ISSN 0104-5172

Augusto Csar Pereira Goulart

Fungos em Sementes de Soja: Deteco e Importncia

Dourados, MS 1997
EMBRAPA-CPAO. Documentos, 11

Exemplares desta publicao podem ser solicitados : EMBRAPA-CPAO Setor de Marketing e Comercializao - SMC Rod. Dourados-Caarap, km 5, Caixa Postal 661 Fone: (067) 422-5122 - Fax (067) 421-0811 79804-970 Dourados, MS COMIT DE PUBLICAES: Jlio Cesar Salton (Presidente) Andr Luiz Melhorana Augusto Csar Pereira Goulart Carlos Hissao Kurihara Clarice Zanoni Fontes Edelma da Silva Dias Eliete do Nascimento Ferreira

Guilherme Lafourcade Asmus Jos Ubirajara Garcia Fontoura Membros ad hoc Mrio Artemio Urchei Paulino Jos Melo Andrade Hber Ferreira dos Reis

PRODUO GRFICA: Coordenao: Clarice Zanoni Fontes Diagramao e Reviso: Eliete do Nascimento Ferreira Normalizao: Eli de Lourdes Vasconcelos TIRAGEM: 1.500 exemplares FOTOS DA CAPA: Augusto Csar Pereira Goulart

GOULART, A.C.P. Fungos em sementes de soja: deteco e importncia. Dourados: EMBRAPA-CPAO, 1997. 58p. (EMBRAPA-CPAO. Documentos, 11) 1.Soja-Semente-Fungo.I.Ttulo.II.Srie. CDD 633.3494

EMBRAPA, 1997

SUMRIO

RESUMO, 5 ABSTRACT, 7 1. INTRODUO, 9 2. SANIDADE, 10 3. PRINCIPAIS FUNGOS ENCONTRADOS EM SEMENTES DE SOJA, 11 3.1. Phomopsis spp., 12 3.2. Colletotrichum truncatum - Antracnose, 14 3.3. Cercospora kikuchii - Mancha prpura, 14 3.4. Cercospora sojina - Mancha olho-de-r, 15 3.5. Rhizoctonia solani - Tombamento e morte em reboleira, 15 3.6. Sclerotinia sclerotiorum - Podrido branca da haste e da vagem, 16 3.7. Fusarium semitectum, 16 3.8. Aspergillus spp., 17 3.9. Penicillium spp., 17 4. TESTES DE SANIDADE DE SEMENTES DE SOJA, 18 4.1. Importncia do teste de sanidade, 18 4.2. Necessidades bsicas de um laboratrio para anlise sanitria de sementes, 18 4.3. Mtodos de deteco de patgenos em sementes de soja, 21 5. TRATAMENTO DE FUNGICIDAS, 25 SEMENTES DE SOJA COM

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS, 29 6. ANEXO, 34

REPBLICA FEDERATIVA DO BRASIL Fernando Henrique Cardoso

Presidente

MINISTRIO DA AGRICULTURA E DO ABASTECIMENTO Arlindo Porto Neto

Ministro

EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA AGROPECURIA Alberto Duque Portugal

Presidente

Elza Angela Battaggia Brito da Cunha Jos Roberto Rodrigues Peres Dante Daniel Giacomelli Scolari
Diretores

CENTRO DE PESQUISA AGROPECURIA DO OESTE Jos Ubirajara Garcia Fontoura

Chefe Geral

Jlio Cesar Salton

Chefe Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento

Andr Luiz Melhorana

Chefe Adjunto de Apoio Tcnico

Josu Assuno Flores

Chefe Adjunto Administrativo

FUNGOS EM SEMENTES DE SOJA: Deteco e Importncia

Augusto Csar Pereira Goulart1

RESUMO
A simples indicao das percentagens de pureza, germinao e vigor de um lote de sementes no suficiente para caracterizar a sua verdadeira qualidade, sendo necessrio, obrigatoriamente, levar em conta o somatrio dos atributos fsicos, genticos, fisiolgicos e sanitrios. A condio sanitria extremamente importante, considerando-se que as sementes so veculos de agentes fitopatognicos, que nelas podem se alojar e com elas serem levados ao campo, provocando reduo de germinao e vigor e originando focos primrios de doenas. A maioria das doenas de importncia econmica que ocorre na soja causada por patgenos que so transmitidos pelas sementes. Dentre eles, merecem destaque: Phomopsis spp. - anamorfo de Diaporthe spp. (causador do cancro da haste da soja, da seca da haste e da vagem da soja e da deteriorao das sementes), Cercospora sojina (causador da mancha olho-de-r), C. kikuchii (causador da mancha ________
1

Eng.-Agr., M.Sc., Fitopatologista, EMBRAPA-CPAO, Caixa Postal 661, 79804-970 - Dourados, MS.

prpura da semente e do crestamento foliar), Colletotrichum truncatum (causador da antracnose), Fusarium semitectum (causador da deteriorao das sementes), Aspergillus flavus (fungo de armazenamento), Sclerotinia sclerotiorum (causador da podrido branca da haste e da vagem) e Rhizoctonia solani (causador do tombamento de plntulas e morte em reboleira). Esses patgenos so detectados e identificados nas sementes de soja atravs da realizao de um teste especfico (Teste de Sanidade ou de Patologia de Sementes). Seu objetivo principal determinar o estado sanitrio de uma amostra de sementes. Esse teste realizado em um laboratrio, que precisa ter os seguintes equipamentos: cmaras de incubao, estereomicroscpio binocular (lupa), microscpio composto binocular, recipientes (gerbox e placas de Petri de plstico ou de vidro), substrato (papel de filtro), capela de fluxo laminar, estufas para esterilizao (fornos Pasteur), autoclave e outros utenslios (pinas, bisturis, estiletes, tesouras e alas de platina). Vrios testes de laboratrio podem ser utilizados para caracterizar o estado sanitrio das sementes de soja. O principal, utilizado e recomendado internacionalmente, o Mtodo do papel de filtro ou Blotter test, que detecta a quantidade total de fungos presentes nas sementes (interna e externamente). Outros mtodos tambm podem ser utilizados, como o Deep Freezing Method e o Mtodo de incubao em gar. Consta ainda neste trabalho um Anexo, contendo as estruturas e descries dos principais fungos encontrados em sementes de soja.

FUNGI IN SOYBEAN SEEDS:

Detection and Importance

ABSTRACT
The sole indication of purity, germination and vigor indexes in a seed lot is not sufficient to characterize its true class. One should also take into account the sum of the physical, genetic, physiologic, and sanitary traits to better characterize a seed lot. The sanitary condition is extremely important if one considers that many pathogens may be seed-borne. If a pathogen is taken to the field with the seed, it can reduce the seed germination and vigor indexes and originate disease primary foci. As for the soybean diseases, most of them are incited by seed-borne pathogens. Among these, the most important are: Phomopsis spp. - anamorph of Diaphorte spp. (cause of stem canker, stem and pod blight, and seed deterioration); Cercospora sojina (frog leaf spot); C. kikuchii (purple seed and leaf blight); Colletotrichum truncatum (antracnosis); Fusarium semitectum (seed deterioration); Aspergillus flavus (seed deterioration in storage); Sclerotinia sclerotiorum (stem and pod white mold); and Rhizoctonia solani (seedling blight and dead patches). These pathogens are detected and identified by a specific test (Sanitary Test or Seed Pathology Test). The main purpose is to determine the sanitary class of a seed sample. This test is performed at a laboratory which must have the following equipments: growth chambers, binocular stereomicroscope, compound microscope, test boxes (gerbox and plastic or glass Petri dishes), substrate (filter paper), transfer chamber, sterilizing oven, autoclave, and other small tools (forceps, knives, scissors, and transfer loops). Several lab tests may be used to characterize the sanitary class of soybean seeds; The commonly used and internationally recommended is the filter paper method or blotter test which can detect all

fungi in the tested seeds (internally and externally). Other tests (deep freezing method and agar incubation method) may be used. Drawings and descriptions of the most important fungi found in soybean seeds are in the appendix.

1. INTRODUO
A simples indicao das percentagens de pureza e de germinao de um lote de sementes no suficiente para caracterizar o seu verdadeiro estado fisiolgico, pois, nesses testes, alm da pureza fsica, apenas avaliada a capacidade que a semente possui para formar plntulas normais sob condies timas germinao. Na tentativa de melhor identificar os lotes de sementes de alta qualidade fisiolgica, a concepo de vigor vem recebendo grande ateno como mais um parmetro utilizado para indicar o futuro desempenho dessas sementes no campo. Experincias tm demonstrado que a considerao apenas desses atributos para se atestar a qualidade de sementes tem sido insuficiente, principalmente na atual poltica agrcola brasileira, onde se exige uma agricultura mais econmica e rentvel, assumindo a semente papel decisivo na diminuio de riscos. Nesse contexto, a sanidade de sementes apresenta-se com significativa importncia, uma vez que determinados microorganismos, associados a elas, podem constituir-se em fator altamente negativo no estabelecimento inicial de uma lavoura. Dessa forma, fica evidenciado que para se atestar a verdadeira qualidade de um lote de sementes, deve-se, obrigatoriamente, levar em conta o somatrio dos atributos fsicos, genticos, fisiolgicos e sanitrios.

2. SANIDADE
O laboratrio de Anlise de Sementes tem como funo

bsica verificar a qualidade das sementes. Esta qualidade no se expressa somente em seu valor gentico e estado fsico e fisiolgico, mas tambm no aspecto sanitrio. A condio sanitria extremamente importante se consideramos que as sementes so veculos de agentes fitopatognicos, que nelas podem se alojar e com elas serem levados ao campo, provocando reduo na germinao e vigor e originando focos primrios de infeco de doenas. No controle de qualidade de sementes, a importncia do aspecto sanitrio vem sendo reconhecida de forma crescente. E, considerando os expressivos avanos da rea de patologia de semente, vem crescendo tambm a necessidade de implantao e credenciamento de laboratrios, para a realizao de anlises sanitrias.

3. PRINCIPAIS FUNGOS ENCONTRADOS EM SEMENTES DE SOJA

A soja no campo atacada por um grande nmero de doenas fngicas, que podem causar prejuzos tanto no rendimento quanto na qualidade das sementes. Do ponto de vista sanitrio, a semente ideal seria aquela livre de qualquer microorganismo indesejvel. Entretanto, isso nem sempre possvel, uma vez que a qualidade das sementes altamente influenciada pelas condies climticas sob as quais a semente foi produzida e armazenada. Essas, porm, variam de ano para ano, de regio para regio, assim como para diferentes pocas de semeadura e ciclo da cultura. A maioria das doenas de importncia econmica que ocorre na soja causada por patgenos que so transmitidos pelas sementes. Isso implica na introduo de doenas em reas novas ou mesmo a reintroduo em reas cultivadas nas quais a doena ocorreu um dia e, em funo da adoo de prticas eficientes de controle, como, por exemplo, a rotao de culturas, ficou livre da mesma. A transmisso via semente proporciona, na lavoura, uma distribuio ao acaso de focos primrios de doenas, sendo que o processo infeccioso geralmente ocorre nos estdios iniciais de desenvolvimento da planta. Alm disso, a freqente introduo de patgenos pelas sementes tende a aumentar a incidncia de doenas j existentes numa rea. At o momento, inmeros fungos j foram identificados em sementes de soja, porm so poucos os que merecem destaque por serem economicamente importantes, conforme relao a seguir: Phomopsis spp. (anamorfo de Diaporthe spp.), Colletotrichum truncatum, Fusarium spp. (principalmente F. semitectum), Sclerotinia sclerotiorum, Cercospora kikuchii, Cercospora sojina, Aspergillus spp. (principalmente A. flavus), Penicillium spp., Alternaria spp., Chaetomium sp., Cladosporium sp., Corynespora cassiicola, Curvularia sp., Epicoccum sp., Macrophomina phaseolina, Monilia sp., Mucor sp., Periconia sp., Peronospora manshurica (crosta de oosporos), Phoma sp., Pithomyces sp., Rhizoctonia solani, Rhizopus stolonifer,

Septoria glycines, Sclerotiorum rolfssii, Stemphylium sp. e Trichoderma sp.

3.1. Phomopsis spp.

Diaporthe phaseolorum var. caulivora - Cancro da haste (Northern stem canker) Diaporthe phaseolorum var. sojae - Seca da haste e da vagem Diaporthe phaseolorum var. meridionalis - Cancro da haste (Southern stem canker)

Esse fungo freqentemente reduz a qualidade das sementes de soja, especialmente quando ocorrem perodos chuvosos associados com altas temperaturas durante a fase de maturao; considerado como a principal causa da baixa germinao de sementes de soja, no teste padro de germinao, temperatura de 25 C. Trabalhos tm demonstrado que sementes altamente infectadas por Phomopsis podem ter sua germinao drasticamente reduzida, quando avaliada pelo teste padro (rolo de papel toalha a 25 C); porm a emergncia das plntulas oriundas de ssas sementes no teste de solo ou areia no afetada, se a qualidade fisiolgica for boa e as condies forem adequadas para rpidas germinao e emergncia. Esses resultados podem ser explicados por um mecanismo de escape no qual a plntula, ao emergir, solta o tegumento infectado no solo, ao passo que, no teste padro de germinao (rolo de papel) o tegumento permanece em contato com os cotildones, causando sua deteriorao. Esses resultados demonstram que o teste padro de germinao por si s inadequado para avaliar a qualidade de sementes de soja com alta incidncia de Phomopsis. J foi demonstrado tambm que Phomopsis perde viabilidade rapidamente durante a armazenagem em condio ambiente, ocorrendo, ao mesmo tempo, um aumento gradual

na percentagem de germinao em laboratrio. Este aumento na germinao depende tambm da qualidade fisiolgica da semente. Danos mecnicos, deteriorao por umidade e danos por percevejo so freqentemente responsveis pela baixa qualidade da semente e, algumas vezes, esto associados com Phomopsis. Nestes casos, mesmo que o fungo tenha perdido sua viabilidade durante a armazenagem, a germinao poder no alcanar o padro mnimo necessrio para a sua comercializao. Aps incubao no teste de sanidade, as sementes infectadas apresentam um miclio denso, branco, floculoso, contendo freqentemente picndios escuros, globosos e ostiolados, com formao de exudatos. Muitas vezes pode ocorrer desse fungo produzir apenas picndios sobre a semente, sem a presena do miclio. Nesses casos, a identificao segura do patgeno deve ser baseada na presena dos esporos alfa e beta. Esses dois tipos de esporos podem ser produzidos, no raramente, no mesmo picndio (caracterstica da espcie), podendo ocorrer tambm a produo apenas de esporos alfa ou beta num picndio.

3.2. Colletotrichum truncatum - Antracnose

Esse fungo pode causar deteriorao da semente, morte de plntulas e infeco sistmica em plantas adultas. De maneira geral, a incidncia desse patgeno nas sementes baixa, sendo que dificilmente obtem-se um lote de sementes com nveis elevados de C. truncatum. Entretanto, com a expanso da cultura da soja para outras regies do Brasil, temse observado, em algumas safras, aumento considervel da presena desse fungo nas sementes de soja. Com relao perda de viabilidade desse patgeno nas sementes durante o armazenamento, trabalhos recentes demonstraram que esse fungo mais persistente que Phomopsis spp. e Fusarium

semitectum, apesar de sua incidncia diminuir quando as sementes so armazenadas em condies ambientes, por um perodo de seis meses. A principal caracterstica utilizada para a identificao do patgeno nas sementes, aps o perodo de incubao, a presena de acrvulos tpicos da espcie, onde so observadas inmeras setas escuras.

3.3. Cercospora kikuchii - Mancha prpura

Embora o sintoma caracterstico causado por esse patgeno na semente seja a mancha prpura, nem todas as sementes infectadas apresentam esta descolorao do tegumento. Trabalhos tm demonstrado no haver nenhum efeito negativo do fungo sobre a qualidade da semente. As sementes infectadas no parecem ser fonte importante de inculo, a no ser em reas novas, uma vez que a taxa de transmisso semente-planta-semente bastante baixa. No teste de sanidade, a presena da colorao prpura do tegumento facilita a identificao do fungo, bastando observar o crescimento do mesmo e/ou esporulao. Os condios longos, hialinos e septados so produzidos em fascculos e distinguemse dos conidiforos que so de cor marrom-escura.

3.4. Cercospora sojina - Mancha olho-de-r

As sementes infectadas por esse patgeno podem apresentar colorao cinza esverdeada no tegumento, que, freqentemente, apresenta rachaduras, porm no causa problemas de qualidade de sementes. A presena desse fungo nas sementes de soja tornou-se espordica, uma vez que a grande maioria das cultivares recomendadas para plantio so resistentes a essa doena. A identificao do fungo no teste de sanidade feita,

observando-se a presena de conidiforos escuros e condios hialinos, septados, que so as caractersticas utilizadas para diferenciar Cercospora kikuchii de C. sojina, cujos esporos so bem menores.

3.5. Rhizoctonia solani - Tombamento e morte em reboleira

A importncia do inculo da semente duvidosa, porque o fungo ocorre naturalmente no solo. A identificao do fungo no teste de sanidade de semente feita com base na caracterstica do miclio marrom, onde hifas septadas apresentam ramificao em 90 j que o mesmo no p roduz , esporos.

3.6. Sclerotinia sclerotiorum - Podrido branca da haste e da vagem

A transmisso por semente pode ocorrer tanto atravs de miclio dormente (interno) quanto por esclerdios misturados s sementes. O fungo, devido formao de estruturas de resistncia (esclerdios), de difcil erradicao aps introduzido numa rea. No teste de sanidade de sementes usualmente realizado (papel de filtro/23 C/7 dias), dificilmente o fungo detectado. Para a obteno de melhores resultados, recomenda-se o uso de temperatura entre 10-15 e 2 8 dias de C incubao. A identificao feita com base na presena de miclio branco tpico e formao de esclerdios.

3.7. Fusarium semitectum - Podrido de sementes

Dentre as espcies de Fusarium, o mais freqente (98% ou mais) em sementes de soja o F. semitectum.

considerado como fungo patognico, por causar problemas de germinao em laboratrio, de maneira semelhante ao Phomopsis. O fungo F. semitectum est freqentemente associado a sementes que sofreram atraso de colheita ou deteriorao por umidade no campo. O sintoma tpico desse fungo em sementes de soja, aps perodo de incubao, a presena de miclio normalmente branco, porm variando do amarelo-pssego at o marrom (dependendo da idade da cultura) e com aspecto algodonoso denso. Sob o microscpio estereoscpico (50 aumentos) possvel observar as frutificaes tpicas do fungo.

3.8. Aspergillus spp.

Diversas espcies de Aspergillus ocorrem em sementes de soja, porm a mais freqente Aspergillus flavus. Tem sido observado que, em sementes colhidas com teores elevados de umidade, um retardamento do incio da secagem por alguns dias suficiente para reduzir sua qualidade, devido ao desse fungo. Quando encontrado em alta incidncia, pode reduzir o poder germinativo das sementes.

3.9. Penicillium spp.

Este fungo menos freqente que Aspergillus spp., porm ocorre geralmente em semente de soja de baixa qualidade.

4. TESTES DE SANIDADE DE SEMENTES DE SOJA

4.1. Importncia do teste de sanidade
Um teste de sanidade consiste na anlise das sementes para deteco e identificao dos patgenos a ela associados. Seu objetivo determinar o estado sanitrio de uma amostra e, conseqentemente, do lote que representa. As informaes obtidas permitem: a) evitar a introduo de patgenos em reas isentas; b) prevenir futuros prejuzos devido ao aparecimento e desenvolvimento de doenas no campo; c) racionalizar o tratamento das sementes-escolha do fungicida adequado a ser utilizado; d) comparar a qualidade de diferentes lotes, complementando os testes fisiolgicos; e e) decidir pela eliminao de lotes de sementes altamente contaminados por determinados patgenos.

4.2.

Necessidades bsicas de um laboratrio para anlise sanitria de sementes

H vrios equipamentos bsicos de um laboratrio para anlise de patologia de sementes. Na seqncia, sero listadas as instalaes e equipamentos mnimos necessrios realizao desse tipo de teste.

a) Cmaras de incubao

So unidades fabricadas ou salas adaptadas com controle de temperatura e luz, contendo em seu interior prateleiras, de cerca de 40 cm de altura entre a parte de acomodao das placas/recipientes contendo as sementes. A temperatura deve situar-se entre 20-25 e o regime luminoso ser de 12 h de C luz/12 h de escuro. Para estimular a esporulao dos fungos, as cmaras devem possuir luz com comprimento de onda entre 320 e 420 nm, o qual conseguido usando-se luz negra (NUV) ou luz fluorescente tipo luz do dia.

b) Estereomicroscpio binocular (lupa) Esse equipamento deve ser dotado de um conjunto de lentes que permita uma ampliao de at 60 vezes, com iluminao artificial.

c) Microscpio composto binocular Dever permitir alto poder de resoluo (at 1000 vezes), permitindo o exame detalhado do microorganismo envolvido.

d) Recipientes As sementes podem ser incubadas em vrios tipos de recipientes. Placas de Petri de plstico transparente, de vidro borossilicato ou de vidro pirex e caixas plsticas transparentes de germinao (gerbox) podem ser usadas, uma vez que esses materiais permitem a passagem de luz com o comprimento de onda necessrio. Os gerbox inicialmente so lavados com gua e detergente e, posteriormente, esterilizados com hipoclorito de sdio a 1,5%.

e) Substrato Deve ser usado papel de filtro qualitativo ou quantitativo, perfeitamente limpos e esterilizados. Normalmente, so colocadas trs folhas de papel de filtro/recipiente (placas de Petri ou gerbox).

f) Capela de fluxo laminar um equipamento capaz de criar ambiente estril, sendo composto por filtros absolutos, de 99,97% de eficincia para partculas de 0,3 mcrons. Esse equipamento utilizado para a montagem/instalao dos testes de sanidade de sementes.

g) Estufa para esterilizao (fornos Pasteur) Placas de Petri, tubos de ensaio, erlenmeyers e demais vidrarias devem ser esterilizados em calor seco (150-170 por C) duas horas, utilizando esse tipo de equipamento. As placas de Petri devem ser embrulhadas em papel antes de serem colocadas no forno e s desembrulhadas no momento da utilizao. O papel de filtro tambm deve ser embrulhado em sacos de papel comum e esterilizados por 4 h a 120C. h) Autoclave Esse equipamento utilizado para esterilizao por meio de calor mido. So esterilizados em autoclave: vidrarias em geral e meios de cultura contidos em erlenmeyers ou em tubos de ensaio vedados com tampes de algodo, por 15-20 minutos, a 121 e presso de 1,5 ATM. C

i) Outros utenslios Todo o instrumental (pinas, bisturis, estiletes, tesouras, alas de platina, etc) deve ser primeiramente lavado com lcool 70% e posteriormente flambado em chama de bico de Bunsen ou lamparina a lcool. Lminas, lamnulas e fita adesiva durex tambm so utilizados em um laboratrio de patologia de sementes.

4.3.

Mtodos de deteco de patgenos em sementes de soja

Existem vrios testes de laboratrio que podem ser utilizados para caracterizar o estado sanitrio das sementes de soja, sendo que a seleo de um mtodo em particular depender do patgeno a ser detectado, da espcie de semente e do prprio objetivo do teste. O principal mtodo utilizado na anlise sanitria de sementes de soja o papel de filtro (blotter). A experincia tem comprovado que este mtodo perfeitamente vivel e o mais eficaz para a cultura. Em casos especficos, o mtodo pode ser alterado, variando-se a temperatura e o perodo de incubao para detectar patgenos como Sclerotinia sclerotiorum, por exemplo. A seguir, esses mtodos sero descritos, detalhadamente.

a) Mtodo do papel de filtro (blotter test) Este mtodo consiste na utilizao de sementes, sem assepsia superficial, semeadas em placas de Petri ou caixas Gerbox, contendo trs folhas de papel de filtro previamente esterilizadas, embebidas numa soluo de 2,4-D (2,4 - diclorofenxiacetato de sdio), a 0,02% do produto comercial (1.000

ml de gua destilada esterilizada + 2 ml do herbicida 2,4-D) e em gar diludo (10 g de gar/1.000 ml de gua) para facilitar a fixao das sementes no substrato. As sementes so dispostas em nmero de 20, por recipiente. Em seguida, os recipientes contendo as sementes so incubados em ambiente controlado, com temperatura entre 22 e 26 sob regime de 12 h de luz (negra NUV e/ou b ranca C, fluorescente tipo luz do dia)/12 h de escuro. O objetivo da utilizao da luz o de estimular a esporulao da maioria dos fungos. Aps um perodo de incubao de sete dias, as sementes so examinadas, uma a uma, sob microscpio esterescpico e os microorganismos so identificados e anotados. A identificao feita com base na esporulao dos fungos. Para cada amostra recomenda-se a utilizao de 200 a 400 sementes, que devem ser tomadas ao acaso. O resultado do teste expresso em percentagem de cada fungo detectado. A utilizao do 2,4-D tem por finalidade inibir a germinao das sementes, a fim de facilitar a leitura do teste. Este tratamento leva morte do embrio, sem causar efeito negativo na flora fitopatognica.

b) Mtodo do papel de filtro com congelamento (deep freezing method) Este mtodo consiste em pequena variao do anterior, no qual elimina-se a germinao, no pelo uso do 2,4-D, mas pela exposio das sementes temperatura de -20 C. As sementes de soja so semeadas em placas de Petri ou caixas gerbox contendo trs folhas de papel de filtro previamente esterilizadas e embebidas em gar diludo (10 g de gar/1.000 ml de gua). Em seguida, so incubadas, sob as mesmas condies j descritas no teste anterior, nas primeiras

24 horas. Aps esse perodo, os recipientes so retirados e colocados em um freezer a -20 C, por 24 horas. Posteriormente, voltam ao ambiente normal de incubao por cinco dias, perfazendo assim os sete dias, quando ento realizada a avaliao. O choque de frio, aps as sementes absorverem gua nas primeiras 24 horas de incubao, prejudica a germinao normal. Os microorganismos desenvolvem-se normalmente durante a incubao e a avaliao fica facilitada, uma vez que no ocorre a germinao das sementes.

c) Mtodo de incubao em gar Neste tipo de teste, inicialmente as sementes necessitam sofrer assepsia superficial com soluo de hipoclorito de sdio 1,5% (gua sanitria, por ex., Q.boa); 2:1 v/v (duas partes de gua e uma parte do produto comercial). Para isso, submergem-se as sementes na soluo por cinco minutos. Esse processo tem por finalidade eliminar microorganismos presentes na superfcie das sementes, sem afetar os patgenos localizados internamente. As sementes, em nmero de dez, so distribudas em placas de Petri, contendo 10 ml do meio BDA (200 g de extrato de batata; 20 g de dextrose; 12 g de gar e gua destilada). A esse meio, antes da autoclavagem, adiciona-se 2,4-D a 0,02%. As placas com as sementes so incubadas em ambiente controlado, sob as mesmas condies descritas no item a. Aps um perodo de sete dias, a avaliao realizada baseando-se nas caractersticas das colnias que se desenvolvem sobre o meio de cultura.

5. TRATAMENTO DE SEMENTES DE SOJA COM FUNGICIDAS

Nem sempre a semeadura realizada em condies ideais, o que resulta em srios problemas de emergncia, havendo, muitas vezes, a necessidade de replantio, que acarreta enormes prejuzos ao produtor. Por essa razo, o tratamento de sementes com fungicidas (Tabela 1) vem sendo utilizado por um nmero cada vez maior de produtores, para garantir populaes adequadas de plantas. O objetivo principal desse tratamento erradicar ou reduzir, aos mais baixos nveis possveis, o inculo transportado por elas. importante ressaltar que o tratamento no visa o aumento da viabilidade da sementes. Se a baixa germinao for causada por danos mecnicos, os fungicidas no demonstraro qualquer efeito. Por outro lado, se a baixa germinao ou emergncia for causada por fungos presentes nas sementes, o tratamento proporcionar incrementos nesses parmetros. O tratamento recomendado quando as sementes a serem utilizadas para a semeadura estiverem contaminadas por fungos (o que se determina atravs de teste de sanidade) e para proporcionar proteo parcial contra patgenos de solo e da prpria semente, quando as condies para uma rpida germinao e emergncia forem

desfavorveis, tais como dficit hdrico e condies de plantio em solos com baixa temperatura e/ou alto teor de umidade. O tratamento de sementes apresenta as seguintes vantagens: relao custo/benefcio favorvel - no caso da soja, representa menos de 0,5% do custo total de produo da lavoura; eficiente na fase inicial do desenvolvimento da cultura.; de fcil execuo; e seguro ao homem e ao meio ambiente.

5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BARNETT, H.L.; HUNTER, B.B. Illustrated genera of imperfect fungi. 3.ed. Minneapolis: Burgess, 1972. 241p. FRANA NETO, J. de B.; HENNING, A.A. DIACOM: diagnstico completo da qualidade da semente de soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1992. 22p. (EMBRAPACNPSo. Circular Tcnica, 10). FRANA NETO, J. de B.; HENNING, A.A. Qualidades fisiolgica e sanitria de sementes de soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1984. 39p. (EMBRAPA-CNPSo. Circular Tcnica, 9). GOULART, A.C.P. Avaliao do nvel de ocorrncia e efeitos de Phomopsis sp. e Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary em sementes de soja (Glycine max (L.) Merrill). Lavras: ESAL, 1984. 80p. Tese Mestrado. GOULART, A.C.P. Eficincia do tratamento qumico de sementes de soja no controle de Colletotrichum dematium var. truncatum. Revista Brasileira de Sementes, Braslia, v.13, n.1, p.1-4, 1991. GOULART, A.C.P.; FRANCISCHELLI, R.A.; SANTINI, A. Avaliao de fungicidas para tratamento de sementes de soja (Glycine max). Summa Phytopathologica, Jaguarina, v.16, n.1, p.9, 1990. Resumo.

GOULART, A.C.P.; MACHADO, J. da C.; VIEIRA, M. das G.G.C.; PITTIS, J.E. Desenvolvimento inicial da soja (Glycine max) a partir de sementes portadoras de

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6. ANEXO
Barnett & Hunter (1972) Fonte: Moraes & Soave (1987) Moraes & Melchiades (1991)

R | S | T

C D A

FIG. 1. Phomopsis sp. (SACC) - picndios escuros, ostiolados, imersos no incio, quase globosos; conidiforos simples; condios hialinos, unicelulados, de dois tipos: ovide para fuside (condio ) ou filiforme, curvado (condio ). Estgio imperfeito do Diaporthe sp. (A) picndios; (B) dois picndios; (C) condios ; (D) condios ; (E) conidiforos. Ordem: Sphaeropsidales.

A D

FIG. 2.

Diaphorte phaseolorum - (A) condios; (B) condios germinando; (C) duas ascas contendo ascosporos; (D) ascosporos; (E) ascosporos germinando; (F) corte de um peritcio. Ordem: Sphaeriales.

Caractersticas de Diaporthe spp. e Phomopsis spp. em cultura de B.D.A.

Espcies

Cor do miclio

Caracterstica Presena de Tipo de picndio estroma preto

Tipos de picnidiosporo s Esporos raros

Localiza o do peritcio Produzido em grupos em tufos de miclio

D. phaseolorum var. caulivora

Branco, a cor no muda com a idade (14-21 dias)

Ausente

No freqente; ponta pequena; usualmente estril

D. phaseolorum var. sojae

Branco no incio; laranja para rosa ou escuro com a idade (30 dias)

Pequeno; Sozinho; com medianament ponta pequena e espalhado

Produzido sozinho em torno da base do picndio, no estroma Ausente

Phomopsis spp.

Branco no Extenso, incio; a grandemente maioria dos espalhado isola-dos se torna verdeamarelado para mar-rom com a idade (14 a 21 dias)

Multirepartido, ponta grande

Somente

PERONOSPORA

FIG. 3. Peronospora manshurica o agente causal do mldio. (A) Esporangiforo com esporngios; (B) esporngio germinando; (C) um anterdeo em contato com um oognio; (D) oosporos maduros envolvidos pela parede oogonial em colapso. Ordem: Peronosporales.

SEPTORIA

FIG. 4. Septoria glycines - (A) corte vertical de um picndio; (B) condios; (C) germinao de um condio; (D) condio germinando em ambas as extremidades. Ordem: Sphaeropsidales.

D A

FIG. 5. Fusarium sp. (LINK) - miclio algodonoso, freqentemente com alguma colorao rosa, avermelhada ou amarelada; conidiforos variveis, finos, simples ou fortes, pequenos, septados irregularmente ou produzindo um espiral de filides, sozinho ou agrupados no esporodquio; condios (fialosporos), hialinos, variveis, principalmente de dois tipos, freqentemente seguros em pequenos agrupamentos; macrocondios pluricelulados, ligeiramente curvos nas pontas como meias-luas; microcondios unicelulados, ovides ou oblongos, nascidos separados ou em cadeias, intermedirios de condios; condios bi ou tricelulados, curvados ligeiramente, produzidos em conidiforos nas hifas (miclio) ou agregados (massas, pionnotes). (A) Hifas com conidiforos; (B) conidiforos variados; (C) um esporodquio formado por conidiforos ramificados; (D) condios. Ordem: Moniliales.

Algumas espcies mais comuns de Fusarium sp.

FIG. 6 1. F. avenaceum; 2. F. chlamydosporum; 3. F. culmorum; 4. F. dimerum; 5. F. equiseti; 6. F. graminearum; 7. F. longipes; 8. F. moniforme; 9. F. nivale; 10. F. poae; 11. F. semitectum; 12. F. solani.

A B

A AeB

FIG. 7. Aspergillus sp. (LINK) - conidiforo nico, simples, terminando em vescula produzindo filides, condios (fialosporos) unicelulados globosos, formando cadeias, com variadas cores

dependendo da espcie. (A) hbito em cultura; (B, C) conidiforos com condios. Ordem: Moniliales.

Alternaria tenuissima (Nees) - condios

Alternaria zinniae (Nees) condios e conidiforos

FIG. 8. Alternaria sp. (Nees) - conidiforos escuros, pequenos e alongados, septados, produzindo, tipicamente, uma longa

cadeia seccionada de condios; condios caudatos, escuros, com septos longitudinais e transversais (muriformes). Ordem: Moniliales.

CLADOSPORIUM

A) Cladosporium tenuissimum; B) C. elatum; C) C. britanicum.

FIG. 9. Cladosporium (LINK) - conidiforos longos, retos, escuros, septados, arborescentes, muito ramificados; condios (blatosporos) escuros, unicelulados ou bicelulados, variveis em forma e tamanho, ovides para cilndricos e irregulares, alguns com a forma tpica de limo. Ordem: Moniliales.

A Cercospora sojina

B Cercospora kikuchii

CERCOSPORA

FIG. 10. (A) conidiforos e condios de Cercospora sojina; trs condios esto germinando; (B) conidiforos e condios de

Cercospora kikuchii. Ordem: Moniliales.

A B (A) acrvulos de Colletotrichum dematium var. truncata em vagem de soja: (B) um nico acrvulo com setas.

Colletotrichum dematium glycines

Glomerella

FIG. 11. (A, D) Colletotrichum dematium var. truncata. (A) acrvulo com conidiforos, condios e setas; (B) condios; (C) condios germinando em gua: (D) apressrio se formando em gua; (E, I) Glomerella glycines (fase perfeita do Colletotrichum sp.); (E) quatro peritcios imersos no estroma; (F) asca contendo oito ascosporos; (G) ascosporos; (H) ascosporos de cultura artificial; (I) germinao de condio e penetrao na parede da vagem da soja por uma hifa, 48 horas aps inoculao. Ordem de Colletotrichum dematium: Melanconiales. Ordem da Glomerella glycines: Sphaeriales.

COLLETOTRICHUM

GLOMERELLA

Chaetomium piluliferum - peritcio de ascosporos

C. globosum A) peritcio

B) ascosporos

FIG. 12. Chaetomium sp. - peritcios superficiais, ovides, de colorao escura, isolados ou aglomerados, recobertos por numerosas setas escuras, no ramificadas; ostolo circular bem definido na parte apical do peritcio, este com parede formada por clulas polidricas; ascas cilndricas, de parede evanescente, com dois, seis ou oito ascosporos contnuos,

limoniformes, Sphaeriales.

com

membrana

lisa

delgada.

Ordem:

BOTRYTIS sp.

BOTRYTIS

FIG. 13. Botrytis (PERS) - conidiforos longos, finos, hialinos ou pigmentados, septados, as clulas apicais arredondadas, produzindo cachos de condios num pequeno estergma; condios (botryoblastosporos) hialinos ou acinzentados, cinzentos na massa, unicelulares, ovides; esclercios pretos e irregulares freqentemente so produzidos; (A, B) conidiforos e condios; (C, D) vista do pice dos conidiforos;

(E) condios. Ordem: Moniliales.