UNIVIX Centro de Educao Superior Farmcia e Bioqumica Bioqumica clnica I Jorge Terro

Ana Paula Barbosa Bormann Antonielle Lucindo Camila Gonalves Marinho Luceline Alves Soares de Souza Riaze Fernades 9 perodo

Diagnstico laboratorial da diabete

Vitria Maro, 2005

Ttulo: Diagnstico laboratorial da diabetes mellitus. (dosagem da glicose nos lquidos corporais) Objetivo: Realizar o mtodo de diagnstico laboratorial da diabetes mellitus para trs amostras de soro com concentraes de glicose desconhecidas. Introduo: A glicose a principal fonte de energia para o organismo humano, derivando da degradao dos glicdeos da alimentao (cereais, vegetais ricos em amido e legumes) e das reservas corporais (glicognio), assim como da sntese endgena a partir de protenas ou do glicerol dos triglicerdeos. O nvel de glicose no sangue mantido dentro de uma faixa razoavelmente estreita, em diversas condies (alimentao, jejum prolongado ou exerccio intenso), por hormnios reguladores, tais como a insulina (diminui a glicose sangunea), glucagon ou epinefrina (aumentam os nveis sanguneos de glicose). O distrbio mais freqente encontrado do metabolismo glicdico a glicose sangunea elevada devido a diabetes mellitus. A incidncia de hipoglicemia desconhecida, mas muito menor. O diagnstico dos distrbios no metabolismo da glicose depende da demonstrao de alteraes na concentrao de glicose no sangue. As vrias desordens do metabolismo dos carboidratos podem estar associadas com: o aumento da glicose plasmtica (hiperglicemia), reduo da glicose plasmtica (hipoglicemia) e concentrao normal ou diminuda da glicose acompanhada de excreo urinria de acares redutores diferentes da glicose (erros inatos do metabolismo da glicose). Muitos procedimentos analticos so utilizados para dosar os nveis sanguneos de glicose. No passado, as anlises eram, com freqncia, executadas com mtodos relativamente inespecficos, que resultavam em valores falsamente elevados. Quase todas as usualmente utilizadas so atualmente enzimticas, e os mtodos mais antigos, como as tcnicas colorimtricas ou de oxidorreduo, raramente so empregadas. Resultados normais no devem excluir o diagnstico de distrbios do metabolismo dos carboidratos. 1Materiais utilizados: Vidrarias: Pipeta graduada 5ml; tubos de ensaio. Reagentes: Amostras de soro; Kit de glicose: #Reagente 1 (padro):glicose 100mg/dL, cido benzico 20,47 mmol/L. #Reagente 2 (tampo): tampo fodfato (pH7,0) 100mmol/L, fenol 10mmol/L. #Reagente 3 (reagente enzimtico lquido estvel): tampo 100 mmol/L (pH7,0), 4-aminoantipirina 0,3 mmol/L, azida sdica 15,38 mmol/L, glicose oxidase 10.000 U/L, peroxidase 700 U/L. Obs.: conservar os trs reagentes entre 2 e 8C. Equipamentos: Pipeta automtica 20l; Banho-maria;

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Espectrofotmetro. 4Diversos: Pras; Estante; Cubetas de quartzo; Ponteiras. Metodologia: Preparo das solues: Identifica-se 7 tubos de ensaio, sendo um deles representado pela letra B (branco), 3 deles com a letra P (padro) e 3 enumerados de 1 a 3 contendo amostras de pacientes diferentes. Utilizando-se uma pipeta automtica, colocase 20l do reagente 1 nos trs tubos identificados com a letra P. Em seguida, pipeta-se 20l da amostra de soro de cada paciente em seu respectivo tubo. A cada amostra pipetada deve-se trocar a ponteira. Por fim, utilizando-se uma pipeta graduada coloca-se 2ml do reagente de trabalho em cada tubo. Transfere-se os tubos para um banho-maria 37C, deixando-os durante 10 minutos. Obs.: o reagente de trabalho j havia sido preparado anteriormente, mas ele consiste em uma mistura de 24 partes do reagente 2 com 1 parte do reagente 3. o reagente de tralho estvel durante 30 dias entre 2 e 8 C e 7 dias entre 15 e 30C. B P1 P2 P3 1 2 3 Reagente 1 20l 20l 20l Amostras 20l 20l 20l Reagente de trabalho 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2Leitura no espectrofotmetro (500nm): Liga-se o espectrofotmetro 20 minutos antes da leitura para estabilizao dos componentes. Seleciona-se no aparelho o modo T. Coloca-se a cubeta contendo o branco ( tubo B ), ajuntando 100% de transmitncia. Seleciona-se no aparelho o modo A, ajustando 0% de absorbncia. Seleciona-se no aparelho o modo A. Realiza-se a leitura dos tubos contendo o padro, anotando-se os valores encontrados para cada tubo. Em seguida, faz-se a leitura dos tubos contendo as amostras 1,2 e 3, seguindo a ordem de intensidade de cor para evitar interferncias entre as amostras. Anota-se o valor de absorbncia encontrado para cada amostra. Resultados e discusses: A glicose oxidada enzimaticamente pela glicose-oxidase de acordo com a seguinte reao: glicose oxidase Glicose + O2 cido glucnico + H2O2
peroxidase

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2 H2O2 + fenol + 4-aminoantipirina

cromgeno cereja + 4H2O

O perxido de hidrognio em presena da peroxidase reage com a 4aminoantipirina e fenol, formando um cromgeno vermelho cereja cuja intensidade de cor proporcional a concentrao de glicose. Os mtodos de glicose oxidase so adequados para dosar glicose no liquor. A urina contm altas concentraes de substncias que interferem com a reao da peroxidase, produzindo resultados falsamente baixos. O mtodo com a glicose oxidase no deve, portanto, ser empregado para a urina. B P1 P2 P3 1 2 3 - 0,331 0,368 0,494 0,333 1,280 0,442

Absorbncia

Calcula-se a mdia dos valores de absorbncia dos trs padres para diminuir a faixa de erro de pipetagem. Observando-se os valore de absorbncia dos tubos contendo o padro, nota-se uma discrepncia do valor de absorbncia do padro 3, tornando-se necessrio elimina-lo do clculo da mdia, pois do contrrio ele pode aumentar o valor de absorbncia do padro e conseqentemente diminuir o valor da concentrao de glicose. Mdia dos padres = 0,331 + 0,368 = 0,3495 2 Fator de calibrao = concentrao do padro = 100 = 286 absorbncia do padro 0,3495 Clculo da concentrao das amostras: Concentrao da amostra = Abs da amostra . Fc Tubo 1: CA = 0,333 . 286 = 95mg/dL Tubo 2: CA = 1,280. 286 = 366 mg/dL Tubo 3: CA = 0,442 . 286 = 126 mg/dL Concluso: Analisando-se os resultados pode-se dizer que o paciente 1 est dentro da faixa de glicose considerada normal (70 a 99mg/dL). J o paciente 2, considerando-se os valores de referncia, encontra-se com valores elevados de glicemia, indicando uma quadro de diabetes (acima de 126 mg/dL). O paciente 3 est dentro do limite da faixa de referncia (100 a 126 mg/dL) sendo considerado um pr-diabtico. Referncias bibliogrficas: 1- Apontamentos de aula; 2- MOTTA, Valter. T. Bioqumica clnica para o labortrio-princpios e interpretaes. 4 ed. Porto Alegre: editora mdica missau, 2003.

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BURTIS,Carla;et al.Tretz. Fundamentos de bioqumica. 4 edio. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,1998.