Gentica bacteriana e colorao de Gram

Marinalda Vilela 2011

evoluo
As bactrias surgiram na terra h cerca de 3,5 bilhes de anos, em ambiente hostil: >temperaturas altssimas, >radiaes ultravioleta e csmicas, >tempestades e falta de nutrientes; No entanto elas sobreviveram, porque??

evoluo
Sobreviveram devido a sua capacidade de adaptao; Hoje elas podem ser encontrados: no ar, no solo, na gua, na pele e trato GI. dos homens, etc. Em condies desfavorveis algumas bactrias formam esporos, que podem sobreviver milhes de anos. Evoluram para ocupar hoje todos os habitats, at aqueles de condies mais extremas (vulco, no mar profundo, nas fontes quentes, no gelo, no sal).

Gentica bacteriana
O material gentico das bactrias transmitido aos descendentes no momento da diviso celular. Estando o genoma da bactria disperso no citoplasma. As informaes genticas esto contidas: Cromossomo contm quase a totalidade das informaes genticas das bactrias. Plasmdios, integrons e Transposons contm poucas informaes e a maioria no so essenciais para a vida bacteriana.

Cromossomo bacteriano
Seus genes contm todas as informaes necessrias sobrevivncia da clula. nico, sendo portanto haplides Replicao semiconservativa, isto , as duas cadeias da molcula separam-se e cada uma serve de molde para sntese de uma nova cadeia. Cada clula filha na diviso binria recebe uma nova molcula de DNA

Organizao genmica
Cromossomo bacteriano circular, altamente enovelado, compactado, porque??? 4,6 106 pb esticados em 1mm = 1000 vezes > clula, mas ocupa 10% do volume celular DNA superespiralado (supercoiled): topoisomerase e girase;

Diviso bacteriana
Diviso celular / Fisso Binria Parede celular
Membrana plasmtica Molcula de DNA
Alongamento da clula e replicao do DNA

Diviso nuclear

Inicio da diviso da parede celular e da membrana citoplasmtica

Separao das clulas

cromossomo

http://129.109.136.65/microbook/ch002.htm

Variabilidade Gentica em Bactrias

As bactrias podem apresentar variaes que conduzem formao de clones com propriedades distintas da clula original. A variao se d atravs de mutao ou recombinao: MUTAO => alterao na seqncia de bases nitrogenadas do DNA, geralmente resultante de: >deleo, >insero >substituio de um ou mais nucleotdeos; >esta alterao gentica pode modificar o produto (protena). As mutaes podem ser neutras, desvantajosas ou vantajosas.
RECOMBINAO => processo de variabilidade gentica que envolve

transferncia de material gentico entre duas clulas.

Variabilidade gentica
Mutao espontnea e a recombinao dos genes, que criam variabilidade gentica sobre a qual atua a seleo natural, dando vantagens aos mais aptos; Os antibioticos atuam como agentes seletivos, favorecendo as raras bactrias resistentes (resultantes de mutaes) presentes na populao; O potencial de resistncia aos antibiticos por mutao cromossmica intrnseco a todas as bactrias; Mutaes cromossmicas ocorrem espontaneamente na replicao bacteriana devido imperfeita fidelidade da replicao do DNA

Transferncia de material gentico

Os genes transferidos podem: Se integrar ao cromossomo da bactria Persistir como um elemento citoplasmtico autnomo (plasmidios)

Variabilidade Gentica em Bactrias

MUTAO Processo vertical Ocorre durante a replicao do cromossomo bacteriano Responsveis pela expresso de vrias novas caractersticas por uma clula

RECOMBINAO Processo horizontal Ocorre durante os processos de conjugao, transformao ou transduo Varias caractersticas so decorrentes da aquisio de novos fragmentos de DNA

Mutao
Parede celular Membrana plasmtica Molcula de DNA mutao Duplicao do DNA

Separao das clulas

Emergncia de resistncia microbiana

Microrganismo sensvel

Microrganismo resistente

Gene de transferncia de resistncia

Microrganismo resistente

Seleo de Cepas Resistentes

Cepas resistentes raras Exposio ao antibitico Cepas resistentes Dominantes

Formas de transmisso dos genes

TRANSFORMAO CONJUGAO TRANSDUO

Resistncia bacteriana aos antimicrobianos cocos Natural ou intrnseca bacilos

Enterococos resistncia aos cefalosporinas K. pneumoniae resistncia a ampicilina

Adquirida

Plasmidial Transmissvel

Mutao de genes Resistncia transmitida da clula-me para Produo: -lactamases, clula-filha fosfotransferases, hidrolases, redutases. Resistncia mltipla Quinolonas

Cromossmica

Mecanismos genticos de resistncia

Plasmdios
Segmentos de DNA fita dupla, super enovelada; circulares; auto-duplicam independentemente do cromossomo. Carregam informao gentica no essencial a clula, mas podem prover uma vantagem seletiva para as bactrias que os possuem.

> Alguns plasmdios so promscuos, atravessando a barreira das espcies > Pili: Forma de conexo entre bactrias para transferncia de material gentico;

Conjugao
Plasmdeo Clula doadora Ponte citoplasmtica Clula receptora DNA bacteriano

Clula doadora

Separao das clulas Clula receptora

Plasmdios
DNA circular extra-cromossomal circulares covalentes, fechadas nmero varivel por bactria replicao autnoma fita dupla, altamente compacta; menores que o DNA cromossmico; No so indispensveis clula, mas podem conferir-lhe vantagens seletivas bactria: - genes de resistncia aos antimicrobianos, - tolerncia a metais pesados, - sntese de toxinas, - fmbria F, - enzimas

Transformao
Molcula de DNA circular Fragmentos de DNA doador Clula bacteriana

Clula bacteriana

Lise celular

Quebra do DNA

Fragmentos de DNA ligam-se superfcie da clula receptora.

O fragmento de DNA incorporado clula receptora. O fragmento de DNA integrado ao cromossomo da clula receptora.
Clula transformada

Transduo
Fago O DNA do fago integra-se ao DNA da bactria como um profago. Quando o profago inicia o ciclo ltico, o DNA da bactria degradado e novos fagos podem conter algum trecho do DNA da bactria.

O DNA de um fago penetra na clula de uma bactria.

DNA do fago com genes da bactria Genes de outra bactria so introduzidos e integrados ao DNA da bactria hospedeira. O fago infecta nova bactria. A clula bacteriana se rompe e libera muitos fagos, que podem infectar outras clulas.

Elementos genticos extracromossmicos: Transposons

So chamados genes saltadores ou sequncias de insero (IS) >so elementos genticos mveis >podem se transferir de uma posio para outra no cromossomo; >entre cromossomo e plasmdios >de plasmdios para cromossomo >No se auto-duplicam.

Elementos genticos extracromossomicos: Integrons

Sistema de captura e expresso de genes
5CS
Insero cassetes

3CS

CR

Intl 1
attI1

I
59be

II
59be

orfD

qacE E

sul 1

Orf513

59be

Integrons so unidades genticas Compostos por sistema de recombinao stio especfica, Capazes de integrar, retirar e rearranjar genes que se localizam nos cassetes gnicos de suas estruturas, Podem ser encontrados no DNA cromossomal e extracromossomal

Como so traduzidas as informaes carreadas por estes genes de resistncia? Produo de enzimas que modificam a parte ativa da molcula do antibacteriano; produo de novas enzimas que no sofrem ao do antibacteriano (PBPs alteradas), sem perda da atividade metablica; alterao do stio de ao (alvo) diminuio da permeabilidade expulso do antibacteriano - bombas de efluxo

Colorao de ZiehlGram e Ziehl-Neelsen

Marinalda Vilela

Colorao de Gram
Mtodo para colorao de bactrias desenvolvido pelo mdico dinamarqus Hans Christhian Joachim Gram em 1884. Essa tcnica permite a separao de amostras bacterianas em: Gram-positivas
Christhian Joachim Gram

Gram-negativas

Colorao de Gram
O mtodo da colorao de Gram baseado nas paredes celulares das bactrias.

Gram-positivas: Retm o corante cristal violeta aps o tratamento com lcool.

Gram-negativas: No retm o corante cristal violeta aps o tratamento com lcool, e se coram pela fucsina.

Fundamento para Gram-positivas

Aps colocar a Violeta e o lugol o lcool desidrata as espessas paredes celulares das bactrias Grampositivas Provoca contrao da camada do peptidoglicano, tornando-o impermevel a fucsina; O corante Violeta retido e as clulas permanecem coradas.

Fundamento para Gram-negativas

Quando se coloca a violeta a bactria fica corada por esse corante; Ao colocar o lcool ele dissolve a poro lipdica das membranas externas das bactrias Gram-negativas; A violeta removida, deixando a clula descorada; Ao colocar a fucsina a bactria descorada fixa o ltimo corante colocado.

Gram Positiva x Gram Negativa

Nas Gram-positivas a fucsina no consegue penetrar, pois ela j esta corada pela Violeta. Nas bactrias Gramnegativas, quando colocada a Fucsina ela penetra na clula descorada.

Estrutura da parede celular das bactrias Gram positivas

Parede celular Gram-Positivo Gram-

peptidoglicano

Membrana citoplasmtica

Parede celular Gram-negativo

peptidoglicano

Cocos Gram-positivos
Staphylococcus

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae Streptococcus viridans Enterococcus faecalis

Streptococcus

Bacilos Gram-negativos
E. coli Klebsiella spp Proteus spp Serratia spp P. aeruginosa Acinetobacter spp
P. aeruginosa

E. coli

Todos os cocos so Gram positivos, EXCETO:

Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Moraxella catarrhalis

Todos os bacilos so Gram negativos, EXCETO:

Corynebacterium diphtheriae Gnero Bacillus
Lactobacillus spp

Clostridium spp Lactobacillus spp

Clostridium botulinum

Colorao de Ziehl-Neelsen
Existem bactrias que resistem fortemente descolorao; At por cidos fortes diludos e lcool absoluto; s bactrias que possuem esta propriedade dizemos que so Bacterias Alcool cido Resistentes: BAAR; Mycobacterium tuberculose e M. leprae; Esta caracterstica esta relacionada ao elevado teor de LIPDIOS na parede celular destas bactrias (ex.cido miclico).

Microscopia para B.A.A.R.

Nmero Total de Campos Observados Nmero de bacilo lcool-cido resistente observados por campo Resultado

100 100 50 20 Ministrio da Sade

No foram encontrados Menos de 1 BAAR por campo De 1 a 10 BAAR por campo Mais de 10 BAAR por campo

Negativo Positivo (+) Positivo (++) Positivo (+++)

Microscopia

M. leprae

M. tuberculose

Colorao de Ziehl-Neelsen
A fucsina, atuando a quente, vai corar de vermelho todas as clulas bacterianas e outras estruturas presentes no esfregao; O calor derrete os lpidos da membrana tornando-a permevel; O lcool cido diludo vai descorar todas as bactrias exceto as lcool-cido-resistentes, que permanecem coradas de vermelho pela fucsina. Por ltimo a colorao pelo azul de metileno (colorao de contraste).

Colorao de Ziehl-Neelsen
lcool cido resistentes: CORADAS DE VERMELHO No lcool cido resistentes: CORADAS DE AZUL

Patologias: Tuberculose e Lepra; Agentes etiolgicos: Mycobacterium tuberculosis (Bacilo de Koch) Mycobacterium leprae (Bacilo de Hansen)

Eis que estou convosco todos os dias at a consumao dos sculos. Mateus 28:20