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CITOESQUELETO

Importncia Evolutiva
Alimentao (Fagocitose e pinocitose) Sustentao Organizao intracelular Forma clula nua Transporte intracelular (organelas e vesculas) Comunicao Diviso celular (Fuso mittico e anel contrtil) Adeso celular Movimento (migrao, msculo, clio e flagelo)

Ausente nas bactrias???

Natureza do citoesqueleto
O que a evoluo apresentou, no uma, mas pelo menos trs vezes, foram molculas proticas tipo Lego, que podem ser armadas de forma reversvel como um arranjo rgido. (De Duve, 1996)

Nome incompatvel estrutura dinmica Organizado como trilhas de formiga

Filamentos de Actina (microfilamentos) formado por 2 filamentos torcidos com 5-9 nm que se agrupam em feixes localizados principalmente no crtex celular prximo a membrana. Determina a forma e movimento da clula. Microtbulos estruturas longas e cilndricas e um dimetro externo de 25 nm. So mais rgidos que a actina e possuem uma extremidade associada a um centrossoma. Determinam o posicionamento das organelas e transporte interno. Filamentos intermedirios so fibras com um dimetro mdio de 10 nm formadas por uma grande famlia de protenas heterogneas. Esto espalhados por todo o citoplasma, conferindo resistncia mecnica s clulas

- Como uma clula eucaritica de 10 m ou mais, pode ser organizada espacialmente por molculas proticas do citoesqueleto que so linearmente 2.000 vezes menor em dimenses lineares?

Polimerizao Vantagens das pequenas subunidades?

Distribuio dos filamentos de actina


Rede de actina abaixo da membrana plasmtica de uma clula animal observada em microscopia eletrnica pela tcnica de deep etch

Molecular Biology of the Cell. 3rd ed. Alberts et al 1994

Figure 18-7. The organization of the major erythrocyte cytoskeletal proteins and their interactions with integral membrane proteins. (Inset) Hypothetical arrangement of the components of a junctional complex and their interactions with the ends of spectrin tetramers. [Adapted from S. E. Lux, 1979, Nature 281:426; E. J. Luna and A. L. Hitt, 1992, Science 258:955.]

Estrutura do filamento de actina

Microscopia eletnica de filamentos de actina contrastados negativamente. Molecular Biology of the Cell. 3rd ed. Alberts et al 1994

Esquema dos monmeros e do filamento de actina

Molecular Biology of the Cell. 3rd ed. Alberts et al 1994

Clulas no-musculares
50% actina solvel e 50% em filamentos [alta] 2,8 mg/ml Por que no polimeriza?

Actina + Timosina - cobre o stio de ligao - inibe a troca ATP/ADP Actina + Profilina adicionada ao filamento e logo se desliga, permitindo a adio de nova subunidade - acelera a troca ATP/ADP - regulada por fosforilao, ligao com PIP2 (sinais extracelulares, ligao com protenas ricas em prolina

Molecular Biology of the Cell. 3rd ed. Alberts et al 1994

Como tudo comea? Nucleao dos filamentos de actina - Normalmente na Membrana Plasmtica Consequentemente... - Distribuio - Determina forma e movimento - Projees lamelipdios celulares microvilosidades, filipdios e

Complexo ARP (45% de homologia) regula crescimento da extremidade -, permitindo rpido crescimento

Como o mesmo filamento pode se organizar em diferentes arranjos?

Os filamentos de citoesqueleto nunca trabalham sozinhos

Figure 18-11. The three phases of G-actin polymerization in vitro. (a) During the initial nucleation phase, ATP G-actin monomers (pink) slowly form stable complexes of actin (purple). These nuclei are more rapidly elongated in the second phase by addition of subunits to both ends of the filament. In the third phase, the ends of actin filaments are in a steady state with monomeric ATP G-actin. After their incorporation into a filament, subunits slowly hydrolyze ATP and become stable ADP F-actin (white). Note that the ATP-binding clefts (black triangles) of all the subunits are oriented in the same direction in F-actin. (b) Time course of the in vitro polymerization reaction (pink curve) reveals the initial lag period. If some actin filament fragments are added at the start of the reaction to act as nuclei, elongation proceeds immediately without any lag period (purple curve).

Protenas que se ligam actina: - Comprimento - Estabilidade - Nmero - Geometria da ligao - Protenas empacotadoras - Protenas formadoras de gel - Protenas motoras mltiplos tipos de miosina

Protenas acessrias Funes:


Permitem que um mesmo filamento participe diferentes funes em diferentes regies da clula Regulam a velocidade e a extenso da polimerizao Produzem fora e movimento direcionado ao longo do filamento hidrolisando ATP Regulam a distribuio espacial e o comportamento dinmico dos filamentos Permitem uma estrutura altamente organizada mas flexvel Permitem a interao com outras estruturas de

Tropomiosina previne a ligao com outras protenas Cofilina desestabiliza os filamentos de actina aumento da toro CapZ + ARP Aumento [PIP2]

Contatos Focais

- Fibroblasto em cultura separado do substrato por 50 nm e nas regies de contato por 10 nm

Schematic drawing of various stages of the infectious process by (a) EPEC, (b) Listeria and Rickettsia, (c) Shigella and Burkholderia pseudomallei and (d) vaccinia virus.

A Superhighway to Virus Infection

Cell 124, 741754, February 24, 2006

Microtbulos

Centro Organizador dos Microtbulos

tubulina que forma complexo de anis que servem como molde para os 13 protofilamentos Centrossomo maioria das clulas animais Localizao prxima ao ncleo Matriz fibroza de protenas 1 par de centrolos que organiza a matriz e se duplica na intrfase e migra para depois formar o fuso (planta e fungo)

Protenas acessrias
Statimina se liga ao dmero, diminuindo a disponibilidade para polimerizao

MAPs (estabilidade, regulao, interao e distribuio) TAU XMAP215 ubqua fosforilao e mitose Catastrofina tubulina

MAPs- protenas associadas a microtbulos

Verde- distribuio da MAP TAU nos axnios Laranja- MAP2 no corpo celular e dendritos

OS MICROTBULOS FORMAM TRILHOS POR ONDE AS VESCULAS PODEM CIRCULAR PELAS ORGANELAS.

Figure 13-34. The endocytic pathway from the plasma membrane to lysosomes. Transport from early to the late endosome is mediated by large endosomal carrier vesicles, which contain large amounts of invaginated membrane and are therefore called multivesicular bodies. It is uncertain whether they should be regarded as middle-aged endosomes moving toward the cell interior as they mature or as distinct transport compartments. The movement occurs along microtubules and can be experimentally blocked with microtubule-depolymerizing drugs. Eventually, the late endosome is thought to convert into a lysosome. Transport vesicles recycle material between the early endosome and the cell surface, while a different set of transport vesicles recycle material between the late endosome and the trans Golgi network.

Figure 19-26. A general model for kinesin- and dynein-mediated transport in a typical cell. The array of microtubules, with their (+) ends pointing toward the cell periphery, radiates from an MTOC in the Golgi region. Kinesin-dependent anterograde transport conveys mitochondria (carried by KIF1B), lysosomes, and an assortment of membrane vesicles to the endoplasmic reticulum (ER) or cell periphery. Cytosolic dynein dependent retrograde transport conveys elements of the ER, late endosomes, and lysosomes to the cell center. [Adapted from N. Hirokawa, 1998, Science 279:519.]

Protenas Motoras

Centrossomo Microtbulos R.E. Golgi Ncleo

B- cel tratadas com anticorpos que reconhecem o RE e microtbulos; C- cel tratadas com anticorpos que reconhcem Golgi e microtbulos

Orientation of cellular microtubules.

CLIOS E FLAGELOS: 9 PARES DE MICROTBULOS PERIFRICOS (13 + 11 SUBUNIDADES) + 1 PAR CENTRAL (13+13 SUBUNIDADES)

CENTROLOS E CORPSCULO BASAL: 9 TRIPLETS (TRIOS) DE MICROTBULOS PERIFRICOS (11+13 + 11 SUBUNIDADES) SEM PAR CENTRAL

Fig. 4. Mad2 leaves kinetochores as they accumulate kinetochore microtubules. Mitotic PtK1 cells were labeled with antibodies to Mad2 (orange/pink), antibodies to -tubulin (green), and the DNA stain Hoechst 33342 (blue). (A) Just after nuclear envelope breakdown. White arrows, Mad2 accumulating on kinetochores; white arrowhead, Mad2 on residual nuclear envelope. (B) Early prometaphase. Green arrowhead, kinetochore fibers are visible as bright dense bundles of green microtubules that end abruptly on a chromosome; white arrowhead, spindle pole. (C) Mid-prometaphase. White arrowhead, Mad2 on kinetochore microtubules. (D) Late prometaphase. (E) Metaphase. (F) Anaphase. Yellow arrows, newly attached leading kinetochores on congressing chromosomes label brightly for Mad2; purple arrows, trailing kinetochores on attached kinetochores label less brightly; green arrows, attached kinetochores that lack Mad2; and red arrows, attached kinetochores on which some Mad2 is still visible.

J. Cell Biol., Volume 141, Number 5, June 1, 1998 1181-1191

Drogas que inibem tubulina: tubulina Taxol se une aos microtbulos e impede a despolimerizao da tubulina Colchicina, vimblastina e vincristina se ligam tubulina pela extremidade + evitando a agregao dos microtbulos

Figure 19-16. Structures of colchicine and taxol. These and other drugs that interfere with normal assembly and disassembly of microtubules have an antimitotic effect that is particularly devastating to rapidly dividing cells, such as cancer cells.

Actina e Tubulina so altamente conservadas


Tubulina de levedura e mamferos 75% de homologia

Mamferos 6 isoformas com localizao e funo distintas, codificada por diferentes genes muito similares. Actina de levedura e de Drosophyla - 89% de homologia Filamentos intermedirios e protenas acessrias no so to conservados. Por que? Vrias protenas diferentes so capazes de se ligar e interagir com os filamentos de actina e microtbulos

Filamentos Intermedirios

Encontrado

em

alguns

metazorios

(vertebrados,

nematodos e moluscos) Importncia para suportar estresse mecnico No ocorre em todos os tipos celulares Diferentes celulares famlias expressa em diferentes tipos

Localizao rede que envolve o ncleo indo at a periferia onde interage com a membrana

mais proeminente nas clulas que esto sujeitas a estresse mecnico Presente em grande nmero no epitlio, onde participam das junes celulares; ao longo dos axnios das clulas nervosas e em todos os tipos de clulas musculares

Clula epitelial em cultura marcada com anticorpo contra queratina

4 famlias diferentes expressas em diferentes tipos celulares

1) Queratina 20 tipos diferentes expresso nas clulas epiteliais humanas (10 especficas para cabelo e unha) -Diagnstico da origem de cncer epitelial escolha de tratamento - Mutao doenas humanas Ex. Epidermlise bullosa simplex

2) Laminas Nucleares protenas filamentosas que formam uma rede abaixo da membrana interna nuclear. Possibilidade de ancoragem de cromossomos e poros nucleares

3) Neurofilamentos durante o crescimento do axnio novos filamentos so adicionados. O nvel de expresso de neurofilamentos parece controlar diretamente o dimetro do axnio (relacionado com a velocidade do sinal eltrico)

Doenas Neurodegenerativas - esclerose amiotrfica lateral (Lou Gehrigs) associada ao acmulo e a formao anormal de neurofilamentos no corpo do axnio (transporte neuronal e atrofia muscular)

4) Vimentina Desmina- expressa em msculo cardaco, liso e esqueltico

Tipos de Filamentos Intermedirios

Desmina- nos msculos, GFAP (glicoprotena fibrilar cida- forma os filamentos dos astrcitos (co-expresso com vimentina)

Filamentos Intermedirios geram especializaes de membrana e junes com a matriz-extracelular

Figure 11.34. Attachment of intermediate filaments to desmosomes and hemidesmosomes (A) Electron micrograph illustrating keratin filaments (arrows) attached to the dense plaques of intracellular protein on both sides of a desmosome. (B) Schematic of a desmosome. Intermediate filaments are anchored to sites of cell-cell adhesion by desmoplaskin. (C) Schematic of a hemidesmosome. Intermediate filaments are anchored to an integrin by plectin. (A, Don Fawcett/Photo Researchers, Inc.)

Figure 12.61. Junctions between cells and the extracellular matrix Integrins mediate two types of stable junctions in which the cytoskeleton is linked to the extracellular matrix. In focal adhesions, bundles of actin filaments are anchored to the subunits of most integrins via associations with a number of other proteins, including -actinin, talin, and vinculin (see Figure 11.13). In hemidesmosomes, 64 integrin links the basal lamina to intermediate filaments via plectin.

Figure 16-15. An immuno-fluorescence micrograph of glial filaments in cultured astrocytes. The bundles of intermediate filaments ( green) are stained with antibodies to glial fibrillary acidic protein. Nuclei are stained with a blue DNA-binding dye. (Courtesy of Nancy L. Kedersha.)

Electron micrographs of two types of intermediate filaments in cells of the nervous system. (A) Freeze-etch image of neurofilaments in a nerve cell axon, showing the extensive crosslinking through protein cross-bridges - an arrangement believed to provide great tensile strength in this long cell process. The crosslinks are formed by the long, nonhelical extensions at the carboxyl terminus of the largest neurofilament protein. (B) Freeze-etch image of glial filaments in glial cells illustrating that these filaments are smooth and have few cross-bridges. (C) Conventional electron micrograph of a cross-section of an axon showing the regular side-to-side spacing of the neurofilaments, which greatly outnumber the microtubules. (A and B, courtesy of Nobutaka Hirokawa; C, courtesy of John Hopkins.)

Figure 16-17. Keratin filaments join cells together in cell sheets. Immunofluorescence micrograph of the network of keratin filaments in a sheet of epithelial cells in culture. The filaments in each cell are indirectly connected to those of its neighbors by desmosomes. (Courtesy of Michael Klymkowsky.)

Figure 16-12. The intermediate filaments in the cytoplasm of a tissue culture cell. Rat kangaroo epithelial cells (Ptk2 cells) in interphase were labeled with antibodies to one class of intermediate filaments (called keratin filaments) and examined by fluorescence microscopy. (Courtesy of Mary Osborn.)

Sistema integrado que gera, transmite e sente eventos mecnicos em uma variedade de funes celulares A clula capaz de reagir integralmente a condies intrinsecas e extrnsecas pela coordenao dependente de foras diretas e distribudas pelo citoesqueleto Nos tecidos protenas trans-membranas (integrinas) e junes transmitem a informao clula a clula a matriz extracelular

Evidncias de citoesqueleto em procarioto FtsZ


homlogo da tubulina em Bactria e Archaea
Essencial para diviso forma uma banda no local do septo e sua destruio ajuda na separao das 2 clulas filhas. Forma protofilamentos e anis in vitro, se liga e hidrolisa GTP

Mre B
homlogo da actina em Bactria e Archaea
Forma filamentos e regula o tamanho da bactria

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