You are on page 1of 14

Universidad de Chile Facultad de Ciencias Departamento de Qumica Licenciatura Ciencias mencin Qumica

Informe de Laboratorio Espectrofotometra de absorcin Determinacin simultnea de orto y paraNitrofenol

Autores:

lvaro Etcheverry Valeria Hermosilla Noelia Ayala Fecha de entrega: 27/01/2012 e-Mail: aetcheverry@ug.uchile.cl wale.hermosilla@gmail.com

doncell20y20@gmail.com RESUMEN En este laboratorio se emplear un espectrofotmetro de barrido Shimadzu UV1700, para realizar estudios espectrales a fin de obtener las concentraciones de dos compuestos absorbentes presentes en una muestra problema. Para esto se trabaj con paranitrofenol y orto-nitrofenol, utilizando soluciones patrones y una muestra problema (N6), que consista en una mezcla desconocida de ambas soluciones. Los aspectos fsicos de este experimento se basan en la aplicacin de la Ley de Beer, as como de dos mtodos distintos para la resolucin de los espectros, uno mediante un sistema de ecuaciones y otro mediante la derivacin de los espectros obtenidos. Utilizando un software especializado se obtuvo que las concentraciones para el p-NF y o-NF son de 1.47 10-5 M y 1.25 10-4 M, respectivamente con un error de 3.86% utilizando el mtodo del sistema de ecuaciones; y, 1.40 10-5 M y 1.24 10-4 M, respectivamente con un error de 2.21% utilizando el mtodo de la derivacin de espectros. INTRODUCCIN Como se vio en el laboratorio anterior, la espectrofotometra UV-Vis, se basa en los principios fsicos de la espectroscopa de absorcin, resumidos en la Ley de Beer por la que establece que la absorbancia, A, de una solucin es proporcional al espesor de la capa de solucin y a la concentracin de la especie absorbente.
A bc A = l c

(1)

Donde corresponde a la constante de proporcionalidad, llamada absortividad molar, corresponde al espesor de la capa de solucin, tambin denominado paso ptico, y c que corresponde a la concentracin de la especie absorbente. Cabe destacar que la Ley de Beer slo es vlida para soluciones de concentraciones menores a 10-2 M, a mayores concentraciones se observan desviaciones en el comportamiento lineal debido a diversas razones, principalmente: que vara con el ndice de refraccin de la solucin, se pueden producir interacciones entre las especies absorbentes, o que existen especies con comportamiento cido/base cuando se utilizan soluciones que no se encuentran tamponadas. Gracias a la ecuacin (1), es posible conocer la concentracin de la especie absorbente en una solucin si conocemos la absortividad molar y la absorbancia. La absorbancia es posible conocer mediante el uso de un espectrofotmetro y la absortividad molar se puede conocer confeccionando una curva de calibracin con soluciones de concentracin conocida y midiendo sus absorbancias a una longitud de onda especfica. Como se mencion anteriormente, la espectrofotometra puede ser utilizada como una herramienta para conocer la concentracin de una especie absorbente, lo que puede ser ampliado a conocer las concentraciones de varias especies absorbentes presentes en una 2

muestra. Para esto, se pueden utilizar dos mtodos que se diferencian tanto en la sensibilidad que poseen, como en la precisin con la que arrojan resultados. El primer mtodo consiste en aprovechar el hecho de que la absorbancia total de una solucin a una longitud de onda es la suma de cada uno de los componentes individuales, como se muestra en la ecuacin (2) y (3). Atotal = A1 + A2 + ... + An Atotal = 1 c1 l + 2 c2 l + ... + n cn l (2) (3)

As, para una mezcla de dos componentes, M y N, a dos longitudes de onda distintas, la absorbancia de la mezcla se puede expresar como un sistema de ecuaciones de la siguiente forma:
1 A1 = M cM l + 1 cN l a 1 N 2 2 A2 = M cM l + N cN l a 2

(4)

Las cuatro absortividades molares se calculan confeccionando curvas de calibracin individuales para M y N a las longitudes de onda 1 y 2. El segundo mtodo consiste en la derivacin de los espectros (espectroscopa de derivadas). Esto consiste en el clculo de la primera, segunda o derivadas de orden mayor de las absorbancias con respecto a la longitud de onda.
A = l c A = l c A ' = ' l c

(5)

Cuando conocemos los compuestos que conforman la mezcla, calculamos la derivada de los espectros de las soluciones patrn, y hallamos la longitud de onda en que la derivada se hace cero, a fin de que en el espectro de la muestra problema sepamos que uno de los dos compuestos no est aportando a A'. Una vez que conocemos las longitudes de onda a las que cada A' de los compuestos se hace cero, es posible confeccionar curvas de calibracin con soluciones de concentracin conocida para hallar '. De esta forma, conociendo las A' de la muestra problema y las ' a las longitudes de onda en que cada uno de los compuestos se hace cero, podemos hallar las concentraciones de cada compuesto en la mezcla problema. A '1 = '1 cM l a 1 M A2 = '2 cN l a 2 N (6)

Para este laboratorio se utiliz un espectrofotmetro de barrido marca Shimadzu UV-1700 (Figura N1). Este tipo de espectrofotmetros consiste en un sistema monocanal, con un solo detector que emplea ptica directa. 3

Figura N1: Espectrofotmetro de barrido Shimadzu UV-17001. Las especies absorbentes que se utilizaron en este laboratorio son para-nitrofenol y orto-nitrofenol (Figuras N 2 y 3). Estos compuestos son utilizados para medir la presencia de residuos de pesticidas en plantas, frutas y otros alimentos2. Ambos compuestos poseen espectros de absorcin que cubren la regin de 200 nm a 500 nm.
OH OH NO 2 NO2

Figura N2: orto-nitrofenol.

Figura N3: para-nitrofenol.

PARTE EXPERIMENTAL
1 2

http://www.advmex.com/espectrofotometro_uv.htm M.I. Toral, P. Richter, M. Cavieres y W. Gonzlez. Evironmental and Monitoring and Assessment 1-13 1997

1. Datos brutos obtenidos: En primer lugar, se analizaron los espectros obtenidos de las muestras de pnitrofenol y o-nitrofenol para ver a que longitudes de onda existe la mxima absorcin.

Grfico N1: Absorbancia del p-nitrofenol a distintas longitudes de onda. Se observa que a 400 nm existe un mximo de absorbancia, lo que fue comprobado al ver los datos obtenidos del espectro.

Grfico N2: Absorbancia del o-nitrofenol a distintas longitudes de onda. Se observa que existen 2 puntos de mxima absorbancia, se escoge utilizar el que se encuentra cercano a los 280 nm. De los datos obtenidos para la muestra problema (N6), se confeccion el siguiente grfico:

Grfico N3: Absorbancias de la muestra problema a distintas longitudes de onda. 2. Tratamiento de datos: En primer lugar se toman las absorciones a las longitudes de onda escogidas (280 y 400 nm), para confeccionar las curvas de calibracin. Para esto se utilizaron los datos correspondientes de las alcuotas usadas. Las soluciones patrn fueron realizadas con 2.49 mg de p-NF y 8.74 mg de o-NF, cada una diluida en 250 mL de agua destilada. Vol. alcuota Vol. total Concentracin Absorbancia Absorbancia (mL) (mL) (mol/L) a 280 nm a 400 nm 2.6 20.1 9.26E-06 0.014 0.174 5.3 20.1 1.88E-05 0.025 0.352 7.9 20.2 2.80E-05 0.03 0.478 10.1 20.1 3.59E-05 0.041 0.661 12.5 20 4.47E-05 0.053 0.829 14.8 20.1 5.27E-05 0.06 0.969 17.1 20 6.12E-05 0.07 1.3 Tabla N1: Concentraciones y absorbancias a 280 y 400 nm para el p-NF. 6

1 2 3 4 5 6 7

Grfico N4: Curva de calibracin a 280 nm para el p-nitrofenol.

Grfico N5: Curva de calibracin a 400 nm para el p-nitrofenol. Del ajuste realizado con OriginPro 8.5, se encontraron los siguientes valores para la absortividad molar del p-NF a 280 nm y 400 nm. Ntese que para el clculo de la absortividad molar a 400 nm se despreci el ltimo dato, ya que se encontraba fuera del comportamiento lineal. 7

280 = 1084.8 ; 280 = 41.9 400 = 18432.6 ; 400 = 506.2


Vol. alcuota Vol. total Concentracin Absorbancia Absorbancia (mL) (mL) (mol/L) a 280 nm a 400 nm 2.8 19.9 3.53E-05 0.18 0.182 5.4 19.9 6.81E-05 0.357 0.367 7.8 20.1 9.75E-05 0.504 0.519 10.1 20.2 1.26E-04 0.652 0.671 12 20 1.51E-04 0.784 0.807 13.9 19.9 1.76E-04 0.905 0.931 15.6 20 1.96E-04 1.015 1.044 Tabla N2: Concentraciones y absorbancias a 280 y 400 nm para el o-NF.

1 2 3 4 5 6 7

Grfico N6: Curva de calibracin a 280 nm para el o-nitrofenol.

Grfico N7: Curva de calibracin a 400 nm para el o-nitrofenol. Del ajuste realizado con OriginPro 8.5, se encontraron los siguientes valores para la absortividad molar del o-NF a 280 nm y 400 nm.

280 = 5176.5 ; 280 = 22.9 400 = 5338.9 ; 400 = 28.9 En base a los datos obtenidos, se procede a calcular la concentracin de las dos especies presentes en la muestra problema, utilizando las absortividades calculadas, para lo que se pueden utilizar dos mtodos:
Un mtodo directo es el que aprovecha el hecho de que la absorbancia de la muestra problema es la suma de las absorbancias de cada compuesto a distintas longitudes de onda, de esta forma, si tenemos un sistema con dos componentes (p-NF y o-NF), para dos longitudes de onda dadas (280 y 400 nm), tenemos el siguiente sistema de ecuaciones: A 280nm = 1084,8 C p NF l + 5176,5 Co NF l A 400nm = 18432, 6 C p NF l + 5338,9 Co NF l Donde: A280nm = 0.663 0.001 A400nm = 0.914 0.001 = 1 cm

Luego, despejando cada concentracin en el sistema obtenemos las siguientes concentraciones para cada compuesto:

C p NF = 1, 47 105 M Co NF = 1, 25 104 M El segundo mtodo consiste en aplicar mtodos derivativos para obtener las concentraciones, para esto primero se calcula la derivada de los espectros tomados (p-NF y o-NF) y se ubica en que puntos cada derivada se hace cero de tal manera que exista una diferencia apreciable entre ambas curvas (a fin de que se logre mayor sensibilidad).

Grfico N8: Curvas correspondientes a la 1ra derivada de los espectros del p-NF y o-NF. Los puntos donde el espectro del p-NF se hace cero corresponde a los 300 nm, mientras que para el o-NF se toma el punto correspondiente a los 416 nm. Con estos puntos se confecciona una curva de calibracin de A' versus la concentracin utilizando los mismos espectros que se utilizaron para las curvas de calibracin anteriores. o-NF Concentracin A' a 300 nm (mol/L) 3.53E-05 -0.00519 6.81E-05 -0.01029 9.75E-05 -0.01443 1.26E-04 -0.01896 1.51E-04 -0.02274 1.76E-04 -0.02607 p-NF Concentracin A' a 416 nm (mol/L) 9.26143E-06 -0.00293 1.88791E-05 -0.00584 2.80012E-05 -0.0081 3.59771E-05 -0.01123 4.47488E-05 -0.0143 5.27189E-05 -0.01644 10

1 2 3 4 5 6

1.96E-04 -0.02937 6.12163E-05 -0.01946 Tabla N3: Concentraciones versus A' para el p-NF y o-NF.

Con los datos obtenidos de la Tabla N3, se confeccionan las nuevas curvas de calibracin para obtener ' a 300 y 416 nm.

Grfico N9: Curva de calibracin a 300 nm para la concentracin de o-NF.

Grfico N10: Curva de calibracin a 416 nm para la concentracin de p-NF. 11

Usando un ajuste lineal para ambos grficos, podemos obtener la pendiente, que corresponde a '. De esta forma, tenemos lo siguiente:

'300 = 149,94 ; '300 = 1,17 '416 = 320,14 ; '416 = 7, 08 Luego, si conocemos la A' de la muestra problema a las longitudes de onda escogidas y utilizamos las ' respectivas, es posible conocer las concentraciones de las especies presentes.

Grfico N11: 1ra derivada del espectro de la muestra problema. Las A' de la muestra problema son -0.01863 y -0.00447 para 300 y 416 nm, respectivamente. Entonces, utilizando los datos obtenidos se obtiene lo siguiente:

' = A ' c l '300 = 149,94 ; A '300 = 0, 01863 '416 = 320,14 ; A '416 = 0, 00447
C p NF = 1, 40 105 M Co NF = 1, 24 104 M En la Tabla N4 se resumen los valores obtenidos para las concentraciones considerando ambos mtodos. 12

Cp-NF Co-NF

Sistema de ecuaciones Espectros derivados Concentracin (mol/L) Concentracin (mol/L) 1.47E-5 1.40E-5 1.25E-4 1.24E-4 Tabla N4: Concentraciones obtenidas para ambos mtodos.

DISCUSIN Como se puede ver, para ambos mtodos utilizados para encontrar las concentraciones de los compuestos en la muestra problema dieron como resultado valores similares, sin embargo, los valores obtenidos usando el mtodo de los espectros derivados poseen un menor margen de error. Esto se basa en el clculo del error asociado a las absortividades encontradas. Para el mtodo del sistema de ecuaciones la relacin / alcanza un valor mximo de 3.86%, mientras que para el mtodo de los espectros derivados, la relacin '/' alcanza un valor de 2.21%. Es posible observar la enorme influencia que ejerce la concentracin en la forma del espectro, los valores obtenidos muestran que la concentracin de o-NF es casi 10 veces mayor que la concentracin de p-NF, lo que se ve reflejado en el hecho de que el espectro de la muestra problema es muy similar al espectro del o-NF. En este experimento no se observaron desviaciones qumicas de la Ley de Beer (es posible descartar las desviaciones instrumentales y reales debido a los criterios utilizados para las mediciones y a que se utilizaron soluciones con concentraciones menores a 0.01 mol/L), por lo que se asume que los compuestos absorbentes no interactan entre s y a que su comportamiento cido/base ha sido controlado utilizando soluciones a pH 12. Si bien el mtodo de los espectros derivados es bastante bueno a la hora de obtener resultados confiables, presenta el problema de que disminuye la relacin seal/ruido, lo que se ve acentuado cuando se utilizan derivadas de orden mayor. CONCLUSIONES La espectroscopa de absorcin UV-Vis es una poderosa herramienta al realizar estudios cuantitativos en soluciones que poseen una mezcla de compuestos absorbentes. El mtodo de espectros derivados, si bien otorga una mayor precisin a la hora de hallar las concentraciones, presenta la desventaja de disminuir la relacin seal/ruido, lo mismo ocurre si se utilizan espectros derivados de orden superior. En general, ambos mtodos llegaron a valores similares para ambas concentraciones, por lo se puede concluir que ambos mtodos resultaron eficaces y que el mtodo experimental utilizado es el adecuado. BIBLIOGRAFA 13

SKOOG, Douglas A. y West, Donald M. Anlisis Instrumental, 2da Edicin. Mxico, McGraw-Hill, 1992.

14

You might also like