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Estudio de las Propiedades de la Semilla de Aguacate (Persea americana) Variedad Hass, para el Aprovechamiento Integral del Fruto Mara E. Pahua Ramos, Alicia Ortiz Moreno, German Chamorro C. y Leticia Garduo S. Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional. Prolongacin de Carpio y Plan de Ayala s/n. Col. Plutarco Elas Calles. Delegacin Miguel Hidalgo. C.P. 11340. Mxico, D.F. elenapahuayahoo@com.mx. * Becaria de PIFI ** Becarios de CONACYT Resumen En Mxico el aguacate es un fruto de gran importancia econmica, ya que ocupa el primer lugar a nivel mundial en produccin con ms de 987,323 toneladas anuales, tiene amplias oportunidades en los mercados internacionales, tanto en fresco como procesado en guacamole, pur, aceite, cosmticos. Cabe sealar que en la industrializacin de estos productos se ocupa la parte comestible del aguacate, desechndose la cscara y la semilla. La semilla representa de un 15 a 16 % del total del fruto, en consecuencia se desperdician aproximadamente 148 000 toneladas anualmente. Sin embargo para que estos productos puedan ser consumidos por el ser humano deben estudiarse los factores de riesgo, as como una posible actividad farmacolgica. El anlisis fitoqumico de la semilla de aguacate mostr presencia de taninos y azcares reductores. La dosis letal media (DL50) tuvo un valor mayor a 2000 mg/kg, lo que corresponde a un producto ligeramente txico. Tambin se realiz un estudio en ratones en el cual se demuestra que hay una disminucin del 55 % de movilidad espermtica, por lo que se podra utilizar la semilla de aguacate como un anticonceptivo natural para varones a corto plazo. Abstact In Mexico, the avocado is a fruit with great economic importance, due its production arises the 987,323 tons, taking the Mexican production the first place in the world. Avocado also has a wide range of opportunities at international markets, selling it as a fresh fruit and as processed items like guacamole, smashed, oil, and cosmetics. In the process of obtaining this products, it is used only the eatable part of the fruit, throwing away the seed and the pericarp. The seed represents 15-16% of the whole fruit, so 148,000 tons of seed are wasted every year. It is important to find the adequate green technologies which help us to avoid this pollution. Before this byproduct is considered as a potential food or drug, many toxicological studies are needed in order to know if the Natural compounds in the seed have shown pharmacological activities. For this purpose in this investigation different analysis were made
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to known the seeds toxicity. The avocado seed phytochemical analysis showed the presence of tannins. The avocados seed lethal medium dose (LD50) found in this research was 2000 mg/Kg which corresponds to a slightly toxic product. After six days of feeding the mice with an avocado seed containing diet, their sperm mobility was reduced in a 55% indicating its potential as a short term male contraceptive. There was not variation in the liver enzymes used as indicators of liver toxicity, indicating that no liver damage is produced. Introduccin. La actividad del aguacate en Mxico genera una derrama econmica por ms de 5,000 millones de pesos anuales; la fortaleza de la industria del oro verde depende en gran medida de la concurrencia de los distintos actores que en ella participan, en especial de los centros acadmicos y de investigacin. El aguacate como fruto fresco tiene gran aceptacin, con amplias oportunidades de participacin en los mercados internacionales, tanto en fresco como procesado en guacamole, pur, aceite, cosmticos, etc. (Congreso Mexicano y Latinoamericano del Aguacate 2005) . Cabe sealar que en la industrializacin de estos productos se ocupa la parte comestible del aguacate, desechndose la cscara y la semilla, las cuales pudieran tener alguna utilidad. Por lo que uno de los retos en la industrializacin de aguacate, es el uso integral del mismo dando un valor agregado a la semilla y a la cscara. La semilla representa de un 15 a 16 % del total del fruto se desperdician aproximadamente 148,000 toneladas de semilla anualmente, mismas que son desechadas sin aprovechamiento alguno. A la semilla de aguacate se le han atribuido varias propiedades cosmetolgicas y farmacuticas; Propiedades farmacolgicas Debido a la presencia de cidos grasos, compuestos polifenlicos y esteroles, ha sido usada desde pocas precolombinas contra padecimientos tales como dolores musculares, parsitos y micosis. (Garca, 1999) Propiedades Cosmetolgicas. La semilla tostada y pulverizada se emplea en el tratamiento de la cada de cabello y para el tratamiento de la caspa (http://www.living-food.com) En el presente trabajo se realiz la determinacin de la LD50 y el estudio de los efectos sobre la movilidad y viabilidad espermtica de la semilla de aguacate variedad Hass, para darle una posible utilidad como anticonceptivo natural para varones.
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Material y mtodos Materia prima. Se emplearon semillas de aguacate Persea americana, las cuales se deshidrataron a temperatura ambiente y posteriormente se redujeron de tamao en un molino de martillos, hasta obtener un polvo fino. Material biolgico. Se utilizaron ratones machos de la cepa ICR de aproximadamente 8 semanas de edad. Los ratones se acondicionaron en jaulas metlicas a temperatura de 231 C, ciclos de luz oscuridad de 12 horas y humedad relativa de 60%; los animales recibieron agua y alimento ad limitum, durante el transcurso del tratamiento. Anlisis proximal. El anlisis proximal de la semilla de aguacate se realiz por los mtodos descritos en el AOAC # 935.39, cuantificando humedad 925.04, cenizas 900.02, fibra cruda 962.09, protena 920.152 y extracto etreo 920.39. Anlisis fotoqumico. Del polvo fino de la semilla de aguacate se obtuvieron tres extractos: acuoso, etanlico y etreo. Con los tres extractos se realiz un anlisis fitoqumico preliminar por el procedimiento de Asongalem et al., 2004. Determinacin de la DL50. Los ratones se distribuyeron aleatoriamente en grupos de tres animales cada uno. Se mantuvieron en ayuno durante 12 horas. Posteriormente se les administr la semilla de aguacate por va intragstrica empleando una cnula, en dosis de 10, 100, 1000 mg/Kg de peso. Los animales se mantuvieron en observacin durante 14 das, se contabilizaron el nmero de animales muertos y constantemente se observ la sintomatologa que presentaron. Al trmino de ese periodo y siguiendo la metodologa descrita por Lorke (1983) se consultaron las tablas de dosis de acuerdo con los resultados obtenidos, para determinar la dosis con la que se continuara el estudio para determinar la DL50 Estudio preliminar de viabilidad espermtica. Con la finalidad de determinar si la semilla de aguacate tiene propiedades sobre los parmetros espermticos se realiz un estudio preliminar con ratones de la cepa ICR los cuales se administraron con una dosis de 500mg de semilla de aguacate por kilogramo de peso del animal durante 6 das. Transcurrido este tiempo se sacrificaron los ratones y se determin: la cuenta espermtica, peso de rganos sexuales, enzimas indicadoras de hepatotoxicidad, colesterol total y lipoprotenas de alta densidad. Viabilidad espermtica. Se administraron por va intragstrica durante 6 das dosis de dosis de 500mg de semilla de aguacate por kilogramo de peso del animal, la muestra se
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homogeniz en un mortero con 5mL de agua y 1 gota de Tween 80. Al trmino del tratamiento se extrajeron muestras de sangre de los animales por medio de una puncin en el seno retroorbital y posteriormente se sacrificaron para realizar el anlisis espermtico (viabilidad y concentracin) y peso de rganos sexuales secundarios. Despus del sacrificio se realiz una incisin en la regin plvica del animal y se procedi a retirar el epiddimo junto con el canal deferente los cuales limpiaron; enseguida, se realiz un corte en la cola del epiddimo para que fluyera el lquido seminal. La parte del epiddimo unida al canal deferente se coloc en un vidrio de reloj que contena 0.5mL de solucin salina isotnica al 0.9 % a una temperatura de 37C y por el extremo de dicho canal se inyectaron 0.5mL de la solucin, para verter el lquido seminal al vidrio de reloj. Posteriormente, se homogeneiz la suspensin, tomando una alcuota, (Peuelas 1997) que se deposit en un porta objetos para ser estudiado en el equipo TOX-IVOS en donde se evaluaron los siguientes parmetros: concentracin espermtica, movilidad e inmovilidad. Se aplic un anlisis de varianza a los resultados obtenidos. Resultados y discusin Anlisis proximal. Los resultados del anlisis proximal realizado a la semilla de aguacate comparados con los obtenidos por Carriles (1977) se muestran en el Cuadro 1. Cuadro 1. Anlisis proximal de la semilla de aguacate variedad Hass Determinacin Resultados Experimentales (g/100g) Resultados Bibliogrficos (g/100g) Humedad Cenizas Protena Fibra Cruda Extracto Etreo 47.5 1.2 2.6 3.5 2.4 47.8 0.9 1.7 3.5 2.8

Como se puede observar en el cuadro 1 los resultados obtenidos experimentalmente fueron muy semejantes con los reportados por Carriles (1997), la mayor diferencia se tuvo en la cantidad de protenas, lo cual pudo deberse a la poca del ao en que fue cultivado el aguacate.
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Fotoqumico. En el cuadro 2 se muestra el anlisis fitoqumico realizado a la semilla de aguacate. De estos resultados se destac el contenido de taninos y azcares reductores. Castro en 1999 atribuy a los taninos un efecto desinflamarorio y antihemorrgico. Cuadro 2. Anlisis fotoqumico de la semilla de aguacate variedad Hass
Muestra Extracto etreo de semilla de aguacate Negativo Positivo Azul Fehling Benedict NaOH Flavonoides HCl Quinonas NaOH H2SO4 Saponinas Serquiterpenlactonas Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Positivo Naranja Positivo Naranja Negativo Extracto etanlico de semilla de aguacate Negativo Positivo Azul Positivo Naranja Positivo Naranja Positivo Extracto acuoso tradicional de semilla de aguacate Negativo Negativo Positivo Naranja Positivo Naranja Positivo

Alcaloides Taninos Azcares reductores

DL50. El valor de la DL50 obtenida de la semilla de aguacate, fue mayor a 2000 mg/Kg de peso corporal. Comparando este resultado con lo informado Deichmann (1969), se puede considerar que la semilla de aguacate tiene un intervalo de toxicidad 4 que corresponde a ligeramente txica. Viabilidad espermtica. Los resultados del estudio de la semilla de aguacate administrada va oral a ratones ICR durante 6 das se muestran en los cuadros 3 al 6. En el cuadro 3 se muestran los resultados de los niveles de colesterol total, colesterol-HDL, colesterol-LDL y triglicridos (TG). De estos resultados se puede resaltar que los animales administrados con semilla de aguacate disminuyeron las concentraciones de colesterol total y colesterol-LDL con respecto al grupo testigo.

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Cuadro 3. Perfil lipdico de ratones ICR administrados con semilla de aguacate Grupo Testigo Semilla de aguacate Colesterol (mmol/L) 44.18 32.99 HDL (mmol/L) 27.3 27.25 LDL TG

(mmol/L) (mmol/L) 16.52 5.17 0.81 1.27

n=8 Anlisis de Variancia

Respecto al anlisis de movilidad y cuenta espermtica los resultados obtenidos se muestran en el cuadro 4. Se puede observar que en los animales tratados con la semilla de aguacate se manifest una disminucin en los porcentajes de espermatozoides deficientes e inmviles con respecto al grupo testigo. Cuadro 4. Parmetros espermticos Grupo Testigo Semilla de aguacate Mviles (%) 83.33 46.67* Inmviles (%) 4.0 35.83* Deficientes (%) 14.33 22.5 Cuenta espermtica (x106 cel/mL) 5.36 0.15*

n=8 Anlisis de Variancia

En el cuadro 5 se presentan los resultados de los pesos de los rganos sexuales. Se encontr una diferencia significativa en el peso del epiddimo y del testculo. Sin embargo en la vescula seminal no se encontr diferencia significativa. Cuadro 5. Peso relativo de rganos sexuales Grupo Testigo Semilla de aguacate Epiddimo 0.258 0.107* Testculo 0.236 0.366* Vescula seminal 0.565 0.566

n=8 Anlisis de Variancia *Diferencia significativa con respecto al grupo testigo p<0.05 Conclusiones El anlisis proximal obtenido experimentalmente fue muy similar a los resultados reportados por Carriles (1997).
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La DL50 de la semilla de aguacate fue mayor a 2000 mg/Kg, lo que corresponde a un producto ligeramente txico. De los resultados de perfil lipidico se puede resaltar que los animales administrados con semilla de aguacate disminuyeron las concentraciones de colesterol total y colesterol-LDL con respecto al grupo testigo. Durante el estudio de la movilidad espermtica se obtuvo una disminucin del 55% de espermatozoides mviles de los ratones tratados con semilla de aguacate con respecto al grupo testigo. BIBLIOGRAFIA. A. O. A. C. (1995), Association of Official Analytical Chemist. Oficial Methods o Anlisis 15 Edition. Washington D.C.U.S.A. Asongalem, E.A., Foyet, H.S., Ekobo, S., Dimo, T., Kamtchouing, P. 2004. Antiinflammatory, lack of central analgesia and antipyretic properties of Acanthus montanus (Ness) T. Anderson. J. of Ethnopharmacol. 95-1: 63-68. Carriles Rangel F. 1997 Obtencin y caracterizacin de aceite de semilla de aguacate Persea americana variedad Hass Universidad La Salle Escuela de Ciencias Qumicas Mxico D.F. Castro Oscar, Gutirrez J. M. 1999 Neutralizacin del efecto hemorrgico inducido por veneno de Bothrops asper (Serpentes: Viperidae) por extractos de plantas tropicales Revista de Biologa Tropical vol. 47 no. 3. Deichmann,W. B. Y Gerarde H. W. 1969 Toxicology of drugs and chemical. Academic Press, New York. Garca Fajardo J. A. 1999 Estructura de la semilla de aguacate y cuantificacin de la grasa extrada por diferentes tcnicas Revista Capingo Serie Especial Hortcola No.5 pp 123-128. INEGI 2005 El sector alimentario en Mxico Edicin pp 19Lorke Dietrich (1983) A new approach to practical acute toxicity testing Toxycology 54:275-287 Olaeta J. A. 2003 Industrializacin del aguacate: Estado actual y perspectivas futuras Facultad de Agronoma Pontificia Universidad Catlica de Valparaso Chile. pp 749-754 Proceddings World avocado congreso. Peuelas, R.J.K. y Pizaa F. 1997 "Mtodo para evaluar la viabilidad espermtica en rata Winstar" Toxicologa Preclnica Tomo III pp 8-10 Victoriano, C. P. (2005) Mejorar la imagen del aguacate mexicano ante el mundo Congreso Mexicano y Latinoamericano del Aguacate 2005) Diario digital 17 de octubre de 2005 Mxico. Werman M.J., Neeman and Mokady 1990 Avocado oils and hepatic lipid metabolism in growing rats Chemical Toxic 29(2)2 http://www.living-food.com

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