Caracterizao anatmica das folhas, frutos e sementes de Sapindus saponaria L.

(Sapindaceae)
Adriana Lenita Meyer Albiero1*, Elfriede Marianne Bacchi2 e Kthia Socorro Mathias Mouro3
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Departamento de Farmcia e Farmacologia, Universidade Estadual de Maring, Av. Colombo, 5790, 87020-900, Maring, Paran, Brasil. 2Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, Av. Lineu Prestes 580, Cidade Universitria, 05508-970 So Paulo, So Paulo, Brasil. 3Departamento de Biologia, Universidade Estadual de Maring, Av. Colombo, 5790, 87020-900, Maring, Paran, Brasil. *Author for correspondence.

RESUMO. A anatomia das folhas, frutos e sementes de Sapindus saponaria L., espcie utilizada no combate a lceras e inflamaes da pele, foi estudada utilizando-se material fresco e fixado, com a finalidade de subsidiar estudos taxonmicos e farmacobotnicos. Analisaram-se cortes em diferentes planos, obtidos mo livre ou com micrtomo, em lminas semipermanentes e permanentes, corados com safrablau. As folhas compostas, apresentam fololos de pice acuminado e base assimtrica, glabros na face superior e pubescentes na inferior. Drusas e cristais prismticos ocorrem no mesofilo dorsiventral. O fruto esquizocarpo indeiscente com at trs mericarpos desenvolvidos. O exocarpo apresenta clulas isodiamtricas com cutcula espessa e muitas lenticelas. No mesocarpo parenquimtico encontram-se cavidades secretoras, idioblastos cristalferos contendo drusas e cristais prismticos. O endocarpo constitudo por fibras lignificadas, dispostas em diagonal. As sementes so bitegumentadas, exotestais, e exalbuminosas. Nas folhas e frutos secos e triturados (droga) destacam-se: fragmentos das faces adaxial e abaxial da epiderme com tricomas ntegros, do mesofilo parenquimtico, do pericarpo e drusas e cristais prismticos.
Palavras-chave: Anatomia, Sapindaceae, Sapindus, folhas, frutos, sementes.

ABSTRACT. Anatomical features of leaves, fruits and seeds of Sapindus saponaria L. (Sapindaceae). The anatomical features of leaves, fruits and seeds of Sapindus saponaria L., a species used in the combat of ulcers and skin diseases, are described. Samples from fresh and fixed material are analyzed for taxonomic and pharmacognostical studies. Anatomical description was undertaken by the analysis of semi-permanent and permanent slides made with different sections of leaves and fruits stained with safranin and astra blue. Compound leaves present leaflets with acuminate apex and asymmetric base, glabrate in the adaxial and pubescent in abaxial surface. Druses and prismatic crystals occur in the dorsiventral mesophyll. Fruit is an indehiscent schizocarp, which has up to three developed mericarps. The exocarp is constituted by isodiametric cells with thick cuticle and many lenticels. The parenchymatic mesocarp presents secretory cavities and idioblasts which contain druses and prismatic crystals. The endocarp is constituted by lignified fibers with diagonal orientation. Seeds are bitegumented, exotestal and exalbuminous. In dried and ground leaves and fruits the following may be enhanced: fragments of adaxial and abaxial surface of the epidermis with complete trichomes, parenchymatic mesophyll, pericarp, druses and prismatic crystals.
Key words: Anatomy, Sapindaceae, Sapindus, leaves, fruits, seeds.

Sapindus saponaria L., conhecida popularmente como sabo-de-soldado, saboeira, sabo-demacaco, espcie arbrea de distribuio regular nos estados das regies Norte, Nordeste e Centro Oeste. Os seus frutos so utilizados pela populao como sabo, no banho e no combate a lceras, feridas na pele e inflamaes.
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Espcies de Sapindus tm sido pesquisadas como fonte de saponinas para uso cosmtico, por suas propriedades tensoativas como tambm para uso farmacolgico, pois esses compostos classificados como triterpenides, apresentam atividade antiulcerativa e antineoplsica.

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O potencial medicinal de outras espcies da famlia Sapindaceae pode ser traduzido pelo uso extremamente difundido da Paullinia cupana H.B.K., o guaran, um importante produto da Amaznia, cujas sementes so utilizadas para a obteno da cafena, e na produo de refrescos e outras bebidas (Pio Corra, 1978). O uso de plantas medicinais pela populao, em busca da cura para as mais variadas molstias, um costume muito difundido no s em nosso pas, como em todo o mundo. Esta prtica foi sedimentando-se ao longo do tempo como resultado do acmulo de conhecimentos sobre a ao das plantas por diversos grupos tnicos. Atualmente, constata-se um aumento marcante na utilizao de plantas medicinais, estimulado de forma pouco criteriosa pelos meios de comunicao, bem como uma tendncia generalizada dos consumidores em utilizar, freqentemente, produtos de origem natural, atitude esta decorrente do aumento da conscincia ecolgica dos ltimos anos (Albiero, 1994). Paralelamente utilizao popular de chs, garrafadas, cataplasmas e outras formas, as plantas medicinais vm sendo utilizadas tambm em formas farmacuticas, elaboradas industrialmente, denominadas fitoterpicos. A produo industrial ou semi-industrial destes produtos leva a necessidade da implementao de parmetros de qualidade que visem a avaliar desde a matria-prima at o produto acabado (Ferreira, 1998). Deste ponto de vista, o trabalho com fitoterpicos inicia-se com a correta identificao da espcie vegetal, droga utilizada para a elaborao do produto. O termo droga aplica-se a um produto de origem natural (animal, vegetal ou mineral) que coletado ou separado da natureza, possui uma composio e algumas propriedades que constituem a forma bruta do medicamento. Este conceito antigo e, atualmente, tem sido usado como sinnimo de qualquer substncia quimicamente definida ou como medicamento que tenha ao sobre os sistemas orgnicos (Di Stasi, 1996). Uma das formas de se fazer o controle de qualidade a anlise comparada entre os dados do estudo morfolgico e anatmico da espcie vegetal e a descrio macro e microscpica da droga. Entretanto, os compndios farmacopicos mais recentes (Farmacopia Brasileira, 1988) descrevem, em sua grande maioria, espcies de uso consagrado e em geral exticas cultivadas, e pouco se sabe da morfologia e anatomia das espcies medicinais brasileiras. Alm disso, trabalhos de morfologia e anatomia de espcies medicinais brasileiras no
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trazem, geralmente, a descrio da planta na forma como esta comercializada e consumida, ou seja, em p. Assim, o presente estudo fornece dados morfoanatmicos das folhas, frutos e sementes de S. saponaria, bem como da droga obtida destes rgos, que certamente contribuiro para a sua identificao e avaliao de qualidade. Material e mtodos O material botnico utilizado constou de folhas, flores e frutos, em diferentes estgios de desenvolvimento e maduros, de Sapindus saponaria L., coletados de espcimes do Horto Florestal Dr. Luiz Teixeira Mendes e do campus da UEM. Exsicata da espcie estudada encontra-se depositada como documento taxonmico no Herbrio da Universidade Estadual de Maring, sob nmero registro HUM 8158. Os estudos anatmicos foram realizados em material fresco e fixado. Para a fixao foi utilizado FAA 50, e a conservao foi feita em etanol 70% (Jensen, 1962). A nomenclatura para descrever as folhas e frutos foi baseada em Radford (1974). Cortes transversais (C.T.), longitudinais (C.L.) e paradrmicos (C.P.) foram realizados mo livre, com auxlio de lmina de barbear comum ou utilizando-se micrtomo rotatrio. Em ambos os casos os cortes foram corados com safranina e azul de Astra (Gerlach, 1969). Para a confeco de lminas permanentes, as peas fixadas foram desidratadas em srie etlica, passando em seguida por srie xilica, includas em parafina, cortadas (Sass, 1951) e aps coradas e montadas em Permount. Utilizou-se tambm, na obteno de lminas permanentes material includo em historresina, segundo a tcnica descrita por Gerrits (1991). Este material, aps secionado, foi corado com azul de toluidina (OBrien et al., 1964). Para os testes microqumicos, os cortes do material fresco foram submetidos a: soluo aquosa de cloreto frrico a 10%, para localizao de compostos fenlicos; floroglucinol cido, para evidenciar paredes lignificadas (Sass, 1951); Sudan IV, para localizar paredes suberificadas e cutinisadas e outros materiais lipdicos; e reagente de Lugol, para localizao de amido (Johansen, 1940). Com a finalidade de comparar dados para a diagnose da droga vegetal foram montadas lminas semipermanentes com o p das folhas e dos frutos, obtidos por secagem em estufa de ar circulante temperatura mdia de 45C, durante 72 horas, e posteriormente modos em moinho de facas, e tamisados, resultando em ps tamanho 20# (20
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mesh). Os ps obtidos foram clarificados com soluo de hipoclorito de sdio 33% durante trs minutos, lavados sucessivamente com gua destilada e corados com safranina e azul de astra; e, aps nova lavagem, foram centrifugados (1000 rpm/2 min.), e o centrifugado montado em gelatina glicerinada. No caso das folhas, cujo p era mais leve, todo o processo, aps o clareamento, foi conduzido com centrifugao para possibilitar a montagem da lmina. Este procedimento permitiu a observao de maior nmero de estruturas por campo do microscpio, facilitando assim a caracterizao da droga. Os aspectos anatmicos das folhas e frutos foram observados, descritos e ilustrados, com auxlio de cmara clara, adaptada ao microscpio tico Wild. As fotomicrografias foram obtidas em fotomicroscpio Olympus e as fotografias em cmera fotogrfica Pentax K1000 e filme colorido ISO 400. As escalas referentes s ilustraes foram obtidas utilizando-se rgua milimetrada e lmina micromtrica, nas mesmas condies pticas utilizadas para cada caso. Resultados e discusso Anatomia da folha. As folhas de S. saponaria L. so compostas, alternas, imparipenadas, possuindo de 7 a 11 fololos, curtamente peciolados com margem sinuosa, pice acuminado e base assimtrica, glabros na face superior e pubescentes na inferior, caractersticas estas j descritas para esta espcie por Reitz (1980). Os fololos so hipoestomticos e os estmatos do tipo anomoctico. A epiderme, em suas faces adaxial e abaxial, constituda por clulas isodiamtricas com paredes anticlinais pouco sinuosas. Os tricomas glandulares pluricelulares que ocorrem em S. saponaria, deitados sobre as epidermes das faces abaxial e, raramente, adaxial, tambm foram descritos por Metcalfe e Chalk (1950) em Arytera, Cupaniopsis, Dodonea e Filicium. Este mesmo autor descreveu em: espcies de Cardiospermum, Chytranthus, Matayba, Pancovia e Xerospermum, tricomas tectores unicelulares, alongados, flageliformes, como os observados na epiderme da face abaxial de S. saponaria (Figuras 14). Clulas secretoras de mucilagem em ambas as faces da epiderme, alm das papilas que foram mencionadas por Metcalfe e Chalk (1950) em espcies da famlia Sapindaceae, no foram evidenciadas no presente estudo.

O mesofilo dorsiventral, com a maioria das clulas apresentando drusas de oxalato de clcio. Na nervura mediana, biconvexa, destacam-se o colnquima angular e dois grandes feixes vasculares colaterais, quase inteiramente envolvidos por fibras esclerenquimticas (Figuras 58). Nos tecidos que constituem o pecilolo e a rquis destacam-se: cutcula espessa e tricomas tectores unicelulares na epiderme, grande quantidade de clulas contendo drusas no colnquima e no parnquima fundamental, e grupamentos de braquiscleredes imersos no colnquima e no parnquima que se encontram envolvidos pelo tecido vascular. Na base da rquis, alm destas caractersticas, observa-se a substituio da epiderme pela periderme (Figuras 9-12). Em todo o fololo, cristais prismticos ocorrem apenas nas clulas das bainhas que envolvem o tecido vascular. Nos testes histoqumicos o lugol evidenciou a presena de amido no tecido vascular, alm de reagir com o contedo das clulas que constituem os tricomas glandulares, tornando-o amarelo, podendose admitir a provvel presena de alcalides. Anatomia do fruto. O fruto, de cor castanha brilhante, de S. saponaria esquizocarpo indeiscente, apresentando um e, mais raramente, dois ou trs mericarpos desenvolvidos, nos quais se evidenciam muitas lenticelas. A semente esfrica, lisa e de colorao negra brilhante (Figuras 13-16). Esta descrio est de acordo com a apresentada por Paoli e Santos (1998) em seu estudo sobre a morfologia dos frutos desta espcie e por Barroso et al. (1999) para espcies de Sapindus em sua recente classificao de frutos e sementes de dicotiledneas. A epiderme externa do ovrio constituda por clulas levemente alongadas e de contedo fenlico. Na regio de juno dos carpelos ocorrem tricomas tectores, unicelulares, com extremidades afiladas. Em cerca de quatro camadas subepidrmicas, as clulas parenquimticas isodiamtricas do mesofilo ovariano tambm apresentam contedo fenlico. No mesofilo as divises ocorrem em todas as direes e encontram-se imersos feixes procambiais que percorrem longitudinalmente o ovrio. Na epiderme interna, que delimita o lculo, as clulas apresentam formato tabular e esto se dividindo periclinalmente, constituindo um meristema ventral (Figura 17). Tricomas unicelulares alongados ocorrem apenas na regio prxima ao eixo central do ovrio (Figura 23).

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Figuras 1-4. Sapindus saponaria - Seo paradrmica da folha. 1-3: Face abaxial da epiderme; 4: Face adaxial da epiderme. (cp = cristal prismtico; et = estmato; tg = tricoma glandular; tt = tricoma tector)

A estrutura do pericarpo em um fruto muito jovem (mericarpo = 4.0 x 2.0 mm) assemelha-se da parede ovariana, destacando-se: o aumento no nmero de estratos celulares no mesocarpo e no endocarpo, este ltimo originado da atividade do meristema ventral; maior diferenciao do tecido vascular e o incio de diferenciao de algumas clulas maiores que as demais clulas do mesocarpo, de contedo translcido, distribudas em crculo entre os feixes vasculares e o exocarpo (Figura 18). Em um fruto mais desenvolvido (mericarpo = 5.0 x 7.0 mm), observa-se que o pericarpo aumenta sua
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espessura, no s pelas divises celulares que ocorreram na fase anterior, mas tambm devido expanso das clulas do mesocarpo. Os feixes vasculares esto mais diferenciados nesta fase e as clulas de contedo translcido aumentaram de tamanho e esto diferenciando-se em cavidades secretoras. Observa-se, nesta fase, a lise de clulas circunvizinhas s cavidades em diferenciao, que resultam no aumento em dimetro e tambm no nmero destas estruturas secretoras (Figura 19).

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Figuras 5-8. Sapindus saponaria - Regio mediana do fololo em seo transversal. 5: Margem; 6: Regio entre a margem e a nervura central; 7: Nervura central; 8: Detalhe da regio indicada na figura 7, evidenciando, colnquima e bainha do feixe com cristais prismticos (seta). (cl = colnquima; cp = cristal prismtico; dr = drusa; fb = fibras; fl = floema; tg = tricoma glandular)

A definio de exo, meso e endocarpo varia de acordo com cada autor. Os autores modernos, na sua maioria, preferem usar os termos exo e endocarpo em sentido amplo, incluindo as epidermes externa e interna, respectivamente, e alguns dos tecidos subepidrmicos (Roth, 1977). Segundo Fahn (1990), a separao do pericarpo em trs camadas facilita a descrio anatmica, mas elas no representam camadas distintas do ponto de vista de sua origem. Assim, considerou-se que nos frutos maduros de S. saponaria o exocarpo plurisseriado e derivado da epiderme externa do ovrio e de cerca de cinco a sete estratos celulares subepidrmicos do mesofilo ovariano. A camada mais externa constituda por clulas isodiamtricas, cujas paredes periclinais externas so
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muito espessadas e cutinizadas. Nas demais camadas, as clulas variam de polidricas a polidricas levemente alongadas tangencialmente e apresentam paredes desigualmente espessadas. Observam-se ainda no exocarpo muitas lenticelas. No mesocarpo parenquimtico as cavidades secretoras encontram-se completamente diferenciadas. Idioblastos cristalferos contendo drusas so encontrados no mesocarpo e, os que contm cristais prismticos esto dispostos ao redor dos feixes vasculares colaterais ramificados, os quais percorrem o mesocarpo principalmente em sentido longitudinal. O endocarpo constitudo por cinco a nove camadas de fibras lignificadas e dispostas em diagonal (Figuras 20-22).
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Figuras 9-12. Sapindus saponaria 9: Pecilolo em seo transversal; 10: Detalhe da regio indicada na figura 9; 11: Rquis em seo transversal; 12: Detalhe da regio medular da rquis evidenciando grupos de braquiscleredes e cristais (seta). (br=braquisclerede; cb=cmbio; dr=drusa; fb=fibra; fl=floema; pr=periderme; xi=xilema)

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Figuras 13-16. Sapindus saponaria - 13-14: Aspecto geral de frutos em fase de maturao e maduros com um, dois ou trs mericarpos, respectivamente; 15: Frutos abertos evidenciando as sementes negras; 16: Superfcie do fruto evidenciando lenticelas (seta)

Em Sapindus mukurossi Gaertn., Corner (1976) afirma que grandes clulas mucilaginosas ocorrem no mesocarpo e que o endocarpo constitudo por fina camada de fibras levemente lignificadas. Nas cavidades secretoras, que se diferenciam durante o desenvolvimento do fruto de S. saponaria, no se detectou a presena de mucilagem; entretanto, o teste para substncias lipdicas revelou a presena de gotas de leo, as quais podem estar relacionadas ao odor caracterstico do fruto na maturidade. Albiero (1994), em seu estudo farmacognstico sobre S. saponaria, descreve a existncia de saponinas no pericarpo. Devido ao desconhecimento de testes histoqumicos especficos para estas substncias, no foi possvel

relacionar a sua sntese s cavidades secretoras descritas no presente estudo. O vulo antropo, bitegumentado, apresenta obturador de origem funicular e exostomal. O tegumento externo constitudo por cerca de sete a nove camadas de clulas e o interno por quatro a cinco camadas (Figuras 23-24). De acordo com Corner (1976), o obturador freqente em Sapindaceae, sendo uma estrutura arredondada de origem placentria ou funicular que recobre ou no a micrpila. Este autor relatou a presena de obturador em Allophylus cobbe L., Cardiospermum halicacabum L., Dodonea viscosa L e Nephelium lappaceum L. Esta estrutura possui a funo de orientar o tubo polnico at a micrpila, encontrando-se em conexo com o tecido transmissor (Bouman, 1984).

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Figuras 17-19. Sapindus saponaria - Seo transversal da parede ovariana, do pericarpo em um fruto muito jovem (mericarpo = 4.0 x 2.0 mm) e em um mais desenvolvido (mericarpo = 5.0 x 7.0 mm), respectivamente. (cs = cavidade secretora em diferenciao; ee = epiderme externa; ei = epiderme interna; en = endocarpo; ep = exocarpo; fv = feixe vascular; mo = mesofilo ovariano, mp = mesocarpo)

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Figuras 20-22. Sapindus saponaria - Fruto maduro em seo transversal. 20: Aspecto geral do pericarpo; 21: Detalhe do exocarpo e de parte do mesocarpo; 22: Detalhe do endocarpo e de parte do mesocarpo. (cs = cavidade secretora; en = endocarpo; ep = exocarpo; fv = feixe vascular; mp = mesocarpo)

Com o desenvolvimento da semente ocorre acentuado aumento no nmero de estratos celulares caracterizando-se a testa e o tgmen como multiplicativos. Entretanto, no tgmen este aumento em menor proporo. Na semente jovem, observa-se, na exotesta, o incio de alongamento de suas clulas. Nesta fase, na parte mais externa da mesotesta, em cerca de quatro a oito estratos de clulas, observa-se um incio de espessamento das paredes celulares. Nas
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demais camadas as clulas parenquimticas, polidricas, permanecem com suas paredes finas. Na endotesta observa-se o incio de diferenciao de escleredes, pouco alongadas tangecialmente, e de astroescleredes, cujas extremidades afiladas se projetam em direo mesotesta. O tgmen, apesar de aumentar em espessura no apresenta especializao (Figuras 25-26). Na semente madura, exalbuminosa e bitegumentada, a testa, composta por muitas camadas de
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clulas, apresenta exotesta constituda inteiramente por macroescledes bastante alongadas, as quais apresentam uma linha lcida em seu tero superior. A mesotesta pode ser dividida em externa, esclerificada, constituda por clulas pouco alongadas e, interna, parenquimtica.

Na endotesta encontram-se completamente diferenciadas as escleredes e astroescleredes, que emitem projees em direo mesotesta. O tgmem parenquimtico e apresenta cerca de 13 camadas de clulas de paredes levemente espessadas (Figuras 27-28).

Figuras 23-28. Sapindus saponaria 23: vulo em seo longitudinal; 24-28: Detalhe dos tegumentos do vulo (24), da semente jovem (25-26) e da semente madura (27-28) em seo transversal. (at = astroesclerede; ca = calaza; cm = canal micropilar; ed = endotesta; ex = exotesta; fu = funculo; ll = linha lcida; mt = mesotesta; nu = nucelo; ob = obturador; te = tegumento externo; ti = teguento interno; tn = tgmen; ts = testa)

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Figuras 29-34. Sapindus saponaria 29-31: Fragmentos da folha; 32-34: Fragmentos do fruto. (cp = cristal prismtico; dr = drusa; en = endocarpo; ep = exocarpo; et = estmato; fb = fibras do feixe vascular; fv = feixe vascular; le = lenticela; mp = mesocarpo; pp = parnquima palidico; tg = tricoma glandular; tt = tricoma tector)

Caractersticas semelhantes s observadas no presente estudo foram descritas nas sementes de Sapindus mukurossi Gaertn. por Corner (1976), em seu extenso trabalho sobre anatomia de sementes de dicotiledneas. Para Sapindus trifoliatus Netolitzky (1926) descreveu uma camada fibrosa na epiderme interna da testa, que, segundo Corner (1976), pode
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ser o exotgmen, como em Alectryon sp. Em S. saponaria, esta camada fibrosa, constituda por escleredes levemente alongadas tangencialmente e por astroescleredes, a endotesta, conforme observou Netolitzky (1926). Em seu estudo sobre morfologia dos frutos, sementes e plntulas de S. saponaria, Paoli e Santos
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Received on January 26, 2001. Accepted on March 21, 2001.

(1998) fizeram breve descrio da anatomia da semente, referindo-se a ela como exotestal, com mesotesta esclertica e endotesta, parecendo ser fibrosa, caractersticas que foram confirmadas no presente estudo. Caracterizao microscpica das folhas e frutos secos e triturados (droga) Pela anlise microscpica das folhas e frutos secos transformados em p (droga) constata-se que os elementos marcantes para a sua caracterizao so: fragmentos das faces adaxial e abaxial da epiderme, tricomas tectores e glandulares ntegros, fragmentos do parnquima clorofiliano, no qual quase todas as clulas contm drusas; e cristais prismticos nas clulas da bainha dos feixes vasculares. No p do fruto os elementos que permitem a sua identificao so: fragmentos do exocarpo, mesocarpo e endocarpo, nos quais se destacam as lenticelas, as cavidades secretoras, idioblastos cristalferos contendo drusas e cristais prismticos nas clulas da bainha dos feixes vasculares (Figuras 29-34). Tais dados podero ser utilizados no controle de qualidade de S. saponaria adquirido no comrcio para a produo de fitoterpicos. Referncias Referncias
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