A transcrio consiste na sntese de RNA.

Ela realizada por um complexo enzimtico cuja enzima chave a RNA polimerase, composta de vrias subunidades e que realiza a polimerizao do RNA a partir de um molde de DNA. Esse processo ocorre em trs etapas principais, a iniciao, o alongamento e o trmino, cada um contendo fatores especficos que sero explicados adiante. A figura abaixo representa um esquema simplificado do processo.

A transcrio em eucariontes bem mais complexa que em procariontes. Nos eucariontes a transcrio ocorre no ncleo, enquanto a traduo ocorre no citoplasma. J nos procariontes tal separao celular no existe, sendo os dois processos muito bem acoplados no espao. A separao temporal e espacial desses dois processos nos eucariontes permite a eles uma melhor regulao da expresso gnica. Outra diferena que o transcrito primrio de mRNA dos eucariontes, ao contrrio dos procariontes, amplamente processado. O RNA nascente sofre uma srie de alteraes: aquisio de revestimento (cap) na sua extremidade 5, cauda poli-A na extremidade 3 e remoo exata de introns (splicing) para a formao de mRNAs maduros com mensagens contnuas. Alguns mRNAs maduros chegam a ser at dez vezes menores em tamanho que seus precursores.

Processamento de RNA :

Aps a transcrio, o RNA resultante chamado de transcrito primrio. Os transcritos primrios de RNA mensageiro (mRNA), em procariontes, sofrem pouco ou nenhum processamento aps sua sntese e, em geral, so traduzidos ainda durante a sua produo. Entretanto, nos eucariotos, o transcrito primrio necessita de algumas alteraes para adquirir maior estabilidade e caracterizar a molcula de RNA que ir para o citoplasma ser traduzida. O conjunto dessas alteraes necessrias chamado de processamento do RNA. O RNA transportador (tRNA) e o RNA ribossmico (rRNA), ao contrrio do mRNA procaritico, so gerados por quebras e outras alteraes dos transcritos recm-sintetizados. De uma nica cadeia nascente de RNA contendo regies espaadoras podem ser produzidas, por exemplo: trs tipos de molculas de rRNA e uma de tRNA, vrios tipos de tRNA ou, at mesmo, vrias cpias de um mesmo tRNA - sendo isso determinado pela seqncia do transcrito. Entre outras modificaes ps-transcricionais possveis, podemos citar a adio de nucleotdeos aos trminos das cadeias de RNA e a alterao de bases e de unidades de ribose dos RNAs. comum em procariontes a adio da seqncia terminal CCA ponta 3' de tRNAs e a metilao de algumas bases do rRNA, j em eucariontes o que normalmente ocorre a metilao da hidroxila 2' de uma a cada cem unidades de ribose do rRNA. Todas as molculas de tRNA apresentam bases incomuns (ribotimidilato, pseudo-uridilato, etc.) formadas por alterao enzimtica de um ribonucleotdeo padro no tRNA precursor. Nos eucariontes, o processamento do transcrito primrio que leva a formao do tRNA maduro inclui a clivagem da seqncia lder ou inicial 5'; o splicing ou processamento de introns; a substituio do terminal 3' UU por CCA e a modificao de vrias bases. O processamento de tRNAs bem conservado entre as espcies de eucariontes, sendo a especificidade das enzimas de splicing mantida ao longo da evoluo. O gene de uma levedura, por exemplo, pode ser transcrito e processado por Xenopus, um anfbio. O processamento dos mRNAs em eucariotos realizado em trs etapas principais: Adio do cap 5'; Splicing;

Adio da cauda de poliadenilato; Na figura a seguir voc pode ver um esquema sobre processamento do RNA.

Cap5 :

O capacete do RNA uma modificao que ocorre na sua extremidade 5. Ele confere a essa molcula uma maior estabilidade, pois protege-a da ao de fosfatases e nucleases. Alm disso o cap 5, como conhecido esse capacete, aumenta a chance desse RNA ser capturado pelos sistemas eucariticos de traduo, levando a uma maior produo de protenas. Deve-se notar que essa alterao no acontece nos RNAs transportadores e ribossmicos, acontecendo principalmente nos mRNAs e tambm nos hnRNAs.

Etapas para a formao do CAP 5' A formao do CAP exige uma srie de alteraes qumicas na estrutura do RNA. Primeiramente, um fosfato da extremidade 5 do RNA deve ser liberado por hidrlise, gerando uma extremidade 5 difosfato. Essa extremidade difosfato deve ento se ligar a um tomo de fsforo de um GTP, gerando uma ligao incomum 5-5 trifosfato. O nitrognio que se encontra na posio 7 da guanina da extremidade deve ento sofrer uma metilao, mediada pela enzima S-adenosil-metionina, formando o chamado cap 0. As riboses dos dois primeiros nucleotdeos do RNA podem tambm ser metiladas na extremidade 2'-OH, formando os chamados cap 1 e cap 2. Veja na figura abaixo a estrutura do CAP 5'.

Cauda Poli A : Alm dos capacetes, a maioria dos RNAs eucariticos so alterados de forma a conter uma cauda de poliadenilato na sua extremidade 3. Nessa cauda esto presentes cerca de 200 As, que se enrolam ao redor de vrias cpias de uma protena ligadora. Essa cauda tem a funo de atuar como acentuadora da traduo, pr oteger o mRNA da digesto por nucleases presentes no meio e proporcionar uma maior estabilidade molcula. Especula-se que ela tambm tenha um papel importante no transporte do mRNA para o citoplasma.

 interessante notar que o nucleotdeo que se encontra logo antes da cauda poli-A no o ltimo que ser traduzido e podem haver mais centenas de nucleotdeos alm da extremidade 3 de um RNA maduro.

Formao da cauda Poli-A Os nucleotdeos contendo a adenina no so codificados pelo DNA e so adicionados posteriormente ao mRNA. Como o mecanismo celular sabe onde dever ser adicionada a cauda poli-A? Estudos mostraram que os transcritos primrios de RNA so clivados atravs de uma endonuclease especfica que reconhece a seqncia AAUAAA. Entretanto, apenas essa seqncia no suficiente para que ocorra o corte, tambm necessrio que haja um contexto ainda desconhecido de nucleotdeos prximos que caracterizem a regio. Aps o corte, uma enzima polimerase poli-A, dependente de ATP, acrescenta os nucleotdeos contendo a base adenina na extremidade 3 do RNA.

Splicing: Sobre a interrupo dos genes At a pouco tempo atrs, pensava-se que os genes celulares eram compostos por arranjos contnuos de nucleotdeos. Somente em 1977 descobriu-se a existncia de genes interrompidos. Assim, quando se olhava o DNA, percebia-se que o gene possua mais nucleotdeos do que aqueles encontrados no mRNA (necessrios para a produo de protenas). Hoje, sabe-se que os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional. As seqncias que so retiradas do transcrito primrio foram chamadas de ntrons e aquelas que permaneceram como parte do RNA funcional, exons.

Processamento alternativo interessante notar que, para algumas protenas, o conceito de ntros e exons meio confuso. Com essas protenas acontece o chamado processamento alternativo. Nesse tipo de processamento pode-se dizer que os ntrons e os exons so tecido-especficos, ou seja, em um tecido ele pode ser um ntron e em outro tecido ele pode funcionar como exon. Isso pode caracterizar funes especficas de uma mesma protena em um determinado tecido. Deve-se notar que os fatores que controlam esse corte especfico ainda so pouco conhecidos.

Splicing O splicing consiste na retirada dos ntrons de um RNA precursor, de forma a produzir um mRNA maduro funcional. Essa exciso dos ntrons do mRNA um evento muito importante e requer uma extrema preciso das enzimas envolvidas no processo. A falta ou o acrscimo de um nico nucleotdeo em um exon pode levar a uma alterao da fase de leitura e a produo de uma protena completamente diferente da original. A anlise das seqncias de milhares de unies ntro-exon de eucariotos permitiu a definio de consensos apresentados dentro dessa regio de corte. Esses dados mostraram que a grande maioria dos ntrons comea com uma seqncia GU e termina com AG. A seqncia de consenso no ponto de corte 5 dos vertebrados AGGUAAGU e na extremidade 3 dos RNAs de mamferos, o consenso um trecho contendo 10 pirimidinas (C ou U), seguidas por uma base qualquer, um C e uma seqncia final AG (veja abaixo).

Alm disso, os ntrons possuem ainda, um importante ponto interno, chamado de ponto de ramificao, situado entre 20 e 50 nucleotdeos antes do ponto de corte 3 e que no muito conservado nos mamferos. O restante do ntron extremamente varivel e no tem muita importncia no processo de splicing, o que foi provado com a produo de ntrons quimricos atravs de experimentos biomoleculares. Deve-se notar ainda que formas de algumas doenas, como a talassemia, podem ser causadas pela mutao em regies intrnicas (nesse caso a mutao criou um novo local de corte para o ntron, produzindo uma sinal de parada precoce da protena). Etapas do Corte :

Durante a exciso dos ntrons dos precursores do mRNA acontece a formao de intermedirios em forma de lao.

A reao se inicia com a clivagem da ligao fosfodister entre o ltimo nucleotdeo do primeiro exon (upstream, mais prximo da extremidade 5) e a ponta 5 do primeiro ntron. Essa clivagem feita atravs do ataque da extremidade 2-OH de um adenilato no ponto de ramificao, formando uma ponte 2-5 fosfodister entre esse adenilato e o fosfato 5 terminal do ntron (veja a figura). Esse adenilato realiza, portanto, ligaes entre 3 nucleotdeos, gerando um intermedirio em forma de lao.

Posteriormente, a extremidade 3-OH do exon1 ataca a ponte fosfodister entre o ntron e o segundo exon, fazendo com que os exons fiquem unidos e liberando o ntron que contm ainda a adenosina pareada com 3 nucleotdeos. Esse processo deve ser repetir para a retirada de cada um dos ntrons da seqncia precursora. At que todos os exons estejam unidos, os produtos so mantidos juntos atravs de um spliceossomo, constitudo de diversas ribonucleoprotenas que reconhecem os pontos de ramificao e os pontos de corte 5 e 3 dos precursores de mRNA.