17

0.770.15

o
AI~pIano Rhro.t.ra

21 22 3 4 25 26

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hrtedo

Ro Rizoolano R~ Rizosfera Do Dosel

Oos.i

Aliseda arbrea Sauceda ~

Matorral de aliso Ladera

Citooe<a

O 1 P Y

Otoo invierno Primavera Verano

Pastizal

Fig. 3.17 Variaciones estacionales y entre zonas de la densidad media de la microf lora total (ro)

128

70

70 CO

COCO.

Ca 40 So SO -

40
So a.

lo.
0 1

lo.
P Y 0 1 P Y

Masa arbma

Mflrral a aflso

It

70

e, Co. 40 eaO -

Co40 40SO -

lo 0 1 Y

lo O O fi P Y

Cflopsrs
a Alzosfsra Dosel

Sauceda

-4

RIzopisno

-4-

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano

Fig. 3.18 Variaciones entre el rizoplano, rizosfera y dosel de la densidad de microf lora total (xlO)

de las zonas con rboles (tabla 3.XXVII) indica que las diferencias son significativas (p<O.0l y F=l5.l). Los ANOVA de los datos del rizoplano, de la rizosfera y del dosel junto con las zonas 5 y 6 ratifican que las variaciones no se deben al azar. En el caso del rizoplano la F es 37.9 (tabla 3.111131111), en la rizosfera, 30.1 (tabla 3.1111111) y en el agrupamiento del dosel, 26.8 (tabla 3.111111), datos que se
corresponden con un grado En las tablas de de significacin superior al 99%. comparacin entre medias (tabla 3.1111111) no

aparecen variaciones entre la chopera y la sauceda, pero s entre stas, la aliseda y las zonas sin arbolado. El NNP de la microflora total de los alisos de porte arbreo, tanto en la rizosfera como en el rizoplano es mayor que el NMP de microorganismos en los alisos arbustivos, aunque las
diferencias no son significativas. Sin embargo, cuando se

considera el dosel sensibles (p<O.Ol).

de

los

alisos,

aparecen

diferencias

Los cambios estacionales se indican en la figura 3.17. En las tres grficas aparece el otoo como la poca ms favorable para el desarrollo de los microorganismos y el invierno como la estacin en que se detecta el NMP menor. En las zonas 5 y 6 las diferencias son mnimas. Los anlisis de la varianza de los resultados de las seis zonas detectan diferencias muy significativas (p<O.Ol), salvo cuando se
asocian los datos del dosel y de las zonas sin vegetacin

leosa (p<0.O5). En los cuadros de comparacin entre medias se observa que la densidad de la microflora total es elevada en otoo y en primavera, estaciones entre las que no se aprecian variaciones significativas, mientras que en verano e invierno, en mayor grado en esta ltima, disminuye el NMP de
microorganismos. Ambas estaciones son muy homogneas y no se

diferencian entre s.

130

La grfica 3.18 refleja las fluctuaciones del NMP en el rizoplano. la rizosfera y el dosel de las plantas durante el ao. La densidad de la microf lora total desciende bajo el dosel de las plantas en las cuatro estaciones y el rizoplano y la rizosfera apenas difieren. El ANOVA seala variaciones no debidas al azar (9=108.9 y p<O.Ol) y la tabla de comparacin entre medias indica que la densidad de microorganismos en el rizoplano es mayor que la media rizosfrica, variaciones a pesar de significativas. que estos datos no expresan La media del NNP bajo dosel es

del orden de 7 veces inferior a la media de densidad en el rizoplano y en la rizosfera. Estas variaciones no se deben al azar Las interacciones de los tres factores de variacin detallados difieren en el grado de significacin. Los ANOVA no detectan variaciones significativas en las interacciones estacinzona y estacinsistema radical, ni cuando considera el efecto triple, estacinzonasistema radical.
interaccin nivel de p<O.05. se

La

zona-sistema radical (9=2.5) es significativa al

3.3.2.
El

Densidad de la microf lora prateolitica

NMP de microorganismos proteolticos La veces densidad de menor que la los se expone en la del la microf lora el

tabla 3.XXIII.

microorganismos es

orden de

100

densidad de

total y los resultados oscilan entre 58x10~ microorganismos/g de suelo en el rizoplano de los rboles de aliso durante otoo y 0.8xl0~ en el pastizal y ladera durante el verano.

131

Las variaciones entre zonas (figura 3.19) se caracterizan porque son muy uniformes. Los datos ms altos se aprecian en ambas poblaciones de alisos. En las cuatro zonas control (chopera, sauceda, ladera y pastizal) no aparecen cambios de gran relieve. En las cuatro estaciones la densidad inferior se observa en las zonas carentes de vegetacin arbrea. El anlisis
las diferencias

de la

varianza (tabla alisos y significativas

3.XXVII) revela las zonas

que Los

entre los

control con

vegetacin leosa son

(F=33.44. p<O.Ol).

ANOVA de las zonas 5 y 6 con el

rizoplano,

la rizosfera y el

dosel, sealan variaciones entre zonas no debidas al azar (p<O.Ol). La comunidad proteoltica de los rboles de aliso es significativamente mayor (p<O.Ol) a la que se encuentra en los matorrales de aliso, chopos y sauces (tabla 3.32). En la aliseda ms joven la densidad de microorganismos es
intermedia entre los resultados de la aliseda arbrea y de

los chopos y de los sauces,

Los

entre los que no hay diferencias.

se representan en la figura

canibios estacionales

3.19. En el

rizoplano la densidad ms elevada corresponde pues en a la

se aprecia en primavera. la En pero

el

otoo, sin embargo, en la rizosfera

microorganismos poco importante,

y en el dosel el NI4P

mayor de de forma

invierno y verano desciende

el N}IP de microorganismos, invierno

comunidad

proteolitica alcanza el 82% de la que aparece en el otoo. Los anlisis de la datos no varianza de los cuatro conjuntos de

revelan diferencias

grandes entre las

estaciones,

porque en ningn caso p es inferior a 0.05.

Las variaciones entre el en la rizoplano. figura la rizosfera y La densidad el

dosel

se

representan

3.20.

132

Tabla 3.111111 Densidad media de la microf lora proteolitica (xlO~)

ZA Z2 23 24 25 26

ftp Rf Do ftp

58.0016.4 23.205.01 6.002.23 42.005.22

36.605.02 16.403.55

5.301.40
26.603.27 14.602.57 4.361.17 35.004.14 17.001.60

17. 603.12 12.402.03 2. 000.27 17.601.56. 1.500.35 17. 204.79 12. 80 60 1. 2.540.61 15.002.47 10. 001. 55 2.220.51

19.203.18
14.203.85 2.460.46 19. 204.67 2.260.34 20.404.81 14.404.22 2.600.46 17.203.20 12.202.16 2.020.36 0.920.16 0.940.26 1.180.24 1.060.24

Rf
Do ftp Rf Dc ftp RE Dc

22. 004.31
6.502.21 54.009.21 26.904.66 7.441.59 48.007.69 19.204.30 5.661.70

10.001.60 10. 401. 37

5.600.72
29.604.35 15.001.70 4.001.16

1.020.46.

0.940.26

0.800.13

0.600.17

o Rhzosfer.

RIotano

Co 00 40 So 20 -

21 22 23 4 5 6

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hmedo

o. o
OC..

Rp Rizoplano Rf Rizosfera DO Dosel

Y

O 1
~
.

*tiaede arbrea Sauceda

~ ~

Matorral de auca tadera

Chapen
PSCtIuS

Otoo Invierno Primavera Verano

Fig.

3.19 Variaciones estacionales y entre zonas de la densidad media de la microf lora proteolitica (xlO~)

133

CO so 40

00CO 40 So

So So lo O

So lo o.
Y

u p Alada arbWsa

M Matorral e. aliso

CO
CO

CO
40 So SO lo
~

40
CO

So lo

Cho~rs

huosda

Rimpleao

Rlwsfsrs

Dossi

O
Fig.

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano

3.20 Variaciones entre el rizoplano, rizosfera y dosel de la densidad de microf lora proteolitica (xlO~)

134

proteoltica es superior cerca de los alisos, chopos y sauces

en todas las pocas de muestreo. En el rizoplano aparecen los resultados ms altos del NNP, descienden en la rizosfera y en el dosel la comunidad proteolitica es menos abundante. El
ANOVA manifiesta que estas diferencias no se deben al azar.

con F=126.7 y p<O.Ol. El cuadro de comparacin entre medias indica que la densidad de la microl lora proteoltica en la rizosfera es significativamente menor que en el rizoplano (46.86% menor) y desciende an ms bajo dosel. Las interacciones estacinzona y estacinsistema radical no son significativas, pero, con F=9.28. la interaccin zonasistema radical varia significativamente
(p<O.OI).

3.3.3. Densidad de la microf lora amonificante

La microflora microf lora total amonificante
y superior

es 10
en el

veces
mismo

menor
nivel

que la
a los

microorganismos proteolticos (tabla 3.XXIV). Los valores del NNP oscilan entre 67x106

microorganismos/g de suelo en las fracciones del rizoplano de los alisos ms desarrollados durante el otoo y O.57x106
microorganismos del pastizal en invierno, lo que indica fuertes variaciones entre los puntos de muestreo. La cuatro leosa densidad durante de el microorganismos y en las dos en ao aparece amonificantes zonas sin la figura en las Las

zonas arboladas

vegetacin 3.21.

variaciones del la comunidad densidad

NMP discurren paralelas a las registradas en Las comunidades ms numerosas de

proteolitica.

microorganismos amonificantes se localizan en la

desciende en

aliseda, la

la chopera y sauceda y los resultados

135

menores se registran en la zona en pendiente y en el pastizal

hmedo. Los anlisis de la varianza indican que las diferencias entre las seis zonas son significativas (p<O.Ol)

y la tabla de comparacin entre medias (tabla 3.XXXIII) de los datos de las zonas con alisos, chopos y sauces manifiesta que la densidad mayor de microorganismos productores de amonio se localiza bajo los alisos de porte arbreo y que entre la sauceda y la chopera no hay diferencias
significativas. Los cuadros de comparacin entre medias de los sin

resultados del rboles tambin

rizoplano. rizosfera y de reflejan densidades mayores

las zonas

de

microf lora el pastizal

amonificante en torno a los alisos,

resultados intermedios en

los chopos y sauces y las comunidades menores en

y ladera. Entre los alisos y las zonas restantes las variaciones son significativas (p<O.Ol), pero no as entre los chopos, sauces y ambas zonas sin vegetacin leosa, excepto en la asociacin de pastizal y ladera (pc0.01). los datos rizosfricos y del

La grfica 3.21 refleja los cambios comunidades de microorganismos aumentan en primavera y en las dos estaciones de
extremas desciende el NMP de

estacionales. Las

el otoo y en la temperaturas ms
Estas

microorganismos.

variaciones son escasas como se refleja en los ANOVA, pues no manifiestan diferencias significativas en ningn caso. El efecto del sistema radical se observa en la figura superior en

3.22. La microflora

productora de amonio es muy

el rizoplano de las plantas durante todo el ao. La densidad de microorganismos desciende segn aumenta la distancia al sistema radical de las plantas y. bajo el dosel, aparecen las comunidades menos numerosas. El anlisis de la varianza indica para esta fuente de variacin una F=85..5 y p<0.Ol. La
tabla de comparacin entre medias seala que la microflora

136 Tabla 3.111111 Densidad media de la microf lora amonificante (x106)

21

22
29.003.65

23
6.100.54 5.000.60 1.020.15 6.100.61 5.400.61 0.620.10 8. 500.60 6.200.67 0.930.09 7.100.73 5.600.59 0.790. 11

24
9.100.67 7. 401. 26 1.140.21
~. 900.99 5.700.67 0. 660.09

25

26

ftp Rf Do
ftp

7.0016.0 20.002.00 2. 900.30 46.0014.6 16.201.73 2.150.46 48.0014.2 20.201.91 2.601.54 51.0013.7 19.20t1.56 2.400.43

9.900.67
2.420.36 25.002.00 6.900.76 1.920.76 31.003.29 10.201.26 ~. 120.25 26.004.15

0.790.19

0.650.14

ftf Da
ftp

0.580.10

0.570.06

Ri Dc ftp Rf Dc

10.601.13 7. 40 26 1. 1.060.13 8.100.54 7.100.73 0.790.11

0.720.19

0.650.15

9.500.60
1.950.31

0.670.12

0.640.10

yo
Co

CO
40

So o lo o
a
y

Aaplano

Rlic efers

o Co
-

40

1 22 23 4 25 26

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hmedo

so 20 10-1

Rp Rizoplano M Rizosfera Do Dosel

o P Y

Dosel

O 1

Aulasda arbrea ~ Sauceda

Matorral de ala.

Chopera PaetIas

E~

L.dara

Otoflo Invierno Primavera Verano

Fig. 3.21 Variaciones estacionales y entre zonas de la densidad media de la microf lora amonificante (r106)

o so.
Co.

70.

CO

CO

4O~

40

soSO $0O. o

a, lo u p AMMda s,bwsa 0
Y

u P M.torral de aliso

O CO CO. CO. 40 SO.

so
40

Co lo o.
~ ~

so. lo.

*~------

u Sauceda

Chopera

~4-

Ruropisno

-~

Rlmsfsrs

~4-

Dosel

O
Fig.

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano de

3.22 Variaciones entre el rizoplano,

rizosfera y dosel

la densidad de microf lora amonificante

<r106)

138

amonificante del dosel es inferior de la que se

encuentra en

el rizoplano y en la rizosfera (p<O.Ol). Por su parte la densidad de microorganismos de la rizosfera representa el 42.75% de la que habita en el rizoplano. Las interacciones de las tres fuentes de variacin no son significativas salvo cuando se analiza la interaccin zona-sistema radical (p<0.Ol).

3.3.4.
La

Densidad de la microf Lara nitrificante

densidad de microorganismos que

nitrosa
oxidan el amonio

hasta nitrito es baja (tabla 3.11KV) y menor que la registrada

en los grupos fisiolgicos antes citados pues los datos del NMP de este grupo oscilan entre 37400 microorganismos/g de suelo del dosel de la aliseda ms desarrollada en- el verano y 1840 microorganismos/g de suelo de la rizosfera de las zonas con matorrales de aliso y sauces en el invierno y en la primavera, respectivamente. La figura 3.23 refleja
variaciones importantes entre las

seis zonas estudiadas. Los resultados ms elevados aparecen en la chopera y sauceda. Por el contrario los resultados
inferiores 2, del NMP se registran en las dos zonas sin y vegetacin arbrea, mientras que los datos son intermedios. El indica F=4.8). ANOVA de que las La los datos de las cuatro zonas al azar refleja (pc0.01> arboladas <p<0.0l y que no las son balo los alisos, zonas 1

diferencias no LSD las (tabla

se deben 3.XXXIV)

prueba entre

variaciones significativas

plantas

diazotrficas

pero que

hay diferencias

entre la

zona 1 y las zonas

3 y 4. La comunidad

nitrificante nitrosa

de la zona con rboles

de aliso supone el 74.29% y el 74.76%

139 del NNE de microorganismos de las zonas con sauces y chopos

respectivamente

Los anlisis de la varianza de las dos zonas sin rboles y de cada una de las tres zonas delimitadas respecto al sistema radical presentan tambin diferencias significativas (p<O.O1).
La densidad de microorganismos que aparecen en el que

rizoplano y en la rizosfera de

todas las zonas es menor

en el pastizal y en la ladera. Los cuadros de comparacin entre medias manifiestan que dichas variaciones son significativas. Pero no se observan diferencias en el rizoplano de las zonas con alisos, chopos y sauces, ni tampoco a nivel de rizosfera. La tabla de comparacin entre medias de los datos del dosel, del pastizal y de la zona en ladera seala que, como en los casos anteriores, los controles sin vegetacin leosa
presentan resultados significativamente menores (p<O.Ol). Las variaciones en el segundo factor objeto de estudio, 3.23. La densidad ms

la estacin, en otoo y es de la

se reflejan en la figura

elevada de microorganismos se varianza

encuentra en verano, desciende diferencias estacionales

menor en primavera y en invierno. Los anlisis establecen

significativas en un 99%. Los cuadros de comparacin entre medias indican que hay

variaciones (p<O..Ql) entre el verano, la poca con NI4P mayor, y las dems estaciones. La densidad de microorganismos desciende en otoo y en primavera, estaciones que no difieren

de forma significativa, y es ms baja en invierno.

140 Tabla 3.111131 Densidad media de la

nitrosa
22

(riO2)
23

microf lora nitrificante

24

2-5

26

.0

Ap 26.203.25 Af 26.202.94 Dc 176.0012.2 ftp 18.802:92 Da 150.0027.1

27.602.84 29.905.57 29.203.50 26.203.56 23.403.04 23.601.82. 230.0043.8 266.0022.9 246.0026.5 19.802.37 162.0015.1 26.202.38 25.603.55. 216.0036.6 19.402.22. 21.601:46.. 1S0.0O12.3 178.0032.1 25.602.4a 22.202.54 226.0033.3 33.044.23 18.40t.B5.,

40.606.69

42.406.58

34.404.09

36.603.24

ftf

ftp

27.602.05 26.602.15

Do 160.0034.1

248.0025.5.

39.208.94

34.604.02.

.V

Ap 36.004.42 37.003.53 37.8010.4 46.406.56, Al 36.605.45 30.404.43 26.606.42 41.006.79 Dc 232.0033.3 294.0019.5 374.00t3L9354.0057.2-

56.0014.5

62.8013.3

400

400-

SoO

500-,

500

soo;

loo

loo.

o
Rizos sra

Rizoplano

21 2 3 4 5 Z 6

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sa~cea Ladera Pastiial hniedo

Rp Rizoplano Rf Rizosfera Do Dosel

O u
r

Dosel
Alueeda arbrea ~ Sauoeds Matorral de aliso ~ Chopera Paetizet

~E

Ladee.

O 1 P Y

Otoo Invierno Prirtiavera Verano

Fig. 3.23 Variaciones estacionales y

entre zonas de la densidad

media de la microf lora nitrificante nitrosa (x102)

141

400

400

Bac

500

aoo

oc

loo

cc

O P Y 0 P Y

Altesd arbtea

Marral de aliso

400

Oc

SoO

sO~

*00

500

40*

O
0 0 P Y 0 0 P
y

~wflrs

LauqU

-4-

Rlzovleno

-~

Rizostera

-~

Dosel

O
Fig.

Otoo;

Invierno;

Primavera;

Verano

3.24 Variaciones entre el rizoplano, rizosf era y dosel de la densidad de microf lora nitrificante nitrosa (x102)

142

Las variaciones

entre el

rizoplano,

la

rizosfera

el

dosel de las zonas 1, 2, 3 y 4 durante todo el ao se observa en la figura 3.24. El anlisis de la varianza revela diferencias significativas (p<0.Ol) entre rizoplano, rizosfera y dosel. La prueba LSD confirma que la densidad mayor de microorganismos aparece en el dosel de las cuatro zonas con rboles y es superior en un 89.51 % y en un 89.05 % al NMP de la microf lora nitrificante nitrosa que aparece en el rizoplano y en la rizosfera. Entre estas dos ltimas zonas no se observan variaciones significativas. Los anlisis de la varianza indican que la
interaccin

estacinzona no es significativa en ningn caso, pero sin embargo las interacciones zonasistema radical y estacinsistema radical varian por causas ajenas al azar
(p-cO.0l).

3.3.5.

Densidad de la microf lora nitrificante ntrica

oxidan el tn

Los valores del NMP de microorganismos que

nitrito hasta nitrato se expresan en la tabla 3.XXVI.

El NIIP de microorganismos

nitrificantes ntricos

supera

la densidad de la microf lora nitrificante nitrosa en todos los puntos de muestreo. Los datos del NMP oscilan entre 10600 microorganismo/g de suelo en la rizosfera de los
matorrales de aliso durante el invierno y 140000 en de los sauces durante la poca de esto. A pesar es ms de que la densidad de que la de la microorganismos ntricos microflora nitrosa las el dosel

elevada

variaciones

en ambos grupos evolucionan

de forma parecida.

143

Las diferencias grfica 3.25. Los

entre las suelos ms

zonas se ricos en

representan en

las

microorganismos que chopos y sauces.

producen nitrato pertenecen a las zonas con

En las alisedas se observa la densidad menor, mientras que en los puntos de muestreo carentes de vegetacin arbrea aumenta el NMP de microorganismos. Los ANOVA demuestran que las
variaciones entre las zonas no se deben al azar (p<O.Ol). En medias todos los casos los cuadros de comparacin entre

(tabla 3.XXXV) no

sealan diferencias significativas

entre las dos alisedas,

ni entre los chopos y los sauces.

La grfica 3.25 ilustra las diferencias entre las estaciones. El verano es la poca del ao ms favorable para
el desarrollo de estos microorganismos. (p<O.Ol). entre medias muestran que la Las variaciones estacionales son significativas Las tablas densidad mayor que los de comparacin

de microorganismos en

verano es significativamente y tambin establecen en la poca invernal.

que en las

restantes estaciones

valores ms bajos se alcanzan

Sin embargo los datos de la primavera a nivel del rizoplano y

del otoo en la rizosfera

superan los resultados del esto.

Las variaciones en el rizoplano. rizosfera y dosel se observan en la grfica 3.26. La densidad menor de microflora nitrificante ntrica aparece cerca del sistema radical y el anlisis de la varianza indica que las diferencias son
grandes (p<O.Ol). entre El cuadro de comparacin no entre se medias aprecian seala que, rizoplano y rizosfera,

variaciones significativas. En ambas zonas el nivel de microorganismos que oxidan el nitrito no alcanza el 50 % de la comunidad detectada en el dosel.

144

Tabla 3.111131! Densidad media de la microf lora nitrificante ntrica (rO3)

22 23 4 5

ftp Rf Do ftp Rf

16.404.26 11.601.54 14. 202.60 16.404.58 30.805.98 29.605.26 16.204.12 10.601.37 24. 004.53 13. 604. 74 13.604.74 22.263.06 17. 202.30 13.802.78 26.201.93

23.403.24 24.605.23 70.007.48 16.602.55 19. 004.7.1 34. 603.17 23.804.56 20.402.96 49. 656.56

24.402.96 25.203.03 68.005.93 19.802.20 20.801.84 49.60A.SQ

49. 606.58

42.806.64

Da
ftp Rf

35.603.89

37. 605.44

16. 604. 06
14.402.46 24.4010.4

Dc
Ap

30. t04.8&. 24.002.67 77. 6016.6- 41. 405.27 45.407.37

Rl
Do

16. 201.7 1 18.20 1.45 33.404.30 35.403.73 26.602.09 36.803.56 16.402.69 19.003.84 40.407.69 29.005.59 114.0036.0 140.0037.1

52.0010.8. 53.801.0.0

RImplrnO

Rizosisra

1 22 Z 3 24 25 26

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal i~aeo

Rp Rizoplano flf Rizosfera ~o Dosel

0
.-

00541

Aticeda .rb,Sa Bauoed.

____

Matorral de aliso Ladera

Chopera Paetzal

O 1 2 Y

Otoo Invierno Primavera Verano

Fiq.

3.25 Variaciones estacionales y entre zonas de la densidad media de la microf lora nitrificante ntrica (x1O~)

145

la,-

*4 -

1*0-

e,

CO

o
fi Y

Aliad. *rMJ

Matorral de aliso

la,

154-

lo,

toe.

Co

fi

Clicocre

Sauceda

-4- Rlioplaao

~~-

RzoefO, e

Dosel

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano

Fig. 3.26 Variaciones entre el rizaplano, rizosfera y dosel de la densidad de microf lora nitrificante ntrica (x103)

146

Las zona-sistema contrario

interacciones radical son

estacinsistema significativas

radical Por

y el

(p<O.Ol). y la

la interaccin estacinzona

interaccin de

los tres

factores

no lo son.

147

Tablas 3.11113111

a 3.111111. Significacin de los ANOVA (F) del NMP de microorganismos

148

Tabla 3.11113111

M1031A de los datos del NHP del rizoplano, rizosfera y dosel. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

Hlcroflora total Proteoliticos

9.7 (**) 1.8 (NS) 0.8

(NS)

15.1 (**) 33.4 (**) 43.8

(**) 4.8

108.9 (**) 126.7 (**) 85.5

(**) 529.9

0.6 (NS) 0.2 (NS) 0.3

(NS) 0.4

2.5 (*) 9.3 (**) 18.8

(**) 4.5

1.8 (NS) 0.3 (NS) 0.4

(NS) 9.3

0.2 (NS) 0.2 (NS) 0.3

(NS) 0.4

Amonificantes

Nitrificantes

17.9

nitrosos Nitrificantes ntricos

(**) 10.6 (**)

(**) 20.9 (**)

(**) 52.9 (**)

(NS) 1.9 (NS)

(**) 6.3 (**)

(**) 3.6 (**)

(NS) 0.9 (NS)

Fuentes de variacin:
1 Estacin

2 Zona
3 4 5 6 7 Significacin:
** *

Sistema radical Interaccin Estacin Zona Interaccin Zona Sistema radical Interaccin Estacin Sistema radical Interaccin Estacin Zona Sistema radical
-

p<O.0l p-cO.05

NS

no significativo

149

Tabla 3. XXVIII ANOVA de los datos del NMP del rizoplano y zonas sin rboles. Se indica la E y la significacin

FUENTES DE VARIACION

Microflora

4.8

37.9

0.8

total Proteoliticos

(**) 0.7
(NS)

(**) 59.9
(**)

(NS) 0.7
(NS)

Amonificantes

0.5 (NS)
10.3 (**) 4.4 <**)

35.5 (**)
5.5 (**) 22.6 (**)

0.3 (NS)
0.2 (NS) 0.5 (NS)

Nitrificantes nitrosos Nitrificantes ntricos

Fuentes de variacin: 1 Estacin 2 Zona 3 Interaccin

Estacin

Zona

Significacin:

**

NS

p<0 .01 no significativo

150

Tabla 3. 111131111 ANOVA de los datos del NI4P de la rizosfera y de las zonas sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

Microflora

4.3

30.1

0.7

total Proteoliticos

(**) 1.2
(NS)

(**) 35.7
(**)

(NS) 0.2
(NS)

Amonificantes

0.9
(NS)

162.4
(**) 8.9 (**) 24.8

0.2
<NS) 0.5 (NS) 0.2

Nitrificantes nitrosos Nitrificantes

8.8 (**) 4.9

ntricos

<**)

(**)

<NS)

Fuentes de variacin: 1 Estacin 2 Zona 3 Interaccin Estacin Significacin: p<O.0l

Zona

**

NS

no significativo

Tabla 3. XXX ANOVA de los datos

del NMP del dosel y de las zonas

sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

Micraflora

2.7

26.8
(ri

total Proteoliticos

(*) 0.8
(NS)

0.2 (NS)

19.?
(rtt)

0.2
(NS)

Amonificantes

2.6
(NS)

36.5
(n) 48.4
(r*)

0.2
(NS) 1.2 (NS) 1.3

Nitrificantes

14.0

nitrosos
Nitrificantes

(n)
7.2

9.2

ntricos

(n)

(**)

(NS)

Fuentes de variacin: 1 Estacin 2 Zona 3 Interaccin Estacin Significacin: p<0.0l p<0.05 no significativo

Zona
-

** *

NS

152

Tablas 3.XXXI a 3.11111131. Significacin de las diferencias de la densidad microbiana entre las estaciones del ao, las zonas de muestreo y las zonas respecto al sistema radical. En cada tabla se presentan a) Significacin de los cuatro apartados: de las observaciones del

datos

rizoplano, de la rizosfera y del dosel.

b) Significacin zonas sin rboles c) Significacin

de los datos de las observaciones de las y del rizoplano de las zonas arboladas. de los de los datos de datos de las observaciones las observaciones de las de las

zonas sin rboles y de la rizosfera de las zonas arboladas.

d) Significacin

zonas sin rboles y del dosel de las zonas arboladas.

En todas las tablas los resultados observaciones se disponen en orden creciente derecha y de arriba hacia abajo. Significacin:
** *

medios de las de izquierda a

p-cO.Ol

NS

p<o. no significativo

05

153

Tabla 3.1111111 Significacin de las diferencias entre los resultados medios del 141W de microf lora total a)
24 22 21 ** ZS ** 24 NS 22 O ** 1 NS V NS * ** V NS P Al ftp Do Al

b)

Z5 ZS Z4 22

V NS
P * NS ** V NS P

O ** 28 25 23 24 22 1

o>

26 Za 24 22 21

20

26

Za

24

22

d)
26
23 NS *fr **

Z4~ ** 22 21 ** 20

**NS

*w
**~ 26

*1:
Za 24 Z2

V NS P NS NS

* 1

* Y

NS P

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda

O Otoo; 1

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera

Invierno; P Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal hmedo

31 Verano

Rp

Rizoplano;

Rf

Rizosfera;

Do

Dosel

154

Tabla 3.XXXII Significacin resultados a)

4 2 1 NS ** ** 23 ** ** 24 ** 22 Y P O

de las

diferencias

entre los

medios del NMP de microf lora proteolitica

NS NS NS Rl

NS
1

NS
Y

NS
P

Rp
Do Ef

b)

26 Za Z4

NS
** ** ** ** **

** **~

NS

Y P

NS
NS NS

~~
21

O NS 22 1

NS
Y

NS P

26 ZG Za Z4

c)
za
24 22 21
**
-

**

**

NS

1 O P

NS NS
NS Y

NS
NS 1 NS 0

zsItltILtiilII 26
28 23 24 22

d)

23
24 Z2 2l 26 26 Za 24 Z2 1 NS NS NSNS 1 0 O NS P NS Y

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda O Otoo; 1

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera Invierno; E Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal hmedo 31 Verano

Rp

Rizoplano;

Rf

Rizosfera;

Do

Dosel

Tabla 3.111111111 Significacin de las diferencias entre los resultados medios del 141W de microf lora
amoni ficante

a)

4
Z2 21

NS ** ** 3 ** ** 24 ** Z2

V P O

NS NS NS 1 NS NS y NS p Do Rl

b)

26 23

NS

NS NS NS
*~* ** ZO NS *~* NS Y NS P O 23 4 2 NS NS

z4
Z2
21

**i
6

NS
1

NS
4

NS
?

c)
26 23 4 2 Y NS O NS P 26 6 Za Z4 2 NS NS NS .4 NS p

zt
d)
26 Za 4

NS
NS NS NS NS **
*

NS

Y NS

Z2

**

~
Z6 ZG Za 4

NS

NS NS
b

O NS 1

NS P

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda O Otoo: 1

Z 2 Matorral Z 5 Ladera
Invierno; E

de aliso
Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal
31 Verano

hmedo

Rp

Rizoplano;

Rf

Rizosfera;

Do

Dosel

156

Tabla 3.XXXIV Significacin de las diferencias entre los resultados medios del NMP de microf lora nitrificante nitrosa a)
Z2 3 NS ** NS 1

o
NS 3
Y 1 P O

ftp DOW Rl AP

** 1

NS 2

b)

Z2

NS
NS

za
Z4

NS NS NS P NS
* O

26 ** **!**f 8
** 21 ** 22

NS

NS

NS

**j*~N5j
3 4 28

~ 1
p

c)

Z4
2 1

NS NS~
** ** 23 24 Z2 **~NSl 1 6 P O NS

NS

NS **
P

28

y **
1

**
O

d)
26 1

NS
** ** ** ** ** ** 8 * ** NS **INBINBI 1 Z2 Za P NS

22
23

O
.4

*
** 1

NS
** P ** O

4- ** ZG

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda O Otoo; 1

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera Invierno; Ef P Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal hmedo 31 Verano Dosel

Rp

Rizoplano;

Rizosfera;

Do

157
Tabla 3.11111131 Significacin de las diferencias entre los resultados

medios del NMP de microf lora nitrificante ntrica

a)
1

NS **
** 22

~ NS **
** 21 NS Za

ZS
4

ONS ~ 1

NS

ftp Do

NS ** Rl ** Rp

b)

21

NS
** ** NS

Za
24 26

*t** **I**L
****

NS

NS

ONS
P NSJ 26 NS NS

Za

**
3 4

Y **

*
0

NS P

22

21

c)

22

NS

Za
24 5 26

**
** ** ** 1

** ** ** ** Z2

NS

P NS O NS NS *
P

** 3

** 24

NS 26

Y **
1

NS o

d)
21 5 NS NS NS

6
Za Z4

NS
****

NS

NS
* *

P NS ONS
NS 23 Y ** 1

NS
**

** 2

** 1

** 5

** 26

**
O

Z 1 Aliseda arbrea
Z 4 Sauceda O Otoo; 1

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera Invierno; Ef P Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal hmedo 31 Verano

Hp

Rizoplano;

Rizosfera;

Do

Dosel

158

3.3.6. Actividad biolgica

Los

de la microf lora proteoltica

TSO que se expresan en la tabla 3.XXXVI reflejan las

variaciones en la actividad biolgica de los microorganismos proteolticos. Los datos oscilan entre 0.68 en el rizoplano de los alisos de porte arbreo durante el verano y 0.75 en
las zonas control sin vegetacin arbrea del invierno. En la figura 3.27 se observan las diferencias entre las

seis zonas. Los T50 inferiores aparecen en las fracciones suelo que corresponden a las alisedas, por el contrario
microflora proteoltica de las zonas sin

de
la

rboles manifiesta

una actividad menor, mientras que en los sauces los resultados son intermedios.

chopos y

en los

El anlisis de la varianza de los T50 de las cuatro zonas primeras (tabla 3.XL) indica que hay diferencias significativas (F=7.4 y p<O.Ol). Los ANOVA de los datos del rizoplano, rizosfera y dosel. junto con los controles sin rboles reflejan variaciones significativas (p<0.Ol), con F de 8.4, 6.2 y 3.7 respectivamente (tablas 3.XLI, 3.XLII y 3.XLIII).
Los cuadros de comparacin entre medias (tabla 3.XLIV)

sealan que la actividad biolgica mayor de proteoltica corresponde al bosquete de

desarrollados y las diferencias respecto a

la microf lora alisos ms

los sitios

restantes

son significativas <p<0.05 y p-O.Ol). Sin embargo,

cuando se consideran los resultados del rizoplano y de las zonas sin vegetacin leosa no se observan variaciones entre las superficies radicales chopos y los sauces. de los alisos los datos con respecto a rizosfricos los Entre y las

muestras del pastizal y de la ladera se advierten diferencias

159
Tabla 3.11111131! Resultados medios del T50 de la micraf lora

proteolitica
-

al

Z2

--5

o
1

ftp

Rl Da
ftp

0.690.01 0.700.01

0.700.02
0. 710. 01 0. 710. 01

0.700.01 0. 710. 01 0. 720. 01 0.730.01 0.700.01 0.700.01 0.700.01 0.680.01

0.690.01

0.710.01,. 0.710.01 0.720.01

0.700.01 0.710.02

0.730.01 0.720.01
0. 730. 01

0.730.01

0.740.01

o. 720. 01
0.720.0 1

0.720.01
0.730.01 0.730.01 0.720.01 0.720.01 0.730.01

Rl

Do
ftp

0.720.01
0. 7 10. 01 0.710.01 0.720.02

0.730.01 0. 720.01, 0.730.01 0.740.01

0. 710.01 0.710.01 0.720.02

0.750.01

0.750.01

Al Dc

0. 740.01

0.730.01

ftp
Y A-E
Do

0.700.01
0.700.01 0.710.01

0.710.01
0. 7 10. 01 0.720.02

0.700.01

0.720.01

0.730.01

-O

.74
0.75 -

o-?
0.5* -

o-.

o
Rlmpl.nc

Rln,s lera

o.?. 0.7-4

21 2
3 4 25 6

0.72

o-y
o-CC

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hi~edo

0-a,

o
Dosel

Rp Rizoplano flf Rizosfera Do Dosel O

Suceda arbrea ~ sauceda

Matorral de alIce

--

Chop..a Pastizal

:
2 Y

~E

Ladera

Otoo Invierno Pri~avera Verano

Fig. 3.27 variaciones estacionales y entre zonas del T50 de la microf lora proteolitica

160

0.,. .14
0.15 -

O.TC 0.74

0.7

0-ss. O.

0-se 0.55-
Y

fi

AliSte arbreo

MatOrrsJ de suso

0.rC
-

0.14

ose
0.?

0-5 Orn-

Chopera

8auoeda

Rlicplwio

-~

Rzoafera

~4-

Dosel

O
Fig.

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano

3.28 Variaciones entre el rizoplano, rizosfera del T50 de la microf lora proteolitica

y dosel

161 solo en el caso de los alisos de datos del dosel. e igual sucede con el conjunto

Las variaciones estacionales a lo largo del ao se representan en la figura 3.2?. En las grficas no se aprecian grandes diferencias entre las cuatro estaciones. La actividad biolgica mxima aparece en la estacin ms calurosa. Por el contrario, en invierno se registran los T50 ms elevados.
Los anlisis de la varianza muestran que las variaciones

entre estaciones no se deben al azar. El ANOVA de los datos de la aliseda, chopera y sauceda presenta una F=5.6 y una p<O.Ol. Los ANOVA de los T50 de las dos zonas sin vegetacin leosa y de cada una de las tres zonas delimitadas respecto al sistema radical de los alisos, chopos y sauces reflejan diferencias significativas (p<O..O5) entre las estaciones. En el cuadro de comparacin entre medias de la rizosfera y de las zonas 5 y 6, la actividad de los microorganismos proteoliticos en invierno difiere significativamente (p<O.Ol) de la que se registra en verano. En los dems conjuntos de datos la variacin entre ambas estaciones es significativa al 95%. Las medias de los T50 del invierno y del otoo varan en un nivel de p<O.O5, excepto cuando se agrupan los resultados de las fracciones
vegetacin arbrea.

de suelo

del dosel y

de ambas zonas

sin

La

figura 3.28 representa la

actividad biolgica de los

microorganismos proteolticos en el rizoplano, rizosfera y dosel. En el dosel aparecen los valores ms elevados, mientras que entre el rizoplano y la rizosfera las diferencias
T50 muestra

son escasas.

El

anlisis

de la

varanza de los
rizosfera y

que las variaciones entre rizoplano.

dosel no se deben al azar (F=4.O y pcO.Ol).

162 El
T50.

cuadro de comparacin entre

Aunque no hay diferencias

medias indica que, segn

significativas entre el y el

nos alejamos del sistema radical, aumentan los valores de los

rizoplano y la rizosfera, dosel (p<0.Ol). Los anlisis de

existen

entre

el rizoplano

la varianza

de

los distintos

conjuntos

de valores de los T50 indican que en las interacciones de los tres factores de variacin no se registran diferencias significativas, por tanto la actividad biolgica de la microflora proteoltica de todas las zonas evoluciona de forma similar durante el ao.

3.3.7.

Actividad biolgica

de la microf lora amonificante

La actividad biolgica de los microorganismos amonificantes se expresa en la tabla LXXXVII. Los T50 oscilan entre 0.58 en el rizoplano de los rboles de aliso en otoo y 0.74 en la ladera en verano e invierno. En la figura
T50

3.29

se

representa
en

la variacin
sin

de

la

actividad amonificante resaltan los mientras que en

en las distintas zonas. las zonas constituida por

Las grficas rboles, ejemplares ms

ms elevados la aliseda

desarrollados se observan los resultados menores. El anlisis (tabla de la varianza de los TSO de las zonas con

alisos, sauces y chopos seala diferencias con F=8.3 y p<0.Ol 3.XL). El ANOVA de los datos del rizoplano y de las 3.XLI). zonas sin vegetacin leosa manifiesta tambin variaciones no debidas al azar entre los Lo mismo puntos de muestreo (tabla sucede en los ANOVA de las muestras rizosfricas y

de ambas zonas libres de arbolado, y de stas con-los datos del dosel <tablas 3.XLII y 3.XLIII). Para el rizoplano la F

Tabla 3.111111311! Resultados medios del T50 de amonificante

u
Ap Rf Do 0.580.01 0.630.01 0.680.02 12 13 4

la microf lora

.5

16

0.620.01

0.. 640. 02.

0.650.02
0.660.01 0.670.02 0.690.01., 0.710.01 0.620.01 0. 650.02 0.690.01 0. 640.01 0.660.02 0.720.01

0.690.02 0.710.02 0.660.03, 0.700.01 0.720.02

0.650.01 0.660.02 0.710.02 0.690.02. 0.690.02 0.730.02
-

0.630.02 0.660.01 0.700.01

-

0.710.01;

0.700.01

ftp
1 Rl Da

0.670.02
0.690.02 0.700.02

0.650.02 0.690.02 0.710.02

0.740.01,

0.730.01

ftp P
Rl

0.590.02
0.650.02 0.680.02 0.610.02 0.650.02 0. 700.0.1

0. 640. 02,
0.660.01.. 0.700.01 0.660.02 0.690.03 0. 710.02

Do
ftp

0. 710. 02

0.710.01

Rl
Dc

0.740.02

0.720.02

CTS

0.~

CAS

O-Ce o Rizoptano Rjrcafer.

0J5

4?

o-sa
o-e

21 22 Z 3 24 5 6

Aliseda arbrea Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal haedo

oso Dosal

Rp Rizoplano Rf Rizosfera Do Dosel O

Aliseda erbree Sauceda ~

Matorral de alIso Ladera

~ ~

Chopas-e Pastital

? Y

Otoo Invierno Priaavera Verano

Fig. 3.29 Variaciones estacionales y entre zonas del TSO de la microf lora amonificante

164

CA

0*

04

0*

O-..

O.
0

Aliseda arbrea

Matmraj de aliso

os

Os.

cA

O.4

o,

os

o
Chopera

fi

Bago edo

Rtxo~lano

-~

gimoler.

~4-

Dosel

O
Fig.

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano

3.30 Variaciones

entre el rizoplano,

rizosfera

y dosel

del T50 de la microf lora amonificante

165 es 20.7 (pcO.0l). para la rizosfera~ dosel, 2.4 (pcO.O5). 9.1 (p<O.Ol) y para el

Los cuadros de comparacin entre medias (tabla 3.XLV) confirman que, tanto en el rizoplano como en la rizosfera de los alisos, aparece la comunidad amonificante ms activa,
mientras que en las zonas 5 y 6 los microrganismos

productores de amonio se encuentran en un estado fisiolgico de actividad menor y estas variaciones son significativas (p<0.0l). Los T50 de las zonas con chopos y sauces no difieren significativamente entre s. Sin embargo los T50 del dosel y de las zonas sin rboles no varan
significativamente, excepto cuando se comparan los datos del

dosel de la aliseda de porte arbreo con los T50 de las zonas 5 y 6 y de la zona con chopos. En estos casos las diferencias son significativas al 99 y al 95%, respectivamente.

Las variaciones estacionales se representan en la figura 3.29. El otoo y la primavera son las estaciones en las que la microf lora productora de amonio alcanza una actividad biolgica superior, que disminuye en las dos estaciones de condiciones climticas ms extremas.
El anlisis de la varianza

zonas arboladas indica que significati3as al 99% con F=9.8. Las diferencias tambin son significativas (p<O.Ol y p<O.O5) en los ANOVA de los T50 del rizoplano y de la rizosfera con las zonas sin rboles, con resultados de la F 7.4 y 3.9 respectivamente. En el ANOVA del dosel y de las zonas sin vegetacin arbrea no se aprecian variaciones significativas. Las comparaciones entre las medias de los T50 en los cuatro conjuntos de datos sealan que en invierno la actividad amonificante es menor. En ningn caso se advierten
variaciones significativas entre las medias de los T50 de

de los T50 de las cuatro las variaciones estacionales son

166
verano e invierno. El hecho se repite en las dos estaciones aunque en el otoo se

con actividad mayor, otoo y primavera,

registran los T50 ms bajos, menos cuando se resultados del pastizal, ladera y rizosfera zonas arboladas.

consideran los de las cuatro

Las variaciones entre el rizoplano. rizosfera y dosel se representan en la figura 3.30. La actividad mxima corresponde al rizoplano y en el dosel aparece la microf lora amonificante menos activa. El anlisis de la varianza de los T50 muestra que las variaciones son significativas (Ftt37.9 y p<0.Ol). La tabla de comparacin entre medias manifiesta variaciones entre las tres zonas (p<0.0l). Al igual que en el estudio de la actividad la microflora proteolitica las interacciones variaciones significativas. biolgica de no sealan

3.3.8.
La

Actividad nitrosa

biolgica

de la microf lora nitrificante

los datos de la actividad

tabla 3.XXXVIII

muestra

nitrificante nitrosa. Los resultados oscilan entre 1.08 en la ladera durante el verano y en el dosel de la sauceda durante

el invierno y verano y 1.39 en el rizoplano de los alisos ms

desarrollados en invierno. La figura 3.31 presenta las diferencias entre las seis

zonas. Los T50 menores aparecen en las zonas cpntrol sin rboles, mientras que en las zonas con alisos la actividad biolgica disminuye y en la chopera y sauceda los resultados son intermedios.

Tabla 3.11111131111 Resultados medios del T50 de la microf lora nitrificante nitrosa
rl 22 23 .2 4 25 .2 6

Rl Do A

1.360.04 1.350.01 1. 15O..01 1.390.02 .360.01 1.160.01 1.330.01 1.350.02 1.120.04 1.320.01 1.330.01 1.170.03

1.370.02
.350.01 1.150.03

1.230.03. 1.230.03 1.290.01

1.200.03
..

1.160.02 1.170.03
1.280.03 1.210.02 1.200.01. 1.160.02 1.150.03,

Rl
Da Ap Rl

1. 380.02 1.370.02.
1. 290.01

1.240.02 1.310.01

1.060.01
-

1.190.02 -

1.200.02,

1.350.02
1.350.01

Do

1. .120. 03
1.330.01 1.330.02

1.230.01 1.. 200.02, 1.170.03,. 1.180.01. 1.260.01 1 290.01

1.160.02 .1.190.03 1.300.01 1.160.02 1.160.03. 1.060.03

1.120.03.. 1.170.01

A
Y Rl
Do

1.270.02

1.060.03

1.. 120.03

-4

fi-a

lA

ffimolam

Rlzosf.ca

1,4

1 Aliseda arbrea 22 Matorral de aliso

Chopera 24 Sauceda 5 Ladera 6 Pastizal hniedo

fi-a

Li
~

Dosel

Ro Rizoolano R Rizosfera Do Dosel

O
AlIsada arbrea Sauceda
~.

Matorral de cneo Ladera

--

Chapeta Paetlgat

:
P

Otoo Invierno Prinvera Verano

Fig. 3.31 Variaciones estacionales y entre zonas del T50 de la microf lora nitrificante nitrosa

168

1.4

te

te

ti

ti

1.1

1.1

fi

ASceta arbWs.

Matorral de aJiso

1.4

te

1.e

14

ja-

ti

1.1

1.1

Ohope rs

Sauced;

Riroolano

-~

Rizosfer.

-.4-

Dosel

O
Fig.

Otoo;

Invierno;

Primavera;

31

Verano

3.32 Variaciones entre el rizoplano, rizosfera y dosel

del T50 de la densidad de microf lora nitrificante

nitrosa

169

El primeras

anlisis zonas

de la

varianza que

de los las

TSO de

las cuatro son

manifiesta

diferencias

significativas comparacin variaciones rizoplano y actividades

embargo no dosel de

(p<O.O1, tabla 3.XL). Los cuadros de entre medias (tabla 3.XLVI) reflejan que las no se deben al azar (p-cO.Ol) y que en el en la rizosfera de ambas alisedas se registran menores que en las zonas no arboladas. Sin
diferencias significativas los resultados de ambas entre el zonas sin y

se aprecian los alisos

vegetacin Las los

leosa.

En

variaciones estacionales aparecen en la figura 3.31. anlisis de la varianza se observan variaciones

significativas (p<O.Ol), salvo cuando se consideran los valores de las zonas 5 y 6 y del dosel de las cuatro zonas con rboles. La tabla 3.XLVI manifiesta que en el verano la actividad biolgica nitrificante nitrosa es mayor y no difiere significativamente de los resultados de la primavera, excepto cuando se considera el conjunto de datos de las zonas 5 y 6 Y de la rizosfera de las cuatro zonas primeras
(p<O.O5). Entre la primavera y el otoo no se advierten diferencias, ni entre esta ltima estacin y el invierno,
-

donde aparecen los datos ms elevados de los T50. La figura rizoplano, 3.32 representa

la actividad biolgica

en el

rizosfera y dosel. En las grficas se observa que

el rizoplano es la regin con datos ms altos del T50 entre los alisos. Por el contraro en los chopos y en los sauces la microflora nitrificante nitrosa se activa. El anlisis
entre el

de la

varianza muestra que

las diferencias
deben al

rizoplano,

la rizosfera y

el dosel no se

azar (F=41.6 y p<O.Ol). El cuadro de comparacin entre medias (tabla 3.XLVI) indica que la actividad de los microorganismos

nitrificantes

nitrosos es superior

en el

dosel y disminuye

1 ?O
cerca del sistema radical, pero no se aprecian variaciones

significativas

entre el rizoplano

y la rizosfera. y de las que hay

El ANOVA de los zonas control con

T50 de las zonas con alisos vegetacin leosa expresa

variaciones significativas (p<O.Ol) en las interacciones estacinzona, zonasistema radical y estacinzonasistema radical. Sin embargo los ANOVA de las zonas sin rboles con el rizoplano y rizosfera no manifiestan variaciones en la
interaccin estacinzona.

3.3.9. Actividad biolgica de la microf lora nitrficante ntrica Los resultados del T50 del grupo nitrificante ntrico se exponen en la tabla 3.XXXIX. El dato ms elevado. 1.18, aparece en el pastizal en otoo y en el dosel de los rboles de aliso en invierno, el limite interior, 1.07, corresponde a los chopos en las fracciones de suelo del dosel en primavera y en verano. Las variaciones entre las zonas se expresan en la figura 3.33. Los T50 menores se observan entre los sauces y la actividad biolgica menor se encuentra en el pastizal. Los anlisis de la varianza de los T50 reflejan que hay variaciones significativas (pcO.Ol) entre las zonas. La tabla de comparacin entre medias (tabla 3.XLVII) manifiesta que las diferencias ms acusadas se registran entre las zonas sin rboles y las fracciones del dosel de las cuatro zonas restantes, mientras que las variaciones son menos acusadas a nivel del rizoplano y de la rizosfera. En estos dos casos la actividad biolgica mayor aparece en la sauceda que difiere de las zonas control libres de vegetacin leosa (pc0.01). Las zonas con alisos varan de forma significativa entre s.

171 Tabla 3.111111111 Resultados medios del T50 de la microf lora nitrificante ntrica
-1

22
1.140.01

Z3

.24

za

---za

Ap Rf Dc Ap R Dc Ap Rf Dc Ap Rf Da

1.150.02 1.150.01 1.140.01 1.170.01 1.110.02 1.160.01 1.130.01 1.140.02 1.150.02 1.100.02 1.160.02 1.120.02

1.140.01
1.110.01 1.150.01 1.150.02 1.130.03 1.130.02

1.150.01 1.130.01 1.130.01 1.120.02 1.140.02 1.110.02 1.140.01 1.130.01 1.100.01,

lA t0.~02 1.090.02. 1. 080.03 1.120.01,. 1.140.02. 1.110.02

1.160.01.
-

1.180.01

1-

1.150.01

1.170.01

1.130.01
1.130.02. 1.070.01 1.100.02
-

1.130.02 1.060.03
1.120.02 1.130.01 1.110.02

1.140.01
-

1.110.01

1.090.01.
1.090.01 1.140.02,

1.090.02
1.070.03
-

1.140.01

1.070.02

1-S

te

la

I.IC

1.1

t1

lid

.-

Rlplano

Alzos1 sra

-a

1 Aliseda arbrea
2 3 24 25 26 Matorral de aliso Chopera Sauceda Ladera Pastizal hoiedo

-oa

Dosel

Hp Rizoplano Rf Rizosfera Do Dosel

cuico W
Cl.opra

Aufleeda arbrae Sauceda ~

Matorral da Ladera

Paetuzal

O 1 F Y

Otofio Invierno Prirlavera Vetano

Fiq. 3.33 variaciones estacionales y entre zonas del T50 de la microf lora nitrificante ntrica

la
.5

fia

ti

~t.1

1.1

IW

10 4 P Y 0 4 P Y.

Alised, arbrea

Matorrai de aliso

1-a

l.14~

1-

ti

tos

Oflocera

8auoeds

pizopiano

RIr-OSler.

Dosc

Otoo:

Invierno;

Primavera;

31

Verano

Fig.

3.34 Variaciones entre el rizoplano, rizosfera y dosel del T50 de la densidad de microf lora nitrificante ntrica

173 cuando se consideran las fracciones de suelo del dosel. La figura 3.33 representa la actividad de la microf lora nitrifcante ntrica durante el alio. Las variaciones estacionales son escasas. Los ANOVA de los TSO de las cuatro zonas arboladas y del conjunto de datos del rizoplano y de los controles sin rboles reflejan diferencias significativas (F=3.5, p<O.O5 y F=4.5, pcO.Ol respectivamente). La prueba LSD (tabla 3.XLVII) manifiesta que el verano es la estacin de actividad biolgica mayor y difiere significativamente del invierno cuando la actividad de los organismos nitrificantes ntricos es menor. Las variaciones en el tercer factor, la proximidad al sistema radical, se observan en la figura 3.34, y el ANOVA indica que no son significativas. Las interacciones de los tres factores presentan diferencias significativas. considerados tampoco

174

Tablas 3.XL a 3.XLIII. Significacin de los ANOVA (F) de los TSO

175

Tabla 3.XL ANOVA de los datos del T50 del rizoplano, dosel. Se indica la F y la significacin

rizosfera
-

FUENTES DE VARIACION

Proteoliticos

5.6 (rr)

7.4
(irtr)

4.0
(**)

0.2

0.07

0.09

0.08

(NS) 0.5
(NS)

(NS) 0.4
(NS)

(NS) 0.9
(NS)

(NS) 0.2
(NS)

Amonificantes

9.8
(ttr)

8.3
(n)

37.9
(n)

Nitrificantes nitrosos Nitrificantes ntricos

3.8 (*) 3.5 (r)

59.1 (**) 6.9

(nr)

41.6 (*r) 2.6

(NS)

3.7 (**) 0.6

(NS)

41.7 (**)

0.8 (NS)

5.1 (**)

1.4
(NS)

1.0
(NS)

0.9
(NS)

Fuentes de variacin:
1 Estacin 2 Zona 3 Sistema radical

4 Interaccin Estacin
5 Interaccin Zona

Zona Sistema radical

6 Interaccin Estacin
7 Interaccin Estacin

Sistema radical
Zona

Sistema radical

Significacin:

** *

NS

p<0.0l pcO.05 no significativo

176

Tabla 3. XLI ANOVA de los datos del T50 del rzoplano y de las zonas sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

Proteoliticos

(r)

3.1

(nr)

8.4

(NS)

0.2

Amonificantes

7.4
(*er)

20.?
(nr)

0.4 (NS)
0.9 (NS)

Nitrficantes

8.3

nitrosos Nitrificantes
ni t ricas

(rfl
4.5
(**)

68.7 (nr)

3.5
(r*)

1.5
(NS)

Fuentes de variacin: 1 Estacin 2 Zona 3 Interaccin Estacin

Significacin:
**

Zona

NS

p<0.Ol p<0.05 no significativo

Tabla 3. XLII ANOVA de los datos del T50 de la rizosfera y de las zonas sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES

DE VAR!ACION

Proteoliticos

3.4
(ir)

6.2
(nr)

0.1
(NS)

Anonificantes

3.9
(ir)

9.1
(-tsr)

0.3 (NS) 0.6

(NS) 1.5 (NS)

Nitrificantes nitrosos
Nitrificantes ntricos

5.7 (nr)
0.9 (NS)

60.6
(tsr)

3.6 (nr)

Fuentes de variacin:
1 Estacin 2 Zona

3 Interaccin
Significacin:
** ir

Estacin

Zona

p<O.Ol p<0.OS

NS

no significativo

178

Tabla 3.

XLIII ANOVA de los datos del T50 del dosel y de las zonas sin rboles. Se indica la F y la significacin

FUENTES DE VARIACION

Proteoliticos

3.0 () 2.6

3.7
(-itt>

0.1
(NS)

Amonificantes

2.4
(ir)

0.1
(NS)

(NS)
Nitrificantes nitrosos Nitrificantes ntricos

1.3
(iir)

6.3
(nr)

2.5
(nr)

2.3 (NS)

8.0
(itt)

0.7
(NS)

Fuentes de variacin: 1 Estacin 2 Zona 3 Interaccin Estacin Significacin:

** *

Zona

p<0 .01 pcO.05

no significativo

NS

179

Tablas 3.XLIV a 3.XLVII.

Significacin de las diferencias de

los T50 entre las estaciones del ao, las zonas de muestreo y las zonas respecto al sistema radical. En cada tabla se presentan cuatro apartados:
a) Significacin de los datos de las observaciones del

rizoplano,

de la rizosfera

y del dosel.

b) Significacin de los datos de las observaciones de las zonas sin rboles y del rizoplano de las zonas arboladas. c) Significacin d) Significacin zonas sin rboles
En todas las

de los

datos de

las observaciones

de las de las

zonas sin rboles y de la rizosfera de las zonas arboladas.

de los datos de las observaciones y del dosel de las zonas arboladas.

tablas los resultados medios

de

las

observaciones se disponen en orden creciente de izquierda derecha y de arriba hacia abajo. Significacin:
** ir

p<O.Ol pcO.Ol
no significativo

NS

180 Tabla 3.XLIV Significacin de las diferencias entre los

-

resultados medios del T50 de microf lora proteolitica a)

Z2
O NS

za
z4
21 2 23

p 1

~ -t

NS * NS

NNS
Dahflrffij

va

Rp

Rl

b)

NS NS NS
**

23 Z4 26 26

NS NS
**

NS

O NS P NS * NS * NS

MM NS * *
3 4 26

ZI

c)

Z2 4 Za 6
6

NS * *

NS NS NS NS NS NS 3 NS 6 O NS P NS 1 **
\,

NS *
O

** --;- NS 1 2 24

NS
P

d)
2 3

NS
* NS

Z4 26 26

*
**

NS
*

NS
NS NS

O NS
P NS NS

-t-t 21

* 22

NS 3

NS 4

NS 26

*
.4

NS 0

NS P

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda

O Otoo; 1
Pp

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera

Invierno; Ef P Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal 31 Do Verano Dosel

hmedo

Rizoplano;

Rizosfera;

181 Tabla 3.XLV Significacin de las diferencias entre los resultados

medios del T50 de microf lora amonificante a)

i2

NS * NS
-t-t

P NS

24

y
NS 24

28 -tsr
21

*-t *

-tsr -tsr

Rl N

oo~fJfl
Ap Rl

22

op

NS

b)

-tsr NS 23 -tsr * Za -tsr -tsr -tsr

4
-

P NS
y -t-t -tsr NS *

26

**

-t-t

-tsr

-t

-t-t

NS

21

22

Z4

23

26

op

c)

22 24
23 6

NS NS -t NS NS NS

NS
NS NS

~
-tsr Z2

-tsr
-tsr 24

-tsr 28 NS 28

.4

26 ~
ZI

-tsr
p

-tsr

NS y

d)
2 NS

4
3

NS
*

NS NS NS NS
2

NS NS NS NS
4 3 Z8

P NS * .4 -t NS NS
p

za
Za

-t-t
1

NS

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda

O Otoo; 1

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera

Invierno; P Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal
31 Verano

hmedo

Rp

Rizoplano;

Rf

Rizosfera;

Do

Dosel

182
Tabla 3.XLVI Significacin de las diferencias entre los resultados

medios del T50 de microf lora nitrificante a)

Za 21 2 -tsr ~ -tsr 24 -tsr 23 P NS

nitrosa

sr
21

O -t-t .4

NS
-t

NS O

Rl Rp

[Tfl
Do Rl

b)

za
4

ZS 1 2 25 Z6 24 Za

zi

.4

c)

Z 6
4

za
2
21

NS NS

o-t 1 25 Z6 Z4 3 2

-tsr -tsr NS
.4 p

d)

1 Za 24

NS NS NS NS NS~NS NS
** P NS

2 NS Za ~*-t 25

NS~NSJ
-t*~-tir~

-t~ Z2

O NS 1 NS
.4

NS NS
p

NS

Z4

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda

O Otoo: 1

Z 2 Matorral de aliso Z 5 Ladera

Invierno; 1 Primavera;

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal 31 Verano

hmedo

Rp

Rizoplano;

Ef

Rizosfera;

Do

Dosel

183

Tabla 3.11LVII Significacin de las diferencias entre los resultados medios del TSO de microf lora nitrifican-te nl. t rica a)
ZS NS ** NS

P NS

2 1

O
NS 22 1

NS

-t-t Z4

NS Za

-t-t

NS NS

Rl NS Rp NS Do NS Rl

.4

23 NS

b)
6

NS

NS NS NS[NS~ NS
Z2

Z1 NS NS
N8

P NS NS
5 VP

ze
4 23

NS

21

c)
-

23
Z2
rl

NS * * NS NS NS

P NS NS NS 1 NS Z6 O NS 1 NS .4 NS NS NS

Za

-t-t
-tsr

* ~ 3

NS NS 2

Z4

d)

2 Za
1

-t-t srsr

NS nr * * -tsr NS NS
1

P NS Za

NS NS NS NS

za ** -tsr
Za -tsr 4 -tsr

O NS 1 NS
p

2 3

Z 1 Aliseda arbrea Z 4 Sauceda

Z2 Matorral de aliso z5 Ladera Invierno;

Rf

Z 3 Chopera Z 6 Pastizal 31
Verano Dosel

hmedo

Otoo; 1
Rp

Primavera; Do

Rizoplano;

Rizosfera;

184

3.4. Anlisis de la covarianza

Los resultados de los anlisis variables consideradas se expresan

exponen los ndices de correlacin

de la covarianza de en la tabla 3..XLVIII.

y su

las Se

significacin. En

primer lugar se refleja el ndice que corresponde a los valores sin ajustar (nl y en segundo lugar el ndice corregido por la varianza residual que se debe a las fuentes
de variacin (estaciones1
(r2).

sistema

radical

y presencia

de

rboles)

Destaca
una objeto de

que la
la estudio,

mayora

de las

variables
a los

contrastadas.
tres factores

vez eliminada

variacin

debida

no covaran.

Sin embargo

la concentracin

de carbono orgnico y el NMP de microorganismos proteolticos se correlacionan negativamente al 95%, y los TSO de los
microorganismos El amonificantes y la concentracin de

nitrgenoamonio muestran
cociente C/N covara

una covarianza

positiva (p<0.O5). (pcO.Ol) con los

de forma positiva

niveles de carbono orgnico y los TSO de la microflora proteoltica se correlacionan en sentido negativo con la tasa de C/N (p<O.Ol) y positivamente con el contenido de nitrgeno total de las muestras (p<O.O5), aunque en los tres casos se observa que el efecto de las fuentes de variacin altera ~
ennascara las covariaciones hasta el punto de que no se manifiestan si no se corrige la varianza residual. Los TSO de la microl lora axnonificante tambin covaran positivamente con la relacin C/N sin que la correlacin. las fuentes de variacin modifiquen

185

Tabla 3.11L31111 Grado de significacin de los ndices de correlacin de los anlisis de la covarianza

Variable independiente pH pH pH C orgnico

C orgnico

Variable dependiente T50 P

T50 A T50 No NMP Mt

0.05 (NS)
0.15 (NS) 0.37 (-tsr) 0.26 (nr) 0.34 (nr) 0.28 (nr) 0.18 (sr) 0.16 (NS) 0.15 (NS) 0.55 (nr) 0.39 (nr) 0.45 (ira)

0.05 (NS) 0.03 (NS) 0.002 (NS)

0.17
0.22 0.04 0.14 0.12 0.80 0.17 0.04 -0.09 0.04 0.18 0.04

(NS)
(ir)

C orgnico C orgnico C orgnico

C orgnico Mt Nt

NMP P NMP A
TSO P T50 A C/N

Nt Nt
Nt Nt

C/N NMP Mt NNP P NNPA

TSO T50 10W NMP NMP T50 T50 TSO TSO T50 Nt Nt TSO T50 T50 T50 T50 2 A Mt P Ni P A No Ni No No 2 A No Ni

0.27

(-tsr)

(NS) (NS) (NS) (nr) (NS) (NS) (NS) (NS)

(tsr)

-0.12 (NS) 0.25 (nr)

C/N
C/N

0.22
0.21 0.04 0.23 0.22 0.0? 0.17 0.18 0.06 0.32 0.44 0.55 0.17 0.22 0.18 0.31 0.13 0.27 0.38 0.13

(-tsr) (irte)

0.08
0.14 0.05 0.002 0.04 -0.30 0.18 0.09 0.02 0.02 0.12 0.17 0.03 0.04 0.03 0.12 0.06 0.008 0.22 0.02

(NS) (NS)
(NS)

C/N Cfi.?
C/N C/N C/N

NMPA 1042 No

(NS)

(nr) (nr)
(NS)
(ter)
(te)

(NS) (NS)
(NS)
(irte) (ir)

C/N
C/N

(NS)

(NS)

N-Auonio
N-Amonio

(nr)
(re)

(NS) (NS)
(NS)

N-Nitrato
Humedad Humedad NMP P NNP A NMP No NMP Ni T50 A T50 No Nt Nt A Ni

(nr)
(ir)

(NS) (NS)
(NS) (NS) (NS) (NS) (NS)
(-.rc)

TSO Ni

(*sr)
(ir)

(nr)
(NS)
(ce)

N-Amonio
T50 Ni

(*e)

(NS)

(NS)

C/N Relacin carbono-nitrgeno Nitrgeno total. Nicrol lora ProteoUtica Nicroflora total. Microflora Anionificante No Microflora Nitrificante Nitrosa Microf lora Nitrificante Nitrica indice de correlacin de los valores sin ajustar por la varianza residual 2 indice de correlacin de los valores ajustados por la varianza residual debida a las fventes de variacin * p<O.OS NS no significativo Significacin: s p<O.OI

DISCUSION

187

Para
gJaftinnaa

evaluar
sobre

el
las

efecto

del

aparato

radical
mediadas

de
por

A.
los

transformaciones,

microorganismos telricos, de los compuestos orgnicos nitrogenados en nitrgeno mineral se eligi para el muestreo una aliseda integrada por rboles en diferentes estados de desarrollo y donde crecan prximos sauces y chopos, a fin de comparar el papel de las races. El trabajo se centr en la densidad y la actividad biolgica de las comunidades de microorganismos que regulan la transformacin de las formas nitrogenadas en el medio edfico y, por tanto, la disponibilidad del nitrgeno mineral en el suelo y la productividad del mismo. Por ello no se consideran los aspectos taxonmicos de la comunidad microbiana sino que se estima la biomasa microbiana viable que realiza cada proceso biolgico y su funcionalidad. Son numerosos los mtodos que se han usado en la investigacin de la comunidad microbiana implicada en el ciclo del nitrgeno pero no existe una tcnica que permita determinar con exactitud el nmero de microorganismos y la capacidad metablica de cada grupo fisiolgico in situ. El mtodo del Nl4P revisado por Cochran (1950), (1965). MelcbioriSantolini
y conserva su medio de

Alexander
el la su

(1972) y

Colwell

(1979) entre

otros, es til microflora al

vigencia, aunque subestima la adaptacin necesaria de antes de manifestar

nmero de microorganismos por

cultivo

crecimiento. Sin embargo, al cultivar en tubos la comunidad microbiana, se manifiestan interacciones de sinergia y antagonismo (Bungay y Bungay, 1968) que reflejan en parte los procesos que tienen lugar en el medio natural. La tcnica del NMP es clsica en los estudios microbiolgicos edficos en

188

los que se pretende conocer la densidad de la poblacin microbiana encargada de desarrollar una actividad que da nombre a alguna de las etapas de los ciclos biogeoquimicos (Remacle y De Leval, 1915; Velasco y Lozano, 1979; Rao y Veukateswarlu, 1985; Turner y Franz, 1985; Hashimoto y Hattori. 1987 y GkQeoglu, 1988). Por ello, en este trabajo, se usa el NMP como medida de la densidad de los microorganismos de los grupos fisiolgicos del nitrgeno. En el caso de la comunidad nitrificante se ha aumentado el tiempo de incubacin de las muestras debido al crecimiento lento y a la densidad escasa de la microf lora nitrificante, solucin que proponen Matulewich el al. (1975) y Hashmoto y Hattori (1987) ante el mismo problema. El NMP se relaciona con la capacidad fisiolgica de un grupo de microorganismos, pues considera la aparicin de un producto en el medio de cultivo o la desaparicin del sustrato. Muchos autores relacionan el NMP con el potencial biolgico de
microorganismos (Turner y Franz, 1985). Sin embargo se puede

afirmar que la densidad microbiana no es por s sola un indicativo de la actividad, pues no considera las diferencias entre clulas latentes y activas. Por esta razn se estudia la actividad microbiana siguiendo la liberacin de un producto o el consumo de un sustrato in vitro a tiempos discretos ( Pochon y Tardieux. 1962; Parkinson el aL, 1971; Lozano y Velasco, 1981 y Velasco el al., 1986). Para comprobar los resultados de la capacidad funcional

de los microorganismos por esta tcnica indirecta se emplea la pendiente de las grficas que representan el crecimiento de la poblacin microbiana. En este caso la pendiente es un parmetro que no recoge la variacin que se debe al periodo de latencia y al estado fisiolgico de la poblacin de microorganismos que sin embargo se manifiestan en el valor de la ordenada en el origen. Por ello utilizamos un parmetro

189 que complementa la pendiente con el valor de la ordenada en

el origen y que adems no depende del NMP de microorganismos de la muestra. Se utiliz el tiempo transcurrido en alcanzar el 50% del crecimiento (Gutirrez Maero, 198?). Por tanto la mximo que se representa como T50

actividad

biolgica

aqu

expresada

es se la

consecuencia del mtodo de Pochon y Tardieux (1962) y refiere a la velocidad de crecimiento que manifiesta
microf lora edfica en el tubo de

ensayo cuando se suministra

en condiciones
funcional

ptimas un

sustrato
Por

especfico

de cada

grupo

de microorganismos.

ello esta tcnica refleja

la dinmica de las comunidades microbianas y nos indica su estado fisiolgico, pues el T50 considera el periodo de latencia de los microorganismos para adaptarse al medio de cultivo. edficas activas, Este periodo sera mayor cuando las poblaciones se encuentren esporuladas y menor cuando sean aunque el sustrato del medio de cultivo no coincide natural. de las variables fsicoqumicas
ntimamente con

con el sustrato Los

refieren

anlisis
a los

se
la

factores relacionados

circulacin del nitrgeno en el suelo. Algunos, como el nitrgenonitrato y el nitrgenoamonio, tienen un carcter muy especfico que contribuye a comprender el estado de la
mineralizacin en distintos suelos (Vitousek st al., 1982).

La informacin que se desprende de conocer las concentraciones de ambos iones se debe matizar pues dependen no solo de los microorganismos que los emplean como fuentes de energa y de la microflora que los elabora como resultado de su metabolismo, sino tambin de otros procesos biolgicos y fsicoqumicos como la captacin del nitrgeno mineral por las races, la volatilizacin del amonio, el lixiviado de los nitratos y la interaccin con las partculas coloidales del

190

suelo <Vitousek el al., 1982). Por ello los niveles de nitrgenoamonio y nitrgenonitrato no pueden, por si solos, indicar la actividad biolgica de los grupos funcionales que utilizan estos iones, pero conjuntamente con otros datos manifiestan la dinmica del nitrgeno mineral y nos aproximan a entender el estado de la comunidad microbiana que interviene en las transformaciones del nitrgeno. La determinacin de los iones con electrodos especificas

es un mtodo rpido y sencillo que permite evaluar un nmero elevado de muestras en un breve espacio de tiempo, eliminando los problemas que se derivan de almacenar las muestras intervalos largos de tiempo, que pneden modificar los valores de nitrgenonitrato y de nitrgenoamonio en las fracciones de suelo (Breitenbeck y Bremner, 1987). Tambin se estudian variables ms generales como el carbono orgnico y el nitrgeno total que reflejan la cantidad y la naturaleza de la materia orgnica que sirve de sustrato a los microorganismos mineralizadores. Los recursos
orgnicos edficos alteran reflejan las propiedades la comunidad de metabolismo del la suelo, citada

condicionan
mineralizadora

la
y

estructura

de
el

microbiana

microflora. As degradable y con un crecimiento (Danire el at. La

los

un aumento de la materia orgnica fcilmente un contenido elevado en nitrgeno conduce a de la capacidad mineralizadora del suelo 1986). fsicoqumica que define en
determina, junto con la

humedad es una variable

organicos. pues

parte las condiciones compuestos

en que se realiza la mineralizacin de

granulometra, la cantidad de oxgeno disponible para la comunidad microbiana que mineraliza los compuestos orgnicos (Allison. 1973 y Knight y Skujins, 1981) y es de especial

191

inters en el caso de los microorganismos nitrificantes, que son aerobios estrictos. Se incluye tambin el pH que es un factor que influye en desarrolla la microf lora
aL..,

las condiciones en las que se nitrificante auttrofa (Katyal el

microorganismos

1988) y que afecta a las poblaciones de

proteoliticos y amonificantes que se desarrollan ms o menos dentro del intervalo de tolerancia para este factor. Los resultados de las variables fsico-qumicas y de la densidad y actividad de los grupos fisiolgicos de microorganismos estudiados indican que la vegetacin arbrea, principalmente
cuando est formada por plantas diazotrficas, a travs de la

interaccin planta-suelo, desempea un papel fundamental en la dinmica del nitrgeno (De Datta, 1987) y de la comunidad microbiana en el medio edfico (Sundin a al., 1990). El anlisis de ordenacin que considera el conjunto de variables analizadas (tanto fsico-qumicas como biticas) contrasta el efecto de la vegetacin, pues las observaciones realizadas en las zonas pobladas con alisos, chopos y sauces se disponen en espacios diferentes de las muestras recogidas en las dos zonas libres de arbolado. Estas variaciones se justificaran porque las plantas determinan microclimas (Campbell el al., 1971), promueven microhabitats (Reinhold el al, 1989), inducen cambios en la estructura del suelo (Monroe y Kladuko, 1987), regulan las prdidas de nutrientes en el ecosistema (Vitousek st ni.., 1982) y, en particular, suponen un aporte importante de materia orgnica en el medio telrico (Aranda st al., 1991). La deposicin de las hojas y de otros
restos vegetales (Franklin y 1.Jaring. 1986). el aporte derivado de las 1980, races Struwe y Kjoller. muertas (Joslin y

Henderson. 1987) y la liberacin de sustratos orgnicos por los sistemas radicales vivos (Kloss a al., 1989) son las vas principales de entrada de sustratos orgnicos al suelo.

192

Por
alisos, al tipo

esta razn los

chopos y sauces. y

niveles

de

carbono orgnico en las

registra tambin

de las

muestras analizadas
de vegetacin

son superiores
la aliseda

zonas pobladas con

se refieren mayor la riqueza

Las diferencias

de materia orgnica. Resultados similares se encuentran en el contenido de nitrgeno total y de nitrgeno amonio. Aunque debemos tener presente, como indican Sharma y Ambasht (1987), que en la descomposicin de las hojas desciende el contenido absoluto de nitrgeno total pero aumenta su concentracin lo que refleja una mineralizacin intensa de los compuestos carbonados y una inmovilizacin microf lora hetertrofa. Por tanto los alisos requieren del nitrgeno por la

una mencin especial

pues

suponen una fuente de energa y de nutrientes. sobre todo nitrgeno, muy importante para el ecosistema. Las hojas senescentes de los alisos poseen niveles de nitrgeno similares a las hojas activas, sin embargo esto no sucede con los chopos (Domenach y Kurdali, 1989). Los compuestos nitrogenados del lecho de hojarasca de la aliseda se mineralizan rpidamente (Domenach el al., 1989), lo que significa que la materia orgnica que aportan las hojas de aliso est constituida por compuestos que se degradan fcilmente e influyen en el desarrollo de la microf lora
telrica. Como consecuencia de la entrada mayor de materia

orgnica rica en nitrgeno cerca de los alisos se crean unas condiciones favorables para el incremento de la biomasa microbiana tal y como confirman los anlisis microbiolgicos realizados, que muestran valores superiores de la densidad de la microf lora total y del nmero ms probable y de la actividad de los microorganismos proteolticos y

193

amonificantes alisos.

en la interfase

sueloraz

y en el dosel de los

El anlisis de ordenacin manifiesta la influencia del sistema radical de las plantas. El eje principal que absorbe mayor varianza en ambos anlisis de componentes principales delimita campos de observaciones distintos para las muestras rizosfricas y del dosel. La rizosfera y el suelo no rizosfrico difieren en numerosas caractersticas <Sarkar a al., 1979 y Smith, 198?), pero la diferencia ms importante reside en la liberacin de sustratos orgnicos por las races <Janzen y Bruinsma, 1989>. En este sentido destaca que los resultados de los anlisis fsicoqumicos indican que carbono orgnico, nitrgeno total y nitrgenoamonio son las variables con factores de carga mayores en el eje que diferencia las muestras de la rizosfera de los chopos y de los sauces y principalmente en la interfase sueloraz de los alisos. El pH desciende en la rizosfera de los alisos, de los
chopos y de los sauces, y, aunque las variaciones en la

concentracin de protones son biolgica puede ser relevante.

pequeas,

su

significacin

Adems el efecto rizosfera se manifiesta en la comunidad microbiana (Sundin st al., 1990; Alstrm, 1987 y Bowen y
Foster, 1978) y los datos obtenidos as lo el confirman. La caso de una de

influencia

de la zona

rizosfrica sobre los microorganismos especial en aliso, porque la composicin

edficos adquiere

importancia

planta diazotrfica como el

los exudados radicales influye en la

comunidad bacteriana de

la interfase raz-suelo (Lawley st al... 1983) y en especial los niveles de nitrgeno que aportan los exudados pueden
modificar al., 1978). la densidad de los microorganismos (Christie el

194

El anlisis de componentes principales de las variables microbiolgicas diferencia las observaciones del dosel de las localizadas en el rizoplano y en la rizosfera, tanto en los alisos como en los chopos y en los sauces, e incluso ordena en mx campo los datos rizosfricos y del rizoplano de los alisos y en otro los valores del rizoplano y de la rizosfera de los sauces y de los chopos, estableciendo una clara distincin entre el efecto rizosfera de una planta diazotrfica y el impacto del sistema radical de plantas no fijadoras de nitrgeno. Las microf loras proteoltica y amonificante presentan densidades y actividades superiores en el rizoplano y rizosfera de los sauces, chopos y alisos y por el contrario los microorganismos nitrificantes nitrosos y ntricos son menos abundantes y manifiestan una actividad menor. Los resultados son ms acusados en el rizoplano y en la rizosfera de los alisos. El descenso en la densidad y actividad de la microf lora nitrificante implicara un efecto inhibidor de las races de los sauces, chopos y en especial de los alisos sobre los microorganismos nitrificantes, dato contrastado por otros autores en mbitos rizosfricos distintos (Jordan el
al., 1979 y Montagnini y Buschbacher, la rizosfera 1989). Hay que considerar que el rizoplano y constituyen un aportan

hbitat muy

variable donde los

microorganismos compiten por

el espacio (Purchase, las races y donde se

1974) y por los nutrientes que

produce un nmero elevado de productos 1989). Por tanto

con actividad antibitica (Katelijen el al.,

se puede esperar que la entrada de compuestos orgnicos en la rizosfera, muchos fcilmente asimilables, promueva el
desarrollo de la microflora hetertrofa (microorganismos

mineralzadores) (Hennett y Lynch, 1981) que innoviliza el nitrgeno en detrimento de microorganismos auttrofos como
los nitrificantes.

195

Las variaciones manifiesto el efecto

microbiana que

comentadas anteriormente ponen de de la vegetacin sobre la comunidad

los compuestos orgnicos

mineraliza

nitrogenados, y en particular del sistema radicular. Dicho efecto erxmascara las diferencias que promueve la variacin estacional, que se aprecian con mayor claridad cuando las variables analizadas se estudian independientemente una de otra. Las diferencias en los valores del pH entre las seis zonas niuestreadas son pequeas aunque significativas <p<0.0l) y ponen de relieve que, en el suelo de la aliseda, tanto en la zona donde crecen los ejemplares ms desarrollados como entre los alisos de porte inferior, la concentracin de protones es ms elevada. Estos datos coinciden con los valores registrados por otros autores (Crocker y Major, 1955; Crocker y Dickson, 1957; Ugoloni, 1968; Franklin st al.,
1968; Bormann y Debel, 1981; Prez Hernndez st al., 1989 y Bermdez de Castro y Gutirrez Maero, 1987) que observan que

las plantas diazotrficas inducen una acidificacin del medio edfico. El descenso del pH en la rizosfera de los alisos, chopos y sauces hace suponer que las variaciones se deben en primer lugar a lanfluencta del sistema radical que elevara
la concentracin de protones sobre menor medida en la zona todo bajo los alisos y en chopos y de los interaccin rizosfrica de los

sauces. La justificacin de tales variaciones es el resultado conjunto de diversos factores plantasuelo. que inciden en la

Las
edfico, sern consumo

plantas, al introducir materia

modifican su de protones composicin un proceso con el mineralizados en

orgnica en el medio
sustratos que implica el del pH

y aportan

complejo que

consiguiente incremehto

196
(Ulrich, 1980). Por otra parte la descomposicin de los

sustratos orgnicos incrementa los niveles de nitrgeno disponible para el crecimiento de la vegetacin, lo que se manifiesta en un descenso de los compuestos polifenlicos en la hojarasca y por tanto en una entrada menor de protones al medio edfico (Gosz, 1981). Al mismo tiempo la materia orgnica de origen vegetal aporta cidos orgnicos e inorgnicos (Bormann y Debel, 1981) y puede, mediante la disociacin de los grupos fenlicos y carboxilos frecuentes en los restos vegetales (Schwintzer, 1984), liberar protones al suelo. Los dos procesos citados en primer lugar explican los resultados mayores del pH en el dosel de los sauces, chopos y alisos respecto a las dos zonas libres de arbolado, mientras que el tercer mecanismo supone que el incremento del pH no sea muy acusado, aunque las variaciones entre las zonas con rboles y las zonas sin ellos son significativas como encuentran tambin Schmitz el al. (1990) bajo otros rboles
dazotrficos. En papel el sistema sueloplanta las intercambio de races desempean un

importante en el

nutrientes que puede

alterar el equilibrio electrosttico del medio edfico. Se debe considerar que las races captan el nitrgeno que requiere la planta de los sustratos nitrogenados inorgnicos
del suelo (Gillespie y Chaney, 1989). Segn la fuente de

nitrgeno, el pH del suelo cercano a las races puede variar en un sentido o en otro, porque si el sistema radical absorbe
amonio libera protones y para mantener la si capta nitrato libera celular hidrxilos Van electroneutralidad (Swart y

Diest, 1987). Estos procesos

justifican los valores

menores

del pH bajo los alisos respecto a los chopos y sauces pues las plantas fijadoras de nitrgeno manifiestan escasa
necesidad de nitrgeno mineral, mientras que los suelo chopos y con iones

sauces

al

captar

nitrato

enriquecen

el

197
hidrxilo. Por esta razn en la rizosfera de los chopos y de

los sauces la concentracin de protones desciende las zonas sin vegetacin leosa. En leguminosas se ha observado que

respecto

el sistema

radical

absorbe mayor proporcin de cationes que de aniones por lo que el pH del sustrato disminuye debido a que la planta libera ms protones que iones hidrxlo (Kirkby, 1981). Resultados similares obtienen Smith y Pooley (1989), Ingestad
(1980), Stewart y Bond (1961) y McConell y Bond (1957).

Franklin st al. (1968) observan concentraciones menores de Ca2-- y Mg2-- y un descenso del pH bajo Alnns rubra Hong. Estos hechos podran justificar la variacin ms intensa del pH bajo los alisos, pues al absorber las plantas diazotrficas cantidades significativas de cationes y liberar protones, aquellos no pueden actuar como amortiguadores del pH en el suelo y por tanto cualquier cambio en la concentracin de protones se manifiesta de forma ms intensa. Los
microorganismos telricos alteran tambin el pH del medio

como consecuencia de su actividad metablica. Alstrm y Burns

(1989) registran en cultivos

de rizobacterias productoras de y 3 unidades a las 48 horas

HCN un descenso del pH entre 0.5

de incubacin. Las variaciones estacionales se explicaran por esta va porque los microorganismos proteolticos y
amonificantes verano cuando muestran su actividad el pH es ms ms elevada en otoo y como elevado, probablemente

resultado

del

consumo

de

protones

en

el

proceso

mineralizador.

Por tanto las zonas con arbolado, mediante el aporte de sustratos orgnicos que mineralizan los microorganismos edficos, promueven un incremento del pH debido al consumo de protones implcito con el proceso mineralizador. Este hecho se manifiesta en las muestras recogidas entre los chopos y

198 los sauces, pero no as en la aliseda, porque su aparato radical acidifica el suelo (Miller, 1982). Las races absorben cationes divalentes, principalmente Ca2-- y Mg2--. y con el fin de mantener la electroneutralidad interna liberan protones pero no iones hidrxilo, que se utilizan en la sntesis de aniones de cidos orgnicos manteniendo el equilibrio externo. elctrico y el pH interno pero no as e]. pH

Las diferencias

significativas

(p<0.Ol)

en el

contenido

de carbono orgnico indican que en las zonas con arbolado los

niveles de compuestos orgnicos son ms elevados que en las zonas sin rboles. Los materiales orgnicos de origen vegetal derivan de fragmentos de troncos (Franklin y Waring, 1980), del lecho de hojarasca (Hunt st al., 1988), del lavado de la parte area por el agua de lluvia (Bollen y Lu, 1968), de las races muertas <Joslin y Henderson, 1987) y de la liberacin
de productos por las races vivas (Janzen y Bruinsma, 1989 y

Newman, 1985). Los porcentajes

mayores de carbono orgnico en

la aliseda y en las zonas con chopos y sauces respecto a los controles sin vegetacin leosa se podran explicar por un aporte mayor por las vas citadas, en particular por la liberacin de compuestos orgnicos de origen radical y a travs del lecho de hojarasca. La capacidad fijadora de los alisos potencia la produccin primaria y la entrada de
sustratos las especies orgnicos, hecho importante de silvicultura con los alisos (Silvester. porque motiva se asocien 1977 y Rojas que en otras el al.. prcticas moderna

1978).
Las variaciones entre rizosfera y dosel, aunque no son muy elevadas, reflejan que las races suponen una entrada
importante microbiana de sustratos carbonados tambin para la otros actividad autores telrica, como observan

199 (Janzen y Bruinsma, 1989 y Barber y Lynch, 1977). Keith el al. (1986) indican que el carbono que las plantas fijan mediante la fotosntesis se libera en la rizosf era en proporcin elevada, que en ocasiones supera el 20% (Martin y Kemp, 1986>. Las variaciones en la deposicin de los restos vegetales, como la hojarasca, y su correspondiente descomposicin por la microf lora telrica implica que existan diferencias a lo largo del alio en los niveles de carbono orgnico. La tasa de descomposicin de las hojas cadas de los chopos (Aranda st al., 1991) indica una mineralizacin rpida, hecho que tambin se produce en las hojas de aliso
(Domenach st al., 1989). Sharma y Ambasht (1987) observan que en A. nn~alensis D. Don hay una prdida de masa del 30% en el

lecho

de

hojarasca

en

los

tres
hecho

primeros

meses

lo
con

que
los

representa un enriquecimiento fcilmente utilizable. Este

del medio telrico se corresponde

en carbono

datos ms elevados de carbono orgnico que se registran en el invierno tras el desprendimiento de las hojas en el otoo.
Sharma y Ambasht masa del lecho (1987) reflejan tambin de hojarasca disminuye que la prdida en las pocas de de

humedad menor por lo que en el verano desciende la entrada de carbono orgnico en el suelo a partir de las hojas
depositadas elevadas oxidacin parte en de en el mismo. Por otra el la verano materia y en la parte las temperaturas favorecen compensan ms la en primavera

orgnica,
1984),

ms

intensa y

rpida

(RodrguezBarrueco

st al.,

y por tanto

el efecto que promueve el descenso de humedad en la estacin ms calurosa que presenta los valores inferiores de carbono orgnico.
Los resultados obtenidos reflejan la importancia de los

alisos, chopos

y sauces como fuente de compuestos orgnicos.

200
La entrada de materia orgnica supone tambin un aporte de nitrgeno al medio telrico por lo que la cantidad de nitrgeno total en el suelo es mayor en las zonas arboladas y en especial en las zonas con alisos, gracias a su actividad diazotrfica. El aporte de nitrgeno par parte de las plantas que se estudian, al igual que la entrada de materia orgnica, se realiza a travs de numerosas vas, entre las que destacan el lavado de la parte area o el lecho de hojarasca, como ya se ha indicado. En este sentido conviene resaltar que las hojas senescentes de los alisos contienen niveles de nitrgeno similares a los de las hojas activas, hecho que no sucede en las plantas no diazotrficas, que pueden perder de uno a dos tercios de su contenido de nitrgeno antes de caer al suelo (Domenach y Kurdali, 1989).
Estos datos justifican el papel conservador del

contenido de nitrgeno de la cubierta vegetal y se corresponden con los datos apuntados por otros autores que observan un aumento de las prdidas de nitrgenonitrato en aquellos sitios que han sufrido alguna alteracin en el desarrollo de la vegetacin bien por el uso de herbicidas (Vitousek st al., 1982) o por la tala de rboles -(Wiklander. 1981). El contenido ms elevado de nitrgeno total que se registra en las zonas pobladas con rboles coincide con las concentraciones mayores de nitrgenoamonio y de
nitrgenonitrato que aparecen en estas zonas. spbre todo de

nitrgenoamonio en
covarianza de

la

aliseda, aunque
refleja

el
que

anlisis de
los datos

la
de

estas variables

nitrgenoamonio y de nitrgenonitrato, una vez eliminada la variacin que se debe a los tres factores estudiados (zona. sistema radical y estacin), no se correlacionan con la concentracin de nitrgenototal. Los niveles de nitrato en

201 la aliseda son menores que los que se observan entre los chopos y entre los sauces, y. puesto que la granulometra no difiere, podemos atribuir las diferencias en la concentracin de nitrgenonitrato a la localizacin de los alisos junto al cauce del ro Sorbe. En esta zona, por el nivel fretico del ro, es muy importante el lavado horizontal y vertical del nitrgenonitrato, forma aninica de movilidad ms elevada que el nitrgeno-amonio (Hart y Firestone, 1989) que se fija a las arcillas y no es translocado por el agua. Las diferencias en el contenido de nitrgenototal y de nitrgenoamonio de las seis zonas tampoco -se pueden justificar por las variaciones en la textura, porque solo destaca la proporcin mayor de arcillas en las zonas con matorral de aliso y en la ladera. Por otra parte las variaciones geomorfolgicas entre las dos zonas sin arbolado no se manifiestan en el contenido de nitrgenonitrato y de nitrgenoamonio, por lo que los resultados del aporte de nitrgeno mineral en ambas, del lavado superficial en la zona de mayor pendiente y del lavado por el nivel fretico del ro en el pastizal son similares. El incremento del nitrgenototal en la rizosfera de los

alisos, chopos y sauces respecto al dosel de las mismas plantas responde al aporte de compuestos nitrogenados a travs del sistema radical por las races muertas (McClaugherty el al., 1984 y Joslin y Henderson, 1987) y por la liberacin de productos nitrogenados por las races vivas. 32% del nitrgeno asimilado por la parte area de la planta y que en proporcin elevada se liberan como aminocidos en los exudados radicales (Hale el al., 1975). En las plantas actinorrizas, adems, se debe considerar la necrosis de los ndulos donde reside la actividad dazotrfica (Leaf el al.. 1959), pues sus exudados presentan concentraciones elevadas
que Janzen y Bruinsma (1989) cifran en torno al 25
-

202 de compuestos nitrogenados (Remacle y De Leval, -1975). Por ello en la rizosfera de los alisos se observan niveles de nitrgeno total mayores que en la rizosfera de los chopos y de los sauces. Las diferencias en el contenido de nitrgeno total entre los suelos con ambas- poblaciones de alisos confirman que su estado de desarrollo afecta a la intensidad del aporte de compuestos nitrogenados al medio edfico, hecho que tambin observan Sharma st al. (1985) en poblaciones de A. nepalensis D. Don, pues con la edad de los bosques aumenta el nitrgeno total y el carbono orgnico del suelo en proximidad a los alisos. Tras
total

la cada

de las

hojas, los
debido

niveles
a un

de nitrgeno

grado mayor de humedad que provocara el lixiviado de las fornas solubles de nitrgeno minera]., sobre todo cuando en la estacin precedente la actividad de las microf loras nitrificantes nitrosa y ntrica es mxima, lo que determina un incremento del nitrgeno mineral ms fcilmente lavable. Este efecto se manifiesta tambin en primavera, poca del ao en que se
descienden en invierno

obtienen los valores ms bajos del nitrgeno total, y cuando la absorcin de nitrgeno por las races aumenta como consecuencia del incremento de actividad de los alisos, chopos y sauces. Por esta razn en primavera desciende la concentracin de nitrgenonitrato, aunque el contenido menor se registra en invierno, cuando el lavado de las formas mviles de nitrgeno es ms intenso. En las zonas 1 y 2. pobladas con alisos, otro factor a considerar es la actividad nula del endfito de A. glutinosa en invierno (Garduer, 1965) por lo que en esta poca y en esta misma aliseda Bermdez de Castro y Schmitz (1981) no registraron actividad reductora de acetileno y por tanto el aporte de materia orgnica

203 nitrogenada de origen radical es menas significativo. El contenido mayor de nitrgeno total en la rizosfera se corresponde de forma dispar con los niveles de nitrgenonitrato y de nitrgenoamonio, principales formas de nitrgeno inorgnico en el suelo. El amonio aparece en concentracin mayor cerca de las races, hecho que se justifica por el flujo elevado de compuestos orgnicos nitrogenados por parte de las races que, a travs de la mineralizacin biolgica, suponen un aporte significativo de nitrgenoamonio. Por el contrario, en la rizosfera desciende la concentracin de nitrgenonitrato, forma de nitrgeno inorgnico susceptible al lixiviado por su fcil movilidad tal y como indican Vitousek a al. (1982) quienes registran las prdidas ms elevadas de nitrato en la zona radical de los rboles de un bosque de A. rubra. Adems se debe tener en cuenta el papel de la vegetacin nitrfila (llrtica sp., Rubus sp.) que absorbe el nitrgeno-nitrato edfico y que est presente en muchas alisedas (Bermdez de Castro, 1977). Por otro lado el nitrgenonitrato constituye el sustrato de la actividad desnitrificante que los microorganismos realizan en la rizosfera donde se renen unas condiciones adecuadas para su desarrollo (Mikkelsen, 1987). La relacin carbono/nitrgeno influye en la actividad de los microorganismos edficos (Rosswall. 1981) y por esta razn las variaciones significativas que se encuentran entre las muestras estudiadas son interesantes. Antes de analizar los resultados obtenidos, conviene resaltar que la relacin C/N por si sola no permite determinar ni el tamao ni la actividad de las poblaciones de los microorganismos edficos, aunque nos orienta sobre la composicin cualitativa del sustrato que sirve de soporte a la comunidad microbiana. Los resultados ms elevados de las zonas sin arbolado no

204 significa que, en estos puntos, se encuentren niveles mayores de sustratos orgnicos, sino que la concentracin de nitrgeno total disminuye respecto a las zonas con alisos, chopos y sauces. El aporte de nitrgeno mayor en las zonas arboladas, sobre todo en la aliseda ms desarrollada, favorece la productividad primaria, aumenta la biomasa y se traduce en una relacin C/N elevada, que adems indica que el nitrgeno bajo los alisos se asimila fcilmente. Sin embargo entre el nitrgeno total y el cociente C/N no se observa ninguna correlacin, aunque ambas variables presentan diferencias significativas que se deben a las tres fuentes de variacin estudiadas (zona, estacin y proximidad al sistema radical). La evolucin estacional del cociente C/N y las diferencias entre la zona rizosfrica y el dosel se pueden atribuir a las variaciones registradas en la concentracin de carbono orgnico en cada zona. En este sentido, el anlisis de la covarianza de los resultados de la relacin carbono/nitrgeno ajustados por los valores de carbono orgnico indica que ambas variables evolucionan de forma semejante y que estn correlacionadas. Por ello, las variaciones significativas se pueden atribuir a las diferencias en la concentracin de carbono orgnico. El anlisis de la covarianza de estas dos variables indica tambin que las fuentes de variacin inciden sobre ambas variables hasta el. extremo de enmascarar la correlacin existente. Entre la relacin C/N y la densidad y la actividad de los microorganismos de los grupos fisiolgicos que se estudian solo se observa correlacin significativa con los TSO de las microf loras proteoltica y amonificante. De ello se deduce que el efecto de esta variable sobre los microorganismos proteolticos, amonificantes y nitrificantes est modulado en parte por la interaccin con otras variables

205 y con los factores ambientales. La densidad microbiana de los diferentes gupos de microorganismos por gramo de suelo es comparable con la encontrada en otros suelos de ambientes templados (OBrien, 1918; Bermdez de Castro y Gutirrez Maero, 1987 y Schmitz et al., 1990). El NMP de microorganismos totales, proteolticos y anonificantes son las variables que presentan factores de carga ms elevados en el anlisis de componentes principales. Por ello las variaciones en la densidad de tales grupos fisiolgicos de microorganismos nos permiten caracterizar las distintas observaciones y evaluar el efecto del sistema radical de las diferentes plantas aqu estudiadas y de los cambios estacionales. Estos resultados no implican que los factores de variacin que se analizan solo citadas comunidades de microorganismos. afecten a las

Las variaciones significativas (pc0.Ol) en los anlisis de la varianza del NMP de microflora total ponen de manifiesto el efecto importante de las plantas sobre la microflora telrica. Tanto en la aliseda, como entre los sauces y los chopos, el NMP de microorganismos supera al que aparece en las dos zonas sin vegetacin arbrea. Por consiguiente el papel regulador de la vegetacin en este caso se traduce en un incremento de la comunidad microbiana. Las razones que pueden justificar este hecho son numerosas, pero, como Pough (1914) indica, los nutrientes de las hojas cadas y las excretas de las plantas son condiciones suficientes para el desarrollo de la nicroflora edfica pese a la influencia de los factores fisicoquimicos, y en especial se puede destacar el aporte de materia orgnica que representa el arbolado para la regin edfica. dato que est de acuerdo

206 con los resultados registrados y expuestos anteriormente que demuestran que en las zonas con chopos y sauces, y en especial bajo los alisos, aparecen valores ms elevados de carbono orgnico y de nitrgeno total. La densidad de la microf lora total muestra coeficientes de correlacin positivos con los niveles de carbono orgnico y de nitrgeno total. Pero los anlisis de la covarianza de cada una de ambas variables fsicoqumicas respecto a los datos del N}IP de microf lora total nos indican que, al eliminar el efecto debido a las tres fuentes de variabilidad (aparato radical, estacin y zona), los coeficientes de correlacin que se calculan a partir de la variacin residual reflejan valores no significativos. Por ello la correlacin observada en principio es consecuencia del efecto de las fuentes de variabilidad que inciden de forma significativa en las concentraciones de carbono orgnico y de nitrgeno total (hecho que se refleja en los anlisis de la varianza de las dos variables fsicoqumicas). Estos resultados reflejan que el aporte de potenciales sustratos orgnicos nitrogenados por parte de los alisos, chopos y sauces es importante y justifica en parte las diferencias en el tamao de la comunidad de la microflora total. Sin embargo, deben existir otros factores que incidan en las variaciones de la densidad de microflora total y que alteren su asociacin con los niveles de materia orgnica nitrogenada. En este sentido hay que considerar que Los alisos, chopos y sauces aportan tambin nutrientes distintos de la materia orgnica y esenciales para el. desarrolLo de los microorganismos telricos, situacin que no sucede en las zonas sin rboles que registran las densidades inferiores de la microl Lora total.

207 Los datos tambin manifiestan el efecto de las condiciones ambientales. Aunque la microflora de los suelos mediterrneos se adapta al dficit temporal de agua (Schaefer, 1973) y en un suelo ribereo las variaciones de humedad no son muy acusadas, en otoo y primavera aumenta la densidad de microorganismos. En el otoo la elevacin del 10W coincide con el incremento de humedad en el suelo tras la estacin seca, mientras que en invierno aumenta el contenido de agua e incide en una porosidad menor y una compactacin mayor de los suelos con el consiguiente descenso de la superficie de las particulas del suelo, lo que refleja unas condiciones adversas para el desarrollo de la microflora aerobia. Adems las lluvias ms abundantes en invierno provocan la prdida de sustratos para la comunidad microbiana. En primavera las condiciones no son tan adversas pues tiene lugar un incremento de la temperatura que supone una activacin trmica de la microflora edfica que se manifiesta en una densidad ms elevada de la microflora total. Las condiciones ambientales influyen en la densidad y actividad de la microf lora edfica y. por tanto, alteran la comunidad de microorganismos telricos. Los datos del NNP de microflora total no permiten establecer diferencias entre el rizoplano y la rizosfera en las cuatro zonas con vegetacin arbrea. Por consiguiente rizoplano y rizosfera constituyen una zona homognea para el desarrollo de la comunidad de microorganismos totales. que presenta una densidad superior a la del dosel de los alisos, chopos y sauces. Los valores ms elevados del rizoplano y de la rizosfera se explicaran con las condiciones ptimas de la zona radical, porque las races son una fuente importante de sustratos (superior al lecho de hojarasca en ocasiones. McClaugherty et al., 1982), y muchos de ellos son compuestos orgnicos nitrogenados de fcil utilizacin como los

208 aminocidos (Hale aL al., 1975). El crecimiento de la densidad bacteriana en el rizoplano y rizos era depende en gran medida de la naturaleza de la materia orgnica ya que las caractersticas metablicas de las bacterias manifiestan una eficacia superior con sustratos orgnicos de peso molcular bajo (Nakas y Klein, 1980), lo que tambin afecta al tiempo de generacin de las bacterias, que disminuye cerca del sistema radical (Bowen y Foster, 1978). Adems los productos liberados por las races pueden tener un efecto quimiotctico (Krotzky e.t al., 1983) que favorezca el desarrollo de poblaciones determinadas de microorganismos (Barak aL al., 1983) en detrimento de otras poblaciones de la comunidad edfica, hecho muy importante pues recordemos que, en este sentido, Neal aL al. (1968) indican que el nmero mayor de microorganismos en la interase razsuelo puede disminuir la susceptibilidad de las races a la invasin por bongos patgenos y por tanto las bacterias rizosfricas pueden desempear un papel fundamental en ciertas plagas (Elad y Baker, 1985). el control de

Destacan el rizoplano y la rizosfera de los alisos arbustivos porque presentan el mayor incremento demicroflora total respecto a los valores del dosel y de las zonas libres de arbolado; en el rizoplano y en la rizosfera de los alisos ms desarrollados, el aumento del NbIP de la comunidad microbiana es menor porque la densidad de microorganismos totales en el dosel de estos rboles es la ms elevada de de todas las zonas no rizosfricas. En la interfase razsuelo de los chopos y de los sauces tambin se observan valores ms elevados del NI4P respecto al dosel de ambas plantas y a las zonas sin arbolado, aunque el incremento es menor que en la aliseda. Entre los chopos y los sauces las pruebas estadsticas (anova y LSD) no manifiestan variaciones significativas de la densidad de los microorganismos totales

209 en la zona rizosfrica por lo que el efecto del sistema radical de ambas plantas ser similar. Por el contrario el aumento de la microflora total en la zona rizosfrica de los alisos sugiere que el simbionte .Erankia influye de forma muy acusada en el desarrollo de la comunidad microbiana. La presencia de los alisos, chopos, sauces y en particular de su sistema radicular desempea un papel especial en la dinmica del ciclo del nitrgeno por la interaccin de estas plantas con los microorganismos mineralizadores de los compuestos nitrogenados y as lo confirman los resultados del anlisis de ordenacin efectuado, pues manifiestan un efecto significativo de las plantas citadas sobre las poblaciones de microorganismos proteoltcos y amonifcantes. La densidad y los T50 de las microfloras proteoltica y asonificante caracterizan el eje que representa la tendencia de variacin mayor en el anlisis de componentes principales. Por tanto las variaciones en las comunidades de microorganismos proteolticos y amonificantes adquieren un gran protagonismo que permite diferenciar las muestras de la interfase razsuelo de las locali~adas en el dosel y en los controles sin arbolado. Las diferencias entre el rizoplano, la rizosfera y el

dosel, en las cuatro zonas con arbolado muestran que rizoplano y rizosfera son zonas ptimas para las comunidades microbianas mineralizadoras, probablemente porque el aporte de nutrientes promueve el desarrollo de tales microorganismos. Destaca la riqueza de amonio de la zona rizosfrica y los niveles superiores de carbono orgnico y de nitrgeno total que tambin se encuentran a pie de planta en la interfase razsuelo. Por ello resalta la fuente de nutrientes que representan los alisos, chopos y sauces a travs de su sistema radical que proporciona compuestos

210 orgnicos poco frecuentes en el suelo no rizosfrico (Smith y Pooley, 1989) y, aunque, de composicin qumica diversa, abundan los compuestos fcilmente metabolizables (Turner y Newman, 1984), sobre todo en la interfase razsuelo de los alisos, hecho que reflejan los anlisis de la varianza y las pruebas del LSD que indican que los microorganismos proteolticos y azonificantes varian en densidad y actividad, ms elevados siempre en el rizoplano y en la rizosfera de los alisos, descienden en la zona de influencia de la raz de los chopos y sauces, que no difieren entre s, y son mnimas en el pastizal y ladera. Las variaciones no significativas en el rizoplano y la rizosfera de los chopos y de los sauces manifiestan que, bajo ambos, los microorganismos proteolticos y amonificantes encuentran condiciones similares para su desarrollo e igual ocurre en las das zonas sin arbolado. El efecto favorable de la vegetacin arbrea sobre proteolisis y axnonificacin se extiende al dosel de los chopos y sauces y adquiere un relieve an mayor en la aliseda. Aqu se obtienen los valores ms elevados de densidad y menores de los T50 y las concentraciones superiores de amonio, lo que supone una mineralizacin mayor de los sustratos orgnicos y confirma que los microorganismos productores de amonio se encuentran en un estado fisiolgico que refleja una actividad intensa. En el entorno de otras actinorrizas se han observado resultados similares (Bermdez de Castro y Gutirrez Maero, 1987 y Llinares, comunicacin personal)
-

Los sustratos orgnicos fuera de la rizosfera estn menos localizados, pues la fuente principal de compuestos orgnicos es el lecho de hojarasca y por tanto el NMP y la actividad de la microflora proteoltica en el dosel es menor

211 que en la rizosfera. Otro factor importante es la naturaleza del lecho de hojarasca, ya que las hojas senescentes de los alisos presentan concentraciones superiores de compuestos nitrogenados (Sharma y Ambasht, 1981 y Domenach y Kurdali, 1989). Esto justifica que ambas actividades, proteolitica y amonificante, sean ms intensas en el dosel de los alisos que en las dems zonas no rizosfricas. El dosel de los sauces y chopos refleja, al igual que su rizosfera, unas condiciones semejantes para el crecimiento de ambos grupos de microorganismos. En las zonas sin arbolado no se registra la entrada de sustratos derivados de los exudados radicales de los alisos, chopos y sauces y el aporte de nutrientes de sus hojas es minimo segn confirman los niveles inferiores de carbono orgnico y de nitrgeno total que reflejan unas condiciones menos idneas para el desarrollo de los microorganismos proteolticos y amonificantes.

Los resultados ms elevados de la densidad e inferiores de los T50 de la comunidad amonificante en relacin a la microflora proteoltica, principalmente en la aliseda, se atribuyen a que los productos que resultan de la actividad metablica de los microorganismos proteoliticos son susceptibles de ser metabolizados por numerosos microorganismos y, por tanto, un aumento de la proteolisis induce un incremento mayor de la amonificacin. Tambin destaca el hecho antes citado de que la diazotrofa de los alisos manifiesta a travs de las races y del lecho de hojarasca un aporte de compuestos nitrogenados sustrato de la microf lora amonificante sin que los microorganismos proteolticos los degraden previamente. Por ello en las zonas control (chopera, sauceda, ladera y pastizal) las diferencias entre las comunidades proteolitica y amonificante son menores, aunque en la rizosfera de los sauces y de los chopos

212 las variaciones aumentan respecto al dosel de las mismas plantas, debido a la liberacin de exudados radicales que proporcionan sustratos a la actividad amonificante por una va alternativa a la iniciada en la proteolisis. Los resultados de los anlisis de la covarianza de la

densidad y actividad de las microl loras proteoltica y amonifcante con las concentraciones de carbono orgnico y de nitrgeno total indican que la correlacin positiva que se aprecia entre el MM? de ambos grupos fisiolgicos de microorganismos y las dos variables fsicoqumicas, desaparece cuando se desestima el efecto de las tres fuentes de variacin que se estudian (zona, sistema radical y estacin) e incluso se observa que el N}P de microorganismos proteoliticos y el nivel de materia orgnica se correlacionan negativamente, mientras que el contenido de nitrgeno total y la actividad proteoltica muestran una correlacin positiva. El papel de las fuentes de variabilidad es primordial en la correlacin de los niveles de amonio y de la actividad amonificante, porque el anlisis de la covarianza indica que ambas variables covaran de forma significativa al 99%, a causa de las diferencias que inducen los citados factores de variacin. Si se consideran los datos de nitrgenoamonio ajustados con los valores de la actividad microbiana, el grado de significacin es del 95%. La explicacin de estos resultados no resta importancia al papel de los sustratos carbonados, pues el aporte de materia orgnica cerca de los alisos, chopos y sauces refleja una situacin favorable para el desarrollo de la biomasa microbiana y las microfloras proteoltica y amonificante, pero se puede alterar por otros factores que modifiquen la disponibilidad de los nutrientes de origen vegetal o que incidan directamente sobre las comunidades de microorganismos que mineralizan los compuestos orgnicos nitrogenados. En este sentido se debe mencionar que

213 las races y el lecho de hojarasca de los alisos, chopos y sauces pueden liberar sustancias, en especial compuestos polifenlicos (Schwintzer, 1984; DArcy Lameta, 1986 y Greenway y Whatley, 1990), que forman agregados con las protenas y aminocidos y dificultan su disponibilidad como sustratos de las comunidades proteoltica y amonificante (Howard y Howard, 1990). El efecto de los exudados radicales puede ser ms intenso como DArcy Lameta y Jay (1987) registran en las races de la soja que libera cumestrol, inhibidor del desarrollo rizosfrico de Pgrnidnmnna~ sp., taxon muy abundante en la interfase razsuelo. Adems debemos considerar que la densidad y actividad de los microorganismos proteolticos y amonificantes se encuentran bajo el influjo de las mltiples microzonas que se tienden a crear en la interfase razsuelo por la absorcin de nutrientes y la competencia por nitrgeno entre plantas y microorganismos (situacin extendible al lecho de hojarasca) y por el mayor nmero de microbabitats aerobios y anaerobios que determinan la estructura del suelo, humedad y respiracin radical, lo que propicia la diversificacin de las comunidades proteoltica y amonificante. Estas circunstancias justificaran que las variaciones en los niveles de carbono orgnico y de nitrgeno total no se correspondan con las diferencias de los microorganismos mineralizadores. Por otra parte hay que resaltar que las diferencias ms importantes entre los niveles de materia orgnica y la densidad y actividad de los microorganismos radica en el cambio estacional que determina que no se aprecie una correlacin positiva entre la materia orgnica y los microorganismos mineralizadores. Las diferencias entre las estaciones reflejan la importancia de las condiciones ambientales sobre ambas comunidades de microorganismos y matiza el papel de la concentracin de sustratos orgnicos

214 nitrogenados. En invierno, tras la cada de la hoja, se observan los valores ms elevados de materia orgnica, pero la densidad y la actividad de los microorganismos son menores. La humedad ms elevada que se registra en esta poca promueve una disminucin de la porosidad, lo que supone una superficie menor de los agregados donde se localizan los microorganismos. Esto se traduce en una disponibilidad inferior de los sustratos orgnicos nitrogenados para la microflora mineralizadora (Schaefer, 1973). Las variaciones en la temperatura tambin son importantes como registran Foster aL al. (1989), quienes detectan un descenso de la mineralizacin de los compuestos orgnicos nitrogenados cuando disminuye la temperatura de los sustratos orgnicos. OBrien (1972) indica que la proteolisis aumenta del orden de tres veces cuando la temperatura se eleva de 2OPC a 37W y Stanford aL al. (1975) observan que por debajo de 35W disminuye la actividad mineralizadora. En verano, estacin con menor grado de humedad y temperaturas ms elevadas se registra la mxima actividad de la microf lora proteoltica. aunque no difiere significativamente de las que aparecen en otoo y primavera, estaciones que presentan las comunidades amonificantes ms activas, lo que indica que estos grupos fisiolgicos debido a su heterogeneidad se muestran activos en un intervalo amplio de humedad y temperatura <Miller y Johnson, 1964). La interaccin de ambas variables promueve la actividad de los microorganismos amonifcantes como Seneviratne (1985) y Sparling y Ross (1988). indican

Un factor abitico importante es el pH, que en todas las fracciones de suelo supera el intervalo ptimo que Sahrawat (1982) seala para la mineralizacin. Por ello en la rizosfera de las plantas, sobre todo en la aliseda, donde el

215 pH desciende y la concentracin de protones se aproxima al nivel idneo, se observan los resultados ms elevados del NY4P y menores de los T50 de las microf loras proteoltica y amonificante. Esta circunstancia no se aprecia en los cambios estacionales del pM y de los T50 (variables que no covaran), luego la variacin estacional tiene mayor incidencia que la concentracin de protones sobre el estado fisiolgico de las microf loras proteoltica y amonificante. De estos datos se desprende que las concentraciones mayores de materia orgnica y de nitrgeno total que se registran bajo los chopos y los sauces, y en particular entre los alisos, as como a nivel del sistema radical, influyen en la comunidad microbiana que descompone los compuestos orgnicos nitrogenados. Adems hay que considerar que la naturaleza de la materia orgnica y la riqueza en nitrgeno condiciona su disponibilidad como sustrato de la actividad metablica de los microorganismos y que junto con otros factores, en especial las condiciones ambientales (Tiedje at al., 1984), determina que no exista ninguna correlacin entre la densidad y la actividad biolgica como indican Scbmidt (1973) y Alef y Kleiner (1986). Los microorganismos nitrificantes manifiestan pautas de

comportamiento diferentes de los grupos fisiolgicos anteriores. El anlisis de ordenacin refleja que las comunidades de microorganismos nitrificantes caracterizan en parte la principal tendencia d variacin entre las zonas estudiadas y. por tanto,, contribuyen a diferenciarlas mediante las variaciones significativas que muestran en su desarrollo. La microflora nitrificante nitrosa, que supone la etapa limitante de la produccin de nitrgeno-nitrato a partir de nitrgenoamonio, presenta las comunidades menos numerosas y los TSO ms elevados en las cuatro zonas con

216 vegetacin arbrea, en particular a nivel del sistema radical de los rboles. Los datos del NNP son inferiores a los que encuentran Prez Hernndez aL al. (1989) cerca de A. glutinnsa. aunque fuera del mbito radical, e indican un desarrollo menor de los microorganismos nitrificantes nitrosos en el rea de influencia de las races de los alisos. Los microorganismos que oxidan el nitrito hasta nitrato tambin aparecen con menor densidad en el rizoplano y en la rizosfera de los alisos, chopos y sauces, pero no ocurre as con los resultados del TSO. Estos valores reflejan que las races de los sauces y de los chopos con la misma intensidad y, en mayor medida, el sistema radical de los alisos, ejercen un efecto inhibidor importante sobre la densidad y la actividad de las comunidades de microorganismos de los grupos fisiolgicos citados. Sin embargo la influencia del aparato radical no modifica la actividad de la microf lora nitrificante ntrica, pues no hay diferencias significativas entre las muestra del rizoplano, de la rizosfera y del dosel. En las seis zonas analizadas los niveles de amonio se mantienen entre las 10 y 800 ppm que Verstraete (1981) y Jones y Hedlin (1970) sealan como concentraciones limitantes para los microorganismos nitrificantes nitrosos. Los resultados del anlisis de la covarianza constituyen un dato interesante pues muestran que la concentracin de amonio y los T50 de la comunidad nitrificante nitrosa covaran positivamente al 99%, pero La correlacin se debe a Las modificaciones que inducen las tres fuentes de variacin sobre ambas variables. De este hecho se deduce que los niveles de amonio encontrados tanto en las zonas no arboladas como en las zonas con alisos, chopos significativamente el desarrollo de nitrificantes nitrosos. y sauces no alteran los microorganismos

217 Dentro de los lmites de nitrgenoamonio antes indicados las concentraciones ms elevadas de amonio se encuentran en la aliseda cerca de las races, que son las zonas con mayor proporcin de carbono orgnico y niveles interiores de nitrgenonitrato. Keeney (1980) interpreta las dos formas de nitrgeno diferencias en el contenido de las mineral en las mismas zonas como una prueba de que la nitrificacin est disminuida, hecho que coincide con los resultados obtenidos del MP y del T50 de la microf lora nitrificante. El pH es otra variable fsico-qumica que afecta profundamente a este grupo fisiolgico de microorganismos. Las races desempean un efecto acidificador sobre la zona del suelo en que crecen y es ms intenso en la rizosfera de la aliseda de porte arbreo, como demuestran los resultados obtenidos y comentados anteriormente, pero en ningn caso la concentracin de protones determina un pH inferior a 5 que inhibe la nitrificacin auttrofa (Katyal et al., 1988). En las seis zonas los valores del pH coinciden con el intervalo que Katyal et al. (1988) indican adecuado para la nitrificacin, aunque superan el ptimo que Sahrawat (1982) seala. Del anlisis de la covarianza entre los valores de los T50 de la microf lora nitrificante nitrosa y del pH se desprende que las variaciones en la concentracin de protones no alteran el desarrollo de los microorganismos. Por tanto el pH no representa un factor limitante para el crecimiento de la microflora que oxida el amonio en ninguna de las zonas que se estudian y cualquier variacin que pudiera inducir se ve modificada por efecto de las tres fuentes de variacin. El hecho de que la densidad menor y los T50 ms elevados de los microorganismos nitrificantes aparezcan en las zonas con mayor riqueza de materia orgnica nitrogenada se puede

218 justificar por diferentes vas. Las races de los alisos y, en proporcin menor, de los sauces y de los chopos aportan compuestos orgnicos nitrogenados al medio edfico que favorecen el desarrollo de la comunidad descomponedora hetertrof a (Pastor aL al., 1984) y el nitrgeno-amonio en presencia de una fuente de carbono estimula la actividad de los microorganismos hetertrofos que inmovilizan el nitrgeno (Robertson, 1982), en clara competencia con la poblacin nitrficante que Jones y Richards (1977) describen como competidores poco eficaces por el nitrgeno inorgnico. Por esta razn, los datos ms elevados de la densidad e inferiores de los T50 de los microorganismos proteolticos y amonificantes y los NNP menores de la microflora nitrificante que se registran en proximidad al sistema radical de los alisos, sauces y chopos, se pueden interpretar como resultado de la competicin entre estas comunidades de microorganismos. La vegetacin tambin compite con los microorganismos por los nutrientes. Las races de los chopos y sauces, y en menor medida de los alisos, asimilan el nitrgenomineral en detrimento de la poblacin nitrificante (Hatch et al., 1990). Purchase (1974) indica que la competencia entre los microorganismos hetertrofos y los nitrificantes auttrofos no se limita al sustrato de la actividad sino que se puede extender a otros factores como el oxigeno y el espacio. En este sentido conviene resaltar que Pastor aL al. (1984) encuentran escasa actividad nitrificante en suelos con niveles de amonio elevados e indican que las races compiten con los microorganismos nitrificantes por otros nutrientes distintos al nitrgeno inorgnico, en especial por el fosfato disponible en el medio edfico. Los datos expuestos por estos autores coinciden con los resultados obtenidos y contribuiran a justificar la actividad menor de la microflora nitrificante nitrosa en el rizoplano y en la

219 rizosfera de los alisos, chopos y sauces donde, los microorganismos manifiestan un periodo de latencia que se explicara por la baja disponibilidad de nutrientes a causa de la competencia con las races. Por ltimo, debemos tener en cuenta el efecto directo de los exudados radicales sobre la poblacin nitrificante. Klein aL al. (1988) y G6k~eoglu (1988) indican que los cidos orgnicos de origen radical inhiben la nitrificacin y favorecen la amonificacin. Jordan aL al. (1979) inciden en el papel inhibidor de las races pues encuentran pocos microorganismos nitrificantes debido a la alta concentracin de taninos que producen las races. Los T50 elevados de la microf lora nitrificante ntrica en la rizosf era de los alisos se explicaran porque el nitrito, sustrato de los microorganismos, reacciona con los compuestos fenlicos liberados por el sistema radical y se forma nitrgeno orgnico (Azhar aL al.., 1986b) que se mantiene en el ecosistema, no se pierde por lixiviado ni por desnitrificacin y supone un mecanismo de inmovilizacin del nitrgeno (Montagnini y Buschbacher, 1989). Esta reaccin se facilita con el aumento de la materia orgnica y con el descenso del pH (Smith y Chalk, 1980), hecho que se observa en la rizosfera de los alisos. Por ello en la aliseda se favorece la conservacin del nitrgeno al impedir que se forme el nitrgenonitrato. Estas consideraciones junto con el nivel fretico deL ro que promueve el lavado intenso del suelo y disminuye el sustrato de la actividad nitrificante ntrica justifican el crecimiento inferior de la comunidad de microorganismos nitrificantes en el rizoplano y en la rizosfera de los alisos y tambin explican que no se aprecien variaciones significativas entre los datos de los rboles y de los matorrales de aliso.

220 La liberacin de productos orgnicos que inhiben la nitrificacin no se restringe al aparato radical de las plantas sino que tambin se observa en el lecho de hojarasca. Pohiman y l4cColl (1988) identifican varios cidos orgnicos en extractos de hojarasca que suprimen la actividad nitrificante y Frazer aL al. (1990) explican por esta va el descenso de la nitrificacin en un bosque de conferas de California. Un mecanismo semejante puede justificar las variaciones de las comunidades de microorganismos nitrificantes en el dosel de los chopos, de los sauces y de los alisos. Por ello bajo estos ltimos se debe registrar el aporte mayor de productos que inhiban la nitrificacin. En las zonas control no hay liberacin de exudados procedentes de las races de los rboles, disminuye el lecho de hojarasca y la densidad de microorganismos hetertrofos que mineralizan los compuestos orgnicos nitrogenados es inferior, condiciones que favorecen el desarrollo de las comunidades de microorganismos nitrificantes frente al ambiente de las zonas pobladas con los alisos, chopos y sauces tal y como manifiestan los resultados del NNP y del T50. Sin embargo estos datos no se corresponden con los niveles inferiores de nitrgenonitrato de las dos zonas sin rboles, lo que indica que el in nitrato se elimina por una desnitrificacin activa o por lixiviado. La microflora nitrificante manifiesta el efecto de Las condiciones climticas como indican los valores mximo y mnimo de densidad y actividad de los microorganismos en las dos estaciones, verano e invierno, de condiciones extremas. La humedad provoca el descenso de la presin parcial de oxgeno y por ello afecta a los microorganismos que transforman el amonio en nitrato que son aerobios y se localizan sobre la superficie de las partculas del suelo.

221 Por tanto la humedad elevada, caracterstica de la estacin invernal, inhibe la actividad nitrificante (Tate, 1985 y Alexander, 1980). La humedad y los T50 de la microf lora ntrificante no covaran de forma significativa cuando se elimina la variacin que inducen los rboles y el cambio de estaciones. Por ello este factor por s solo no justifica las fluctuaciones de los T50 de los microorganismos nitrificantes. Los datos del verano se explican por el menor grado de humedad y por la temperatura ms alta, pues la microf lora nitrificante alcanza su actividad mxima entre 20 y 30W (Niemiera y Wright, 1987) lo que tambin justifica los resultados elevados de la primavera y del otoo. El descenso de la temperatura durante el invierno promueve la disminucin de la actividad de los microorganismos nitrificantes como tambin registran Niemiera y Wright (1987).

CONCLUSIONES

223

1. AJsins glutinosa (L.) Gaertn. modifica las condiciones fsicoqumicas del suelo sobre el que se desarrolla. Esto se manifiesta por: El descenso alisos. significativo del pH en el suelo bajo los

El incremento significativo de las concentraciones de carbono orgnico, de nitrgeno total y de nitrgenoamonio.

2.A. glutinosa interfiere en la densidad y actividad de los microorganismos del ciclo del nitrgeno que mineralizan los compuestos orgnicos nitrogenados y que, posteriormente. transforman el nitrgenoamonio en nitrgenonitrato. Favorece el crecimiento de la microf lora total que presenta densidades significativamente mayores en la aliseda. Induce, con una significacin del 99%~ densidad y actividad biolgica mayores en las comunidades proteoltica y amonificante e inhibe tambin significativamente el desarrollo de los microorganismos nitrificantes
-

3. Las races de A. glutinosa manifiestan un efecto rizosfera importante pues promueven concentraciones de protones, carbono orgnico, nitrgeno total y nitrgeno amonio significativamente mayores que los sistemas radicales de los sauces y chopos que crecen en la misma zona.

4. En el rizoplano y en la rizosfera de los alisos se establecen las condiciones ptimas para el crecimiento de la microflora total, de los microorganismos proteolticos y

224 amonificantes, que presentan densidades ms elevadas y actividades biolgicas mayores, en ambos casos por causas ajenas al azar, que las comunidades de los mismos grupos funcionales que se desarrollan prximas al sistema radical de los chopos y sauces.

5. El rizoplano y la rizosfera caractersticas diferentes que se significativamente mayores de proteolticos y amonificantes y en

de los alisos presentan reflejan en densidades los microorganismos una actividad biolgica

ms elevada (p<O.Ol) de la comunidad amonificante en el rizoplano. Por el contrario los microorganismos nitrificantes, nitrosos y ntricos, crecen por igual en el rizoplano y en la rizosfera de los alisos, por lo que deben encontrar condiciones similares para su desarrollo en ambas zonas.

6. Las comunidades proteolitica y amonificante son las ms sensibles al efecto rizosfera de los alisos, pues aparecen como los grupos fisiolgicos de microorganismos con factores de carga ms elevados que caracterizan la ordenacin de las muestras en el anlisis de componentes principales.

7. Chopos y sauces presentan caractersticas fisicoqumicas. densidades y actividades biolgicas de los grupos de microorganismos considerados semejantes alrededor de su sistema radical. Por ello el efecto de ambas plantas no fijadoras de nitrgeno debe ser similar.

225 8. Las densidades significativamente superiores de las microfloras proteolitica y amonificante en el rizoplano respecto a la rizosfera de los chopos y sauces indican que los microorganismos mineralizadores encnentran en la superficie radicular condiciones ms idneas. No sucede as con la microflora nitrificante que presenta densidades y actividades biolgicas parecidas en el rizoplano y rizosfera de chopos y sauces.

9. La diferencia de edad de los alisos incide en: Un aporte significativamente superior de materia orgnica nitrogenada al medio edfico bajo los alisos de porte arbreo. Un aumento significativo de la densidad de microorganismos proteolticos y amonificantes entre alisos ms desarrollados. los los

10. Las variaciones estacionales modifican las variables fsicoqumicas: las concentraciones de nitrgeno total y de nitrgenoamonio son ms elevadas en otoo, mientras que en invierno se registra la concentracin mayor de carbono orgnico y el pH ms cido.

11. Las

variaciones estacionales

tambin inciden en

la

comunidad microbiana mineralizadora de los compuestos orgnicos nitrogenados, aunque el efecto de los rboles y de su sistema radical, principalmente de los alisos, enmascara las diferencias de origen estacional. A pesar de ello, la temperatura ms elevada y la humedad uenor del verano hacen

226 de esta poca la estacin idnea para la microl lora nitrificante. La microf lora total y la comunidad amonificante se desarrollan mejor en el otoo, cuando las condiciones ambientales son menos extremas.

12.

El

efecto

de

los rboles

(chopos,

sauces

en

particular alisos), de su aparato radical y de las variaciones estacionales sobre los grupos de microorganismos que transforman la materia orgnica nitrogenada en nitrgeno amonio y posteriormente ste en nitrgenonitrato, se realiza en parte a travs de las diferentes condiciones fisicoqumicas que promueven, pero, como reflejan los anlisis de la covarianza las tres fuentes de variacin, tambin ejercen un efecto directo sobre las comunidades de microorganismos.

13. Las races de los chopos, sauces, pero sobre todo de los alisos favorecen la movilizacin de los compuestos orgnicos nitrogenados y, por tanto, su aprovechamiento y promueven la conservacin de las formas nitrogenadas no orgnicas en beneficio de la productividad del ecosistema.

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APENDICE

261

7.1. Medios de cultivo y reactivos

7.1.1. Se (Madrid)

Extracto de tierra
prepar de con tierra que de jardn entre de Monteprincipe 10 y 15 cm de pH 7.1 se recogi

profundidad. La tierra se mezcl con agua destilada en proporcin 1:1 (p/v) y cada litro se enriqueci con 1 ml de la solucin de oligoelementos indicada en 7.3. La solucin resultante se introdujo en autoclave donde permaneci una hora a 130C. Luego se filtr por papel el liquido caliente con el objeto de eliminar las particulas en suspensin ms voluminosas. Posteriormente se centrifug el filtrado a 43000 rpm durante 15 mm en una centrfuga SORVAL 55-34 Superspeed Refrigerated con un rotor SORVAL 55-34. El sobrenadante se esteriliz en autoclave durante 30 mm a 1150C. 7.1.2. Solucin salina de IrJinogradsky K 2HPO.. MgSO4 . 7H20 NaC MnSOA.H=O Fe4SO4)3 Agua destilada
Se en 10% aadi 1 ml de la solucin 7.3 y se esteriliz el pH entre (p/v). en autoclave 7.0 y 7.5 con

5.0 2.5

g g g g

2.5
0.05

0.05 g 1000.0 ml indicada a 110W. de OHNa al durante 20 mm

de oligoelementos una solucin

Se ajust

262

7.1.3. Solucin de oligoelementos Se emple la frmula de Gutirrez Maero y Castro (1983): Na2(MoO4).2W~O 0.05 K2B..O,.10H20 0.05 FeCl3.6H20 0.05 Cd(NOa)2.4H20 0.04 CoSO...7H20 0.05 CuSO4.5H20 0.05 ZnSO4.7H20 0.05 Agua destilada 7.1.4. Medio para microf lora total El medio de cultivo es el extracto el apartado 7.1. Se pusieron 5 ml del

Bermdez

de

g g g g g g g

1000.00 g

de tierra descrito en

medio en tubos de ensayo de 22 mm de dimetro que se taparon con algodn y se esterilizaron en 0C. autoclave durante 20 mm a 110
Se consideraron tubos positivos velo. proteoliticos aquellos que tras la incubacin 7.1.5. presentaban

Medio para microorganismos

Se

emple el medio
salina de carne

Difco para

proteolticos modificado
5 33 5 120 ml g g g ml mli. 2 ml del medio algodn y se

como sigue: Solucin Extracto Peptona Gelatina Solucin Se ajust en tubos de esterilizaron de oligoelementos el pH a 7.2 y se distribuyeron lOxQO mm en autoclave que se taparon 20 mm con durante Agua destilada

1 1000

a 1100C.

263

Se consideraron positivos aquellos tubos en los que tras la incubacin el medio permaneca liquido despus de refrigerados a 2 4W durante una hora. 7.1.6. Medio para microorganismos amonificantes Solucin salina 50 ml Asparragina 0.2 g Solucin de oligoelementos 1 ml Agua destilada 950 ml Se pusieron 10 ml del medio en tubos de 16x160 mm que se taparon con algodn y se esterilizaron en autoclave durante 20 mm a 1100C. Despus de la incubacin se retir con una pipeta estril 1 ml de cada tubo que se pas a otro tubo al que se aadieron dos gotas del reactivo de Nessler (ver 7.1.9). Se consideraron positivos los tubos en que el color amarillo
vr a anaranjado.

7.1.7 Medio para microorganismos nitrificantes nitrosos Solucin salina 50 nl (NH 4)2S04 0.5 g CaCOa 1 g Agua destilada 950 ml Se pusieron 5 ml del medio en tubos de 16x160 mm que se taparon con algodn y se esterilizaron en autoclave durante
20 mm a 110W.

Despus de la incubacin se retiraron con una pipeta estril 0.2 ml de cada tubo que se pasaron a otro tubo donde se aadieron 10 gotas de cido sulfrico concentrado y 10
gotas de difenilamina positivos sulfrica <ver 7.1.10) coloracin y azul. se consideraron los que presentaron

264

7.1.8. Medio para microorganismos nitrificantes ntricos Solucin salina 50 ml NaNOz 1 g CaCO3 1 g Agua destilada 950 ml Se pusieron 5 ml del medio en tubos de 16x160 mm que se taparon con algodn y se esterilizaron en autoclave durante 0C. 20 mm a 110 Se opera igual que en el caso de los microorganismos nitrificantes nitrosos pero antes de aadir el cido sulfrico y la difenilamina sulfrica se incorporan 50 mg de
urea a cada tubo para eliminar los nitritos.

7.l.~. Reactivo de Nessler

Solucin A: 50 36.5 1000 150 de usarlo se mezclan 1000 g g ml g ml iguales de

11ghz
Kl Agua destilada Solucin OHK Agua destilada En el momento las soluciones A y B. de B:

volmenes

7.1.10. NH(C

Reactivo 0H5 )
2

la difenilasina

sulfrica

H2SO.., Agua destilada.

lo 1000 200

g ml ml