Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 44, n. 4, out./dez.

, 2008

Validao de metodologia espectrofotomtrica para quantificao dos flavonides de Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel
Tadeu Jos da Silva Peixoto Sobrinho1, Carlos Henrique Tabosa Pereira da Silva1, Joo Eudes do Nascimento1, Jlio Marcelino Monteiro2, Ulysses Paulino de Albuquerque2, Elba Lcia Cavalcanti de Amorim1*
1

Laboratrio de Produtos Naturais, Departamento de Cincias Farmacuticas, Centro de Cincias da Sade, Universidade Federal de Pernambuco 2 Laboratrio de Etnobotnica Aplicada, Departamento de Biologia, rea de Botnica, Universidade Federal Rural de Pernambuco

*Correspondncia: E.L.C. de Amorim Departamento de Cincias Farmacuticas - Centro de Cincias da Sade - Universidade Federal de Pernambuco - Av. Prof Arthur de S, s/n, Cidade Universitria 54740-521 - Recife - PE, Brasil E-mail: elba@ufpe.br

Os laboratrios de fitoterpicos necessitam de metodologias que assegurem o controle de qualidade de seus produtos quando os mesmos no constam em farmacopias ou monografias oficiais. Baseando-se neste fato, o presente estudo visou validar uma metodologia analtica para quantificao de flavonides contidos nos extratos da pata-de-vaca (Bauhinia cheilantha [Bongard] Steudel), atravs de espectrofotometria no visvel, como equivalentes de Rutina (g/mL). Todos os parmetros exigidos pela ANVISA foram avaliados. No teste de especificidade, observou-se a existncia de pico mximo a 420 nm. O mtodo foi considerado linear e com alta sensibilidade de quantificao (2,51 g/mL). O mtodo tambm mostrou-se robusto e com elevada recuperao (98,36%). Os resultados obtidos para repetibilidade (intra-corrida), preciso intermediria (inter-corridas) e reprodutibilidade certificaram a preciso do mtodo com valores entre 0,31 e 3,58%, sendo tambm considerado exato (95,71-105,50%). Com este estudo, o mtodo proposto foi considerado especfico, preciso, reprodutvel, exato, de baixo custo e fcil execuo.

Unitermos Espectrofotometria/ validao de mtodo Rutina/uso Bauhinia Cheilautha/ farmacognosia Flavonides/quantificao Fitoterpicos/controle de qualidade

INTRODUO
O gnero Bauhinia (Caesalpiniaceae) possui aproximadamente 300 espcies e, no Brasil, podemos encontrar cerca de 20% destas em seu territrio (Haver, 2002; Silva, Cechinel Filho, 2002), muitas presentes na composio de diversos fitoterpicos ou comercializadas em feiras livres (Melo et al., 2004). Apesar de ser bastante empregada na medicina popular (Albuquerque, Andrade, 2002a,b;

Albuquerque et al., 2005), o gnero Bauhinia at o momento no faz parte da Farmacopia Brasileira (Melo et al., 2004). Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel uma espcie amplamente usada na medicina tradicional em diversas comunidades rurais, podendo ser encontrada em quintais agroflorestais ou em reas de mata de caatinga (Albuquerque, Andrade, 2002a). uma espcie de expressiva importncia local sendo usada na produo de rem-

684

T. J. S. Peixoto Sobrinho, C. H. T. P. Silva, J. E. Nascimento, J. M. Monteiro, U. P. Albuquerque, E. L. C. Amorim

dios tradicionais com ao antiinflamatria, antidiabtica, para distrbios digestivos, reumatismo e sedativa (Albuquerque et al., 2005; Almeida et al., 2005). Todavia, ainda so escassos os estudos que investiguem sua atividade biolgica. Por exemplo, o efeito hipoglicemiante da frao butanlica do extrato foliar foi testado em ratos diabticos induzidos por aloxano (Silva, Cechinel Filho, 2002). Outras espcies do gnero Bauhinia, por sua vez, j foram os objetivos de diferentes investigaes. Argolo et al. (2004) estudando a ao antioxidante das folhas de Bauhinia monandra Kurz., mostrou que os extratos clorofrmico e em acetato de etila, apresentaram excelente atividade, com concentrao de inibio IC50 de 2 mg/g de 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH) e porcentagem de inibio IP de 60-65%. Esta atividade foi atribuda aos esterides e flavonides presentes nas folhas, indicando potente atividade antioxidante quando comparada ao grupo tratado com catequinas e com outros extratos vegetais. A ao antidiabtica de diferentes fraes do extrato foliar de Bauhinia candicans Benth. foi avaliada por Fuentes et al. (2004). O tratamento utilizando doses de 8 mg/kg da frao III (Canferol-3-O-rutinosdeo) reduziu, significativamente, os nveis de glicemia, evidenciando uma atividade mais pronunciada. Estes resultados sugerem que os extratos de B. candicans aumentam o metabolismo da glicose e que podem conter princpios ativos com propriedades hipoglicemiantes. Durante os ltimos anos, diversos fitoterpicos que possuem em sua constituio plantas do gnero Bauhinia, tiveram seu registro indeferido por estar em desacordo com a legislao vigente (Brasil, 2007). Para a regularizao de fitoterpicos, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) exige atravs de sua Resoluo da Diretoria Colegiada (R.D.C) n 48, de 16 de maro de 2004 (Brasil, 2004), entre outras recomendaes, a validao da metodologia analtica para registro do produto acabado. A Resoluo Especfica (R.E.) n 899, de 29 de maio de 2003, Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos (Brasil, 2003) da ANVISA e a norma Q2(R1), Validation of analytical procedures: text and methodology do International Conference on Harmonisation - ICH (ICH, 1996), determinam que para validar uma metodologia, faz-se necessrio avaliar os seguintes parmetros: especificidade, linearidade, robustez, limite de deteco (LD), limite de quantificao (LQ), preciso e exatido. Por tanto, a validao de metodologias analticas necessita ser especfica, robusta, sensvel, precisa e exata, constituindo fundamental importncia para o controle de qualidade dos produtos e sendo parte das normas de Boas Prticas de Fabricao e Controle (Pimentel, Barros Neto, 1996; Barros Neto et al., 2002).

Em virtude das necessidades normativas no que se refere regularizao de fitoterpicos, o enfoque deste trabalho foi validar uma metodologia por espectrofotometria capaz de quantificar os constituintes flavnicos presentes nas folhas de Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel, para que possa ser usada rotineiramente nos laboratrios de controle de qualidade.

MATERIAL E MTODOS
Equipamentos Empregaram-se espectrofotmetro GBC UV/Visvel 911A (Melbourne), cubeta de quartzo de 10 mm de caminho ptico (Equilab), placa de aquecimento (Tecnal TE018) e triturador industrial (Bermar BM30) para validar o mtodo proposto. Em todos os parmetros foram utilizadas balanas e vidrarias analticas. Reagentes e padro de referncia Os solventes usados para quantificar os flavonides de B. cheilantha (Bongard) Steudel foram todos de grau analtico: metanol p.a. Cintica Reagentes & Solues e Dinmica Reagentes Analticos, cido actico glacial p.a. Merck, cloreto de alumnio 99,5% Vetec Qumica Fina e piridina Vetec Qumica Fina 99,0%. Como padro para flavonides, foi utilizado Rutina (Merck), com grau de pureza de 99,5%. Amostra vegetal As folhas de B. cheilantha foram obtidas na Estao Experimental do Instituto Agronmico de Pernambuco IPA (081418,2"S e 355457,1"), situado no agreste pernambucano, sendo a identificao confirmada pelo Prof. Dr. Ulysses P. de Albuquerque, do Departamento de Biologia da Universidade Federal Rural de Pernambuco e a exsicata foi depositada no Herbrio Prof. Vasconcelos Sobrinho do Departamento de Botnica, na Universidade Federal Rural de Pernambuco, sob o n 49684. Aps secagem temperatura ambiente, as folhas foram pulverizadas em triturador industrial para subseqente anlise dos parmetros de validao. Procedimentos Experimentais O padro (Rutina) foi preparado em balo volumtrico de 100,0 mL com metanol, obtendo-se concentrao final de 0,5 mg/mL. A cada balo foram acrescentados 0,6 mL de cido actico glacial, 10,0 mL da soluo metanlica de

Validao de metodologia espectrofotomtrica

685

piridina 20% e 2,5 mL do reagente cloreto de alumnio em metanol 50,0 mg/L, completando-se o volume com gua destilada. Aps 30 minutos em temperatura ambiente, foram realizadas as leituras em espectrofotmetro a 420 nm, utilizando-se todos os reagentes anteriores (exceto extrato ou padro) como soluo-branco para zerar o aparelho. Da amostra vegetal seca e pulverizada, 500,0 mg foram pesados e transferidos para Erlenmeyers de 50,0 mL, sendo adicionados 25,0 mL de metanol e aquecidos sob ebulio branda em placa de aquecimento por 30 minutos. Os extratos foram filtrados em papel de filtro e transferidos quantitativamente para bales volumtricos de 50,0 mL. O resduo do material foi lavado com 25,0 mL de metanol e novamente filtrado para o balo, tendo o volume completado com metanol. Do extrato, 1,0 mL foi transferido para balo volumtrico de 25,0 mL e, de forma semelhante ao procedimento empregado para a construo da curva com o padro, foram acrescentados os mesmos reagentes. Aps 30 minutos em temperatura ambiente foram realizadas as leituras em espectrofotmetro a 420 nm em cubetas de quartzo. Parmetros de validao O ensaio de especificidade foi conduzido com os extratos metanlicos das amostras foliares de B. cheilantha pulverizadas e Rutina como padro, ambos concentrao de 18,0 g/mL, para verificao de possveis interferentes. Os espectros de absorbncia foram realizados na faixa compreendida entre 300-500 nm e forneceram os dados para construo do grfico de especificidade. Para a linearidade foi usada a mdia de trs intervalos com repeties autnticas, que contemplavam seis concentraes da soluo de Rutina 0,5 mg/mL (6,0, 8,0, 10,0, 12,0, 16,0 e 20,0 g/mL). Aps relao linear visual, os resultados foram analisados estatisticamente para definir o coeficiente de determinao (mnimo aceitvel R2 = 0.99), a equao de regresso, o ajuste linear e o desvio padro relativo (Barros Neto et al., 2002; Brasil, 2003). Os limites de deteco e quantificao foram estimados (em g/mL) considerando o desvio padro em razo ao coeficiente angular (inclinao da reta) obtidos pela linearidade, nos quais foram utilizadas as equaes 1 e 2 para determinar o limite de deteco e quantificao, respectivamente (Brasil, 2003). LD = DPa 3/IC LQ = DPa 10/IC (1) (2)

O parmetro recuperao foi realizado com trs amostras em triplicata e o resultado foi obtido atravs da equao 3. CTF-CFE R(%) = 100 CFP (3)

CTF compreende a concentrao total de flavonides (padro Rutina adicionado ao extrato foliar de B. cheilantha), CFE compreende a concentrao de flavonides no extrato foliar e CFP a concentrao de flavonides do padro Rutina. R (%) a recuperao obtida (Brasil, 2003). Os fatores a serem considerados para analisar a robustez foram: tempo de extrao (20 e 40 minutos), estabilidade de leitura (20 e 40 minutos) e diferentes fabricantes de solventes (Marca 1 e Marca 2), o que est de acordo com o preconizado pela ANVISA (Brasil, 2003). Os resultados foram avaliados mediante comparao feita atravs da anlise de varincia. Os ensaios de repetibilidade e preciso intermediria foram determinados por seis amostras de mesma concentrao (18,0 g/mL) executados no mesmo dia (intra-corrida) e dois dias consecutivos por analistas diferentes (inter-corrida) (Brasil, 2003). Os resultados foram expressos como desviopadro relativo (Equao 4). A reprodutibilidade foi realizada no Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos e compreendeu seis amostras de mesma concentrao (18,0 g/mL). A exatido foi avaliada por trs controles (em triplicata) de concentrao baixa (9,0 g/mL), mdia (18,0 g/mL) e alta (27,0 g/mL). A exatido (Equao 5) foi calculada, individualmente para cada controle. DPR(%) = DP/CMD 100 E(%) = CME/CT 100 (4) (5)

Em que o DPR (%) a preciso; DP o desvio-padro; CMD a concentrao mdia determinada; E (%) a exatido; CME a concentrao mdia experimental; e CT a concentrao terica.

RESULTADOS E DISCUSSO
Especificidade Na Figura 1, podemos observar o espectro obtido para o extrato de B. cheilantha (18,0 g/mL) e para a Rutina (18,0 g/mL), na faixa compreendida entre 300-500 nm, sendo evidenciado apenas um pico de absoro mxima a 420 nm. Com isso, confirmamos que neste comprimento de onda possvel quantificar especificamente o padro para flavonide e os contidos no extrato, mesmo na presena de impurezas.

Em que o LD o limite de deteco; LQ o limite de quantificao; DPa o desvio-padro relativo; IC a inclinao de curva de calibrao.

686

T. J. S. Peixoto Sobrinho, C. H. T. P. Silva, J. E. Nascimento, J. M. Monteiro, U. P. Albuquerque, E. L. C. Amorim

TABELA I - Resultados do teste de linearidade por espectrofotometria para flavonides foliares de Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel, utilizando-se Rutina como padro Concentrao C terica (g/mL) (n=3) 6,0 8,0 10,0 12,0 16,0 20,0 6,051 8,160 9,957 12,092 15,842 19,658 DP 0,1033 0,1790 0,2561 0,2151 0,3854 0,5023 DPR (%) 1,71 2,19 2,57 1,78 2,43 2,56 E (%) 100,85 102,00 99,57 100,77 99,02 98,29

FIGURA 1 - Especificidade do mtodo construdo com padro Rutina (18,0 g/mL) e com o extrato foliar de Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel (18,0 g/mL). Amplitude compreendida entre 300-500 nm. [Abs] = Absorbncia. Linearidade e Limites de Deteco (LD) e Quantificao (LQ) O mtodo espectrofotomtrico apresentou linearidade a 420 nm para as concentraes estudadas (6,0-20,0 g/mL). A equao da regresso linear mdia obtida a partir de trs curvas de calibrao, foi y = 0,0256x + 0,0141, em que y a absorbncia (nm) e x a concentrao (g/mL) em equivalentes de Rutina (Figura 2). O coeficiente de determinao obtido foi R2 = 0,9994, comprovando a adequao do mtodo ao intervalo avaliado (Brasil, 2003). Os dados de preciso (DPR) e exatido (E) do intervalo do mtodo so apresentados na Tabela I. Os valores dos limites de deteco (LD) e quantificao (LQ) estimados pelas equaes 1 e 2, foram

C = Concentrao mdia (g/mL) de trs determinaes; DP = Desvio Padro; DPR (%) = Desvio Padro Relativo (Preciso); E (%) = Exatido. 0,75 e 2,51 g/mL, respectivamente. Com esses resultados, verificamos que o mtodo possui alta sensibilidade para detectar e quantificar o padro, sem sofrer alterao de fatores intrnsecos do equipamento. A anlise de varincia ANOVA (um critrio) confirmou que o mtodo proposto foi considerado linear e indica que no h falta de ajuste (p<0,05) (Pimentel, Barros Neto, 2002), como pode ser visto na Tabela II. TABELA II - Resultados da Anlise de Varincia ANOVA (um critrio) e teste de ajuste linear (p < 0,05) ANOVA Fonte Modelo Residual Falta de ajuste Erro puro Total

SQ

gL

MQ

FCrtico

0,2684 1 0,0026 16 0,0002 4 0,0025 12 0,2710 17

0,2684 1625,90 4,4940 0,0002 Curva Linear 0,0000 0,2050 3,2592 0,0002 No h falta de ajuste 0,0159

Recuperao e Robustez A recuperao que mede a eficincia do procedimento de extrao do mtodo proposto foi 98,36%, atestando este valor como aceitvel (Brasil, 2003). Os fatores da robustez (tempo de extrao, estabilidade e diferentes fabricantes de solventes) foram avaliados em triplicata (Brasil, 2003): intrafatores (parmetro individual) e interfatores (todos os parmetros conjuntamente). Os resultados receberam tratamento estatstico pela Anlise de Varincia ANOVA (dois critrio) fator duplo e esta anlise se encontra na Tabela III.

FIGURA 2 Curva de calibrao construda com padro Rutina (6,0-20,0 g/mL) a 420, em que a equao linear mdia obtida foi y = 0,0256x + 0,0141. [Abs] = Absorbncia.

Validao de metodologia espectrofotomtrica

687

TABELA III Anlise de varincia ANOVA (dois critrios) demonstrando que o mtodo possui robustez (p > 0,05). ANOVA Fonte de SQ gL MQ variao Entre grupos 2,4412 5 0,4882 Dentro dos 3,3919 12 0,2826 grupos Total 5,8331 17 F 1,7273 Fcrtico 3,1058

CONCLUSO
O mtodo proposto apresenta alta especificidade a 420 nm para o extrato foliar de Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel o que confere confiabilidade na quantificao de flavonides. A linearidade confirma que o mtodo linear e possui alta sensibilidade de quantificao. um mtodo robusto para os fatores exigidos pela legislao vigente e encontra-se dentro do limite para a recuperao. Os resultados de preciso e exatido obtidos atestam confiabilidade necessria para o uso desta metodologia em laboratrios de controle de qualidade. O mtodo de quantificao por espectrofotometria a 420 nm, mostrou-se preciso, exato e reprodutvel, aliado acessibilidade e facilidade de execuo.

O mtodo mostrou que no h diferena estatstica significativa (p < 0,05), j que encontrou valores de F menores que os valores de Fcrtico, demonstrando assim ser um mtodo robusto em todos os fatores analisados. Preciso e Exatido Os dados da repetibilidade (intra-corrida), preciso intermediria (inter-corridas), reprodutibilidade e exatido do mtodo encontram-se na Tabela IV, cujos valores encontraram-se compreendidos entre 0,44% e 3,58%. Para o ensaio de exatido foram encontrados resultados entre 95,71105,50%. A ANVISA regulamenta que os resultados da preciso no podem ultrapassar 5% e, para exatido, no deve ser inferior a 95% (Brasil, 2003). Estes dados confirmam que o mtodo de quantificao por espectrofotometria proposto encontra-se em conformidade com a legislao vigente e apresenta confiabilidade dos resultados.

ABSTRACT
Validation of spectrophotometric methodology for quantify flavonoid content in Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel Phytotherapeutic laboratories require access to methodologies that guarantee quality control for their products when these items are not already registered in pharmacopeias or official monographs. As such, the present study sought to validate analytical methodologies for quantifying natural flavonoids contained in extracts of pata-de-vaca (Bauhinia cheilantha [Bong.] Steudel)

TABELA IV - Resultados da repetibilidade, preciso intermediria, reprodutibilidade e exatido do mtodo espectrofotomtrico para o doseamento dos flavonides contidos nos extratos de Bauhinia cheilantha (Bongard) Steudel Ensaio Repetibilidade Preciso intermediria Analista 2 Reprodutibilidade Exatido Analista 1 Concentrao terica (g/mL) 18,0 18,0 18,0 18,0 18,0 18,0 9,0 18,0 27,0 N 6 6 6 6 6 6 3 3 3 C 18,069 18,113 18,087 18,133 18,060 18,990 9,303 17,465 25,843 DP 0,203 0,641 0,573 0,484 0,647 0,083 0,096 0,079 0,0792 DPR (%) 1,12 3,54 3,17 2,67 3,58 0,44 1,03 0,45 0,31 E (%) 100,38 100,63 100,48 100,74 100,33 105,50 103,37 97,03 95,71

C = Concentrao mdia (g/mL) das n determinaes; DP = Desvio Padro; DPR (%) = Desvio Padro Relativo (Preciso); E (%) = Exatido.

688

T. J. S. Peixoto Sobrinho, C. H. T. P. Silva, J. E. Nascimento, J. M. Monteiro, U. P. Albuquerque, E. L. C. Amorim

using visible light spectrophotometry and a rutin standard (g/ml). All of the parameters required by ANVISA were evaluated. The specificity test revealed a maximum absorption peak at 420 nm. The methodology was considered linear and of high quantification sensitivity (2.51 g/ml). The methodology also proved to be robust, and had high recovery levels (98.36%). The results obtained for repeatability, intermediate precision (intraand inter-day), and reproducibility all certified the precision of the method, with values between 0.31 and 3.58%; the methodology was also considered exact (95.71-105.50%). This study demonstrated that the proposed methodology can be considered specific, precise, reproducible, exact, of low cost, and easy to perform. Uniterms: Spectrophotometry/methods validation. Rutin/ use. Bauhinia cheilautha/pharmacognosia. Flavonoids/ quantification. Phytotherapics/quality control.

ARGOLO, A. C. C.; SANTANA, A. E. G.; PLETSCH, M.; COELHO, C. B. B. Antioxidant activity of leaf extracts from Bauhinia monandra. Bior Tech, v.95, n.2, p.229233. 2004. BARROS NETO, B.; PIMENTEL, M. F.; ARAJO, M. C. U. Recomendaes para calibrao em qumica analtica - Parte I. Fundamentos e calibrao com um componente (calibrao univariada). Quim. Nova, v.25, n.5, p.856865, 2002. BRASIL, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA). R. E, n 899 de 29 de maio de 2003 Guia para validao de mtodos qualitativos e bioanalticos. Disponvel em: http://e-legis.anvisa.gov.br/leisref/public/ showAct.php?mode=PRINT_VERSION&id=15132. Acesso em: 05 de janeiro 2007. BRASIL, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA). Resoluo R.D.C. n 48, de 16 de maro de 2004 Dispe sobre o registro de medicamentos fitoterpicos. Disponvel em: http://e-legis.anvisa.gov.br/ leisref/public/showAct.php?id=10230#. Acesso em: 05 de janeiro de 2007. BRASIL, Legislao da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. (Visalelgis-ANVISA) Disponvel em: http:// www.anvisa.gov.br/legis/index.htm. Acesso em: 14 de janeiro 2007. FUENTES, O.; ARANCIBIA-AVILA, P.; ALARCN, J. Hypoglycemic activity of Bauhinia candicans in diabetic induced rabbits. Fitoterapia, v.75, n.6, p.527-532, 2004. HAVER, N. J. Desenvolvimento, purificao e caracterizao de IgG anti lectina de folha de Bauhinia monandra. 2002. 95p.Tese (Doutorado em Cincias Biolgicas) Centro de Cincias Biolgicas, Universidade Federal de Pernambuco, Recife. ICH, International Conference on Harmonization.Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2(R1). 1996. Disponvel em: http://www.ich.org/LOB/media/ MEDIA417.pdf. Acesso em: 05 de janeiro 2007. MELO, J. G.; NASCIMENTO, V.T.; AMORIM, E. L. C.; LIMA, C. S. A.; ALBUQUERQUE, U. P.Avaliao da qualidade de amostras comerciais de boldo (Peumus boldus Molina), pata-de-vaca (Bauhinia spp.) e ginco (Ginkgo biloba L.). Rev. Bras. Farmacogn., Joo Pessoa, v.14, n.2, p.11-120, 2004.

AGRADECIMENTOS
Os autores gradecem CAPES (Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior) pelo apoio financeiro, ao Instituto Agronmico de Pernambuco (IPA), Profa. Dra. Miracy M. de Albuquerque do Ncleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos (NQCMCUFPE) pelos resultados da especificidade, ao Prof. Dr. Pedro Jos Rolim Neto do Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos (LTM-UFPE) pelas anlises de reprodutibilidade.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ALBUQUERQUE, U. P.; ANDRADE, L. H. C. Conhecimento botnico tradicional e conservao em uma rea de Caatinga no Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Acta Bot Bras, v.16, n.3, p.273-285, 2002a. ALBUQUERQUE, U. P.; ANDRADE, L. H. C. Uso de recursos vegetais da Caatinga: o caso do agreste do estado de Pernambuco (Nordeste do Brasil). Intercincia, v.27, n.7, p.336-346, 2002b. ALBUQUERQUE, U. P.; ANDRADE, L. H. C.; SILVA, A. C. O. Use of plant resources in a seasonal dry forest (Northeastern Brazil). Acta Bot Bras, v.19, n.1, p.27-38, 2005. ALMEIDA, C. F. C. B. R.; SILVA, T. C. L.; AMORIM, E. L. C.; MAIA, M. B. S.; ALBUQUERQUE, U. P.Life strategy and chemical composition as predictors of the selection of medicinal plants from the caatinga (Northeast Brazil). J Arid Environ, v.62, n.1, p.127-142, 2005

Validao de metodologia espectrofotomtrica

689

PIMENTEL, M. F.; NETO, B. B. Calibrao: Uma reviso para qumicos analticos. Quim. Nova, v.19, n.3, p.268277, 1996.

SILVA, R. L.; CECHINEL FILHO, V.Plantas do Gnero Bauhinia: Composio qumica e potencial farmacolgico. Quim. Nova, v.25, n.3, p.449-454, 2002. Recebido para publicao em 23 de outubro de 2007 Aceito para publicao em 30 de julho de 2008