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__________________________________________________________ Microbiologia
APONTAMENTOS
PERGUNTAS MAIS IMPORTANTES
1. Algumas descobertas so marcos na histria da microbiologia. Cite exemplos.
Anthony van Lunwenhok foi o pai da microbiologia, j que foi ele o
responsvel pela construo do instrumento o microscpio que tornou
possvel a observao de seres minsculos. Os quais observou, descreveu e
desenhou designando-os por animculos;
Lazarro Spallanzani deu o primeiro passo para a destruio do conceito
de abiognese (gerao espontnea); revelou que carne quando fervida
no se alterava j que o calor destrua o microorganismo;
Louis Pasteur veio demonstrar com os seus frascos com pescoo de
cisne, que no existia gerao espontnea, mas sim que os
microorganismos provinham de outros pr-existentes nas poeiras do ar
teoria da biognese; descobre que existem microorganismos que necessitam
de O
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para viver (bactrias anaerbias); inventa um processo de
esterilizao dos alimentos pasteurizao; isolou o parasita responsvel
pela doena do bicho-da-seda e demonstrou a possibilidade de eliminar a
doena; descobriu que a aco das bactrias altera a composio qumicas
dos produtos dos caldos, atravs da fermentao (transformam os hidratos
de carbono em lcool e cidos orgnicos) e da putrefaco (decomposio
das protenas, com formao de produtos de cheiro nauseabundo);
demonstra serem as fermentaes o resultado de actividades microbianas;
Conh e Tyndal descobriram que existem formas de vida resistentes ao
calor (esporos termorresistentes) e do nascimento a um novo mtodo de
esterilizao tindalizao;
Joseph Lister desenvolve trabalhos sobre antissepsia e descobre que os
vapores de cido carbnico reduzem a infeco no ps-operatrio;
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Robert Koch fez a 1. demonstrao directa do papel desempenado por
uma bactria no desenvolvimento de uma doena o Bacillus anthracis e
a doena que este agente produzia (carbnculo); isola o Mycobacterium
tuberculosis (bacilo de Koch), agente causador da tuberculose; define um
conjunto de princpios relacionados com o que estudou Postulados de
Koch:
Um microorganismo especfico est sempre associado a um caso de
doena;
O microorganismo suspeito deve ser isolado e capaz de crescer em
laboratrio;
A inoculao da cultura deve ser capaz de produzir a mesma doena
num animal susceptvel;
O mesmo microorganismo deve ser isolado a partir do animal
doente;
Desvantagens dos Postulados de Koch:
H microorganismos que no crescem em meios de cultura;
Presentemente conhecem-se microorganismos que apenas so
patognicos para o Homem, no produzindo doena em animais
vrus da hepatite C, Treponema pallidum, Mycobacterium leprae;
James Watson descobre a es6rutura do DNA;
Alexander Fleming descobriu a penicilina e a lisozina.
2. Cite as principais diferenas entre procariticas e eucariticas e cite exemplos de
uns e de outros.
Um ser eucariota apresenta nas suas clulas um ncleo individualizado
envolvido por uma membrana nuclear, onde se encontra inserido o DNA. No citoplasma
existem vrios organelos ribossomas, cloroplastos, mitocndrias, retculo
endoplasmtico, aparelho de Golgi, vacolos, flagelos e citoesqueleto que
desempenham funes especficas. As clulas eucariticas so maiores e mais
complexas, o seu genoma maior e possuem mecanismos muito mais elaborados que a
clulas procariticas. Exemplos: animais, plantas, fungos, algas e protozorios.
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Os procariotas apresentam clulas sem ncleo individualizado e esto
organizadas em ribossomas e parede celular. Exemplos: eubactrias e arqueobactrias.
3. As bactrias podem ser classificadas em Gram positivas e Gram negativas de
acordo com a parede celular. Explique.
A parede celular confere proteco mecnica (impede a lise da clula bacteriana
em meio hipotnico), confere forma bactria e determina o comportamento ao Gram.
O diferente comportamento das bactrias ao Gram deve-se ao facto dos dois
grupos bacterianos (Gram + e Gram -) apresentarem parede celular qumica e
estruturalmente diferente.
A parede celular das bactrias Gram + no apresenta lpidos (excepto nos
gneros Mycobacterium, Corynebacterium e Nocardia) e apresenta elevada
concentrao de peptidoglicano (50-90% do peso da parede).
Enquanto que a parede das bactrias Gram apresenta um elevado teor em
lpidos e baixa concentrao de peptidoglicano (10% do peso da parede).
3.1 Outros mtodos de colorao podem ser utilizados, Cite um exemplo e explique.
H bactrias que no so visveis na colorao de Gram, apesar de terem uma
parede do tipo gram + complexa. Por isso recorre-se a outros processos de colorao,
por exemplo, Ziehl-Neelsen. Os BAAR aps a colorao com fucsina de Ziehl,
concentrada e a quente, resistem descolorao com o soluto de Ebner (lcool mais
cido clordrico).
4. Quais as funes das seguintes estruturas:
a) Retculo endoplasmtico.
constitudo por um labirinto intracelular de cisterna, limitado por
membranas. Divide-se em retculo endoplasmtico rugoso (cisterna revestida por
ribossomas) e retculo endoplasmtico liso (no tem ribossomas).
O retculo endoplasmtico rugoso o responsvel pela sntese de todas as
protenas secretadas para o exterior das clulas, das protenas das membranas e
das enzimas lisossmicas.
O retculo endoplasmtico liso muito abundante nas clulas hepticas e
musculares. Tem como funes a biossntese de lpidos, a degradao de drogas
e compostos txicos (desintoxicao) e o armazenamento de clcio.
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b) Aparelho de Golgi.
constitudo por um conjunto de cisternas e vesculas que modificam,
acondicionam e distribuem as protenas e lpidos produzidos pelo retculo
endoplasmtico. no aparelho de Golgi que se produzem as glicoprotenas.
c) Pili.
Os pili so estruturas filamentosas de natureza proteica, s visveis na
microscopia electrnica e que permitem o contacto entre bactrias de sexo
diferente.
5. As bactrias so identificadas por caractersticas morfolgicas e propriedades
bioqumicas. Cite algumas.
Em relao s propriedades morfolgicas podemos dividir as bactrias em cocos
e bacilos. Podemos ainda verificar a presena/ausncia de cpsula.
Em relao s propriedades qumicas temos a classificao pela composio
qumica da membrana (coloraes)
6. Em que caracterstica se baseia a classificao dos vrus?
O vrus uma entidade potencialmente patognica cujo genoma so cidos
nucleicos que se replicam no interior de clulas vivas usando o equipamento de sntese
celular e que sintetizam partculas que transmitem o genoma a outras clulas.
Os principais critrios usados na classificao de vrus so:
Tipo e estrutura do genoma com DNA ou RNA; DNA de cadeia linear
ou circular, de cadeia simples ou dupla; RNA de cadeia dupla ou simples;
Estrutura icosadrica, helicoidal ou mista;
Tipo de hospedeiro vertebrado, invertebrado, plantas, fungos ou
bactrias.
7. Quais so as fases do ciclo viral?
O ciclo viral um ciclo infeccioso que inclui diversas fases distintas:
Absoro o vrus adsorve-se aos receptores da membrana da clula;
Penetrao translocao da partcula para o interior da clula;
Descapsidao perda da cpsula no citoplasma ou no ncleo celular;
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Fase sinttica sntese dos componentes virais e replicao do genoma
viral;
Montagem e extruso os componentes dos vrus so montados em
partculas mais ou menos complexas; so posteriormente transportados para
o exterior sem entrar em contacto com o citoplasma.
7.1 Quais os marcadores de infeco no VHB?
HBsAg indica infectividade do sangue;
HBsAc anticorpo contra o antignio de superfcie; fornece imunidade,
no est presente nos indivduos portadores; imunidade aps infeco ou
aps vacinao;
HBeAg antignio da nucleocopside; indica transmissibilidades;
HBeAc anticorpo do HbeAg; indica baixa transmissibilidade;
HBcAg antignio do core;
HBcAc anticorpo do antignio do core; aparece na fase inicial.
8. Cite trs vantagens da flora normal para o hospedeiro.
A flora comensal serve de barreira de defesa contra as infeces. Os
microorganismos da flora comensal impedem a colonizao da sua rea de residncia
por outras bactrias, mantendo assim o equilbrio entre as diversas populaes.
A flora comensal do intestino grosso ajuda fermentao doa alimentos.
9. A disseminao da flora normal para locais estreis do organismo pode ocorrer
em vrias situaes. Cite trs exemplos.
Esta disseminao pode ocorrer por alterao do pH, por desidratao, por m
higiene e devido a defeitos congnitos.
10. Cite quatro estratgias adoptadas pelos microorganismos para maximizar a sua
sobrevivncia no hospedeiro.
Para escaparem aos mecanismos de defesa do hospedeiro, os microorganismos
aderem ao hospedeiro, disseminam (invadem) para outros locais, mantm-se no local da
primeira interaco com o hospedeiro pois h caractersticas favorveis ao seu
desenvolvimento, induzem leso ou utilizam toxinas para facilitar o seu ciclo de vida.
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11. A densidade dos microorganismos no trato digestivo aumenta do estmago at
ao intestino grosso. Explique.
O tracto gastrointestinal onde reside a maioria da flora do organismo.
No estmago h pouca flora devido existncia de pH muito cido (suco
gstrico).
No intestino delgado tambm h pouca flora devido aco conjunta do suco
gstrico, da blis e do suco pancretico.
No entanto no intestino grosso que reside a maior parte da flora do organismo,
j que a o pH mais alcalino devido fermentao dos alimentos, o que permite que
cresam abundantemente bactrias.
12. O que entende por sistema de defesa inato.
Os mecanismos de defesa inatos (imunidade inata) esto sempre presentes num
indivduo saudvel e no so especficos, so efectivos contra a maioria dos
microorganismos e constituem a 1. linha de defesa do organismo. o caso das barreiras
fsicas (pele), as clulas fagocitrias ou as molculas com actividade antimicrobiana.
13. Quais so as vantagens da existncia de diferentes classes de imunoglobulinas?
Podemos classificar os anticorpos (imunoglobulinas) em:
IgA surgem na fase aguda da doena e a sua deteco permite um
diagnstico mais precoce;
IgM surgem no incio da resposta humural e perduram at ao fim da fase
aguda da doena; revelam um contacto recente com o antignio especfico;
IgG na convalescena as IgG substituem as IgM e podem ficar com os
ttulos residuais toda a vida.
14. Os plasmdeos podem conter genes de virulncia. Diga o que sabe.
As bactrias tm na sua constituio plasmdeos.
So sequncias de DNA, onde esto codificadas as resistncias s drogas, a
sntese de enzimas que originam a resistncia droga.
Assim possuem resistncias cromossmicas (naturais) e resistncias mediadas
por plasmdeos (adquiridas).
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Por exemplo, as enzimas -lactamases so codificadas por plasmdeos, e vo
inibir a aco dos frmacos antibiticos do grupo -lactmicos, utilizados para destruir
todas as bactrias.
15. O que so doenas transmitidas por vectores? D exemplos.
So doenas transmitidas por artrpodes (moscas, mosquitos, carraas), que
podem actuar como reservatrios (se h multiplicao do agente, o que essencial ao
ciclo de vida do parasita) ou serem passivos (apenas transmitem).
Por exemplo a transmisso das Ricktesias.
16. Defina infeco hospitalar.
Infeco hospitalar a infeco adquirida pela passagem ou permanncia no
Hospital, e que pode infectar tanto os utentes como os profissionais de sade.
As vias de transmisso so:
Doente Doente;
Meio Doente;
Material Doente;
Profissional de sade doente;
Comunidade Doente;
Material Profissional de sade;
Meio Profissional de sade.
17. Defina esterilizao.
Esterilizao o processo mediante o qual todas as formas de vida bactrias,
fungos e vrus contidos em lquidos, utenslios, instrumentos e substncias so
completamente destrudos.
17.1 Cite limitaes no uso do xido de etileno.
Vantagens:
No detiora os objectos cortantes nem os termo-sensveis;
Eficaz sobre bactrias e esporos;
Tem grande capacidade de penetrao.
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Desvantagens:
Ciclos de esterilizao longos;
Deixa resduos txicos em alguns materiais;
Necessita de arejamento;
Mais caro que os outros mtodos;
Instalao perigosa.
18. Defina desinfeco.
o processo fsico ou qumico, pelo qual os agentes patognicos ou micrbios
causadores da doena so destrudos.
18.1 Quais os critrios usados na escolha de um antissptico?
Antisspticos so substncias qumicas que actuando sobre os tecidos vivos
destroem os microorganismos ou impedem o seu crescimento.
Os critrios usados na sua escolha so:
Factores fsicos ter em conta o pH, a temperatura e a luz do local;
Factores qumicos no devemos juntar substncias desconhecidas;
Factores microbiolgicos a eficcia depende do nmero e da natureza
dos grmens.
19. A que normas gerais devem obedecer a colheita e transporte de produtos
biolgicos para a cultura de microorganismos?
A colheita deve obedecer s seguintes normas:
O produto biolgico deve ser colhido no local que, no momento da
infeco, oferece maior possibilidade de se isolar o agente infeccioso;
A colheita deve ser feita antes do incio de cada teraputica;
A colheita deve ser feita com material estril (seringa, agulha, bisturi) e
para contentor estril (tubo de ensaio, frasco);
A colheita deve ser adequada e suficiente (expectorao sem saliva);
Os produtos devem ser colhidos para um meio de transporte que mantenha
a viabilidade do microorganismo.
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20. Defina microbiologia e microorganismo.
Microbiologia a cincia que estuda os seres vivos de dimenses microscpicas
bem como outros que tm durante a sua evoluo ovos ou formas larvares
microscpicas.
A microbiologia inclui reas como a bacteriologia, a virologia, a parasitologia e
a micologia.
Microorganismo um organismo, vegetal ou animal, com dimenses
microscpicas.
21. O que uma estirpe?
Estirpe so descendentes de uma colnia pura.
22. Em que consiste a tcnica de colorao de Gram?
Consiste em:
Corante primrio (Violeta Cristal);
Mordente (Soluto de Lugol);
Descorante (Etanol);
Corante de contraste (Fucsina bsica).
As bactrias Gram + fixam o corante primrio (Violeta de Cristal) adquirindo a
cor arroxeada.
As bactrias Gram fixam o corante de contraste (Fucsina bsica) corando de
vermelho.
23. O que o peptidoglicano?
um macropolmero em forma de saco, presente em todas as paredes celulares
bacterianas, rgido e insolvel em gua. constitudo por 2 a.a. a N-acetilglucosamina
(NAG) e o cido N-acetilmurmico (NAM).
24. Como constituda a parede celular das bactrias Gram +?
constituda por peptidoglicano, cidos teicicos e teicurnicos. Estes cidos
esto associados ao peptidoglicano mas no conferem rigidez.
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25. Caracterize os cidos teicicos e teicurnicos.
Os cidos teicicos contm vestgios de glicerol e ribitol, so solveis na gua e
localizam-se em toda a espessura da membrana.
Os cidos teicurnicos (as molculas) substituem os cidos teicicos quando as
bactrias crescem em meios pobres em fsforo por conterem galactosamina mais cido
glucnico.
Tanto os cidos teicicos, como os cidos teicurnicos so responsveis pela
carga da superfcie dos bacilos Gram +, atraem Mg
2+
e Ca
2+
e reduzem as represses
electrostticas no polmero conferindo estabilidade estrutural.
26. O que so autolisinas?
So enzimas que actuam durante o crescimento bacteriano (enzimas hidrolticas
dos peptidoglicanos), ligando a parede bacteriana para que a bactria possa crescer. Se
houver algum descontrolo dessa lise leva a bactria ao suicdio.
27. Qual a composio qumica da parede celular das bactrias Gram -?
constituda por lipopolissacardeos (LPS), fosfolpidos, protenas, porinas,
autolisinas e peptidoglicano.
28. Como actuam os antibiticos sobre a membrana exterior das bactrias?
Os antibiticos atravessam a membrana exterior das bactrias por 2 processos:
via hidroflica (atravs de porinas) e via hidrofbica (atravs da bicamada fosfolipdica).
29. O que so as cpsulas?
So estruturas que envolvem a parede celular de algumas bactrias, retm gua e
impedem a dissecao da bactria, Conferem grande virulncia (cpsula
antifagocitria).
30. Caracterize as seguintes estruturas intracitoplasmticas:
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Granulaes metacromticas constituem reserva de fsforo essencial
para a sntese de cidos nucleicos e fosfolpidos da bactria; esto presentes
no agente da difteria e podem visualizar-se pela colorao de Albert;
Vacolos de gs esto presentes em arqueobactrias e bactrias
fotossintticas; funcionam como reservatrio de azoto, permitindo s
bactrias flutuar na gua;
Grnulos de glicognio so polmeros de glucose; funcionam como
material de reserva energtica e coram pelo reagente de Lugol;
Grnulos de lpidos funcionam como material energtico de reserva e
coram com o negro de Sudo;
Ribossomas encontram-se dispersos no citoplasma bacteriano; so muito
abundantes; so os locais de sntese proteica e so constitudos por
protenas e cidos nucleicos;
Endosporos permitem a modificao de clulas vegetativas em esporos;
impedem a dissecao celular, formam resistncia em condies hostis tais
como radiaes, detergentes, calor, antibiticos; preservam o material
gentico em boas condies dando origem a clulas vegetativas.
Nucleide local da clula onde se localiza o material gentico DNA;
no possui membrana nuclear nem aparelho mittico e funciona como um
s cromossoma; visvel com corantes bsicos e o DNA plasmdico pode
coexistir com o DNA cromossmico, na mesma clula.
31. O que so os flagelos?
So rgos de locomoo, de natureza proteica e visveis em microscopia ptica
com corantes.
32. O que so as fimbrias?
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So estruturas filamentosas de natureza proteica, visveis aps colorao
especfica e que funcionam como rgo de aderncia bacteriana a outras clulas, j que
contm a.a. apolares que lhes confere propriedades hidrfobas.
33. O que distingue a membrana externa da parede celular da membrana interior
(citoplasmtica), nas bactrias Gram -?
O que distingue uma da outra o facto da membrana externa ser constituda por
2 folhetos: folheto interno e folheto externo.
O folheto externo rico em lipopolissacardeos (LPS) que so uma molcula
permevel a compostos hidrofbicos.
O folheto interno rico em fosfolpidos.
34. Caracterize os seguintes organelos da clula eucaritica:
Membrana plasmtica capaz de isolar protenas e cidos nucleicos do
meio externo; constituda por:
Fosfolpidos, responsveis pelo tal isolamento;
Protenas, que asseguram as permutas com o meio exterior;
Esteris, colesterol nos mamferos e ergosterol nos fungos;
Parede celular um invlucro protector que est ausente nos mamferos
e em alguns protozorios e que se encontra nas clulas das algas, fungos e
alguns protozorios; constituda por polissacardeos (ao contrrio da
clula procaritica que constituda por peptidoglicano);
Ncleo possui um invlucro nuclear constitudo por 2 membranas: a
membrana nuclear interna e a membrana nuclear externa; Estas 2
membranas delimitam a chamada cisterna perinuclear; atravs da cisterna
h transporte de DNA, RNA
t
e RNA
r
para o citoplasma e transporte de
enzimas, para replicao de DNA e sntese de RNA, do citoplasma para o
ncleo; no interior do ncleo encontra-se a informao gentica da clula;
Nuclolo estrutura nuclear em nmero muito varivel, cuja funo a
sntese de ribossomas;
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Ribossomas so constitudos por 2 subunidades: grande unidade e
pequena unidade; cada uma das quais constituda por molculas de RNA
r
;
o ribossoma o local onde ocorre a sntese proteica e pode encontrar-se
livre no citoplasma ou associado ao retculo endoplasmtico rugoso;
Retculo endoplasmtico constitudo por um labirinto intracelular de
cisterna, limitado por membranas; divide-se em retculo endoplasmtico
rugoso (cisterna revestida por ribossomas) e retculo endoplasmtico liso
(no tem ribossomas); o retculo endoplasmtico rugoso o responsvel
pela sntese de todas as protenas secretadas para o exterior das clulas, das
protenas das membranas e das enzimas lisossmicas; o retculo
endoplasmtico liso muito abundante nas clulas hepticas e musculares.
Tem como funes a biossntese de lpidos, a degradao de drogas e
compostos txicos (desintoxicao) e o armazenamento de clcio;
Aparelho de Golgi constitudo por um conjunto de cisternas e vesculas
que modificam, acondicionam e distribuem as protenas e lpidos
produzidos pelo retculo endoplasmtico; no aparelho de Golgi que se
produzem as glicoprotenas;
Lisossomas so sacos intracelulares que armazenam enzimas
hidrolticas capazes de digerir todas as macromolculas da clula; tm
como funes:
Digerir molculas vindas do exterior (endocitose);
Destruio de componentes celulares obsoletos (autofagia);
Degradao de microorganismos ou partculas nocivas clula
(fagocitose);
Mitocndrias fornecem clula a energia necessria para todas as
reaces do metabolismo; tm como funo produzir ATP a partir de
energia armazenada nos nutrientes orgnicos;
Peroxissomas so sculos envolvidos por membranas que contm
enzimas que digerem cidos gordos e a.a., e enzimas que catalisam a
degradao do perxido de hidrognio; a sua funo , pois, a -oxidao
de cidos gordos.
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Citoesqueleto a estrutura responsvel pela plasticidade, flexibilidade e
motilidade das clulas eucariticas; desempenha o papel de ossos e
msculos da clula; constitudo por 3 grandes tipos de protenas:
35. Quais os produtos biolgicos que podemos usar para anlise?
Podemos utilizar:
Expectorao;
Urina;
Fezes;
Corrimento vaginal ou uretral;
Lquidos asctico, pleural e cafalorraqudeo;
Secrees nasais e faringeas;
Sangue;
rgos bipsias.
36. O que , e para que serve um meio de transporte?
o recipiente onde se colocam as amostras biolgicas com suspeita de que s
agentes infecciosos resistam mal fora do hospedeiro.
Os meios de transporte servem para assegurar a sobrevivncia desses
microorganismos porque fornecem-lhes condies de pH, concentrao proteica e
atmosfricas (CO
2
e O
2
) ideais para manterem a sua viabilidade.
37. Como se pode identificar o agente infeccioso?
O agente infeccioso pode detectar-se:
Directamente no produto biolgico deteco de antignios e de
sequncias genmicas;
Aps cultura do produto caracterizao bioqumica, antignica,
genotpica e teste de sensibilidade aos antibiticos.
38. Quais so as tcnicas utilizadas para a deteco directa de um microorganismo
num produto biolgico?
Podemos utilizar as seguintes tcnicas:
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Exame microscpico directo;
Deteco de antignios especficos evidenciados pelo uso de anticorpos
especficos;
Deteco de sequncias genmicas com pesquisa de sequncias de
nucletidos especficos.
39. Onde feita a cultura de bactrias, vrus, fungos e parasitas in vitro?
As bactrias, fungos e parasitas tm meios de cultura adequados que tornam
possvel a sua multiplicao.
Os vrus e microorganismos intracelulares so cultivados em clulas do Homem,
de animais ou at de ovos embrionados, pois exigem um suporte celular para se
multiplicarem.
40. Como se detecta o crescimento das bactrias, vrus, fungos e parasitas nas
culturas?
O crescimento das bactrias, fungos e parasitas detectado pelas colnias
bacterianas.
O crescimento dos vrus detectado pelo efeito citopatognico (ECP), ou por
tcnicas alternativas (hemadsoro ou hemaglutinao).
41. O que so culturas incubadas?
So culturas que tm temperatura, humidade e atmosfera adequadas ao
desenvolvimento.
42. Como feita a caracterizao e identificao do microorganismo isolado?
A caracterizao e identificao do microorganismo isolado feita por:
Caracterizao morfolgica utiliza-se a tcnica de colorao de Gram+;
Caracterizao bioqumica reconhecimento da presena de enzimas e
produtos dos metabolismos; utiliza-se para bactrias e fungos;
Caracterizao antignica diferentes tcnicas serolgicas;
Caracterizao genotpica.
43. Qual o tipo de crescimento que podem apresentar os microorganismos?
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Crescimento rpido 18-24h;
Crescimento fastidioso mais de 24h.
44. Depois de cultivados os microorganismos o que se faz?
Aps a cultura do microorganismo feita a sua identificao atravs do teste de
sensibilidade aos antibiticos (TSA) ou antibiograma.
O TSA baseia-se na capacidade de um microorganismo se multiplicar in vitro
na presena de diferentes antibiticos.
Para efectuar o TSA podemos utilizar 2 mtodos: mtodo de diluio e mtodo
de difuso.
45. Caracterize os mtodos de diluio e de difuso.
Mtodo de diluio consiste em semear uma suspenso bacteriana
num meio de cultura slido ou lquido com um antibitico em concentrao
crescente; aps incubao efectua-se a leitura e avaliao no caldo de
turvao; podemos assim avaliar a CMI (concentrao mnima inibitria)
que inibe o crescimento bacteriano e a CMB (concentrao mnima
bactericida) que leva morte de 99,9% das bactrias;
Mtodo de difuso consiste em utilizar um meio slido em placa de Petri
no qual se semeia uma suspenso bacteriana; na superfcie do meio solido
colocam-se discos de papel impregnados de vrios antibiticos; aps
incubao faz-se a leitura e avaliao do halo de inibio do crescimento
em volta do disco; caso forma halo diz-se que a bactria sensvel (S) ao
antibitico, se no formar halo diz-se que resistente (R) ao antibitico.
46. Caracterize o diagnstico indirecto.
Numa fase avanada da doena nem sempre possvel isolar e identificar o
agente da infeco, pois a resposta imune do hospedeiro j o eliminou.
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Vamos ento pesquisar, no hospedeiro, anticorpos especficos contra o
microorganismo que provocou a doena ou pesquisar antignios especficos do
microorganismo.
47. Caracterize a resposta imune humural.
Est ligada actividade dos linfcitos B. Estas clulas produzem anticorpos e
estes ligam-se especificamente aos antignios que o organismo reconheceu com os seus
e quer eliminar.
Os anticorpos pesquisam-se no soro, plasma, urina e outros lquidos biolgicos.
48. Defina diagnstico serolgico.
a designao que se utiliza para a pesquisa de anticorpos ou antignios
especficos, independentemente do produto onde feita essa pesquisa.
49. O que o ttulo de um soro?
o inverso da mais alta diluio do soro que deu um resultado positivo.
Por exemplo, se a diluio mais lata que deu positivo for 1/16, ento o ttulo do
anticorpo 16.
50. Qual a importncia de se estudar 2 soros um na fase aguda da doena e outro
na fase de convalescena?
A presena de anticorpos por si s no confirma que o doente est infectado, por
isso necessrio avaliar a evoluo do ttulo de anticorpos especficos.
A recolha de um 1. soro na fase aguda da doena e de um 2. soro na fase de
convalescena (15 dias de intervalo) vai permitir avaliara a tal evoluo do ttulo de
anticorpos.
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OUTROS APONTAMENTOS
HISTRIA DA MICROBIOLOGIA
A microbiologia a cincia que estuda os seres vivos de dimenses
microscpicas.
reas diversas como:
Bacteriologia;
Virologia;
Parasitologia;
Micologia.
A microbiologia surge quando possvel a observao de seres de dimenses
microscpicas.
1632-1723:
Antony Van Lunwenhok:
1. microscopista;
Animculos (bactrias e protozorios).
Conceito de abiognese seres minsculos desenvolvem-se a partir de
matrias em decomposio teoria da gerao espontnea.
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1626-1697:
Francesco Redi:
Os germens desenvolvem-se a partir da matria orgnica exposta ao
ar e calor.
1729-1799:
Lazzaro Spallanzani:
1. passo para a destruio da teoria da gerao espontnea (carne
quando fervida no se alterava);
Georg Schroder;
Theodor Van Dusch;
Usam pela 1. vez algodo para tapar os recipientes.
1822-1895:
Louis Pasteur:
Teoria da biognese os microorganismos provinham de outros pr-
existentes em suspenso nas poeiras;
Usa frascos de colo de cisne.
1820-1893:
Jonh Tyndall:
Cmara isenta de poeiras;
Juntamente com F. Cohn descobrem os esporos termorresistentes;
Tindalizao (esterilizao);
Tyndall/Cohn/Pasteur como resultado da actividade microbiana:
Fermentao Hidratos de Carbono lcool + c. Orgnicos;
Putrefaco decomposio das Protenas produtos de odor
nauseabundo;
Pasteur descobre que existem microorganismos que no necessitam de O
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(bactrias anaerbias);
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Os microorganismos podem provocar doenas nos homens e animais.
1705-1786:
Verona e Penciz:
Via de transmisso homem a homem.
1773-1856:
Agostinho Bassi:
O primeiro suporte para a teoria microbiana da doena (a doena do
bicho da seda era fngica).
1839:
Schnlein (Tinha favosa).
1827-1912:
Joseph Lister:
Trabalhos sobre antissepsia;
Vapores de c. Carbnico reduz a infeco no ps-operatrio.
1843-1910:
Robert Koch:
Estudo do Bacillus anthracis (carbnculo);
A 1. demonstrao directa do papel desenvolvido por uma bactria
no desenvolvimento de uma doena;
Postulados de Koch:
C Um microorganismo especfico deve estar associado a cada
doena;
C O microorganismo suspeito deve ser isolado em cultura no
laboratrio;
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C A inoculao daquela cultura deve ser capaz de produzir a
mesma doena num animal susceptvel;
C O mesmo microorganismo deve ser isolado a partir do
animal doente.
Pelo conhecimento actual:
Nem todos os microorganismos podem ser cultivados no
laboratrio (ex.: Treponema pallidum e Mycobacterium
leprae);
Nem todos os microorganismos patognicos para o Homem o
so para os animais (ex.: Vrus da Hepatite C).
1882:
Robert Koch:
Isola em cultura Mycobacterium tuberculosis (bacilo de Koch);
Isto foi possvel porque surgiram:
Meios slidos (gelatina);
Richard Petri (placa de Petri).
Nos seguintes 30 a 40 anos:
Pasteur e Koch descobrem, isolam e cultivam muitas das bactrias
conhecidas de hoje.
1892:
Dimitri Ivanovski:
Isola o 1. Vrus Mosaico do Tabaco;
Desenvolvimento das primeiras vacinas.
1749-1823:
Eduard Jenner:
Varola;
Pasteur e Chamberland:
Difteria e Ttano;
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1854-1917:
Emil Von Behringer:
Kitasato;
Paul Ehreich:
Difteria.
1845-1916:
Ellie Metchnikoff:
Imunidade inespecfica;
Descobre actividade bacteriana dos leuccitos (fagcitos)
fagocitose.
1900:
Walter Kud:
Febre amarela transmitida por um mosquito.
1906:
Fritz Schandin e Erich Hoffman;
Treponema pallidum Sfilis.
1921:
Alexander Fleming:
Descobre a lisozima (imunidade inespecfica).
1928:
Descobre a penicilina (quimioterapia) antibioterapia.
1933:
Ernest Ruska e Max Knoll:
Descobrem o microscpio electrnico;
Chaton:
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Descobre e divide os seres vivos em:
Eucaritas;
Procaritas.
1935:
Gerard Domagk:
Descobre a sulfonamida antibioterapia.
1944:
Oswald T. Avery, C. M. Mcleod e M. J. McCarty:
Processos de transformao bacteriana que possibilitam a possibilidade
de transferncia de material gentico de uma para outra bactria.
1953:
James Watson e Francis Corick:
Estudos de biologia molecular;
Descoberta da estrutura do DNA.
1892:
Cmara Pestana:
Fundador da bacteriologia em Portugal;
Director do Real Instituto Bacteriolgico de Lisboa;
Faleceu no Porto vtima da peste bubnica.
Durante as primeiras dcadas do sculo XX os microbiologistas
desenvolveram um trabalho no sentido de:
Estudar os microorganismos como fonte de doena;
A resposta imunitria do hospedeiro;
A pesquisa de novos antimicrobianos;
Avanaram no estudo do metabolismo microbiano.
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A partir da dcada de 40 em trabalho com bilogos e bioqumicos Biologia
Molecular e Gentica, surgem como novas reas de estudo e investigao.
TAXONOMIA MICROBIANA
Taxonomia Classificao (arrumao).
A taxonomia tem como base a espcie (estirpes geneticamente semelhantes).
Estirpe descendentes de uma colnia pura.
Outras caractersticas da espcie:
Caractersticas morfolgicas;
Necessidades nutricionais.
Espcies agrupadas em Gneros
Gneros agrupados em Famlias
Famlias agrupadas em Ordens
Ordem agrupada em Classe
Classe agrupada em Filo ou Diviso
Filo agrupado em Reino
CLASSIFICAO DOS SERES VIVOS
1735 Lineu:
Animalia
Reinos
Plantae
1886 Ernest Haeckel:
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Acrescenta um reino Protistas seres de organizao unicelular ou
multicelular sem diferenciao em tecidos (bactrias, protozorios, algas, bolores,
leveduras).
1940 A microscopia electrnica estudo da estrutura celular interna,
surgem:
Eucaritas
2 tipos
Procaritas
ORGANIZAO CELULAR EUCARITA
Ncleo com membrana nuclear;
Aparelho mittico;
DNA associado a histonas;
Ribossomas;
Cloroplastos (vegetal);
Mitocndrias;
Retculo endoplasmtico;
Aparelho de Golgi;
Vacolos (vegetal);
Flagelos;
Citoesqueleto;
Parede celular (vegetal).
ORGANIZAO CELULAR PROCARITA
Ribossomas;
Parede celular;
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CLULAS PROCARITICAS
Archaeobacteria bactrias produtoras de metano, desenvolvem-se em
meio hiper salino ou em temperaturas elevadas (termoflicas);
Eubactrias todas as bactrias incluindo as patognicas para o Homem,
bactrias do solo e da gua.
CLULAS EUCARITICAS
Fungos;
Algas;
Protozorios;
Plantas;
Animais.
TAXONOMIA DE WHITTAKER (1969)
Diviso em cinco reinos:
Plantae;
Animalia;
Protistas protozorios e algas unicelulares (eucariticas unicelulares);
Fungi bolores e leveduras;
Monera ou Procaryotae todas as bactrias procariticas.
Critrios de classificao
Tipo celular procariota e eucariota;
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Nvel de organizao solitria ou colonial, unicelular ou multicelular;
Tipos de nutrio fotossntese, digesto ou absoro.
Nesta classificao os microorganismos ficam em trs grupos:
Monera bactrias e cianobactrias;
Protistas algas unicelulares e protozorios;
Fungi bolores e leveduras.
TAXONOMIA DE CARL WOSE (1977)
Os seres vivos so divididos em trs domnios ou imprios:
Eukarya protozorios, algas, fungos, plantas e animais eucaritas;
Archaea bactrias metanognicas, termoflicas e haloflicas;
Bactria todas as bactrias patognicas, as bactrias do solo e da gua.
Esta nova designao baseia-se na composio bioqumica da membrana
(natureza dos lpidos, tipo molecular do RNA ribossmico mRNA).
Baseado nestes estudos defende-se que os eucaritas e os procaritas tm origem
numa mesma forma ancestral comum, mas que evoluiriam de uma forma diferente.
MICROORGANISMOS PROCARITAS
BACTRIAS PROCARITAS
MORFOLOGIA
Cocos e bacilos. Replicao por diviso binria.
Agrupamentos
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Cocos:
Diplococos;
Cadeia;
Cacho;
Tetrada.
Bacilos:
Isolados;
Cadeia curta;
Pleomorfismo:
Curvilneos;
Fusiformes;
Ondulados;
Espiralados.
Dimenso
De 100nm a 1,5m.
Tintagem (colorao de Gram)
Na microscopia ptica revelam-se com corantes.
A colorao de Gram tem valor taxonmico:
OCorante primrio Violeta de Cristal;
OMordente Soluto de Lugol;
ODescorante Etanol;
Corante de contraste Fucsina bsica.
Bactrias positivas ao Gram fixam o Violeta de Cristal; Parede
Bactrias negativas ao Gram fixam a Fucsina bsica. celular
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Parede celular
As Eubactrias possuem parede celular, com excepo das Mycoplasmas
(possuem apenas membrana celular).
A parede celular:
Confere proteco mecnica impede a lise da clula bacteriana em
meio hipotnico;
D forma bactria;
Determina o comportamento ao Gram
Peptidoglicano (Mucopeptideo ou Mureina)
Presente em todas as bactrias, com excepo das Archaeobactrias (parede
celular com pseudopeptidoglicano).
O peptidoglicano o constituinte rgido da estrutura parietal.
Diferena de comportamento ao Gram
A existncia de Gram + e Gram - deve-se a estrutura e qumica da parede
diferentes.
Diferenas mais relevantes
Bactrias Gram +:
No tm lpidos, com excepo dos trs gneros Mycobacterium,
Corynebacterium e Nocardia;
Elevada concentrao de peptidoglicano 50-90% do peso da
parede.
Bactrias Gram -:
Elevado teor em lpidos;
Baixa concentrao em peptidoglicano 10% do peso da parede.
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Composio qumica da parede celular bacteriana
Constituintes Gram + Gram -
Peptidoglicano + +/-
cidos Teicicos/Teicurnicos + +/-
Polissacardeos + -
Protenas +/- +
Lipossacardeos - +
Lpidos +/- +
Parede celular das bactrias Gram +
Constituio qumica
Peptidoglicano;
Outros heteropolmeros:
cidos Teicicos; ambos esto associados ao peptidoglicano
cidos Teicurnicos. mas no conferem rigidez
Peptidoglicano
Organizao tridimensional universal;
Macropolmero em forma de saco (muraina saculus);
Rgido/insolvel na gua;
Constitudo por dois aminocidos, com disposio linear alternada, ligados
por ligao glicosdica, que pode ser hidrolisada pela enzima lisozima
(aco murenica):
N-acetilglucosamina (NAG);
Acido N-acetil muranico (NAM) a cada molcula de NAM liga-se
um peptdeo (cadeia de 4 aminocidos), atravs de uma ligao
amina.
cidos Teicicos
Contm vestgios de glicerol e ribitol;
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So solveis na gua;
Localizam-se em toda a espessura da membrana;
Formam-se cidos lipoteicicos quando uma poro de cidos teicicos
que contm glicerol se liga ao glicopeptdeo do folheto exterior da
membrana citoplasmtica. Atravessam a parede celular dos bacilos Gram +
e constituem os antignios somticos dos bacilos Gram +;
A zona hidrfila dos cidos teicicos acessvel aos cidos especficos, o
que provoca a sua presena na superfcie celular.
cidos Teicurnicos
So as molculas que substituem os cidos teicicos quando as bactrias
crescem em meios pobres em fsforo por conterem galactosamina mais cido
glucornico.
cidos Teicicos e cidos Teicurnicos
So responsveis pela carga negativa da superfcie dos bacilos Gram +, atraindo
Mg
2+
e Ca
2+
.
Reduzem as represses electrostticas no polmero conferem estabilidade
estrutural.
Lpidos
Esto presentes nos gneros:
Mycobacterium;
Nocardia;
Corynebacteruium.
Estas bactrias tm lpidos de peso molecular elevado que torna a molcula
impermevel a vrios compostos.
O comprimento da cadeia dos cidos lipdicos tem valor taxonmico:
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C 24 - C 40 cidos corionomicolicos;
C 40 - C 60 cidos nocardicos;
C 60 - C 80 cidos micolicos.
So estes que tornam a molcula impermevel a vrios compostos.
No so por isso visveis na colorao de Gram, mas tm uma parede do tipo
Gram + complexa. Coram pela colorao Ziehl Neelsen com Fucsina concentrada e a
quente, resistindo descolorao pelo reagente de Ebner (lcool mais acido clordrico),
por isso so designadas Bacilos lcool cido Resistentes (BAAR).
O polissacardeo especfico dos BAAR a arabinogalactomanana.
Autolisinas endgenas
So enzimas muralticas (tipo amidase).
Localizam-se na membrana citoplasmtica. Durante o crescimento bacteriano
tm uma aco ltica fisiolgica (hidrolisam selectivamente peptidoglicano em
determinadas partes da parede bacteriana para a entrada de novas unidades de
peptidoglicano.
A sua aco controlada pelos cidos lipoteicicos e fosfolpidos. Se falharem
os mecanismos de represso ou forem activados pelas -lactamases, ocorre lise
bacteriana morte.
Parede celular de bactrias Gram
Constituio qumica
Lipossacardeos (LPS);
Fosfolpidos;
Protenas;
Porinas;
Protenas OMpA;
Autolisinas;
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Peptidoglicano.
Lipopolissacardeo (LPS)
Molcula mais caracterstica dos Gram -;
Principal endotoxina;
Molcula anflica:
Polissacardeo hidrfilo;
Lpido A hidrfobo.
Localizao folheto externo da membrana exterior;
Os LPS esto ligados membrana exterior pelo lpido A, e o polissacardeo
fica virado para o exterior da clula, sendo responsvel pela carga negativa
da bactria. Esta hidrofilia torna a molcula impermevel penetrao de
compostos hidrfobos;
Os LPS so os Antignios Somticos dos bacilos Gram -;
A fraco lpido A responsvel nas infeces clnicas por bacilos Gram -,
pelo aparecimento no hospedeiro de febre, inflamao e choque sptico;
Os LPS esto mais ou menos indirectamente envolvidos na activao de:
Macrfagos;
Linfcitos B;
Linfcitos T;
Sistema complemento;
Sistema de coagulao.
Fosfolpidos
Localizam-se na membrana exterior no folheto interno. Quando se deslocam
para o folheto externo tornam as bactrias permeveis a componentes hidrfobos.
Protenas
Localizam-se na membrana exterior.
Nos Gram a concentrao de protenas na parede celular elevada:
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Lipoprotenas;
So as mais abundantes;
Encontram-se livres ou ligadas ao peptidoglicano;
O seu principal papel conferir estabilidade bactria, podendo esta
sobreviver sem ela, mas lisam facilmente por diversos agentes.
Protenas OMpA;
Porinas Protenas que se organizam em poros ou canais onde passam
substncias hidroflicas (nutrientes para a bactria)
Protenas de transporte especfico de substncias na difuso atravs da
membrana exterior;
Autolisinas (enzimas hidrolticas) do peptidoglicano;
Nas bactrias Gram no se conhece:
Natureza;
Localizao;
Mecanismos de regulao.
Enzimas fosfolipase A e proteases.
Esquema da arquitectura molecular da parede celular das bactrias Gram -
CONSTITUIO
Parede celular
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Bactrias Gram -
Por microscopia electrnica verifica-se que constituda por duas membranas:
Membrana exterior;
Membrana interior membrana citoplasmtica.
O espao entre elas denomina-se espao periplasmtico.
A camada rgida R formada pelo peptidoglicano.
Espao periplasmtico
Composio polipeptidossacardeos;
Consistncia gel;
Espao vital para as clulas bacterianas;
Reservatrio de -lactamases;
Enzimas degradativas;
Enzimas de transporte aucares e aminocidos;
Quimioreceptores.
Funes de permeabilidade
Folheto externo (membrana externa) LPS;
Folheto interno (membrana externa) fosfolpidos.
Os antibiticos atravessam a membrana externa por dois processos:
Via hidroflica porinas;
Via hidrofbica bicamada fosfolipdica.
Canais de porinas (transmembranares)
varivel entre as bactrias;
Difuso passiva de compostos hidrfilos:
Membrana citoplasmtica
Bicamada permeabilidade selectiva:
Permevel e molculas lipfilas;
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Impermevel a molculas hidrfobas.
Funes de biossntese peptidoglicano;
Funes energticas metabolismo oxidativo.
Enterobactrias
A camada fosfolipdica impermevel.
A membrana citoplasmtica envolve o citoplasma celular.
Composio qumica:
Bicamada de fosfolpidos;
Protenas.
Archaeobactrias
Composio qumica:
Fosfolpidos;
Protenas;
Lpidos especiais.
Cpsula
Estrutura que envolve a parede celular em algumas bactrias.
Por microscopia electrnica (tinta da china), verifica-se um halo transparente
que envolve a bactria.
Natureza polissacardeo
Retm a gua e impede a dissecao da bactria.
Confere grande virulncia cpsula antifagocitria.
Estruturas intracitoplasmticas
Visveis em microscopia ptica;
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Coloraes especiais;
Esto presentes em algumas espcies.
Granulaes metacromticas (grnulos de volutina)
Colorao de Albert azul de metileno;
Constituem reserva de fsforo essencial para a sntese de cidos
nucleicos e Fosfolpidos da bactria.
Vacolos de Gaz
Para as bactrias fotossintticas;
Reserva de azoto;
Permite flutuar na gua.
Grnulos de glicognio
Coram pelo reagente de lugol;
Polmeros de glucose;
Reserva energtica.
Grnulos de lpidos
Coram pelo reagente de negro de sudo;
Reserva.
Ribossomas
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Dispersos no citoplasma bacteriano;
Local de sntese proteica;
Constitudos por protenas e cidos nucleicos.
Endosporos
Permitem a passagem da morfologia vegetativa em esporos;
Impede a dissecao celular sobrevivncia da bactria por centenas ou
milhares de anos;
Forma resistncia em condies hostis como:
Radiaes;
Detergentes;
Calor;
Antibiticos.
Os esporos preservam o material gentico, em boas condies, dando
origem a clulas vegetativas fenmeno de germinao.
Nucleide
Local da clula onde se localiza o material gentico DNA (material
nuclear);
Ausncia de membrana nuclear;
Aparelho mittico;
Tem um nico cromossoma;
Visvel em microscopia ptica com corantes bsicos;
O DNA cromossmico pode coexistir com o DNA plasmdico.
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Mobilidade bacteriana
Flagelos
rgo de locomoo;
Natureza proteica;
Visveis em microscopia ptica com corantes;
A sua localizao na bactria tem valor taxonmico:
Bactrias com flagelo polar montrico;
Flagelos polares anftrico;
Tufo de flagelos em um ou nos dois plos lofotricos;
Distribuem-se em toda a superfcie peritrica
Outras espcies movem-se por contractura de um conjunto de fibras situadas no
periplasma filamento axial com mobilidade deslizante.
Pilis e fimbrias (apndices bacterianos endocelulares que se projectam para o exterior
das clulas)
Pilis
Estrutura filamentosa de natureza proteica;
Visvel s na microscopia electrnica;
Permite o contacto entre clulas diferentes conjugao.
Fimbrias
Estrutura filamentosa de natureza proteica;
Visvel no microscpio electrnico ou por microscopia ptica aps
colorao;
rgo de aderncia bacteriana a outras clulas;
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Reconhece receptores celulares nas superfcies epiteliais.
MICROORGANISMOS EUCARIOTAS
MORFOLOGIA E ULTRAESTRUTURAS
EUCARIOTAS
Organismos unicelulares e pluricelulares que possuem membranas internas, com
ncleo individualizado existem espaos fsicos com funes diferentes.
ORGANISMOS EUCARIOTAS
Fungos, algas e protozorios (parasitas).
ORGANISMOS EUCARIOTAS MAIS SIMPLES
Leveduras.
ORGANISMOS EUCARIOTAS UNICELULARES COMPLEXOS
Protozorios.
ORGANISMOS UNICELULARES EUCARIOTAS
Constituem metade da biomassa da Terra porque:
So pequenos;
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Tm diviso rpida;
Consomem poucos nutrientes;
Adaptam-se facilmente a diversos ambientes
Sucesso na sua evoluo
As clulas eucariotas so mais complexas que as clulas procariotas.
O genoma maior e possui mecanismos de regulao e de expresso,
genotipicamente mais elaborados.
O DNA encontra-se num compartimento prprio delimitado por membranas o
ncleo.
No citoplasma h vrios constituintes (organitos) delimitados por membranas
com funes especiais.
CONSTITUIO
MEMBRANA CITOPLASMTICA
Constituio:
Fosfolpidos;
Protenas;
Esteris (mamferos colesterol).
PAREDE CELULAR
Eucariotas sem parede celular mamferos e alguns protozorios;
Eucariotas com parede celular algas, fungos e alguns protozorios.
Constituio:
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Peptidoglicano o glicano nos protozorios substitudo por
polissacardeos.
NCLEO
Possui invlucro nuclear constitudo por duas membranas:
Membrana nuclear externa;
Membrana nuclear interna.
As duas membranas delimitam um espao designado por cisterna perinuclear,
qual est intimamente ligado o retculo endoplasmtico.
Atravs da cisterna h transporte para o citoplasma de:
RNA mensageiro;
RNA de transferncia;
RNA ribossomal.
Transporte em sentido oposto:
Enzimas para replicao do DNA;
Enzimas de sntese do RNA.
MOLCULA DO DNA
Macromolcula que cabe no ncleo enrolada e que contm o patrimnio
gentico das clulas.
O DNA encapotado por protenas histonas.
DNA + histonas cromatina nuclear.
Heterocromatina periferia nuclear, zona menos densa.
Eucromatina interior do ncleo, zona menos densa concentra os genes
activos e inactivos.
NUCLOLO
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Estrutura nuclear em nmero varivel.
Funo sntese de ribossomas.
RIBOSSOMAS
Sntese proteica
No citoplasma so utilizadas todas as molculas que permitem clula crescer,
multiplicar-se, diferenciar-se e comunicar com as outras num organismo pluricelular.
Estas molculas com esta funo so na sua maioria proteicas.
As protenas cuja estrutura e consequente funo determinada pela sequencia
de pares do respectivo gene.
Cada gene que codifica uma protena inicialmente copiado no ncleo por um
mecanismo designado transcrio dando origem a uma molcula de RNA mensageiro
(RNA
m
).
Estas quando transportadas para o citoplasma associam-se a ribossomas. Aqui
ligam-se a outras molculas adaptadoras e denominam-se RNA de transferncia (RNA
t
).
A sequncia de nucletidos de cada RNA
m
traduzida numa sequncia de
aminocidos (protena).
As protenas tm na clula eucariota mltiplas funes:
Enzimas que caracterizam reaces especficas;
Transportadores de outras molculas.
Grande parte das protenas sintetizada nos ribossomas localizados no citosol
espao do citoplasma entre os organitos celulares.
Outras protenas so sintetizadas no ribossoma do retculo endoplasmtico
(protenas das membranas celulares, protenas lisossomais, protenas de secreo).
Muitos dos antibiticos usados actuam ao nvel do RNA
r
interagem com os
mecanismos do ribossoma.
Muitos interferem nas clulas procariotas, mas no nas eucariotas.
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Mas nas clulas eucariotas os ribossomas das mitocndrias so semelhantes s
procariotas o que leva intoxicao da clula.
RETCULO ENDOPLASMTICO
Labirinto intracelular constitudo por cisternas limitadas por membranas;
Retculo endoplasmtico rugoso cisterna revestida de ribossomas;
Retculo endoplasmtico liso no tem ribossomas.
Retculo endoplasmtico rugoso
H sntese de:
Protenas secretadas para o exterior da clula;
Protenas das membranas;
Enzimas lisossmicas.
No lmen do retculo as protenas sintetizadas nos seus ribossomas ligam-se a
um acar e transformam-se em glicoprotenas.
Retculo endoplasmtico liso
muito abundante nas clulas hepticas e musculares.
Nas clulas hepticas acumula-se no retculo liso:
Enzimas de sntese de lipoprotenas;
Enzimas de degradao das drogas e de outras substncias txicas;
Enzimas de sntese de hormonas esterides a partir do colesterol;
Sntese de protenas de transporte;
Protenas de sequestro de Ca abundantes no msculo.
APARELHO DE GOLGI
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Constitudo por cisternas e vesculas;
Intimamente ligado ao retculo endoplasmtico, recebendo deste as
protenas de secreo, onde sofrem modificaes qumicas.
No aparelho de Golgi onde se produzem as glicoprotenas.
VIA DA SECREO
Exocitose as vesculas libertam protenas para o meio extracelular.
Um mecanismo de secreo regula o armazenamento de protenas em grnulos
de secreo cuja exocitose s ocorre por um sinal exterior (ingesto de alimento).
Permite a digesto das LDL, fraco de colesterol, libertando o colesterol usado
como nutriente celular.
LISOSSOMAS
Sacos intracelulares que armazenam enzimas hidrolticas (enzimas
lisossomticas), activas em meio cido:
Proteases;
Lipases;
Fosfolipases;
Fosfatases.
DIAGNSTICO LABORATORIAL EM MICROBIOLOGIA
PESQUISA DE MICROORGANISMSOS INFECCIOSOS
PRODUTOS BIOLGICOS
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Expectorao;
Urina;
Fezes;
Corrimento vaginal ou uretral;
Lquidos: asctico, pleural e cefaloraqudeo;
Secrees nasais e larngeas;
Tecidos sangue;
rgos biopsias.
Para o isolamento dos microorganismos preciso respeitar:
Regras de colheita;
Transporte;
Processamento da amostra
COLHEITAS DAS AMOSTRAS BIOLGICAS
Isolar o agente da infeco implica colher a amostra no rgo ou sistema
infectado:
Infeco urinria urina;
Infeco respiratria secrees respiratrias;
Infeco gastrointestinal fezes;
Meningite LCR;
Infeco cutnea:
Exsudado de vescula;
Raspado de leso.
Na ausncia de sintomatologia sugestiva do local vrias colheitas de sangue.
Num pico febril hemocultura.
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O local para a colheita pode variar no decurso da doena dependendo do ciclo
biolgico do agente infeccioso.
Para o isolamento do agente responsvel, deve-se:
Colher a amostra antes de iniciar teraputica para no inibir o
crescimento in vitro;
Colher com material estril (seringa, zaragatoa, bisturi) para um
contentor estril.
Para evitar contaminao com microrganismos, quando se colhe uma amostra
estril, normalmente, sangue, lquido pleural, LCR, antes deve-se desinfectar a pele a
flora da pele contamina a amostra.
A colheita deve ser adequada e suficiente para a analise:
Expectorao sem saliva;
Ps do fundo do abcesso.
Por vezes so necessrias vrias colheitas em perodos diversos porque o
microorganismos tem uma presena intermitente.
Para manter alguns microrganismos viveis necessrio enviar a amostra
em meio de transporte adequado, que fornea:
pH adequado;
Protenas;
Atmosfera (CO
2
);
Enviar o produto em contentores rotulados (identificao do doente, servio e
cama).
CONSERVAO DOS PRODUTOS BIOLGICOS
Aps recepo so trabalhados o mais rapidamente possvel ou conservados no
frigorfico a 4C, salvo raras excepes.
IDENTIFICAO DO AGENTE INFECCIOSO
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Directamente no produto biolgico:
Pesquisa de antignios especficos;
Observao microscpica da morfologia microbiana raramente
possvel.
Aps cultura do produto:
Caracterizao bioqumica;
Caracterizao antignica;
Caracterizao do gentipo;
Teste da sensibilidade aos antibiticos ajuda na identificao.
DIAGNSTICO DIRECTO NO PRODUTO BIOLGICO
Exame microscpico directo;
Bactrias, parasitas, fungos em exame a fresco ou em exame corado
permite:
Diagnstico dos parasitas pelas caractersticas morfolgicas;
Raras vezes serve para os fungos;
Impossvel para quase todas as bactrias.
Deteco dos antignios especficos, evidenciados pelo uso de anticorpos
especficos:
Imunofluorescncia anticorpos marcados com corante fluorescente
para observao com microscopia fluorescente;
Mtodos imunoenzimticos (ELISA) pesquisa com anticorpos por
reaco colorimtrica;
Reaco de aglutinao em ltex partculas de ltex revestidas
com anticorpos especficos.
Deteco de sequncias genmicas, com pesquisa de nucletidos
especficos:
A pesquisa feita directamente no produto biolgico, com
extraco do genoma (DNA) hibridao;
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Aps a extraco do genoma no produto biolgico, amplia-se o
nmero de sequncias especficas utilizando uma enzima, para
aumentar a sensibilidade da tcnica.
DIAGNSTICO APS CULTURA DO PRODUTO
Caracterizao bioqumica:
PCR (Polymerase Chain Reaction) efectua-se com sondas
(sequncias de nucletidos complementares das sequncias
especficas que pesquisamos) hibridao (complementaridade de
base nucletida);
Caracterizao antignica:
Diferentes tcnicas serolgicas;
Reaco antignio/anticorpo;
Caracterizao genotpica:
Classificar os microorganismos de acordo com diferentes padres de
sequncia genmica tcnica de hibridao.
Teste de sensibilidade aos antibiticos (antibiograma) conhecer o
padro de sensibilidade teraputica fundamental porque tm surgido
bactrias muito resistentes. Existem vrias tcnicas para efectuar o TSA.
Este baseia-se na capacidade de um microorganismos se multiplicar in
vitro na presena de diferentes antibiticos:
Mtodo de difuso:
Meio slido em placa de Petri;
Semeia-se uma suspenso bacteriana;
Discos de papel impregnados de antibiticos;
Aps a incubao temperatura adequado, faz-se a leitura
mediao do halo de inibio do crescimento em volta do disco em
mm;
Resultado:
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Resistente no forma halo;
Sensvel forma halo.
Mtodo de diluio:
Meio de cultura semi-slido ou lquido;
Antibitico em concentrao crescente;
Suspenso bacteriana sempre igual;
Leitura e avaliao no caldo de turvao, podendo avaliar:
CMI (concentrao mnima inibitria) que impede o
crescimento bacteriano;
CMB (concentrao mnima que leva morte de 99% das
bactrias).
Cultura e isolamento
Bactrias, fungos, parasitas e vrus:
Meios adequados que permitam a multiplicao bacteriana;
Vrus e microorganismos intracelulares so cultivados em clulas do
Homem, animais ou embries;
Os produtos biolgicos so semeados directamente nos meios de cultura;
Algumas amostras antes de serem cultivadas tm de ser tratadas;
As culturas de produtos biolgicos com flora residente exigem meios
selectivos que favoream o crescimento dos microorganismos
potencialmente patognicos;
Culturas incubadas atmosfera, humidade e temperatura adequadas;
O tempo de incubao depende da capacidade de replicao:
Crescimento rpido 18-24h;
Crescimento fastidioso 48-72h;
Anaerbios estritos 48-96h.
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Colnias bacterianas so a forma de deteco do crescimento de fungos
e bactrias;
Efeito citopatognico (ECP) um vrus em crescimento detectado por
alteraes morfolgicas nas clulas infectadas.
DETECO DA RESPOSTA IMUNE ESPECFICA CONTRA O AGENTE
INFECCIOSO
Quando no possvel identificar o microorganismo recorre-se tcnica
imunolgica que permite avaliar a resposta imune do hospedeiro infectado.
Os microorganismos so nos hospedeiros antignios e induzem a resposta
especfica imunohumoral e celular.
Deteco da resposta imunohumoral
Diagnstico serolgico
Pesquisa de anticorpos ou antignios especficos.
A resposta humoral est ligada actividade dos linfcitos B, estas clulas
produzem anticorpos e estes ligam-se especificamente aos antignios que o organismo
no reconhece como seus e quer eliminar.
Os anticorpos pesquisam-se no soro, plasma, urina e outros lquidos biolgicos.
Quantificao dos anticorpos
determinante para efectuar o diagnstico. As reaces antignio/anticorpo
fazem-se em diluies seriadas do soro do doente.
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Ttulo de anticorpo o inverso da mais alta diluio do soro que d ainda
resultado positivo.
S por si a presena de anticorpos especficos no afirma que o doente est
infectado mas necessrio avaliar a evoluo do ttulo de anticorpos especficos:
1. colheita de soro na fase de doena;
2. colheita de soro na fase de convalescena.
Estas duas colheitas efectuam-se com pelo menos 15 dias de intervalo.
Os anticorpos especficos surgem entre a 1. e 2. semana, aps o contacto com o
microorganismo.
Atingem posteriormente o valor mximo e descem para valores basais.
Interpretao das provas serolgicas
Limitaes;
Resultados positivos;
Falsos resultados positivos.
Reaco cruzada acontece com testes muito sensveis mas pouco especficos,
porque os antignios usados so comuns a outros microorganismos.
Os resultados positivos devem sempre que possvel ser confirmados por tcnicas
mais especficas.
Devemos titular os anticorpos e determinar a classe para avaliar a possibilidade
da relao com a infeco aguda.
Resultados negativos
Se h grande suspeita de infeco deve repetir-se a colheita mais tarde, pois a
primeira colheita pode ter sido precoce, no h ainda anticorpos detectveis.
H pessoas imunocomprometidas, isto , no respondem s infeces com
produo de anticorpos a um nvel detectvel.
Exemplos de pessoas imunocomprometidas:
Doentes do foro oncolgico;
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Diabticos;
Cirrticos;
Insuficientes renais;
Doentes muito idosos.
Isto so doentes que tm uma patologia de base muito debilitante.
Resposta imunocelular
Depende da actividade dos linfcitos T que so responsveis pela resposta
inflamatria local intradermo-reaco (tumefaco limitada, zona quente). a reaco
inoculao intradrmica de antignios de agentes infecciosos.
A reaco positiva da intradermo-reaco serve quando positiva para dizer que j
houve contacto anterior com o agente infeccioso.
Pessoas anrgicas (reaco infectiva)
Pessoas sem contacto com o agente;
Pessoas no incio da infeco;
Pessoas imunocomprometidas.
Deciso diagnstica
H microorganismos que so sempre considerados agentes patognicos. A sua
identificao leva sempre ao incio da teraputica.
A identificao de um microorganismo tem muito significado se a amostra
colhida em local estril habitualmente.
A identificao de microorganismos em locais onde existe flora comensal
analisada com cuidado resposta imune.
Deve ainda ter-se nesse caso em ateno o nmero de microorganismos e de
considerar se for elevada a presena, e verificar se h reaco serolgica compatvel.
Uma subida de ttulo do 1. soro para o 2. soro indica infeco recente. Uma
manuteno do ttulo ou baixa ndice de que houve contacto com o microorganismo
no passado mas agora ele no causa de doena.
Determinao da classe de anticorpos
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Deve determinar-se sempre que possvel a classe dos anticorpos que reagem
especificamente com o antignio:
IgM surgem no incio da infeco e persistem at cerca de dois meses
(fase aguda da doena) revelam um contacto recente com o antignio
especfico (por vezes at um ano);
IgG na convalescena as IgG substituem as IgM e podem ficar com os
ttulos residuais toda a vida;
IgA surgem logo no incio da doena e permitem a sua deteco em
diagnstico precoce.
Mtodos utilizados para a deteco de anticorpos e antignios
Reaces imunoenzimticas;
Reaces de imunofluorescncia;
Reaces de aglutinao;
Reaces de inibio de hemaglutinao;
Reaces de imunodifuso;
Reaces de fixao do complemento;
Reaces de seroneutralizao.
VRUS
CARACTERSTICAS VIRAIS
Dimenso submicroscpica;
Intracelular obrigatrio;
Contm informao gentica num nico tipo de cido nucleico, DNA e
RNA;
Partculas formadas por estruturas proteicas repetitivas e regulares
encerrando o cido nucleico viral;
No tm metabolismo;
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No produzem energia.
DEFINIO DE VRUS
Entidade potencialmente patognica cujo genoma so cidos nucleicos que se
replicam no interior de clulas vivas usando o equipamento de sntese celular e que
sintetizem partculas que transmitem o genoma a outras clulas.
DUAS PROPRIEDADES ESSENCIAIS AOS VRUS
Tm material gentico prprio;
Utilizam o equipamento bioqumico da clula infectada parasitismo
gentico.
FASE EXTRACELULAR
Partculas inertes produzidas na clula sobre o comando de vrus que levam a
informao gentica viral para outras clulas.
DEFINIO VIRAL NA PERSPECTIVA DE BIOLOGIA MOLECULAR
(Rybicki)
Elemento unitrio de uma linhagem contnua com histria evolutiva
individualizada.
CRITRIO DE VIDA
Capacidade de replicao;
Transmisso de informao gentica;
Evoluo.
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Ambiguidade na definio de biologia molecular:
Plasmdeo replicao autnoma, codifica protenas e so
transmissveis. Ao contrrio dos vrus no tm fase extracelular;
Virides so patognicos das plantas com uma molcula de RNA, sem
genes e sem capside;
Pries:
No tm cido nucleico;
Protenas molecular mutada que forma agregados infecciosos.
CICLO VIRAL
Ciclo infeccioso que inclui diversas fases:
O Interaco do vrus com a clula:
Adsoro membrana da clula;
Penetrao na clula.
Segue-se a esta fase inicial o elipse viral no se consegue detectar o
vrus. Corresponde ao perodo de sntese dos componentes para formar novas
partculas viras (enzimas, cidos nucleicos e protenas).
O Fase de maturao:
Detectam-se aps novos vrus com produo exponencial que se vo
libertar na fase final extruso;
Pode ocorrer a morte celular entre 6 e 48 horas.
Este ciclo que leva produo de novos vrus e morte da clula o ciclo
infeccioso completo ciclo ltico ou produtivo. Ocorre nas clulas permissivas.
CICLO ABORTIVO
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Quando o vrus no consegue expressar todas as funes necessrias
sntese de novos vrus, chamam-se a estes vrus defectivos;
As clulas no so permissivas ocorre a sntese de alguns compostos
mas no h produo final de vrus infecciosos.
INFECO LATENTE
Quando o genoma viral fica na clula muito tempo mas no h formao de
novos vrus.
MORFOLOGIA
As partculas virais so constitudas por:
Cpsula proteica encerra o nucleide;
Nucleide constitudo pelo cido nucleico e protenas virais;
Nucleocapside capside mais nucleide;
Invlucro reveste alguns derivados da membrana celular.
FORMA/ESTRUTURA/DIMENSO
Esfricos, bastonete rgido, filamento flexvel;
Icosadrica (vinte faces triangulares), helicoidal;
20-45nm.
CLASSIFICAO E TAXONOMIA
Principais critrios usados:
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Tipo e estrutura do genoma:
DNA e RNA;
DNA de cadeia linear ou circular, de cadeia simples ou dupla;
RNA de cadeia dupla ou simples. Se a cadeia simples pode ter uma
sequncia igual ao RNA
m
ou RNA complementar;
Genoma segmentado dividido em mais do que uma molcula.
Estrutura icosadrica, helicoidal, mista, com ou sem invlucro;
Tipo de hospedeiro vertebrados; invertebrados, plantas, fungos ou
bactrias.
Para estabelecer a diferena entre gnero e espcie acrescentam-se mais critrios
aos anteriores:
Nmero e tipo de protenas;
Estratgia de replicao viral;
Processo de transcrio;
Propriedades fsico-qumicas;
Relaes antignicas.
A classificao actual abrange 3600 vrus que constituem 75 famlias.
CLASSIFICAO DE VRUS DE VERTEBRADOS
Genoma Morfologia Famlia Exemplo
DNA
Cadeia dupla linear
Cadeia mista
Icosadrica com
invlucro
Icosadrica sem
invlucro
Herpes viridae Herpes
simples
Poxviridae Varola
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RNA
Cadeia simples RNA
m
Icosadrica Picornaviridae Poliomielite
Icosadrica Flaviridae Febre amarela
Icosadrica Togaviridae Rubola
Cadeia segmentada Helicoidal Orthomyxovirida
e
Gripe
Cadeia no segmentada Helicoidal Paramyxoviridae Sarampo
RNA-DNA Icosadrica Retroviridae HIV
PROCESSO DE PRODUO DE VRUS
Inclui diversas fases:
Absoro:
Adsoro do vrus (protenas) aos receptores da membrana celular
(protenas ou polissacardeos);
O tipo de receptor factor muito importante na susceptibilidade da
clula infeco;
Alguns vrus tm grande especialidade de hospedeiros.
Penetrao:
Translocao da partcula para o citoplasma da clula;
Fuso do invlucro do vrus com a membrana celular;
Endocitose por endossomas mediada por receptores.
Descapsidao perda da cpsula, pode acontecer no citoplasma ou no
ncleo celular e pode ocorrer logo depois da penetrao;
Fase sinttica fase de sntese de componentes virais (enzimas
reguladoras ou estruturais) e a replicao do genoma viral;
Montagem e extruso:
Os componentes do vrus recm-sintetizados so montados em
partculas mais ou menos complexas;
O local de replicao pode ser o citoplasma ou o ncleo;
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Excepo para os retrovrus cujas partculas imaturas ficam junto da
membrana celular onde adquire o invlucro e sai da clula por
gemulao;
Excepo para os herpes, vrus de replicao nuclear, a maturao
faz-se entre os dois folhetos da membrana nuclear. Os vrus so
posteriormente transportados para o exterior pelo retculo
endoplasmtico sem entrar em contacto com o citoplasma. O
invlucro de natureza nuclear.
ESTRATGIA DO GENOMA VIRAL
Vrios tipos de vrus e diversos genomas implicam diversos mecanismos de
expresso de informao gentica e replicao do genoma.
A replicao viral tem sem excepo uma via comum.
O RNA
m
traduzido em protenas pelo equipamento das clulas:
Ribossomas;
RNA
t
.
De acordo com esta via, Baltimore classificou-os em grupos de estratgia.
CLASSIFICAO DE BALTIMORE (vrus dos vertebrados)
Grupo I vrus de DNA de cadeia dupla de replicao nuclear ou
citoplasmtica. O genoma viral transcrito em RNA
m
por enzimas
celulares ou enzimas virais. Decorre em duas fases:
1. fase o DNA transcrito em RNA
m
precoce e este traduzido em
DNA a polimerase que replica o DNA viral;
2. fase novo RNA
m
dito tardio traduzido em outras protenas do
vrus.
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Grupo II vrus com DNA de cadeia simples. O genoma convertido
numa molcula de cadeia dupla (forma replicativa) que serve de molde
para a transcrio do RNA
m
e replicao que como nos vrus do grupo I
d-se com enzimas celulares;
Grupo III vrus com RNA de cadeia dupla. O RNA viral dentro do
nucleide transcrito em RNA
+
por uma polimerase presente na capside
viral. O RNA
+
serve de RNA
m
e serve de molde para a sntese de RNA
viral de cadeia dupla RNA
-
;
Grupo IV nos vrus RNA
+
, o RNA viral pode ser usado como RNA
m
que codifica e replica RNA viral;
Grupo V nos vrus RNA
-
este transcrito em RNA complementar que
serve de RNA
m
. As clulas no tm RNA polimerases que usam RNA
como molde. Uma enzima deste tipo transcriptase est presente no
prprio vrus, sintetiza o RNA
+
que transcrito em RNA complementar;
Grupo VI retrovrus. O RNA transcrito numa molcula de DNA de
cadeia dupla por uma enzima presente no vrus a retranscriptase. Este
DNA replicado e transcrito em RNA
m
por enzimas celulares como se
fosse DNA celular.

Protenas do vrus modificam a transcrio com
produo de RNA
+
, que encapsidado como RNA viral;
Grupo VII vrus com DNA de cadeia dupla (vrus da hepatite B). Em
zonas do genoma a cadeia simples, esta preenchida por enzimas
celulares. Uma RNA polimerase celular transcreve esta cadeia reparada
em RNA
m
e em RNA que cobre todo o genoma. Este RNA
+
o molde
para a sntese de um hbrido RNA-DNA custa de uma transcriptase
reversa e o hbrido convertido em RNA viral.

VRUS DA HEPATITE B (HBV)
Grupo hepadnavirus.
Tipo do genoma DNA circular.
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ANTIGNIOS IMPORTANTES
HBsAg Ag de superfcie do vrus;
HBeAg Ag do invlucro ou nucleocapside;
HBcAg Ag do core.
O vrus localiza-se no sangue e pode disseminar-se, por replicao no tecido
linfide, fgado e sangue.
Incubao 1-3 meses.
Quando aumenta a leso heptica aparecem os sintomas clnicos.
MARCADORES DA HEPATITE B
HBsAg indica infectividade do sangue;
HBsAc Ac contra o Ag de superfcie. Fornece imunidade, no est
presente nos indivduos portadores. Imunidade aps infeco ou aps
vacinao. Nunca est presente nos portadores;
HBeAg Ag da nucleocapside. Indica transmissibilidades;
HBeAc Ac do Ag do invlucro. Indica baixa transmissibilidade;
HBcAg Ag do core;
HBcAc Ac do Ag do core, que aparece na fase inicial.
MARCADORES SEROLGICOS
O Seroconveno:
HBeAg desaparece;
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Anti-HBe aparece;
indica
Replicao viral evoluo para cura.
O Reactivao da infeco:
HBeAg reaparece;
95% dos casos de infeco HBV evoluem para cura, HBsAg e
HBeAg desaparecem. Surgem estes Ac:
Anti-HBc;
Anti-HBe;
Anti-HBs.
5% infocrnica.
O Hepatite activa, esto presentes fase aguda:
HBsAg;
IgM anti-HBc.
O Hepatite crnica aps 6 meses determinam-se:
No soro:
HBsAg;
IgM anti-Hbc.
Em biopsia heptica:
HBeAg hepatite crnica nativa;
Anti-HBe H.C. mutante.
O Cura, podem desaparecer passado meses:
Anti-HBs;
Anti-HBe.
Vacinados contra VHB
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Pelculas sintetizadas.
Ficam nos imunizados anti-HBs.
Recm-nascidos
Me com imunidade de infeco antiga.
RN apresenta durante meses, porque atravessam a placenta:
Anti-HBs;
Anti-HBe.
GRFICO DE SEROLOGIA E MARCADORES DA HEPATITE B
PROPRIEDADES BIOLGICAS DAS PRINCIPAIS CLASSES DE
IMUNOGLOBULINAS EM HUMANOS
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__________________________________________________________ Microbiologia
Designao IgG IgA IgM IgD IgE
Principais caractersticas
Ig interna
mais
abundante
Proteco
das
superfcies
externas
Muito
eficiente na
bacteriemia
Principalment
e actua como
receptor nos
linfcitos
Inicia a inflamao,
elevada nas infeces
parasitrias, causa
sndromes alrgicas
Ligao ao antignio ++ ++ ++ ++ ++
Fixao do complemento + - +++ + -
Passagem transplacentria ++ - - - -
Fixao a mastcitos e
basfilos homlogos
- - - - ++
Ligao a macrfagos e
polimorfos
+++ + - - +
RICKTESIAS
MORFOLOGIA
Bacilos Gram -:
Coram fracamente pelo Gram;
Corante mais usado Gimenez. Adquirem cor vermelha visveis no
microscpio ptico.
Formas cocobacilares;
Tamanho varivel das diferentes estirpes mais pequenas que as
restantes bactrias;
Aerbias obrigatrias;
Imveis;
Crescimento lento bactrias fastidiosas;
Tm DNA e RNA;
Parede celular bacteriana;
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__________________________________________________________ Microbiologia
Equipamento enzimtico complexo;
Reproduzem-se por diviso binria;
Organizao celular procariota;
Intracelulares;
Sensveis a antibiticos de largo espectro Cloranfenicol e Tetraciclina.
Morfologicamente e fisiologicamente as Ricktesias ficam entre as bactrias e os
vrus.
Desenvolvem-se obrigatoriamente em tecidos e clulas embrionrias
citoplasma e por vezes no ncleo da clula do hospedeiro:
Ciclo de vida;
Transmisso.
RESERVATRIO
Pequenos roedores ratos caseiros;
Pulgas, piolhos, carraas artrpodes;
S acidentalmente no Homem e outros vertebrados caprinos, outros.
CADEIA DE TRANSMISSO
Multiplica-se no artrpode reservatrio;
Transmite-se ao Homem ou a outros vertebrados por picada do artrpode
infectado carraa, piolho, pulga;
No caso da Coxiella burnetii o hospedeiro acidental pode ser infectado
directamente
Aps multiplicao no interior da clula reservatrio (infectada) as enzimas da
Ricktesia promovem a lise da parede celular do hospedeiro.
Quando libertas (vida extracelular) perdem rapidamente o poder infectante.
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__________________________________________________________ Microbiologia
No sobrevivem dissecao. Excepto Coxiella burnetii que muito resistente
assim pode haver contgio directo com o Homem. Esta no necessita de vectores
artrpodes.
RESITNCIA AOS DESINFECTANTES
Com a Coxiella burnetii, a mais resistente, deve usar-se:
Formaldeido 5%;
gua oxigenada 5%.
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO
Difcil isolamento;
Perigosa manipulao cmara de classe III perigo de transmisso
atravs de aerossis infectados;
Cultura em tecidos ou embries laboratrio especializado.
SEROLOGIA DIAGNSTICO PRESUNTIVO (rotina laboratorial)
Reaco de Weil Felix que utiliza antignios homlogos da estirpe Proteus
vulgaris OX 19; OX 2; OX K:
Aglutinam com os anticorpos produzidos contra a Ricktesia (dos grupos
do Tifo e Febre);
Reaco sempre negativa para a Coxiella burnetii agente da febre;
INCUBAO DAS DOENAS
Agrupam-se de acordo com a morfologia, cultura e tipo de infeco. Provocam:
Febre;
Mialgias; Toxinas da
Leso cardaca; Ricktesia
Hemorragia.
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RELAES PARASITA-HOSPEDEIRO
Parasitismo se o microorganismo beneficia na relao com o hospedeiro em
detrimento deste.
Comensalismo quando um beneficiado e o outro no prejudicado;
Mutualismo quando ambos beneficiam.
equilbrio
Floram comensal hospedeiro
Flora comensal microorganismos residentes num local do hospedeiro sem
provocar doena adaptao.
O hospedeiro fornece condies de residncia aos microorganismos no local:
Nutrientes;
pH;
Humidade;
Temperatura.
adequadas ao crescimento bacteriano.
ZONAS DE COLONIZAO
Cavidade bucal;
Tracto gastrointestinal;
Tracto respiratrio superior fossas nasais e nasofaringe;
Pele.
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COMO SURGE A COLONIZAO
Antes do nascimento vivemos em condies estreis, ao nascer comea a
colonizao. Varia em alguns locais com a idade e com o sexo do hospedeiro.
A flora constituda, por ordem crescente:
Bactrias;
Leveduras;
Parasitas.
BENEFCIOS E RISCOS DA FLORA COMENSAL PARA O HOSPEDEIRO
Barreira de defesa contra as infeces impedem a colonizao da sua
zona de residncia por outras bactrias (so selectivos), mantendo assim
o equilbrio das diversas populaes residentes no local;
Potenciais patognicos podem provocar doena em caso de se romper
o equilbrio entre ambos.
MECANISMOS DE REGULAO DO HOSPEDEIRO NA FLORA COMENSAL
PELE
pH cido e lisozima (suor) tm ambos aco bactericida;
Produo de cido lctico, pela presena de:
Staphylococcus epidermidis;
Staphylococcus aureus.
Propionibacterium acne digesto da gordura da pele que impede os
fungos de se instalarem;
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A pele a primeira barreira do hospedeiro.
TRACTO RESPIRATRIO
Colonizao da mucosa nasal:
Staphylococcus aureus;
Staphylococcus epidermidis;
Haemophilus influenzae;
Difterides;
Streptococcus pneumoniae;
Neisseria.
Mucosa nasal constitui uma barreira de defesa colonizao do tracto
respiratrio inferior (brnquios, traqueia e alvolos pulmonares);
Movimento ciliar impede mecanicamente a entrada de partculas e
bactrias, com um movimento de dentro para fora (os fumadores tm
reduo do movimento ciliar, devido ao calor, tendo maior predisposio
para infeces respiratrias;
Muco nasal rico em lisozima (bactericida);
Presena de comensais ajuda a que no se instalem novas populaes.
CAVIDADE ORAL
A humidade da mucosa e os resduos alimentares favorecem o
crescimento de uma flora muito varivel;
A flora aerbia predominante Streptococcus alfa-hemoltico;
Anaerbios facultativos:
Lactobacilus;
Bacterides;
Actinomyces;
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Candida.
TRACTO GASTROINTESTINAL
A saliva arrasta parcialmente a flora para o estmago, mas so residentes em
pouca quantidade por aco do suco gstrico pH muito baixo incompatvel com a
sobrevivncia da maioria das bactrias.
Estmago
Streptococcus;
Staphylococcus;
Candida;
Haemophilus pylori.
Intestino alto
Pouca flora similar anterior, destruda por:
Suco gstrico;
Blis;
Suco pancretico.
Intestino grosso
pH alcalino;
Fermentao dos alimentos, com a ajuda da flora;
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Predispem ao desenvolvimento das bactrias:
Bactrias anaerbias bacterides;
Enterobactrias Estrectcia coli;
Enterococcus fecalis;
Leveduras Candida albicans;
Parasita Trichomonas hominis.
Mecanismos de regulao da populao
Peristaltismo;
Fezes;
Muco lisozima;
Dieta.
O que pode desequilibrar o ecossistema
Alterao da dieta;
Stress altera o peristaltismo;
Antibiticos destroem os patognicos e a flora comensal podendo
seleccionar bactrias multiresistentes.
TRACTO GENITO-URINRIO
Rins;
Uretra; estreis
Bexiga.
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URETRA TERMINAL
Tem flora proveniente do tracto intestinal, mas que removida pela urina:
Staphylococcus epidermidis;
Enterococcus fecalis;
Enterobactrias Estrectcia coli.
Pode ocorrer infeco por maior parte da populao, devido a ascenso no tracto
urinrio colonizao da bexiga (cistite) at ao rim (pielonefrite), devido a:
Alterao do pH;
Desidratao;
M higiene;
Defeitos congnitos.
TRACTO GENITAL
Varia com o sexo;
Varia com a idade;
Na mulher o pH cido:
Bacilos Dderlein perodo frtil;
Leveduras;
Enterococos;
Enterobactrias.
DOENA INFECCIOSA
Doena infecciosa sintomas clnicos;
Infeco assintomtica sem sintomas clnicos.
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Portadores perigo para a sade pblica transmitem o agente infeccioso ao
indivduo susceptvel:
Portadores em fase de incubao transmitem a doena antes de se
manifestarem sintomas. Perodo de incubao perodo entre o
contacto com o agente microbiano e o aparecimento dos sintomas;
Portadores convalescentes so infectantes aps a fase aguda;
Portadores crnicos podem ser infectantes toda a vida.
IMUNIDADE
Mecanismos de defesa do organismo:
Imunidade inata imunidade natural e prpria de cada indivduo;
Imunidade rcica resistncia de uma raa natural a um agente
infeccioso;
Imunidade adquirida:
Activa (natural) adquirida por contactos, com o tempo;
Passiva vacinao.
Hospedeiro susceptvel:
Defesas deficientes;
Defesas inexistentes.
Imunodeficincia adquirida ou imunocomprometimento risco acrescido de
infeces oportunistas (flora comensal endgena ou oportunistas exgenos).
VIAS DE TRASNMISSO NA DOENA INFECCIOSA
Transmisso directa Homem a Homem:
Aerossis contaminados;
Produtos biolgicos:
Saliva;
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Sangue;
Urina;
Fezes.
Transmisso indirecta vectores (moscas, mosquitos, carraas
artrpodes):
Reservatrios se h multiplicao do agente (essencial ao ciclo de
vida parasita);
Passivos apenas transmitem.
MECANISMOS DE DEFESA CONTRA AS INFECES
DEFESAS MECNICAS
Integridade estrutural;
Qumica das clulas queratinizadas no atacadas pelas enzimas dos
microorganismos;
Glndulas sebceas e sudorparas;
cidos gordos esterificados (anti-microbianos) pH cido;
Flora comensal pH cido;
Clios colicinas.
DEFESAS QUMICAS
Muco;
Lisozina;
Lactoferrine;
IgA.
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DEFESAS INTERNAS
Fagcitos defesa no especfica dos tecidos;
Anticorpos defesa especfica.
DEFESA HUMORAL
Anticorpos;
Mediadores de reaco activadores do complemento (inactivo a 55C)
SISTEMAS DO COMPLEMENTO
Activado, produz em cascata vrios factores (factores do complemento) de
natureza proteica e actividade protesica e inibitria actividade citoltica (receptores
de clulas fagocitaicais, mastcitos e basfilos).
VIAS DE ACTIVAO
Via clssica activada pelo complexo Ag/Ac, que amplia a aco;
Via alternativa ligao directa ao microorganismo.
ANTICORPOS IMUNOGLOBULINAS
Podem ser classificadas em:
Aglutininas;
Precipitinas;
Opsoninas;
Citosinas.
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Classes de imunoglobulinas (por ultracentrifugao)
IgM macroglobulinas;
IgG;
IgA;
IgD;
IgE.
So constitudas por cadeias leves (L) e pesadas (H), dois fragmentos Fab
(factores de ligao ao Ag) e um fragmento Fc.
So produzidas nos linfcitos B.
A sua actividade antimicrobiana deve-se ao envolvimento de:
Neutralizao eliminao de toxinas;
Opsonizao actividade fagocitria;
Activao do complemento via clssica;
Citotoxicidade;
Inactivao;
Bloqueio dos receptores impede a aderncia s cpsulas alvo;
Sensibilizao celular ligao s clulas para destruio dos
microorganismos;
Aglutinao formao de complexos Ag/Ac para eliminao,
impedindo a sua solubilizao.
INTERFERES
Actividade antivrica.
Impedem a replicao viral nas clulas infectadas.
PROTENAS DE FASE AGUDA
Protenas plasmticas de sntese heptica:
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Protena C reactiva;
Fibrinognio;
Factor C
3
do complemento;
2 macroglobulina;
Transportadores haptoglobina e cerulopasmina.
FAGCITOS
Tecidos macrfagos;
Circulao:
Granuloritos neutrfilos;
Granuloritos Eosinfilos;
Moncitos.
INTERLEUCINAS E CITOCINAS
Mediadores dos leuccitos.
FACTORES DE VIRULNCIA DOS MICROORGANISMOS MECANISMOS
DE FUGA S DEFESAS DO HOSPEDEIRO
Adeso ao hospedeiro;
Disseminao invaso;
Localizao;
Induo de leso.
INTERACES NO ESPECFICAS
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Atraco de polaridade oposta ou ligaes covalentes.
INTERACES ESPECFICAS
Receptores celulares do hospedeiro (fraco glucdica que est
envolvida):
Glicoprotenas;
Glicolpidos;
Proteoglicanos.
Receptores das bactrias adesinas (fraco proteica):
Fmbrias;
Fibrilas.
TOXINAS
Molculas txicas que matam ou lesam as clulas do hospedeiro. Permitem a
invaso e a colonizao do hospedeiro:
Exotoxina secretada pela bactria para o meio ambiente;
Endotoxina molculas da estrutura da prpria bactria.
Como actuam
Sobre a membrana celular lise;
Aco intracelular:
Inibidores de sntese proteica;
Activadores enzimticos;
Inibem a transmisso de impulsos nervosos leso neurolgica
(paralisia).
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ENZIMAS
Coagulase leva formao de cogulos. Promove neste a
multiplicao dos microorganismos e foge ao ataque do sistema
imunitrio (camuflagem);
Hidrolise:
Fibrinolisina lise da fibrina;
Hialuronidase tecido conjuntivo;
Proteinases;
Nucleases;
Colagenases;
Lipases.
Invaso e disseminao dos microorganismos.
RESISTNCIA AO COMPLEMENTO
Gram + possuem peptidoglicano que as torna resistentes lise mediada
pelo complemento;
Gram - algumas destas bactrias inibem os mecanismos de adeso do
complemento (lipopolissacardeos).
ESCAPE FAGOCITOSE
Impedem a chegada de clulas fagocitrias ao local de leso, segregando
substncias que impedem a quimiotaxia dos granulcitos e moncitos;
Impedem a activao do complemento sua superfcie:
Cpsula polissacardeo;
Protena M Streptococcus;
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Protena A Staphylococcus.
Bloqueiam os receptores de ligao clula fagocitria.
PARASISTISMO INTRACELULAR
Infectam as clulas e destroem os tecidos por lise das prprias clulas ou no
promovem a lise, o prprio mecanismo de defesa do hospedeiro que provoca a sua
morte.
INFECO DE CLULAS EPITELIAIS E PARENQUIMATOSAS
So os macrfagos e os granulcitos que as lisam para travar a infeco, por
estas clulas no terem mecanismos antimicrobianos.
INFECO DE CLULAS FAGOCITRIAS
Moncitos e granulcitos.
MECANISMO INTERCELULAR
Lisam o vacolo fagcito;
Inibem os mecanismos oxidativos da digesto;
Multiplicam-se dentro de vacolos alternativos.
ESCAPE AO SISTEMA IMUNOLGICO
Pobreza antignica impedem o hospedeiro de reconhecer o agente
microbiano;
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__________________________________________________________ Microbiologia
Aquisio de Ag do hospedeiro este no reconhece o agente
microbiano como o invasor mas como o self;
Formao de cogulo camuflagem com estruturas do prprio
hospedeiro para no ser detectado;
Sequestro antignico os macrfagos sequestram os Ag que permitem o
reconhecimento pelo sistema imunitrio se esto expostos superfcie;
Variao antignica o reconhecimento do Ag de superfcie dos
microorganismos desencadeia a activao dos linfcitos e produo de
Ac especficos. Se o microorganismo variar a estrutura do antignio
escapa resposta especfica do sistema imunitrio.
MIMETISMO MOLECULAR
Os microorganismos adquirem molculas para a sua estrutura homloga de
estruturas do hospedeiro por integrao dos genes do hospedeiro no seu prprio
genoma. Seleccionam molculas que o organismo infectado no reconhece por serem
anlogas a estruturas suas.
DESINFECO/ESTERELIZAO
Desinfeco processo fsico ou qumico, pelo qual os agentes patognicos ou
micrbios causadores de doenas so destrudos.
Esterilizao processo mediante o qual todas as formas de vida bactrias,
esporos, fungos e vrus contidos em, lquidos, utenslios, instrumentos e substncias
so completamente destrudos.
MTODOS DE ESTERILIZAO
Fsicos:
Calor hmido vapor saturado sob presso (autoclaves verticais e
horizontais):
Vantagens:
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Rapidez;
No txico;
Econmico.
Inconvenientes:
Corroso de materiais metlicos;
Destruio de plsticos;
Destruio de fios cortantes.
Calor seco ar quente (estufas):
Vantagens:
Aparelhos de fcil instalao;
Menos perigoso no trabalha com presso;
Mais econmico.
Inconvenientes:
Deteriorao de matrias termo-sensveis borrachas e
plsticos);
Processo demorado;
Difcil de controlar pouco fivel).
Incinerao.
Qumicos:
xido de etileno (gs):
Vantagens:
No detiora os objectos cortantes nem os termo-sensveis;
Eficaz sobre bactrias e esporos;
Tem grande capacidade de penetrao.
Inconvenientes:
Ciclos de esterilizao longos;
Deixa resduos txicos em alguns materiais;
Necessita de arejamento;
Mais caro que os outros mtodos;
Instalao perigosa fugas.
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__________________________________________________________ Microbiologia
DETERGENTES, DESINFECTANTES E ANTISSPTICOS
Detergentes substncia tensioactiva com efeito mecnico sem aco
antibacteriana.
Antisspticos e desinfectantes so ambos bactericidas, por vezes fungicidas e
virucidas.
Antisspticos destina-se ao uso clnico, para uso externo lavagem, penso,
irrigao.
Desinfectantes aplicao externa cho, material e outras superfcies.
FAMLIAS DE ANTISSPTICOS E DESINFECTANTES
Oxidantes compostos que libertam oxignio;
gua oxigenada H
2
O
2
;
Derivados halogenados hipoclorito de sdio 0,5% (gua de jvel),
irritante, s se usa como desinfectante;
Soluto de Dakim (antissptico) hipoclorito de sdio mais permanganato
de potssio;
Cloraminas derivados orgnicos clorados;
Derivados iodados o iodo um antissptico muito usado;
Tintura de iodo 0,5%;
lcool iodado 1%;
Polividona iodada (antissptico)
Pele, feridas e mucosas.
Tem espectro muito largo sobre bactrias Gram +, Gram -, BAAR, vrus, esporos
e fungos.
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__________________________________________________________ Microbiologia
Tensioactivos
Tensioactivos aninicos sais alcalinos;
Tensioactivos catinicos ou compostos de amnia quaternrios;
Tensioactivos anfteros largo espectro.
Fenis
Fenol e derivados.
Relativa eficcia sobre bactrias Gram - e BAAR, dada a concentrao lipdica
da membrana celular destes microorganismos.
Corantes
Muito utilizados em dermatologia fracos antisspticos:
Verde malaquite;
Verde brilhante;
Violeta genciana.
Em soluo aquosa ou alcolica:
Eosina;
Azul de metileno.
Aldedos (desinfectantes)
So derivados dos metais pouco usados porque so txicos.
O seu poder deve-se ionizao do metal:
Sais de ouro reumatologia;
Sais de cobre, zinco e prata oftalmologia e otorrino;
Sais de mercrio antisspticos.
Carbanilidas (antisspticos)
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Compostos de duplo ncleo benznico. Triclorocarbanilidade.
lcoois
Monolcoois antisspticos:
Etanol 70 ou 90;
Isopropanol necessita de H
2
O.
Dilcoois desinfectantes muito txicos:
Metanol;
A. Benzlico.
CRITRIOS DE EFICCIA DOS ANTISSPTICOS
Factores fsicos:
pH no local de aco;
Temperatura e luz degradam as molculas activas.
Factores qumicos no juntar substncias desconhecidas porque pode
haver antagonismo ou sinergismo;
Factores microbiolgicos:
Gram + muito sensveis a todos os antisspticos;
Gram - menos sensveis (mais lpidos na membrana);
Vrus pouco sensveis.
O uso no adequado de antisspticos leva seleco de espcies, havendo j
estirpes resistentes a antisspticos no ambiente hospitalar, pelo que o seu uso obedece a
critrios e polticas de cada instituio de acordo com o conhecimento do seu
ecossistema, que deve ser revisto anualmente.
PARASITOLOGIA
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__________________________________________________________ Microbiologia
Helmintas:
Intestinais;
Nos tecidos:
Nemtodos;
Tremtodos;
Cstodos.
HELMINTAS INTESTINAIS
Diagnstico pesquisa de:
Parasitas adultos;
Ovos;
Larvas.
Nas fezes:
Parasitas macroscpicos;
Larvas e ovos microscpicos.
Caractersticas dos ovos:
Tamanho;
Forma mamilonados, operculados, corticados;
Estdio de desenvolvimento embrionados e no embrionados.
Aps a infeco no hospedeiro no h parasitas mas ovos e larvas (maturao)
estes ltimos podem encontrar-se na expectorao.
NEMTODOS
Tamanho varivel.
Corpo comprido e cilndrico.
Os parasitas adultos vivem no tracto intestinal.
Podem ter vrios hospedeiros intermedirios ou no ter.
Tm macho e fmea, excepto Strongyloides.
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__________________________________________________________ Microbiologia
Quatro estdios de larvas.
Cinco estdios de adultos.
Estdio injectante 1. a 3. estdio de larva.
ENTEROBIUS VERMICULARES (Oxiures)
Habitat ceco, recto, apndice e clon.
As fmeas pem os ovos na regio perianal causa prurido.
As crianas so as mais afectadas.
Reinfestam-se frequentemente.
A gravidade de pende do grau de infestao.
ASCARIS LUMBRICOIDES (Lombriga)
O mais frequente dos parasitas.
As fmeas pes os ovos que so eliminados pelas fezes ficam no solo trs
semanas.
Os ovos fixam-se no intestino, e eclodem as larvas.
Na fase de maturao migram fgado e pulmo.
Voltam ao intestino para completar a maturao parasita adulto.
A infeco pode ser:
Parasita ocluso intestinal;
Larva pneumonite;
Eosinofilia.
TRICHURIS TRICHURIA
Habitat ceco.
Mais frequente nas crianas mais velhas.
Por vezes associado ao Ascaris.
Diagnstico ovos nas fezes (mamilonados barris de cor castanha), em diarreia.
Os ovos ficam no solo duas a trs semanas larvas infectantes (no hospedeiro).
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__________________________________________________________ Microbiologia
STRONGYLOIDES STERCORALIS
Habitat:
Regies sub-tropicais;
Algumas regies temperadas endmico (nordeste transmontano).
Reservatrio gua.
No Homem mucosa intestinal, migra no lmen intestinal.
Ciclo intestinal s h fmeas ovos so eliminados nas fezes (larvas).
Ciclo de vida livre macho/fmea, as larvas so filariformes (penetram a pele),
e o 1. estdio de larva tem forma infestante.
Nmero elevado no intestino, invadem muitos rgos e provocam morte
doentes com SIDA.
TREMTODOS
Habitat dos adultos intestino, pulmo, fgado e sangue.
Ciclo vrios hospedeiros:
Fase infectante para o Homem, desenvolve-se no molusco;
Cercria molusco (ovo), larva ciliada (tecidos do hospedeiro
intermedirio), larva;
Metacercria na gua infecta plantas aquticas (fica enquistada).
FASCCOLA HEPTICA
No Homem migra do intestino (ductos biliar) para o fgado fascioliase.
SCHISTOSOMA (Bilharziose)
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__________________________________________________________ Microbiologia
Schistosoma japonicum urina;
Schistosoma mansoni urina;
Schistosoma healmatobium fezes.
Habitat:
frica;
sia;
Portugal zona do Algarve;
No Homem cavidade intestinal.
Macho/fmea.
Ovos operculados (sada do miracdeo) eliminados pelas fezes ou urina.
Parasitose grave morbilidade e mortalidade.
CSTODOS
Taenia saginata;
Taenia solium;
Hymenolepsis nana.
Habitat:
Ubiquitrios distribuio mundial;
Intestino delgado.
Corpo fita de mastro, brancos, com corpo segmentado.
Diagnstico:
Ovos morfologia;
Proglotis segmentos do corpo;
Escolex (cabea) com ganchos/fixada na mucosa intestinal;
_________________________ V Curso de Licenciatura _______________________
___________________________ 1. ano/1. semestre __________________________
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Escola Superior de Enfermagem da Guarda ________________________________
__________________________________________________________ Microbiologia
Parasita adulto solitrio no intestino;
Os proglotis soltam-se e so eliminados nas fezes, se grvidos libertam os ovos
(ingeridos por animais vaca) escolex enquistado nos tecidos (cisticercose).
Os proglotis podem rebentar no intestino do Homem e libertar ovos visveis nas
fezes.
Podemos infestar-nos com carne de animais infestados carne mal cozida.
Provocam:
Diarreia;
Desconforto intestinal;
Ocluso devido a grandes dimenses (vrios metros);
Podem sobreviver vinte anos no intestino (ficando o escolex regenera-
se os proglotis).
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