Rpublique Tunisienne

Ministre de l'Enseignement Suprieur, de la Recherche Scientifique

Universit de Sfax
Facult des Sciences de Sfax
Anne universitaire : [2011/2012]

Projet de mmoire de
MASTER DE RECHERCHE
EN CHIMIE ORGANIQUE
DOSAGE DES METABOLITES DES SOLVANTS ORGANIQUES
ISSUENT DE LINDUSTRIE PETROLIERE

Prsent et soutenu le [.]

Par
Awatef SELMI

Mmoire dirig par :

[Prnom NOM]
[Titre et spcialit]

[Prnom NOM2] si existe

[Titre et spcialit]

Jury :
Prsident : .
Membre
Membre.

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organique

_____________Master de recherche en chimie

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organique

_____________Master de recherche en chimie

REMERCIEMENTS

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organique

_____________Master de recherche en chimie

SOMMAIRE (automatique)
Listes des abrviations ... i
Listes des figures et tableaux..... ii
Introduction .............................................................................................................................2
1.1 .........................................................................10
1.2 .................................................................................10
1.2.1 ......................................................10
2 Commentaires et Discussion...............................................................................................11
2.1 .....................................................11
2.2 .....................................................11
3 Conclusion (Attendu et retombs de ltude)....................................................................12
Bibliographie..........................................................................................................................13
13
4 Annexes (Si Existe)...............................................................................................................15
Annexe 1: ...............................................................................................................................16
Annexe 2 : ..............................................................................................................................17

LISTE DES ABRVIATIONS

Version 1

26/12/2011
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LISTE DES FIGURES

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Figure 1

: Locaux de production du Laboratoire Pfizer Tunisie

LISTE DES TABLEAUX

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Tableau I. Principales techniques dvaluation du risque professionnel ..

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Introduction
Les composs organiques volatils sont mis lors de la combustion de carburants (notamment
dans les gaz dchappement), ou par vaporation lors de leur fabrication, de leur stockage ou de leur
utilisation (peintures, encres, colles, dtachants, cosmtiques, solvants). Des COV sont galement
mis par certains vgtaux (agriculture et milieux naturels). Les effets des COV, sur la sant, sont
trs variables selon la nature des polluants envisags. Cela peut aller dun certain gne olfactif des
effets mutagnes et cancrignes (benzne), en passant par des irritations diverses et une diminution
de la capacit respiratoire. [1]
Lorganisme humain est en relation avec son milieu par un ensemble dchanges qui
contribuent maintenir un quilibre dynamique. Par exemple, la respiration permet dabsorber
loxygne de lair et dy rejeter du dioxyde de carbone. Quoi que nous fassions, le milieu nous
influence et nous linfluenons. Ce principe daction-raction signifie que toute action a des
consquences. Le milieu ne constitue cependant pas un tout homogne, mais plutt un ensemble
compos de nombreux lments, comprenant les produits chimiques qui peuvent affecter la sant
des organismes vivants. Un produit qui pntre dans lorganisme peut avoir des effets bnfiques
(mdicaments) ou nfastes (toxiques). Pendant ou aprs son transport dans le sang, le toxique peut
entrer en contact avec diffrentes cellules de lorganisme qui ont la capacit de le transformer.
Lensemble des ractions de la transformation mtabolique est appele biotransformation,
tandis que les produits de la biotransformation sont appels mtabolites. Il peut en rsulter un
produit moins toxique (dtoxification) ou plus toxique (activation), laccumulation ou llimination
du produit et de ses mtabolites. La transformation des toxiques est surtout effectue par le foie,
vritable laboratoire chimique de lorganisme, qui contient une multitude denzymes (substance
protique qui catalyse une raction chimique dans lorganisme). Il enrichit le sang dlments
nutritifs et le purifie en concentrant et en liminant beaucoup de substances. Dautres organes tels
que les poumons et les reins peuvent aussi transformer des toxiques. [2]
Lvaluation dune exposition des travailleurs aux substances chimiques prsentes au poste
de travail est gnralement ralise par le mesurage atmosphrique permet de dterminer la
concentration en polluants dans lair ambiant. Cette mesure, pertinente lorsque la voie de
pntration du toxique se fait essentiellement par inhalation, est cependant insuffisante lors dune
exposition incluant les voies de pntration percutane ou digestive. La surveillance biologique est
alors utilise comme moyen complmentaire dinvestigation, permettant une meilleure valuation
de limprgnation par la mesure de marqueurs. Ces marqueurs peuvent tre la substance elle-mme
ou son (ses) mtabolite(s). [3]
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La surveillance biologique de lexposition une mthode d'apprciation du risque pour la sant

des sujets exposs une substance chimique base sur une estimation de l'exposition interne de
lorganisme (dose interne). Cette valuation est normalement effectue sur une base individuelle. La
dose interne est gnralement estime par la mesure de la substance ou de ses mtabolites dans
divers milieux biologiques ou par la mesure d'effets biologiques non toxiques ("non adverse
effects") Corrls avec la dose interne. Dans certains cas encore limits, on peut aussi apprcier
directement la quantit de toxique fixe aux sites d'action critiques avant la survenue de
rpercussions pathologiques ("adverse effects"). La surveillance biologique de l'exposition est
gnralement rserve aux substances qui pntrent dans la circulation et exercent des effets
systmatiques. L'existence possible d'un risque d'exposition excessive est apprcie par rfrence
une concentration biologique permissible. Au sens strict, Objectifs de la surveillance biologique de
l'exposition Vise dterminer la dose interne d'une substance chimique. Selon la substance en cause
et le paramtre biologique analyse, le terme dose interne couvre diffrents concepts. Il peut d'abord
signifier la quantit de substance rcemment absorbe. Ainsi, le para- mtre mesur peut reflter la
quantit de substance absorbe trs peu de temps avant l'chantillonnage (ce qui est habituellement
le cas pour la concentration d'un solvant dans l'air alvolaire ou dans le sang recueillis pendant la
priode de travail) ou pendant le jour prcdant l'chantillonnage (ce que peut reflter la
concentration d'un solvant dans l'air alvolaire ou dans le sang prlevs 16 heures aprs la fin de
l'exposition) ou pendant les derniers mois s'il s'agit de substances avec une demi-vie biologique
suffisamment longue dans le compartiment chantillonn (tel est le cas pour la concentration de
certains mtaux dans le sang). Dans d'autres circonstances, la dose interne peut signifier la quantit
totale de substance stocke dans un ou plusieurs compartiments ou dans tout l'organisme. Ceci
concerne principalement les toxiques trs cumulatifs. [4]
La surveillance biologique de lexposition est base sur les indices biologiques de
lexposition (IBE). Ces valeurs de rfrence auxquelles lintervenant en sant au travail peut se
rfrer afin dvaluer le risque la sant dcoulant dune exposition professionnelle des
contaminants chimiques. Ces valeurs correspondent pour la plupart aux concentrations biologiques
attendues, pour un paramtre donn, chez des travailleurs sains, exposs des niveaux de
contaminants quivalents aux normes (8 heures par jour, 5 jours par semaine) et ce, en ne tenant
compte que de labsorption pulmonaire. Dans quelques rares situations, les IBE proposs
correspondent des niveaux dexposition infrieurs aux normes dans le but de prvenir certains
effets sur la sant. Les IBE ne sont pas destins mesurer des effets nocifs ou diagnostiquer une
pathologie professionnelle : ils correspondent une mesure "biologique" de lexposition. [5]
La surveillance biologique de lexposition est donc une dmarche complmentaire la
surveillance environnementale et est utilise dans un contexte de prvention.
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Notre travail vise atteindre les objectifs suivants :

- valuation bio-toxicologique du degr d'exposition des travailleurs aux solvants.
- valuation des effets des solvants sur la sant des travailleurs.
- valuation les diffrentes mthodes chromatographiques du dosage des mtabolites des solvants
organiques volatiles.

2. Matriel et mthodes
2.1 Prlvements
Les prlvements doivent tre effectus dans des conditions rigoureuses d'hygine. Les
dosages sanguins sont effectus sur sang veineux aprs nettoyage de la peau ventuellement
contamine. En ce qui concerne les prlvements urinaires, ce sont les variations de volume des
urines qui affectent le plus les rsultats. Les IBE dont l'excrtion dpend de la diurse sont exprims
par rapport la cratinine. Le moment du prlvement est important et dpend essentiellement de la
demi-vie du paramtre analys. En effet, la distribution et l'limination sont des phnomnes
cintiques. Selon la demi-vie du contaminant tudi, on distingue : les indicateurs pour lesquels le
prlvement est effectu avant le poste (soit aprs 16 h sans exposition), pendant le poste ou en fin
de poste (soit pendant les 2 dernires heures de l'exposition professionnelle et la fin de la semaine
de travail (aprs 5 jours de travail conscutifs).
Les indicateurs pour lesquels le moment du prlvement n'a pas d'importance concernent les
substances dont les demi-vies sont trs longues ; les substances s'accumulent dans l'organisme au
cours des annes. [6]
2 .2 Validation des mthodes
Toutes les mthodes utilises par le laboratoire doivent tre valides pour le domaine
Dapplications prvues (nature d'chantillon) en fonction des lments suivants :
-Spcificit (slectivit)
-La limite de dtection (LD)
-Prcision (sous la rptabilit et / ou conditions de reproductibilit)
-La linarit et la plage de travail
Spcificit (slectivit)
Il s'agit d'une mesure de la capacit de la mthode pour identifier / quantifier les analytes dans la
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prsence d'autres substances, soit endogne ou exogne, dans une matrice de l'chantillon
dans les conditions prvues de la mthode.
La spcificit est dtermine en ajoutant des matriaux qui pourraient tre rencontrs dans les
chantillons.
Par exemple, un test de spcificit d'une mthode immunologique pour les chantillons biologiques
peut utiliser ventuellement des ractions croises des substances, un critre de spcificit d'un test
de la goutte pourrait incluent potentiellement des substances qui pourraient interfrer, inhiber ou
masquer la couleur de la raction. La spcificit est dpendante de la concentration et doit tre
dtermin l'extrmit basse de la gamme d'talonnage. La validation et la vrification de la
mthode analytique doivent rpondre l'objectif de la mthode et s'assurer que les effets des
impurets, des ractions croises des substances, qui peuvent tre prsents dans la matrice sont
connues.
La limite de dtection (LD
Elle est galement dfinie comme la plus faible concentration peut tre distingue du bruit de fond
avec un certain degr de confiance.
Il existe plusieurs mthodes d'estimation de la LD, qui tous dpendent de l'analyse d'chantillons en
blanc et l'examen du rapport signal sur bruit. La LD n'est pas un robuste ou un paramtre robuste et
peut tre affecte par des changements mineurs dans le systme analytique
(Par exemple la temprature, la puret des ractifs, des effets de matrice, les conditions
instrumentales). Il est donc important que ce paramtre est toujours vrifie par des laboratoires
d'adopter pralablement valides.
Prcision (sous la rptabilit et / ou conditions de reproductibilit)
La prcision est une mesure de la proximit des rsultats analytiques obtenus partir d'un
srie de mesures rptes de la mme mesure dans les conditions de la mthode. Il reflte les erreurs
alatoires qui se produisent dans une mthode.
Deux ensembles communment accept des conditions dans lesquelles la prcision est mesure sont
des conditions rptables et reproductibles.
Les conditions de rptabilit se produire lorsque les mmes analyses des chantillons de l'analyte
sur le mme jour avec le mme instrument (par exemple le gaz chromatographe) ou des matriaux
(par exemple spot test ractifs) dans le mme laboratoire. Toute variation de ces conditions (par
exemple diffrents analytes, des jours diffrents, diffrents instruments, diffrents laboratoires)
reprsentent les conditions de la reproductibilit. La prcision est gnralement mesure par le
coefficient de variation ou par l'cart type relatif des rsultats analytiques obtenus partir des
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normes de contrle qualit prpars de manire indpendante. La prcision est dpendante de la

concentration et devrait tre mesurs diffrentes concentrations dans la plage de travail. Une
prcision acceptable des concentrations infrieures 20%. Ces critres d'acceptation peuvent tre
largis, dans certains cas, par exemple l'analyse des chantillons d'autopsie, o les effets de matrice
peuvent tre importants.
La linarit et la plage de travail
Traditionnellement, les mthodes sont dcrites comme linaire quand il ya une relation directement
proportionnelle entre la rponse de la mthode et la concentration de l'analyte dans la matrice de
toute la gamme. La plage de travail est prdfinie par le but de la mthode et peut reflter seulement
une partie de la gamme linaire. Les critres d'acceptation impliquent gnralement une Qualit de
l'ajustement essai. Un coefficient de corrlation lev (r) de 0,99 est souvent utilis comme critre
de linarit.
Cependant, ce n'est pas suffisant pour prouver qu'une relation linaire existe, et une mthode
avec un coefficient de dtermination de moins de 0,99 peut-tre encore adapt son objet.
Ces paramtres ne sont pas applicables aux mthodes qualitatives moins qu'il y ait un seuil
de concentration pour la prsentation des rsultats. [7]
2.3 Instrumentation et conditions danalyse
La dtermination des solvants volatils et leurs mtabolites dans les matriaux biologiques tels
que lair expir, le sang ou les urines permet destimer le degr dexposition de ces produits
chimiques. Les mthodes chromatographiques sont maintenant universellement employes cette
fin et de nombreuses mthodes danalyse sont disponibles pour la dtermination de la plupart des
solvants couramment utiliss volatils et leurs mtabolites dans lurine. [8]
La chromatographie en phase gazeuse (CPG) et la chromatographie liquide de haute
performance (HPLC) sont les deux mthodes sparatives les plus employes dans les laboratoires
de toxicologie. Selon la nature des mtabolites des solvants le dosage se fait soit par CPG-FID :
La sparation chromatographique est ralise sur un chromatographe de type Shimadzu GC-9A.
Linjection des chantillons est ralise en mode sans vision (splitless) une temprature de 2OO
C. La colonne est une HP-5MS (60 m * 0,75 mm, 1 m). Soit par chromatographie en phase
liquide haute performance (HPLC) la sparation chromatographique est ralise sur un
chromatographe de type HP AGILENT 1100 le dosage des mtabolites avec dtection UV. La
colonne de type : CLC ODS (M)-C18.

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Rsultats (Attendu)

1.1 .
1.2 .
1.2.1 ..

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2 Commentaires et Discussion
2.1

2.2 ..

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3 Conclusion (Attendu et retombs de ltude)

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Bibliographie
[1] Site de ATMO NPDC : www.atmonpdc.fr
[2] Gilles Lapointe, notions de toxicologie, Bibliothque nationale du Qubec, 2004, p.7, 1819.
[En ligne] www.reptox.csst.qc.ca
[3] INRS, Documents pour le Mdecin du Travail N 93 1er trimestre 2003, p 35.
[4] Lauwerys R, Bernard A, Biological monitoring of exposure to industrial toxic substances.
Present-day situation and prospects for development, Scand J Work Environ Health 1985;
11(3):155-164, In Pub Med: www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4035318
[5] Ginette Truchon, Guide de surveillance biologique Prlvement et interprtation des
rsultats, 6e dition, p. 22.
[6] Betty DEHON, Catherine NISSE, Michel LHERMITTE, Jean-Marie HAGUENOER,
Mtaux et Mdecine du Travail, Mtals and occupational mdicine, Annales de Toxicologie
Analytique, vol. XHI, n 3, 2001
http://www.ata-journal.org or http://dx.doi.org/10.1051/ata/2001016
[7] Laboratory and Scientific Section United Nations Office on Drugs and Crime
Vienna, Guidance for the Validation of Analytical Methodology and Calibration of
Equipment used for Testing of Illicit Drugs in Seized Materials and Biological Specimens,
UNITED NATIONS New York, 2009, p 10-11.

[8] A.Astier, Chromatographic determination of volatile solvents and their metabolites in

urine for monitoring occupational exposure, journal of chromatography A .Vol. 643, No. 1-2
(1993), p. 389-398.

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4 Annexes (Si Existe)

Annexe 1 : Les mthodes gnrales pour lanalyse du risque
Annexe 2 : Classification des phrases de risques en fonction des organes cibles

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Annexe 1:

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organique

Annexe 2 :

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(maximum 5) .. , , , , :

Rsum

Mots cls : , , , , .. (5 maximum)

Abstract:

Keywords: , , , , .. (5 maximum)