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TITULO: SIMULACIN TEXT DE PATERNIDAD NIVEL: ESO IDIOMA: CASTELLANO FECHA:.

OBJETIVOS - Conocer y simular algunas tcnicas de ingeniera gentica. - Conocer aplicaciones actuales de la ingeniera gentica. MATERIALES - Tiras de papel con la secuencia de bases de una cadena de ADN de cada uno de los individuos a estudio. - Unas tijeras que representarn las enzimas de restriccin. - Un rotulador fosforescente que representa el marcaje fluorescente. - Un folio/cartulina blanca que simular el gel de agarosa. - Un papel transparente y rotulador. FUNDAMENTO TERICO Una pareja tiene un hijo. El marido, Abel, acusa a su mujer Eva, de infidelidad, alegando que el beb que ha tenido no es hijo suyo, sino de otra persona, concretamente su vecino Juan. Para resolver la situacin, todas las partes implicadas en el conflicto (Abel, Eva, Juan y el beb) deciden someterse a un test gentico que determine quin es el padre biolgico del beb, Abel o Juan. Esta prueba se basa en que sabemos que cada individuo tiene una secuencia de bases de ADN nica y diferente a la de cualquier otro, como resultado de la combinacin de los genes de sus padres: la mitad procede de la madre y la otra mitad del padre. Por tanto, el beb que ha nacido tendr mitad de los genes maternos y la otra mitad paternos. Las pruebas reales en un laboratorio puedes verlas en las siguientes animaciones: http://www.ehu.es/biomoleculas/isotopos/southernblot.htm http://www.ac-creteil.fr/biotechnologies/doc_southernblotting.htm

Para conocer ms sobre las tcnicas del ADN en la Medicina legal puedes ver las siguientes pginas web donde adems podrs realizar casos prcticos: http://www.biologia.arizona.edu/human/problem_sets/DNA_forensics_1/01t.html http://www.biologia.arizona.edu/human/problem_sets/DNA_forensics_1/02Q.html CONCLUSIONES 1. Quin es el padre biolgico del beb? Por qu lo has sabido?. 2. Qu opinin tienes de las pruebas de paternidad en nuestra sociedad? 3. Por qu se utiliza sondas fluorescentes en el anlisis de ADN? 4. Qu simula el papel transparente que hemos utilizado? 5. Qu simula las tijeras que hemos utilizado?.

Juan Carlos Barber Luna

Dpto. Biologa y Geologa

METODOLOGIA REAL
Obtencin de una muestra de sangre de cada individuo implicado: bebe, madre, padre y vecino. Etiquetado de las mismas. Aislamiento del ADN y separacin de sus cadenas. Para ello se tratan las muestras en una centrifugadora y posteriormente se someten a altas temperaturas obteniendo cadenas simples de ADN.

PRCTICA

Recorta la tira de ADN de cada individuo.

Fragmentacin de la cadena de ADN. Se someta el ADN a enzimas de restriccin que reconocer secuencias GGCC obteniendo diversos trozos de ADN con terminaciones de cadenas GG y CC Separacin de los fragmentos por electroforesis en gel de agarosa. Consiste en introducir las muestras en una placa de gel de agarosa (en nuestra prctica es la cartulina blanca) y aplicar una corriente elctrica. De esta manera los fragmentos de ADN descienden por la placa de manera que los ms pequeos avanzan ms y los ms grandes menos. Identificacin de los fragmentos de ADN mediante sondas fluorescentes, ya que los fragmentos de ADN de la placa no pueden verse. Para ello se utilizan sondas que llevan la secuencia GTA que se unirn a los fragmentos de ADN que contengan la secuencia CAT. Revelado de sondas: las sondas fluorescentes brillan cuando la placa es sometida luz ultravioleta, obteniendo as un patrn de rayas de forma que cada raya corresponde al lugar exacto donde existe una secuencia CAT del ADN. Comparacin de patrones de ADN de todas las muestras y obtencin de conclusiones. La mitad de patrones del bebe debe de coincidir con los de la madre y la otra mitad con los del padre biolgico.

Ahora cortaremos con las tijeras cada secuencia de ADN siempre que nos encontremos la secuencia GGCC. De esta manera obtendremos varios fragmentos de diferentes tamaos de cada ADN terminados con al secuencias GG y CCEl folio/cartulina simular el gel de agarosa. As pegaremos cada fragmento en la misma en funcin del tamao (n de bases), plegndolo como un acorden. De esta manera obtendremos 4 hileras paralelas del movimiento de los fragmentos de ADN, 1 de cada individuo problema. (puedes tomar como nuestro patrn de simulacin del gel de agarosa el dibujo adjunto.

Nuestra sonda fluorescente son los cuadraditos de papel con la secuencia GTA. Estas sondas se unirn a los fragmentos de ADN que contengan la secuencia CAT. Por tanto cada vez que en un fragmento de ADN aparezca esta secuencia se le unir la sonda radiactiva. De esta manera pegaremos estas sondas junto a todas y cada una de las secuencias CTA que aparezcan en el ADN. Pintaremos con rotulador fluorescente la sonda y la secuencia de ADN complementaria. A continuacin cogeremos nuestra hoja transparente, la colocaremos encima y pintaremos en forma de bandas donde exista una sonda fluorescente. Compara y deduce resultados.

Juan Carlos Barber Luna

Dpto. Biologa y Geologa

CADENAS SIMPLES DE ADN

BEBE CAACACATCAGTTAGGCCGAGGCCCATGCCAGACGGCAAGGCCCGCAGGCCATAGGAGACGGCCAAATAGGG

JUAN CCTAGACGGCCAGGCACAAGCCAGGCCACATAGTTAGACCGAGGCCGAATCAGGCCTTATTGCAGGCCATGGG vecino ABEL CCGGTACATTACCAGGCCAAGGATACGGCAAGCAGGCCTTCATGGCCTGGCCATAGCACCGGGCCAATGACGG marido EVA CCGAGGCCAGGGATACATGTATAGGCCAATTGGCCGGCATGGGCCGATACAGCCGATGGCCATAGTAGGGGG madre

SONDAS FLUORESCENTES
GTA GTA GTA GTA GTA GTA

GTA

GTA

GTA

GTA

GTA

GTA

Juan Carlos Barber Luna

Dpto. Biologa y Geologa

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BEBE

EVA madre

Juan Carlos Barber Luna

POLO NEGATIVO

POLO POSITIO

ABEL marido

JUAN vecino

Dpto. Biologa y Geologa