PERCOBAAN 2

UJI AKTIVITAS SIKSINAT DEHIDROGENASE Nama : Oktaviana Quinta Dewi NIM : 10509022

I. Tujuan Menentukan aktifitas enzim Suksinat Dehidrogenase.

II.

Teori Dasar
Enzim dehidrogenase mengkatalisis reaksi transfer hidrogen atau elektron dari suatu substrat kepada senyawa akseptor seperti NAD+, NADP, atau flafoprotein. Suksinat dehidrogenase akan mengkatalisis reaksi oksidasi reversibel asam suksinat menjadi asam fumarat dan mengkatalisis transfer elektron secara langsung ke senyawa flavoprotein (dalam siklus krebs)

III.

Prosedur Disiapkan 2-3 gr hati sapi dalam 10-15 ml larutan 0,25 M sukrosa, kemudian dilakukan homogenisasi. Suspensi disimpang di dalam penangas es. Ke dalam tiga tabung Thunberg dipipet sejumlah larutan dengan komposisi : Tabung Metilen biru (mL) A B C 0,5 0,5 0,5 0,5 Air (mL) 0,1 M Nasuksinat (mL) 0,5 0,5 Buffer pH 7,0 (mL) 5 5 5

0,5 mL homogenat dipipet ke dalam stopper (bagian dalah tutup tabung Thunberg) tabung A dan B dan 0,5 mL homogenat yang telah dipanaskan ke bagian dalam tutup tabung Thunberg tabung C. Ditambahkan 5 tetes minyak parafin ke dalam masing - masing tabung. Dinding tutup tabung tersebut diolesi dengan vaselin, lalu ditempatkan pada tempatnya dengan hati-hati sehingga lubang pada tutup tersebut tepat pada pipa samping.

Larutan yang terdapat pada stopper jangan sampai bercampur dengan larutan yang terdapat dalam tabung. Tabung divakumkan dengan menghubungkan pipa samping tabung Thunberg dengan pompa vakum selama 3-4 menit, kemudian stopper diputar searah 1800 sebelum dilepaskan dari pompa. Isi tabung dicampurkan dengan larutan yang terdapat di dalam tutup tabung (stopper), kemudian inkubasi diteruskan pada suhu 370C. Waktu yang diperlukan untuk warna biru dari Metilen biru dicatat (dihitung sejak pencampuran dilakukan). Percobaan dilakukan dengan menambahkan 0,5 mL larutan Na-malonat 0,5 M ke dalam masing masing tabung lalu hasilnya dibandingkan.

LAPORAN PRATIKUM BIOKIMIA SEMESTER Vl 2012/2013

UJI AKTIVITAS SIKSINAT DEHIDROGENASE

Nama NIM Kelompok Tanggal percobaan Nama Asisten

: Oktaviana Quinta Dewi : 10509022 : : :

LABORATORIUM BIOKIMIA PROGRAM STUDI KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2012/2013