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Introduccin

El oxgeno es indispensable para la vida, pero tambin es muy txico (oxygen paradox). Este fenmeno fue descrito por Pasteur en el siglo XIX. Desarrollo de este campo y sus implicaciones en patologa en el siglo XX.

Concepto de Radical Libre


Los electrones estn cargados elctricamente y rotan sobre s mismos, induciendo un campo magntico llamado spin. Los electrones normalmente se encuentran apareados en los orbitales atmicos. Dos electrones en un orbital atmico son ms estables que dos electrones aislados porque al aparearse con un spin opuesto anulan sus respectivos campos magnticos. Radical libre es aquella especie qumica capaz de existir independientemente y que posee uno o ms electrones desapareados. Este electrn desapareado confiere al radical libre cierto grado de inestabilidad.

Concepto de Radical Libre


Energticamente, para alcanzar la estabilidad, el radical libre puede perder este electrn, en cuyo caso se comporta como agente reductor, o bien puede ganar otro electrn, en cuyo caso se comporta como agente oxidante. Habitualmente el radical libre quita un electrn (generalmente como un tomo de hidrgeno) a una molcula vecina. Cuando un radical libre reacciona con una molcula no radical, esta molcula se convierte en radical libre. Por lo tanto, las reacciones de radicales libres con no radicales suelen generar reacciones en cadena en las que un radical libre genera otro radical. Solamente cuando un radical libre encuentra a otro la reaccin termina. Debido a su alta reactividad qumica suelen poseer muy corta vida media (10-9 seg.).

Radicales Libres de Oxgeno (ROS)


Las ROS son compuestos que contienen oxgeno y que son radicales libres altamente reactivos o compuestos que fcilmente se convierten en estos radicales libres de oxgeno.

Oxgeno Molecular (O2)


Distribucin ubicua en la naturaleza e indispensable para la vida aerbica. A altas concentraciones es peligroso para los sistemas biolgicos. Es considerado un radical libre porque posee dos electrones desapareados en diferentes orbitales y con spin en la misma direccin (birradical). Tiene poca reactividad qumica. En los organismos aerbicos, ms del 90% del oxgeno es utilizado por la citocromo C oxidasa mitocondrial, la cual le aade cuatro electrones para la formacin de dos molculas de agua.

Oxgeno Molecular (O2)


La aceptacin de un electrn por el O2 conduce a la formacin del radical superxido y a la sucesiva generacin de radicales oxigenados. La generacin de ROS ocurre en las clulas de un modo natural. Son formados accidentalmente mediante reacciones enzimticas y no enzimticas.

Radical o Anin Superxido (O2-)


Es el primer producto formado por la reduccin del O2. Su principal fuente de produccin es la cadena de transporte electrnico mitocondrial y microsomal por escape de electrones. Puede ser generado no enzimticamente a partir del CoQ o a partir de enzimas que poseen metales (citocromo P450, xantino oxidasa y NADPH oxidasa). Es altamente reactivo, tiene una relativa larga vida media, pero tiene baja solubilidad en lpidos, por lo que no difunde lejos de su lugar de produccin. Puede reaccionar con el xido ntrico produciendo peroxinitritos. Es eliminado por el enzima superxido dismutasa (mecanismo de defensa antioxidante), la cual lo transforma en perxido de hidrgeno (H2O2).

Perxido de Hidrgeno (H2O2)


Se puede producir: 1. A partir del agua mediante radiaciones ionizantes. 2. A partir del superxido en una reaccin catalizada por el hierro. A su vez, el perxido de hidrgeno dar lugar a la generacin del radical hidroxilo mediante luz ultravioleta o mediante la reaccin de Fenton. Esta es la razn por lo que se le clasifica como ROS, ya que desde un punto de vista fsico-qumico, no es un radical. Tiene baja reactividad. Slo es txico a elevadas concentraciones.

Perxido de Hidrgeno (H2O2)


Es soluble en lpidos, por lo que difunde bien y puede llegar hasta sitios con Fe3+ o Cu+ y generar radicales hidroxilo mediante la reaccin de Fenton. Es reducido enzimticamente a agua en la mitocondria mediante la accin combinada de la glutation peroxidasa, glutation reductasa y transhidrogenasa. Estas reacciones consumen NADH y NADPH.

Radical Hidroxilo (OH)


Los radicales hidroxilo son formados no enzimticamente en la reaccin entre el perxido de hidrgeno y el radical superxido (reaccin de Haber-Weiss). Tambin son formados no enzimticamente a partir del perxido de hidrgeno en la presencia de metales de transicin (Fe3+ o Cu+). Esta es la denominada reaccin de Fenton. Para evitar la reaccin de Fenton, el organismo liga el hierro (protena de transporte transferrina / protenas de almacenamiento ferritina y hemosiderina).

Radical Hidroxilo (OH)


Es muy reactivo y puede atacar prcticamente a todas las molculas biolgicas, tales y como DNA, lpidos y protenas (fenilalanina, tirosina y metionina).

El Singlete de Oxgeno (1O2)


Se forma mediante procesos fotodinmicos por interacciones de diversos radicales oxigenados. Es ms reactivo que el O2. Difunde bien a travs de las membranas biolgicas. Dianas biolgicas son las membranas, las protenas y los cidos nucleicos.

Radical Perhidroxilo (OH2)


Se forma a partir del anin superxido y es ms reactivo que ste. Es un potente iniciador de peroxidacin.

Oxido Ntrico (NO)


Es producido mediante la oxidacin de la arginina mediante la oxido ntrico sintasa (NOS). Reacciona con el oxgeno molecular y con el radical superxido generando peroxinitritos y radicales hidroxilo (RNOS). Esta reaccin tiene importancia biolgica slo cuando se produce en grandes cantidades (macrfagos accin bactericida).

Fuentes Biolgicas de las Especies Reactivas de Oxgeno (ROS)


~ 90% del O2 que consumimos fosforilacin oxidativa. ~ 10% del O2 que consumimos reacciones de hidroxilacin y oxigenacin. ~ 1% del O2 que consumimos ROS.

Fuentes Biolgicas de las Especies Reactivas de Oxgeno (ROS)


El CoQ en la cadena de transporte electrnico es el principal sitio de generacin de anin superxido.

Fuentes Biolgicas de las Especies Reactivas de Oxgeno (ROS)


Diferentes oxidasas, oxigenasas y peroxidasas generan ROS. Oxidasas presentes en peroxisomas, mitocondrias y retculo endoplsmico generan H2O2. La xantino oxidasa es un enzima que participa en la degradacin de las purinas y se localiza en el citosol. Este enzima es importante en el dao oxidativo producido en la isquemia-reperfusin.

Fuentes Biolgicas de las Especies Reactivas de Oxgeno (ROS)


Leucocitos polimorfonucleares (fagocitos): NADPH oxidasa estallido respiratorio generacin de anin superxido, perxido de hidrgeno y radical hidroxilo. cido ascrbico, catecolaminas y flavinas reducidas radical superxido

Fuentes Biolgicas de las Especies Reactivas de Oxgeno (ROS)


Resumen In vivo, las ROS se forman por tres mecanismos: Reaccin secundaria del transporte electrnico. Reaccin del O2 con iones metlicos. Reacciones enzimticas normales (oxidasas).

Estrs Oxidativo

Concepto: dao producido por la superproduccin de especies de oxgeno reactivas de manera que se produce un desequilibrio entre stas y los mecanismos de defensa antioxidante o los mecanismos reparadores.

Estrs Oxidativo
Este dao puede ser: 1. Lipoperoxidacin: se inicia por la extraccin de un tomo de hidrgeno de un cido graso poliinsaturado (PUFA). Afecta a las membranas biolgicas y a las lipoprotenas. Puede ser iniciada por el radical hidroxilo y propagada por el oxgeno molecular. Cambia o daa la estructura molecular lipdica Altera la organizacin estructural de las membranas Altera () la fluidez de las membranas entrada de iones (Ca++). Es un proceso que se autoperpeta (reaccin en cadena).

Estrs Oxidativo

Estrs Oxidativo
La lipoperoxidacin malondialdehido (MDA) y 4-hidroxinonenal (HNE). Estos productos reaccionan con las protenas y forman aductos y uniones cruzadas. Estos compuestos son productos finales de la oxidacin lipdica avanzada (ALE) y han sido encontrados en la aterosclerosis y en la enfermedad de Alzheimer.

Estrs Oxidativo
2. Desnaturalizacin proteica o enzimtica (oxidacin). Como consecuencia del dao oxidativo, las protenas:
Se pueden fragmentar. Se pueden producir uniones entre diferentes aminocidos. Se pueden formar agregados que impiden la degradacin proteica. Se puede aumentar la degradacin proteica recambio.

El glutation se puede oxidar y perder por tanto su capacidad antioxidante.

Estrs Oxidativo
3. Mutagnesis mitocondrial/OH). de los cidos nucleicos (DNA nuclear y

El Fe3+ se une inespecficamente al DNA focaliza la reaccin de Fenton. El dao oxidativo puede romper las hebras del DNA.

Estrs Oxidativo
4. Las ROS tambin reaccionan con los carbohidratos para formar compuestos dicarbonil que reaccionan con las protenas para crear uniones cruzadas y aductos conocidos como productos de glucoxidacin o productos finales de la glucosilacin avanzada (AGE). Estos AGE han sido observados en la diabetes y tanto los AGE como los ALE estn implicados en las lesiones vasculares diabticas de la retina y del rin.

Estrs Oxidativo
El estrs oxidativo puede ser agudo o crnico. El agudo se produce en la reperfusin tras isquemia, en la inflamacin aguda y en la hiperoxia. El crnico se produce en la inflamacin crnica mutagnesis cncer.

Estrs Oxidativo

Mecanismos de Defensa Antioxidante


Compartimentalizacin. Mecanismos enzimticos. Mecanismos no enzimticos (antioxidantes endgenos y exgenos; scavengers). Mecanismos de reparacin.

Mecanismos de Defensa Antioxidante

Mecanismos de Defensa Antioxidante


Enzimticos 1. Superxido dismutasa (SOD). Es el principal mecanismo de defensa para combatir la toxicidad del oxgeno. Cataliza la conversin del anin superxido a perxido de hidrgeno y oxgeno.

Mecanismos de Defensa Antioxidante

Son una familia de enzimas. Existen 3 isoenzimas:


Cu+-Zn2+-dependiente que se localiza en el citosol y a nivel extracelular. Mn2+-dependiente que se localiza en las mitocondrias.

En las mitocondrias se encuentran altos niveles de la isoforma Mn2+-dependiente ya que en este orgnulo se genera mucho anin superxido.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


2. Catalasa (Cat). Cataliza la conversin del perxido de hidrgeno a agua y oxgeno, por lo que previene la formacin de radicales hidroxilo. Se localiza fundamentalmente en los peroxisomas y en menor grado en el citosol y en los microsomas. Hay altos niveles en hgado y rin. En las clulas del sistema inmune, la catalasa protege a estas clulas de su propio estallido respiratorio.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


El glutation (-glutamilcisteinilglicina) es uno de los principales mecanismos de defensa antioxidante del organismo. Se encuentra en las clulas a elevada concentracin. En la reaccin catalizada por la glutation peroxidasa, el perxido de hidrgeno es reducido a agua, mientras que los grupos sulfhidrilos del glutation son oxidados a disulfuro. En las mitocondrias se encuentran altos niveles de glutation y glutation peroxidasa para poder convertir el perxido de hidrgeno en agua y poder as prevenir la lipoperoxidacin.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


3. Glutation peroxidasa (GSH-Px). Es una familia de enzimas seleniodependientes. Se encuentran en el citosol, ncleo y en las mitocondrias, donde son el principal mecanismo para la eliminacin del H2O2 producido fuera de los peroxisomas.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


4. Glutation reductasa (GR). Cataliza la reduccin del glutation oxidado.

Mecanismos de Defensa Antioxidante

5. Glucosa 6 fosfato desidrogenasa (G6PD). Cataliza la oxidacin de la glucosa 6 fosfato. Est ampliamente distribuida en las clulas de los mamferos y tiene un importante papel antioxidante.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


O2 H2O2 (o ROOH) 2GSH H2O2 2H2O + O2
Glutation peroxidasa

2H+ 2O2-.

Superxido dismutasa Catalasa

NADP+
Glutation reductasa

GSSG 2H2O (o ROH + H2O)

NADPH

Mecanismos de Defensa Antioxidante


No enzimticos 1. Secuestradores de iones metlicos que impedirn la formacin de radicales hidroxilos (ferritina, transferrina, lactoferrina, ceruloplasmina, albmina (cobre), haptoglobina (hemoglobina) y hemopexina (hemo), carnosina y pptidos relacionados (cobre). 2. Neutralizadores de radicales libres (scavengers). Los scavengers convierten los radicales libres en especies qumicas no radicales mediante reacciones no enzimticas en las que donan un electrn (un tomo de hidrgeno) al radical libre. Cuando un scavenger reduce a un radical libre, el scavenger sufre una oxidacin.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


Scavengers presentes en la dieta. -tocoferol (Vit. E). Es el antioxidante ms ampliamente distribuido en la Naturaleza. Es el principal antioxidante liposoluble y rompe la cadena de la lipoperoxidacin. Es la principal defensa antioxidante de los fluidos extracelulares y las membranas biolgicas. Tiene poca actividad prooxidante.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


cido ascrbico (Vit. C). Es hidrosoluble compartimento extracelular y circulacin. En determinadas condiciones puede ser prooxidante. Carotenoides. -caroteno es el precursor de la Vit. A. Tiene poca actividad prooxidante. Es un antioxidante lipoflico y protege del dao oxidativo de la luz solar en la retina y en la piel.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


Flavonoides de plantas. Son un grupo de compuestos estructuralmente similares. Algunos flavonoides inhiben a los enzimas que generan anin superxido. Otros secuestran Fe y Cu, actan como scavengers propiamente dichos o estabilizan a los radicales libres formando complejos con ellos.

Mecanismos de Defensa Antioxidante

-tocoferol (vitamina E)

cido ascrbico (vitamina C)

-caroteno

Mecanismos de Defensa Antioxidante


Antioxidantes endgenos. cido rico. Es formado en la degradacin de las purinas. Se localiza en el compartimento extracelular. Su accin antioxidante es importante en el plasma y en las vas areas superiores.

Mecanismos de Defensa Antioxidante


Melatonina. Es el principal producto de la glndula pineal. Sus principales caractersticas son:
Produccin endgena (pineal y numerosos rganos y sistemas). Gran capacidad de difusin y ubicuidad. Carece de toxicidad y acciones prooxidantes. Es un eficaz scavenger de radicales hidroxilos.

Otros compuestos:
grupos SH de las protenas. ubiquinol 10 (coenzima Q reducido). diversas protenas plasmticas.

Status Antioxidante

Balance entre prooxidantes y antioxidantes. Este balance es dinmico y est ligeramente inclinado a favor de la oxidacin.

Status Antioxidante
El organismo se ha adaptado a este ligero disbalance con el desarrollo de mecanismos reparadores (ligasas, nucleasas, polimerasas, proteasas y fosfolipasas). El status antioxidante es afectado por diversos factores (dieta, alcohol, medio ambiente, patologas, ejercicio y envejecimiento).

ROS - Patologa

ROS - Patologa

ROS - Patologa
Envejecimiento (general y del SNC en particular). Con el envejecimiento aumenta la generacin de radicales libres y disminuyen los mecanismos de defensa antioxidantes. Cerebro: Alto consumo de oxgeno (20% del total inspirado). Alta concentracin de PUFA. Bajos niveles de transferrina y ceruloplasmina en LCR. Alta concentracin de hierro.

Fagocitosis - Inflamacin
En respuesta a agentes infecciosos y otros estmulos, las clulas fagocticas del sistema inmune (neutrfilos, eosinfilos y monocitos/macrfagos) muestran un rpido y elevado consumo de oxgeno denominado estallido respiratorio. Estallido respiratorio anin superxido, perxido de hidrgeno, radicales hidroxilo, cido hipocloroso y RNOS. Estallido respiratorio forma parte de los mecanismos de defensa inmunolgicos. NADPH oxidasa genera el estallido respiratorio. NADPH oxidasa anin superxido.

NADPH oxidasa es un complejo multienzimtico que se ensambla en la cara interna de la membrana plasmtica.

Fagocitosis - Inflamacin
El perxido de hidrgeno es formado a partir del anin superxido espontneamente o mediante la SOD. A partir del perxido de hidrgeno y mediante la reaccin de Fenton se generan radicales hidroxilo. A partir del perxido de hidrgeno y mediante la mieloperoxidasa se genera cido hipocloroso. La mieloperoxidasa es un enzima que contiene dos grupos hemo y que est presente principalmente en los neutrfilos.

Fagocitosis - Inflamacin
Neutrfilos, monocitos y macrfagos activados generan NO mediante la NOS. El NO reacciona con el anin superxido y genera peroxinitritos. La produccin de radicales libres durante la respuesta inflamatoria puede daar a los tejidos que rodean al foco inflamatorio y una produccin mantenida de radicales libres se encuentra en la inflamacin crnica. Defectos genticos en algunas de las subunidades de la NADPH oxidasa dan lugar a una enfermedad denominada granulomatosis crnica.

Fagocitosis - Inflamacin

Resumen
Reactive oxygen species (ROS) are the sparks of the oxidative metabolism. Oxidative stress is the price we pay for using oxygen. ROS and reactive nitrogen species (RNS), such as superoxide, peroxide, hydroxyl radical, and peroxynitrite, are reactive and toxic, sometimes difficult to contain, but their production is important for regulation of metabolism, turnover of biomolecules and protection against microbial infection. ROS and RNS cause oxidative damage to all classes of biomolecules: proteins, lipids and DNA. There are a number of protective antioxidant mechanisms, including sequestration of redox-active metal ions, enzymatic inactivation of major ROS, inactivation of organic radicals by small molecules, such as GSH and vitamins, and, when all else fails, repair or turnover. Biomarkers of oxidative stress are readily detected in tissues in inflammation, and oxidative stress is increasingly implicated in the pathogenesis of chronic disease.