Fundamentos de Toxicologia Experimental

PADRONIZAO E IDENTIFICAO DE FRMACOS

1.

OBJETIVOS

Padronizar a tcnica de cromatografia em camada delgada em frmacos para obtermos parmetros para cada nas determinadas condies experimentais, por exemplo, os mesmos frmacos frente a reveladores diferentes. Alm de padronizar, tambm temos como objetivo a identificao de um frmaco em material biolgico, pela tcnica que foi validada com o processo de padronizao.

2.

FINALIDADE DA PADRONIZAO POR CCD

A padronizao para est tcnica de suma importncia, pois as substancias em uma CCD podem se comportar de maneiras completamente distintas, uma vez que seja mudada a fase mvel ou a fase estacionria, isso devido s caractersticas fsico-qumicas das espcies a serem analisadas. Esta tcnica uma tcnica muito ampla, podendo ser utilizada tanto para triagem quanto para a identificao de substancias qumica. Utilizando-se, como parmetros de validao, a comparao do Rf (fator de reteno) e da cor desenvolvida na seqncia de reveladores empregados para a deteco do perfil cromatogrfico dos padres de frmacos analisados

concomitantemente, pode chegar a um resultado comparativo da amostra e dos padres validados.

3.

REVELADORES OU SUBSTNCIAS CROMOGNICAS

Os reveladores ou agentes cromognicos, so as substancias responsveis pelo aparecimento e/ou modificao de cor quando interagem com alguns grupos funcionais de determinadas espcies qumica; com intuito de facilitar a sua identificao e posterior classificao. Embora os agentes cromognicos sejam utilizados para a visualizao das amostras eludas na placa de CCD, mas tambm so largamente utilizando na Anlise Orgnica e em Analtica.

3.1.

CLORETO FRRICO

O FeCl3 utilizado para verificar se a amostra pertence ao grupo dos fenis. Como resultado observa-se uma eventual mudana de colorao, pois os fenis geralmente do cores variadas devido formao de complexos coloridos com on Fe3+. A colorao varia do azul ao vermelho. O teste do cloreto frrico pode ser efetuado em gua, metanol ou em diclorometano.

3ArOH

[Fe(H2O)6]3+

Fe(H2O)3(OAr)3

3H3O+

3.2.

DI (Reagente de Dragendorff Iodado)

O reagente de Dragendorff (soluo do iodeto do bismuto do potssio) forma um precipitado como a maioria dos alcalides e em alguns compostos que possuem nitrognio em sua estrutura.

3.3.

SULFATO DE MERCRIO E DFC

Grupos com anel imida, como os barbitricos e a Fenitona, reagem com o sulfato de mercrio, com a formao de manchas brancas e, em seguida reagem com DFC formando manchas violetas.

4.

ESTRUTURA QUIMICA DAS SUBSTNCIAS

PADRONIZADAS Foram padronizados somente frmacos de carter cido: cido Saliclico, Fenobarbital, Tionembutal, Fenitona, Cafena, Diazepam e Haloperidol. Todos estes compostos foram padronizados numa placa de CCD e sero descritos em seguida.

4.1.

CIDO SALICLICO

O cido saliclico um Beta-Hidroxicido (-Hidroxicido) com propriedades queratolticas (esfoliantes) e antimicrobianas; ele tambm possui ao antipirtica e antiinflamatria, possui excessiva toxicidade, o que inviabiliza seu uso. Faz parte

dos Salicilatos, que alm da ao antiinflamatria, possuem ao analgsica e antitrmica. E agem no hipotlamo alterando sua funo termorreguladora. Provocam a dilatao de pequenos vasos superficiais fazendo com que a transpirao aumente e o calor seja liberado. Agem na inflamao diminuindo a permeabilidade dos vasos sofrendo inflamao.
HO O

HO

Figura 1 - Estrutura do cido Saliclico

4.2.

FENOBARBITAL

Fenobarbital ou fenobarbitona uma substncia barbitrica usada como medicamento anticonvulsivante, hipntico e sedativo.
O

HN

N H

Figura 2 - Estrutura do fenobarbital

4.3.

TIONEMBUTAL

Tionembutal ou Tiopental um barbitrico de ao rpida, utilizado frequentemente como anestsico aplicado intravenosamente para a induo de anestesia geral ou para a produo de anestesia completa de curta durao. Tambm usado para hipnose e para o controle de estados convulsivos.

HN

N H

Figura 3 - Estrutura do Tionembutal

4.4.

FENITONA

A Fenitona uma hidantona , que usada no tratamento da epilepsia.

HN NH O

Figura 4 - Estrutura da Fenitona

4.5.

CAFENA

um composto classificado como alcalide do grupo das xantinas e designado quimicamente como 1,3,7-trimetilxantina. encontrado em certas plantas e usado para o consumo em bebidas, na forma de infuso, como estimulante.

N N N N O O

Figura 5 - Estrutura da Cafena

4.6.

DIAZEPAM

Diazepam frmaco da famlia dos benzodiazepnicos, heterocclico, p cristalino, usado como ansioltico, anticonvulsivante, relaxante muscular e sedativo. comercializado por vrios laboratrios, sob marcas comerciais diferentes, entre os quais Roche, que o criou, como "Valium".
O

Cl

Figura 6 - Estrutura do Diazepam

4.7.

HALOPERIDOL

O Haloperidol um frmaco utilizado pela medicina como neurolptico, pertencente ao grupo das butirofenonas. Pode ser indicao tambm para evitar o vmito, para o controle de agitao, agressividade, estados manacos, psicose esteridea. um dos medicamentos que mais registram uso para cometer suicdio.

O OH

N F

Cl

Figura 7 - Estrutura do Haloperidol

5. 5.1.

FLUXOGRAMA PADRONIZAO

Aplicao dos padres em cromatoplaca

Eluio da fase mvel

Revelao da placa em cuba com lmpada UV

Observar e coletar os dados

Revelar com FeCl3 e DI

Revelar com HgSO4 e DFC

Observar e coletar os dados

5.2.

EXTRAO DO FRMACO DA URINA

Urina 10mL
pH 4,0 5,0 Extrair 20mL ter-clorofrmio (1:3) Agitar por 1 minuto

Fase aquosa

Fase orgnica

Reextrair 20mL ter-clorofrmio(1:3) Agitar por 1 minuto

Filtrar sobre NaSO4 anidro Extrato

Fase orgnica

Filtrar sobre NaSO4 anidro Extrato

Extrato

Evapora 60 70C

Resduo

6.

RESULTADOS

Os resultados cromatogrficos (HRf e cores desenvolvidas) dos padres esto dispostos na Tabela 1, e calculados pela equao:

Sabendo que o solvente eluiu at a altura de 10 cm. Calculamos os fatores de reteno. Tabela 1 - Fatores de reteno calculados a partir da padronizao
Frmaco c. Saliclico Fenobarbital Tionembutal Fenitona Cafena Diazepam Haloperidol UV x v v v v v v 40; cor: marrom 85; cor: marrom 28; cor: marrom 95; cor: branco 56; cor: branco Reveladores FeCl3 - DI HgSO4 - DFC