BACILOSCOPIA

La tuberculosis es una enfermedad infectocontagiosa producida por agentes del grupo Mycobacterium tuberculosis complex, especialmente por el Mycobacterium tuberculosis o bacilo de Koch (BK). Es la infeccin crnica ms importante del mundo en cuanto a morbilidad y mortalidad. La localizacin ms frecuente es en el aparato respiratorio, seguida a gran distancia por la afectacin de cualquier otro lugar. Anatomopatolgicamente se caracteriza por la formacin de granulomas.

M. tuberculosis es un patgeno intracelular capaz de producir infecciones de por vida. No se conoce an la compleja existencia intracelular de esta bacteria, pero se est aclarando con lentitud. En el perodo de exposicin, M. tuberculosis ingresa en las vas respiratorias y las diminutas partculas infecciosas alcanzan los alvolos, y son digeridas por los macrfagos alveolares. A diferencia de la mayor parte de las bacterias fagocitadas, M. tuberculosis impide la fusin del fagosoma con los lisosomas (al inhibir la molcula de unin especfica, el antgeno endosomal especfico 1 [EEA1]). No obstante, el fagosoma es capaz de fusionarse a otras vesculas intracelulares para facilitar el acceso del patgeno a nutrientes y su proceso de replicacin intravacuolar. Las bacterias fagocitadas tambin pueden eludir la destruccin mediada por los macrfagos con la formacin de intermediarios reactivos del nitrgeno creados entre el xido ntrico y los aniones superxido al catabolizar catalticamente los oxidantes generados. Fisiologa y estructura: Bacilo aerobio, grampositivo dbil y fuertemente acidorresistente Pared celular rica en lpidos, lo que hace al microorganismo resistente a desinfectantes, detergentes, antibiticos antibacterianos frecuentes y tinciones tradicionales Virulencia:

Capaz de crecimiento intracelular en los macrfagos alveolares Inactivados ta enfermedad depende fundamentalmente de la respuesta del anfitrin frente a la infeccin Epidemiologa: Universal; un tercio de la poblacin mundial est infectada por este microorganismo Hay 8,8 millones de casos cada ao y 2 millones de muertes la enfermedad es ms frecuente en el sudeste asitico, frica subsahariana y el este de Europa Hubo alrededor de 15.000 nuevos casos en EE.UU. en 2003 la poblacin con mayor riesgo de padecer la enfermedad son Los pacientes inmunodeprimidos (fundamentalmente los infectados por VIH), los alcohlicos y los adictos a drogas, los Vagabundos y aquellos que estn expuestos a otros individuos infectados El hombre es el nico reservorio natural la transmisin de una persona a otra ocurre a travs de aerosoles infectados Tratamiento, prevencin y control: Se necesitan pautas con mltiples frmacos y cursos de tratamiento prolongados para prevenir la aparicin de cepas resistentes a frmacos Isoniacida (INH), etambutol, piracinamida y rifampicina durante 2 meses seguidos de 4 a 6 meses de INH y rifampicina u otras combinaciones alternativas de antimicrobianos ta profilaxis de la exposicin a la tuberculosis puede incluir INH durante 9 meses, rifampicina durante 4 meses, o rifampicina y piracinamida durante 2 meses, ta piracinamida y el etambutol o el levofloxacino se utilizan durante 12 meses despus de estar expuesto a M. tuberculosis multirresistente Se hace profilaxis con BCG en los pases endmicos El control de la enfermedad se hace con vigilancia activa, medidas profilcticas y teraputicas y un control exhaustivo de cada caso Mecanismo de contagio En ms del 98% de los casos, la infeccin es causada por la inhalacin de las secreciones respiratorias mitidas por un adulto con enfermedad tuberculosa pulmonar con esputo positivo a BK. No todos los casos desarrollaran la enfermedad. Existen dos factores que determinan esta evolucin: a) la facilidad de exposicin a un adulto enfermo; y b) las condiciones inmunolgicas propias del husped.Los nios menores de un ao son los que tienen mas probabilidades de desarrollar formas graves de enfermedad, como la tuberculosis miliar o la meningitis tuberculosa. Patogenia Solamente las partculas inhaladas ms pequeas, las que contienen entre 1-3 bacilos, van a ser capaces de llegar al alveolo y ser fagocitados por los macrfagos alveolares. Unos bacilos son destruidos y otros, con mayor capacidad agresiva, tienen la facultad de resistir los mecanismos defensivos celulares y provocar una primoinfeccin tuberculosa. Se constituye el llamado complejo primario, formado por el chancro de inoculacin o ndulo de Gohn, la linfangitis

regional y la adenopata satlite. La repercusin sobre el pulmn se traduce en dos situaciones patolgicas distintas: Primo infeccin tuberculosa subclnica (primo infeccin latente, viraje tuberculnico o infeccin tuberculosa). Se caracteriza por la ausencia de sntomas y signos clnicos, radiolgicos y bacteriolgicos. Slo la prueba de tuberculina es positiva. Enfermedad tuberculosa. Presenta manifestaciones clnicas, radiolgicas, bacteriolgicas e inmunolgicas. La enfermedad, que se manifiesta antes de los 5 aos que siguen al contagio se cataloga como tuberculosis primaria, enfermedad tuberculosa o primoinfeccin patente, y aquella que se desarrolla ms tarde se denomina tuberculosis posprimaria, secundaria o de tipo adulto. Sntomas La fase primaria de la enfermedad normalmente no tiene sntomas. Cuando los sntomas en verdad ocurren, pueden abarcar: Tos (algunas veces con flema) Expectoracin con sangre Sudoracin excesiva, especialmente en la noche Fatiga Fiebre Prdida involuntaria de peso Dificultad respiratoria Dolor torcico Sibilancias LA TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (por ejemplo, el cido mi clico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos.

Otros sntomas que pueden ocurrir con esta enfermedad:

Por esto se denominan bacilos cido-alcohol resistente o BAAR. La pared celular rica en lpidos y cidos carboxlicos (cido miclico) que tienen la propiedad

de unirse excepcionalmente fuerte al colorante primario (fuscina de Ziehl) cuando se usa el calor como mordiente.

Una vez que se forma este complejo colorante-pared, ni siquiera la accin conjunta del cido y del alcohol puede deshacerlo, ya que las paredes retienen el colorante en forma "resistente". Las mico bacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. La tincin fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 to 1926), un bacterilogo y Friedrich Neelsen (1854 a 1894), un patlogo.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES: Microscopio con objetivo de inmersin. Envases para recoleccin de muestras. Aplicadores. Lminas portaobjetos nuevas, limpiadas con alcohol y secadas al aire. Un soporte para sostener lminas portaobjetos durante la preparacin de extendidos. Varillas de vidrio u otro soporte inoxidable, de dimensiones adecuadas para sostener lminas portaobjetos durante la tincin. Un mechero, preferentemente de gas aunque puede utilizarse uno de alcohol. Una pinza. Un hisopo. Aceite de inmersin. Etanol al 70% o xilol. carbolfucsina al 1% acido-alcohol al 1% azul de metileno al 0.2%

PREPARACIN Y FIJACIN DEL EXTENDIDO: se Destap con cuidado el envase. Se Parti un aplicador en dos, y se obtuvieron puntas speras. Tomar una parte del aplicador con la mano izquierda y la otra con la derecha, entre el pulgar y el ndice, y con los extremos irregulares seleccionar la partcula ms densa o purulenta de la muestra de esputo. Enrollarla en una de los dos partes del aplicador con la ayuda de la otra. Se colocaron las partculas seleccionadas sobre el portaobjetos y se extendieron con el aplicador con movimientos suaves, circulares, dispersndolas de forma homognea en el centro de la lmina.(a) Se Dej el extendido en un soporte ubicado al costado de la mesada para que se seque a temperatura ambiente. Luego se Desecha el aplicador y guantes. La lmina se deja secar al aire.

 Se Toma el extendido con una pinza manteniendo la cara que contiene la muestra hacia arriba, y se pasa rpidamente sobre la llama de un mechero tres o cuatro veces cuidando que no se caliente demasiado. (b) Se Coloc la lamina en el soporte destinado para la coloracin.
B A

TINCIN DE CIDOALCOHOL RESISTENCIA (ZIEHLNEELSEN)

Coloracin se Cubri totalmente la superficie del extendido con fucsina bsica fenicada. Y se dispers el colorante con suavidad a lo largo de todo el extendido (1) Con la llama de un hisopo embebido en alcohol calentar suavemente por debajo de los extendidos, con movimientos de vaivn, hasta que observe que se desprenden los primeros vapores blancos. No calentar con mechero. En el trmino de aproximadamente cinco minutos se calent tres veces hasta emisin de vapores; esto fue suficiente para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fijara a sus lpidos. Se tuvo cuidado de no hervir la fucsina porque la pared de los bacilos puede destruirse y colorearse mal.(2) Con una pinza, se levant cuidadosamente la lmina portaobjetos desde el extremo ms cercano. Se Enjuag con abundante agua a baja presin, con un frasco o un grifo. Y

posteriormente se Lav muy suave la superficie eliminando totalmente la solucin de fucsina. Se Gir el extendido y se lav con cuidado la parte posterior.(3) Se Inclin el portaobjetos para eliminar el exceso de agua para evitar la dilucin de los reactivos que se utilizados en el resto de la tincin.

Decoloracin Se Cubri la totalidad del extendido con solucin decolorante y se dej actuar aproximadamente 3 minutos (4) Inmediatamente se Enjuag el extendido con abundante agua a baja presin.(5) Verificar que el extendido se ha decolorado Se inclino el portaobjetos para eliminar el exceso de agua.

Coloracin de fondo
6 se Cubre todo el extendido con solucin de azul de metileno, Dejando actuar durante un minuto.(6) se Enjuagaron las lminas en ambas caras con agua a baja presin.(7) Luego se Dejaron secar las lminas a temperatura ambiente, apoyndolas en posicin vertical en un soporte.(8)

Lectura de extendidos coloreados por Ziehl Neelsen Se Deposit una gota de aceite de inmersin en un extremo del frotis, sin tocar el preparado con el gotero.

Se Enfoc el extendido donde ha colocado la gota de aceite, con la lente 100x de inmersin. Se Observ cada campo microscpico en superficie y profundidad, moviendo permanentemente el tornillo micromtrico, antes de desplazarse al campo contiguo. Luego se Sigui un recorrido en lneas rectas, sistemtico para recorrer el extendido evitando repetir la lectura de algunos campos. de izquierda a derecha. Se Contaron el nmero de campos y el nmero de BAAR que han identificado.

ANALISIS DE RESULTADOS

Al realizar la tincin de Ziehl Neelsen se observo una coloracin azulada del fondo del extendido pero sin la presencia de microorganismos de coloracin fucsiarojiza.

Coloracin azul del medio debida al azul de metileno

Figura 1.

Esta coloracin se debe a que el azul de metileno es un colorante bsico metacromatico, la metacromasia es la capacidad de los colorantes que al reaccionar con un poli anin producen un viraje en la coloracin por esta razn se usa como medio de contraste ya que reacciona con todos las sustancias que se encuentren en el extendido menos con los bacilos que han sido teidos fucsina dando una coloracin azulada (figura 1).

Mycobacterium tuberculosis (bacilosacido alcohol resistente)

Figura 2. Resultado de bacilos copia en caso de prueba positiva (presencia de BAARs ).

La coloracin fucsia-rojiza de algunos microorganismos en esta prueba se debe a la fucsina un colorante bsico que penetra todas las clulas dndoles una coloracin fucsia-rojiza por esta razn la nuestra es sometida a decoloracin dado que si el extendido en estas condiciones se coloca al microscopio todo se observara de esta coloracin por esta razn se usa el acido-alcohol dado a que esta sustancia remueve la coloracin de todas las clulas menos los bacilos acido alcohol resistentes dado a que estos presentan cidos grasos (por ejemplo, el cido mi clico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con este alcohol-cido, de esta manera retienen el colorante y al observarlo microscopio se pueden observar solo los microorganismos que tengan esta propiedad como son los bacilos del genero de las mycobacterias.

Resultado obtenido luego de la observacin de 100 campos al microscopio, el esputo observado es

Estos resultados se deben a que el paciente del cual se extrajo la muestra de esputo no presenta tuberculosis pulmonar dado a que si el presentara al enfermedad eliminara por el esputo los microorganismos y al hacer el extendido se observara estos bacilos en cantidades variables dependiendo del grado de enfermedad.

ESPERMATOGRAMA
INFORME DE ANALISIS DE LQUIDO SEMINAL Nombre: Edad: CONDICIONES DEL EXAMEN
Hora de eyaculacin: 1:45 pm Mtodo de obtencin: masturbacion Hora de examen: 3:40 Abstinencia sexual ......... Tiempo de transporte Ultimo proceso febril .

EXAMEN MACROSCOPICO
Volumen: 1 ml Color: blanquesino Olor: caracterstico Viscosidad: normal

Aspecto: sui generis Licuacin: positiva Filancia: positiva Ph....

EXAMEN MICROSCOPICO

PREPARADO DE ORIENTACION Espermatozoos. Aglutinacin Clulas. Cristalizacin... Espermiofagia.. Leucocitos por campo. NUMERO DE ESPERMATOZOIDES POR ML: MOVILIDAD Inmviles: 40% Movilidad total: 60 % Activa 40% Pasiva: 20 % VITALIDAD Espermatozoos teidos: 40% ndice de vitalidad: 60% ESPERMIOCITOGRAMA Espermatozoos normales: 90% Espermatozoos anormales: 20% Alteraciones de cabeza: 20% Macros: 50% Micros: 50% Alteraciones de Seg. Int: 20% Alteraciones de cola: 40% Alteraciones mixtaa: 0% Clulas de espermiogenesis . Leucocitos. Otras clulas.

BIOQUIMICA

Fructosa....mg/dl Acido ctrico..mg/dl Fosfatasa acida.UI/ml Zinc....mg/dl

DIAGNOSTICO

Nombre: Paul A. Veas Najar Edad: 23 aos CONDICIONES DEL EXAMEN

Hora de eyaculacin: 2:00 pm Mtodo de obtencin: masturbacion Hora de examen: 3:40 Abstinencia sexual ......... Tiempo de transporte Ultimo proceso febril .

EXAMEN MACROSCOPICO
Volumen: 4 ml Color: blanquesino Olor: caracterstico Viscosidad: normal

Aspecto: sui generis Licuacin: positiva Filancia: positiva Ph....

EXAMEN MICROSCOPICO

PREPARADO DE ORIENTACION Espermatozoos. Aglutinacin Clulas. Cristalizacin... Espermiofagia.. Leucocitos por campo. NUMERO DE ESPERMATOZOIDES POR ML: MOVILIDAD Inmviles: 11% Movilidad total: 89 % Activa 67% Pasiva: 23 % VITALIDAD Espermatozoos teidos: 20% ndice de vitalidad: 80% ESPERMIOCITOGRAMA Espermatozoos normales: 80% Espermatozoos anormales: 20% Alteraciones de cabeza: 15% Macros: 60% Micros:40% Alteraciones de Seg. Int: 03% Alteraciones de cola: 02% Alteraciones mixtaa: 0% Clulas de espermiogenesis . Leucocitos. Otras clulas.

BIOQUIMICA

Fructosa....mg/dl Acido ctrico..mg/dl Fosfatasa acida.UI/ml Zinc....mg/dl

DIAGNOSTICO

Nombre: Brando D. Salcedo Ramos Edad: aos CONDICIONES DEL EXAMEN

Hora de eyaculacin: 2:15 pm Mtodo de obtencin: masturbacion Hora de examen: 3:40 Abstinencia sexual ......... Tiempo de transporte Ultimo proceso febril .

EXAMEN MACROSCOPICO
Volumen: 3 ml Color: blanquesino Olor: caracterstico Viscosidad: normal

Aspecto: sui generis Licuacin: positiva Filancia: positiva Ph....

EXAMEN MICROSCOPICO

PREPARADO DE ORIENTACION Espermatozoos. Aglutinacin Clulas. Cristalizacin... Espermiofagia.. Leucocitos por campo. NUMERO DE ESPERMATOZOIDES POR ML: MOVILIDAD Inmviles: 23% Movilidad total: 77 % Activa 52% Pasiva:48 % VITALIDAD Espermatozoos teidos: 30% ndice de vitalidad: 70% ESPERMIOCITOGRAMA Espermatozoos normales: 70% Espermatozoos anormales: 30% Alteraciones de cabeza: 21% Macros: 70% Micros: 30% Alteraciones de Seg. Int: 05% Alteraciones de cola: 04% Alteraciones mixtaa: 0% Clulas de espermiogenesis . Leucocitos. Otras clulas.

BIOQUIMICA

Fructosa....mg/dl Acido ctrico..mg/dl Fosfatasa acida.UI/ml Zinc....mg/dl

DIAGNOSTICO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA

BACTERIOLOGIA Docente: LIC. TM. DAVID MATOS INFORME DE PRACTICAS BACILOSCOPIA Y ESPERMATOGRAMA Alumno: Paul Anthony veas najar Cdigo: 2008230437

CUSCO - 2011