UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

DEPTO. TECNOLOGIA BIOQUMICO-FARMACUTICA

Disciplina: Biotecnologia Farmacutica

Lista de exerccios Prof. Dr. Michele Vitolo 1. Sejam os seguintes dados para uma reao enzimtica genrica S P: (S) v (M) (nmoles/L.min) 6,25x10-6 15,0 7,50x10-5 56,25 1,00x10-4 60 -3 1,00x10 74,9 1,00x10-2 75,0 a) Calcular KM e Vmax; b) Qual seria a v quando (S) = 2,5x10 -5M e a (S) = 5,0x10-5M?; c) Qual seria a v quando (S) = 5,0x10 -5M, se a concentrao de enzima fosse o dobro?; d) Sabendo que as velocidades da tabela acima foram determinadas pela mensurao da concentrao de produto que se acumulou por um perodo de 10 minutos, pergunta-se: as velocidades indicadas correspondem s velocidades iniciais de reao? DADO: Experimentalmente observou-se que a condio de velocidade inicial admissvel at um consumo de S0 da ordem de 5%. Resp. a) Vmax = 75 nmoles/L.min; KM = 2,5x10 -5M ; b) 37,5 nmoles/L.min e 50 nmoles/L.min ; c) 100 nmoles/L.min ; d) sim. 2. A atividade de uma enzima com KM = 3x10-4M foi determinada usando-se uma concentrao inicial de substrato de 1x10-6M. Em 1min foram consumidos 5% do substrato inicial. a) Que percentagem de substrato ser usado em 5 min?; b) Calcular Vmax; c) Aps quanto tempo de reao 75% do substrato inicial ter sido consumido? Resp. a) 22,6%; b) Vmax = 1,54x10-5M/min; c) 27 min. 3. Uma enzima com KM = 5,0x10-3M teve sua atividade determinada a uma concentrao inicial de substrato de 2x10 -5M. Em 6 min metade do substrato foi usado. Calcule: a) Vmax; b) A concentrao de produto formado em 15 min de reao. Resp. a) Vmax = 5,78x10-4 M/min; b) 1,65x10-5M. 4. Uma enzima com um KM de 2,6x10-3M foi determinada usando-se uma concentrao inicial de substrato de 0,3M. A velocidade observada foi de 5,9x10-5 moles/L.min. Se a concentrao inicial de substrato fosse 2x10-5M, qual seria a concentrao de produto decorridos (a) 5min e b) 10min? Resp. a) 2,15x10 -6M; b) 4,06x10-6M.

5. Uma preparao enzimtica tem uma atividade especfica de 42 U/mg de protena e contm 12 mg de protena por mL. Calcule a velocidade inicial da reao numa mistura padro de 1 mL contendo 20 L de preparado enzimtico. Resp. 10,08 U. 6. O produto de uma reao enzimtica d um composto colorido quando misturado com um corante especfico, cuja intensidade de cor medida a 535nm. A tabela 1 mostra a variao da absorbncia com o tempo (a quantidade de enzima fixa), enquanto que a tabela 2 apresenta as absorbncias nos tempos 2, 5, 10 e 18min para diferentes quantidades de enzima. Pergunta-se: a) Qual o tempo de reao mais adequado para ser fixado?; b) Usando o tempo fixado no item anterior, existe uma relao linear entre as absorbncias medidas e a quantidade de enzima presente? TABELA 1. Variao da absorbncia em funo do tempo.

Tempo ( min) Absorbncia 0 0 2 0,36 4 0,60 6 0,84 8 1,05 10 1,18 12 1,26 14 1,35 16 1,39 18 1,40 20 1,40 TABELA 2. Absorbncias medidas em alguns instantes da reao em funo da quantidade de enzima. Absorbncia devida colorao do produto (mdia de trs leituras) Diluio da Tempo de reao (min) Enzima (%) 2 5 10 18 10 0,04 0,08 0,16 0,28 20 0,08 0,16 0,31 0,53 30 0,12 0,22 0,47 0,74 40 0,14 0,30 0,61 0,94 50 0,16 0,39 0,78 1,12 60 0,20 0,46 0,91 1,22 70 0,22 0,53 1,05 1,27 80 0,27 0,61 1,15 1,31 90 0,29 0,69 1,25 1,31 100 0,33 0,76 1,30 1,34 Resp. a) tempo de reao menor que 15 min; b) Qualquer concentrao de enzima pode ser usada para os tempos 2 min e 5 min; Para um tempo de 10 min a concentrao mxima de enzima de 70%.

7. Seja a hidrlise da sacarose pela invertase. Considerando os dados da tabela seguinte, onde so apresentadas as velocidades de reao frente s concentraes iniciais de sacarose, calcular as constantes cinticas KM e Vmax da invertase.

(S) (mM) v (U/mL) 20 0,0131 40 0,0170 50 0,0181 80 0,0200 100 0,0207 120 0,0211 292 0,0267 Resp. Vmax = 0,0240 U/mL; KM = 17,0 mM