Inmuno-serologa

Categoras de la respuesta inmune La respuesta inmune especfica humana se divide de forma simplista en dos categoras: - la respuesta inmune mediada por clulas, que es llevada a cabo por linfocitos de la clase T (timodependientes) y que incluye adems la produccin de activadores qumicos que inducen a otras clulas a atacar y destruir a los patgenos (o a las clulas del husped daadas o infectadas por los patgenos) - la respuesta inmune mediada por anticuerpos, que se debe a protenas especficas generadas por los linfocitos de la clase B (derivados de la mdula sea). Debido a que estas protenas poseen una funcin inmunolgica y a que en su estado activo estn plegadas segn una estructura globular, se denominan inmunoglobulinas. Caractersticas de los anticuerpos Los anticuerpos son producidos contra una pequea molcula especfica, qumica y fsicamente definida, que el husped reconoce como extraa y que se denomina antgeno o determinante antignico. Los antgenos pueden formar parte de la estructura del patgeno o ser sustancias producidas y liberadas por l. Un microorganismo patgeno contiene y produce muchos antgenos diferentes que el husped reconocer como extraos, de modo que la infeccin con un agente provocar la aparicin de varios anticuerpos especficos diferentes. Esta especificidad es la base de la mayora de las tcnicas inmunolgicas para deteccin de Ag o Ac: Los anticuerpos se unen a la superficie de los patgenos y facilitan su ingestin por clulas fagocticas (anticuerpos opsonizantes u opsoninas) o contribuyen a su destruccin por la accin ltica del complemento (anticuerpos fijadores de complemento). Aunque el cuerpo humano produce varias clases de anticuerpos (inmunoglobulinas G, A, M, D y E), los mtodos de diagnstico serolgico han sido desarrollados en su inmensa mayora para medir principalmente las inmunoglobulinas clase G y M.

La estructura bsica de una molcula de anticuerpo est formada por dos imgenes especulares constituida cada una de ellas por dos cadenas proteicas. En los extremos se encuentran los sitios de fijacin al antgeno, que se unen especficamente al antgeno contra el cual ha sido producido el anticuerpo. Segn su especificidad, el anticuerpo puede fijar tambin antgenos semejantes, pero no idnticos, al que lo ha inducido. En la mayora de los casos, el primer Ac producido en respuesta a un Ag determinado es la IgM. Por lo tanto, la presencia de IgM indica usualmente infeccin reciente y activa. Esta IgM deja de ser detectable tras un perodo relativamente corto de tiempo (los Ac de la clase IgG pueden persistir durante mucho tiempo despus de que la infeccin ha finalizado, prcticamente de por vida). La IgM no atraviesa la placenta de las mujeres embarazadas, por lo que toda IgM detectada en el suero de un neonato debe haber sido producida por l mismo. Los Ac IgG estn formados por una molcula bsica con dos sitios de unin al Ag. Los Ac IgM estn constituidos por cinco protenas idnticas a la estructura bsica mencionada que se unen por su extremo no especfico y dejan libres diez sitios de combinacin con los Ag. Esta estructura explica la mayor avidez de las IgM hacia sus Ag especficos. Las molculas de los microorganismos que al penetrar en el organismo humano atraen y reaccionan con los anticuerpos se denominan antgenos (generan anticuerpos). Al principio se pens que los Ac procedan de alguna "clula maestra" capaz de moldearse en la forma correcta usando al Ag como plantilla; pero no es as. Hoy se sabe que los Ac se forman antes de haber visto al Ag y que son seleccionados por el propio Ag. En el organismo humano, cada Linfocito del subgrupo denominado Linfocitos B, que se diferencian mdula sea, est programado para "fabricar" un nico Ac al que coloca en su superficie externa para acte como receptor. Cuando un Ag penetra en el cuerpo, se enfrenta a una gran cantidad de linfocitos, cada uno con su propio Ac y con sus propios lugares de reconocimiento. El Ag slo se unir a aquellos receptores a los que se adapta perfectamente. Los Linfocitos cuyos receptores se han unido al Ag reciben una seal de disparo y se convierten en clulas plasmticas formadoras de Ac, y dado que los Linfocitos estn programados para "fabricar" un nico Ac, el segregado por la clula plasmtica ser idntico al que originalmente actu como receptor de ese Linfocito, es decir, se adaptar perfectamente al Ag. As es como el Ag selecciona los Ac que van a reconocerlo adecuadamente.

Dada la inmensa cantidad de molculas de Ac distintas que puede producir nuestro organismo y dado el limitado nmero de Linfocitos acomodables en nuestro cuerpo, es necesario un mecanismo capaz de compensar este desequilibrio. Es por esto que los Linfocitos activados por el contacto con el Ag sufren sucesivas ondas de proliferacin para construir un "gran clon" de clulas plasmticas capaces de fabricar el tipo de Ac para el que fu programado su Linfocito predecesor. Mediante este sistema de seleccin clonal, pueden producirse concentraciones de Ac suficientemente grandes como para combatir eficazmente la infeccin. Teniendo en cuenta que al clon de proliferacin le lleva tiempo construir una cantidad suficiente, pasan varios das antes de que, tras el contacto con el Ag, se detecten en el suero los primeros Ac. Ya que estos anticuerpos de nueva formacin son una consecuencia de la exposicin al Ag, hablamos de "respuesta inmunitaria adquirida". Cualquier microorganismo que haya penetrado en nuestro cuerpo y disparado una respuesta de Ac, puede volver a hacerlo en cualquier otro momento. En previsin de esta circunstancia, nuestro organismo dispone de un particular "sistema de memoria" que le permite responder con mayor rapidez y en mayor magnitud en el caso de una posterior exposicin a ese mismo microorganismo.El primer contacto produce alguna "memoria", de tal forma que nuestro cuerpo se encuentra eficazmente preparado para repeler una invasin posterior del microorganismo, estableciendo un estado de inmunidad. Esta "respuesta secundaria" se caracteriza por una produccin ms rpida y ms abundante de Ac: en el plazo de 2-3 das el nivel de Ac en sangre se eleva rpidamente para alcanzar valores mucho ms altos que los que se observaronc en la "respuesta primaria". Es altamente probable que los Linfocitos sean las clulas que proporcionan esta "memoria" Las enfermedades infecciosas pueden diagnosticarse por tres caminos: 1- demostracin de la presencia en el paciente de un agente conocido capaz de provocar la enfermedad, ya sea por observacin directa del agente en el material clnico obtenido del paciente, o por cultivo del agente en el laboratorio (in vivo o in vitro) 2- deteccin de un producto especfico del agente infeccioso (que no pueda formarse sin la presencia del agente) en el material clnico obtenido del paciente 3- deteccin en el suero (o plasma) del paciente de una respuesta inmunolgica especfica dirigida contra el agente infeccioso Tcnicas En el laboratorio, el seguimiento de las reacciones AG/AC se hace casi siempre marcando a uno de los reaccionantes (con colorantes, con sustancias fluorescentes, con istopos radioactivos, etc.). Posteriormente se interpreta el

resultado de la reaccin, bien por mtodos espectrofotomtricos (ELISA, ELFA ...), por medio de microscopa UV (IFI, ACIF ...) o por cualquier otra de las tcnicas disponibles actualmente. Si se pretende identificar un Ag viral, se utilizar un Ac especfico marcado y si se quiere identificar un Ac especfico, se utilizar y se marcar el Ag que induce su produccin. Dos son los procedimientos bsicos para desarrollar este tipo de reacciones: - El mtodo directo implica el marcaje del AC, para que, si se da la unin AG/AC, el complejo resultante lleve la marca del AC. - El mtodo indirecto implica un tercer reactivo, un Anti-AC marcado, que si hay unin AG/AC, se une directamente al AC para dar un complejo AG/AC/Anti-AC que muestra la marca del Anti-AC. Enzimoinmunoensayo (ELISA), Inmunofluorescencia (Rhodamina, Fluorescena) El Ag correspondiente al Ac que se quiere investigar se fija sobre la superficie de un pocillo, bola de plstico, etc. Para la prueba, el pocillo con los Ag se cubre con suero del paciente y se incuba; si en el suero hay los Ac que se buscan, se fijarn a los Ag del soporte. Se lava bien el soporte y se cubren los pocillos con un conjugado Antiglobulina marcado con un colorante o con un marcador fluorescente que se unir a los Ac fijados al Ag permitiendo su visualizacin por colorimetra o con una fuente de luz fluorescente. Inmunoblot Diversas protenas de los Ag a investigar se fijan, por electroforesis, en una tira de Gel. El resto de la tcnica se desarrolla como un enzimoinmunoensayo Al margen de los mtodos habituales citados anteriormente (Inmunofluorescencia, ELISA, etc) hay otros que se utilizan con mucha frecuencia en serologa: Fijacin del complemento intervienen dos sistemas -el propiamente fijador de complemento > Ac + Ag + Complemento: si se unen Ag y Ac en presencia del complemento se produce la "fijacin" y se forma el complejo de los tres elementos - el sistema hemoltico o indicador de la reaccin > hemates sensibilizados: Si existe complemento disponible se produce la hemlisis de los glbulos rojos

(reaccin negativa), pero si el complemento ha sido "fijado" en la reaccin Ag/Ac, no hay hemlisis (reaccin positiva) Aglutinacin Los Ac especficos producidos por el husped, presentes en el suero, se fijan a los Ag fijados en la superficie del portador y se produce una aglutinacin que forma agregados visibles. Un sistema anlogo emplea portadores recubiertos con Ac y se emplean para la deteccin de Ag microbianos. Pueden ser macroscpicas o microscpicas (en tubo, porta o microplaca) Pruebas de precipitacin Tambin pueden utilizarse Ag solubles que, en contraste con las pruebas de Aglutinacin, que utilizan Ag particulados, al interactuar con sus Ac especficos formarn un precipitado o concentracin de pequeas partculas. - Floculacin: El producto final precipitado forma agregados visibles macro o microscpicamente ANTICUERPOS MONOCLONALES: Los anticuerpos monoclonales son inmunoglobulinas homogneas dirigidas contra un eptope o determinante antignico nico, y por tanto, son reactivos qumicos uniformes. Son, en teora, los reactivos ideales, puesto que todas sus molculas son idnticas y formadas continuamente por el mismo clon celular, pudiendo, en consecuencia, ser estandarizados con facilidad. http://danival.org/600%20microbio/6200microclin/sero/_madre_sero.ht ml