TEMA: CROMATOGRAFIA DE AZUCARES OBJETIVOS Generales o Realizar la cromatografa de los azucares mediante el papel Whatman los azucares que

contiene una muestra desconocida y su respectivo calculo (factor de retencin)

Especficos o o o PROCEDIMIENTO CROMATOGRAFIA ASCENDENTE EN PAPEL DE AZUCARES Conocer como se realiza una cromatografa Determinar la muestra desconocida mediante la cromatografa Calcular el factor de retencin (Rf) a las muestras de azcar

Colocamos sobre el mesn las diferentes muestras

GLUCOSA

SACAROSA

FRUCTOSA

2cm

XXXXX

2 cm

Colocamos debajo de cada una de las X el nombre de una de las muestras dadas

X Glu

X ?

X Sac

X fruc

Sostenemos los extremos del hilo y sumergimos el papel en la cuba de modo que la lnea de lpiz, quede un poco mas arriba del nivel del solvente (butanol acido actico ter agua (45:35:5:15)

Pegamos los extremos del hilo a los lados de la cuba con cinta, e inmediatamente procedemos a cerrar la cuba.

Dejamos correr la cromatografa, hasta que el solvente llegue al margen superior

Sacamos el papel de la cuba y esperamos que se seque

REVELADO DE LA CROMATOGRAFIA

El revelado se realiza al sumergir el papel cromatografico en:

1.- En solucin de AgNO3 al 0.5% en acetona Secar al aire libre, pasara a la siguiente solucin y asi

2.- En solucin de KOH al 5% en etanol Esperar que aparezcan manchas, lavar con un chorro de

3.-En solucin de NH3 al 3%

Lavar con un chorro de agua y secar al aire

Rf = factor de retencin Rf menor a 1 Clculos X = distancia entre la superficie dejada por el solvente hasta el centro de la mancha de la muestra (cm) Y = distancia entre la superficie dejada por el solvente hasta el nivel del frente del solvente (cm.)

Muestra de Glucosa

Muestra de sacarosa

Muestra desconocida

Muestra de fructosa

RESULTADOS

# de Muestra 1. 2 3 4

Muestra aplicada

x(cm)

y(cm)

Rf

Glucosa Fructosa Sacarosa

Muestra problema (2)

1.8 2.6 o.6 1 2.7

11.3 11.3 11.3 11.3

0.15 0.23 0.05 0.08 o.23

OBSERVACIONES PROCEDIMIENTO/REACTIVO AGREGADO ADICION DE LA MUESTRA EN EL PAPEL DE CROMATOGRAFIA CARACTERISTICAS OBSERVADAS Al colocar la cantidad necesaria de muestra con la ayuda del capilar en el papel whatman se absorbe rpidamente, para secarlo se lo debe agitar

PAPEL EN LA CUBA

Se puede observar la huella del nivel del solvente sin presencia de manchas

REVELADO CROMATOGRAFICO AgNO3 al 0.5% en acetona KOH al 5% en etanol El cromatograma permanece igual su color El papel toma un color caf y las manchas toman un color mas intenso del papel Al igual con el reactivo anterior permaneca del mismo color pero las manchas se notaban mucho mas

NH3 al 3%

Nota en muestro papel se torno totalmente oscuro talvez porque no fue papel whatman sino papel filtro. Conclusiones Al realizar la presente prctica llegamos a la conclusin o Para realizar la cromatografa de las muestras se debe utilizar sustancias puras o estndares, para as poder determinar la muestra desconocida mediante las observaciones de los resultados (lectura del revelado cromatografico ) El revalo cromatografico se lo puede realizar mediante diversos reveladores es decir diferente composicin de los reactivos El calculo para determinar el factor de retencin obtuvimos los siguientes resultados Rf 0.15 0.23 0.05 0.08 o.23

Muestra aplicada Glucosa Fructosa sacarosa Muestra desconocida

Se puede notar que el azcar que tiene un mayor Rf es la fructosa porque tienen un valor de 0.23 por lo que va a tener mayor facilidad de ser desplazado por el solvente desde la fase mvil a la fase estacionaria lo que no ocurrir con la sacarosa o En la muestra desconocida se podra concluir que es una mezcla de los 3 azucares primero porque en el calculo del Rf tienen una valor similar al de la sacarosa (0.05- 0.08) aunque en la lectura la sacarosa empieza la mancha desde el origen lo que no ocurre con la muestra. Tambin contiene glucosa pues estn al mismo nivel pero con seguridad la muestra desconocida tiene fructosa ya que se pudo observar que se encuentran al mismo nivel y edemas tienen el mismo valor de Rf.

Bibliografa. o o o ANGULO Ugalde, Y. Bioqumica Manual de laboratorio Universidad de Costa Biblioteca de Consulta Encarta 2009 http://www.wiquipedia/wiki.disacridos/wiki/wiki.htm Revelado cromatografico