CUARTA PARTE

FERMENTACIONES Y METANOGENESIS
EN PROCESOS DE FERMENTACION, energa de sustratos orgnicos es transferida a ATP exclusivamente por fosforilacin a nivel de sustrato. Como las fermentaciones no requieren de oxgeno y stas pueden llevarse a cabo en ausencia de aire, este proceso es anaerbico. Los productos finales de fermentaciones en ecosistemas naturales varan dependiendo esencialmente de las capacidades metablicas de los organismos presentes y a la naturaleza de la fuente de carbono inicial (Figura 1). Un ejemplo clsico es la biodegradacin de materia orgnica en sedimentos anaerbicos donde el primer grupo de poblaciones (aquellas que pueden utilizar directamente la materia orgnica disponible) hidrolizan sta a azcares y compuestos menos complejos. Los productos metablicos de este grupo sirven como alimento a un segundo grupo de fermentadores que generan diferentes cidos orgnicos (ej. butirato, acetato, lactato, etc.), CO2 e hidrgeno. Finalmente, el acetato, CO2 y H2 sirven como materia prima para que bacterias metanognicas acten produciendo este ltimo grupo metano (metano es el producto final de la descomposicin anaerbica). Hbitats de bacterias metanognicas: Las bacterias metanognicas abundan en ambientes donde limitan aceptadores de electrones tales como O2, NO3-, Fe3+, y SO42-. Digestores anaerobios, sedimentos anxicos, suelos de humedales y tractos gastrointestinales son hbitats tpicos para encontrar estos microorganismos.

FERMENTACIONES Y METANOGENESIS

Figura 1:

Cadena alimenticia en ambientes anaerobios.

Caractersticas generales (ver tabla 1): producen grandes cantidades de metano como producto principal de su metabolismo energtico todos son anaerobios estrictos son miembros del Grupo Arquea (arqueabacterias)

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Reacciones metanognicas tpicas 4 H2 + CO2 CH4 + 2 H2O 4 formato CH4 + 3 CO2 + 2 H2O 4 2-propanol + CO2 CH4 + 4 acetona + 2 H2O 2 etanol + CO2 CH4 + 2 acetato Metanol + H2 CH4 + H2O 4 metanol 3 CH4 + CO2 + 2 H2O acetato CH4 + CO2

Tabla 1:

Caractersticas generales de las principales Familias de bacterias metanognicas. Caractersticas Bacilos largos o cortos; utilizan H2 y CO2 y algunas formato o alcoholes como substratos para metanognesis; cocos que utilizan slo H2 o metanol, la mayora son Gram positivos; contienen pseudomurena; no mtiles; contenido de GC, 23-61% Bacilos; los substratos para metanognesis son H2 y CO2; Gram positivos; contienen pseudomurena; no mtiles; termoflicos extremos; contenido de GC, 33-34% Cocos irregulares; los substratos para metanognesis son H2 + CO2 y formato; Gram negativos; mtiles; contenido de GC, 29-34% Bacilos, espirilos, placas o cocos irregulares; utilizan H2 y CO2 algunas formato o alcoholes como substratos para metanognesis; Gram negativos; mtiles y no mtiles; contenido de GC, 39-61% Pequeos, cocos irregulares; utilizan H2 y CO 2 y algunas formato o alcoholes como substratos para metanognesis; Gram negativos; mtiles y no mtiles; contenido de GC, 4852% Pseudosarcina, cocos irregulares; utilizan H2 y CO 2, acetato, compuestos metlicos como substratos para metanognesis, nunca formato; cocos que utilizan slo H2 o metanol; la mayora son Gram positivos o negativos; frecuentemente no mtiles; contenido de GC, 36-52%

Familia Metanobacteriaceae

Metanotermaceae Metanococcaceae Metanomicrobiaceae

Metanocorpusculaceae

Metanosarcinaceae

FERMENTACIONES Y METANOGENESIS

Materiales: Tubos de ensayo (25 X 150 mm) Tapones de goma con agujero Beaker (500 ml) Tubo de goma Muestra sedimentos 0.1N KOH H2SO4 concentrado Solucin A (0.1% NH4Cl, 0.04% K2HPO4, 0.01% MgCl2, 2% acetato de calcio, y 1% metanol, pH 7.0)

METODOLOGIA
1. Ensambla dos sistemas como se ilustra a continuacin: *Sumerge Tubo II en solucin de 0.1N KOH. Este tubo recoger el gas metano que se produzca. El metano desplazar la solucin de KOH del Tubo II.

FERMENTADOR

Tubo de goma

Tubo I Fermentador

Tubo II Colector de gas

Solucin A Solucin KOH Sedimentos

2. Aade de 1 a 2 cm de sedimentos al Tubo I (tubo de fermentacin). 3. Completa hasta 75% del volumen del Tubo I con Solucin A y cubre la superficie del beaker con una tira de parafina. Determine el pH del sobrenadante.

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4. Prepara un segundo sistema de manera igual, pero acidifica con 2 ml de H2SO4 concentrado y tampoco aada la solucin A. 5. Marca el nivel de solucin en tubo colector de metano (representa tiempo cero). 6. Incuba ambos sistemas a temperatura ambiente. 7. Anota cambios de nivel en el Tubo II semanalmente. 8. Determina el pH del medio al finalizar la incubacin. 9. Grafica tus resultados y aplica anlisis estadsticos para aceptar o rechazar tu hiptesis nula (pide los resultados a tus compaeros de laboratorio). * Puedes utilizar la misma configuracin del digestor anaerbico para examinar cmo diferentes factores pueden afectar la velocidad de metanognesis (temperatura, pH, tipo y concentracin de sustrato, sales, etc.). Datos & Anlisis: Tiempo (semanas) Cantidad metano (cm3) Sistema I (acidificado) Sistema II (experimental)

pH inicial pH final

pH inicial pH final

Observaciones:

FERMENTACIONES Y METANOGENESIS

mm3 gas

Tiempo (semanas)

PREGUNTAS...
1. Por qu el acetato se aadi al tubo de fermentacin? 2. Explica el rol del KOH 3. Existen diferencias significativas en la produccin de gas entre los Sistemas I y II?