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NOTA PRVIA Atividade das glicosidases na presena de ch verde e de ch preto

PEREIRA, L.L.S.*; SOUZA, S.P.; SILVA, M.C; CARVALHO, G.A.; SANTOS, C.D.; CORRA, A.D.; ABREU, C.M.P. Departamento de Qumica / Universidade Federal de Lavras (UFLA), Caixa Postal 3037, CEP:37200-000, LavrasBrasil * lucianalsp@yahoo.com.br RESUMO: Vrias plantas tm sido consideradas produtos teraputicos, dentre elas destacamse os chs verde e preto, popularmente utilizados para controle da hiperglicemia e obesidade. Objetivou-se neste trabalho avaliar o potencial inibitrio sobre as enzimas -amilase, e glicosidases e o teor de compostos fenlicos do ch verde e do ch preto. O teor de compostos fenlicos encontrados foram de 80,8 0,43 mg g-1 no ch preto e 32,0 0,12 mg g-1 no ch verde. O ch verde e o ch preto, em condies de consumo, inibiram as enzimas em estudo, porm, aps a simulao do fluido gstrico o inibidor presente no ch verde perdeu a ao. O ch preto deixou de inibir a -amilase e apresentou inibio inalterada para e -glicosidases. Tais resultados sugerem que o ch preto pode ser auxiliar em dietas de restrio de carboidratos. Palavras-chave: Camellia sinensis, inibio enzimtica, hiperglicemia, obesidade

ABSTRACT: Activity of glycosidases in the presence of green tea and black tea. Several plants have been considered therapeutic products, including green and black tea, popularly used to control hyperglycemia and obesity. This study aimed to evaluate the inhibitory potential of the enzymes -amylase, and -glycosidases, as well as the content of phenolic compounds in green tea and black tea. The concentrations of phenolic compounds found were 80.8 0.43 mg g-1 in black tea and 32.0 0.12 mg g-1 in green tea. Under the tested conditions of use, green and black tea inhibited the enzyme under study. However, after simulation of the gastric fluid, the inhibitor present in green tea lost its action. Black tea no longer inhibited a-amylase and showed unaltered inhibition for and -glycosidases. These results suggest that black tea can be helpful in diets restricting carbohydrates. Key words: Camellia sinensis, enzymatic inhibition, hyperglycemia, obesity

INTRODUO Desde a pr-histria, as plantas tm sido utilizadas como produtos teraputicos. Em todo mundo milhares de produtos de origem vegetal so utilizados nas mais variadas formas como cataplasmas, infuso, macerado, filtrado, tinturas, pomadas, xarope, cpsulas e na forma in natura. O ch uma das bebidas mais consumidas e mais antigas do mundo. O ch verde e o ch preto so preparados com folhas da mesma planta [Camellia sinensis (L.) O. Kuntze], pertencente famlia Theaceae. O ch verde constitudo de folhas secas colhidas de diferentes partes da planta. J o ch preto passa por diversas etapas de processamento, dentre elas a de fermentao, que consiste, na verdade, de oxidao enzimtica dos flavanis a teaflavinas, que constituem

um grupo caracterstico deste tipo de ch (Matsubara & Amaya, 2006). Um dos principais componentes qumicos presentes nos chs, os compostos fenlicos cuja caracterstica estrutural comum que a presena de um anel aromtico hidroxilado, interage com as protenas formando complexos, possivelmente inibindo algumas enzimas (Salunkhe et al., 1990). O uso de frmacos derivados de plantas medicinais movimenta um mercado importante, especialmente na Europa, Pases Asiticos e Estados Unidos. Este mercado se baseia em pesquisa bsica e clnica, porm o uso cotidiano sem respaldo cientfico ainda maior (Lima et al., 2008). Assim o uso emprico do ch verde e do ch preto com finalidades emagrecedora e hipoglicemiante

Recebido para publicao em 29/04/2009 Aceito para publicao em 11/04/2010

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pode estar relacionado inibio das enzimas digestivas que hidrolisam os carboidratos. Dentre essas enzimas esto as -amilases que catalisam a hidrlise da ligao glicosdica -1,4 do amido, glicognio, e vrios oligossacardeos para posterior ao das glicosidases, liberando acares simples para serem absorvidos nas membranas dos entercitos. A inibio da atividade destas enzimas no trato digestivo de humanos relevante no controle da obesidade ou diabetes, por diminuir a absoro de glicose (Negri, 2005). Objetivou-se neste trabalho avaliar o teor de compostos fenlicos do ch verde e do ch preto e o potencial inibitrio sobre as enzimas digestivas -amilase, e -glicosidases.

Todas as anlises foram feitas em triplicata. Em cada anlise a mistura de reao foi incubada por pelo menos quatro perodos de tempo. Controles sem enzima (branco de substrato) (a) e sem substrato (branco enzima) foram incubados em banho-maria a 37C por 10, 20, 30 e 40 minutos, do mesmo modo que os experimentais. A inclinao da reta (grfico absorbncia X tempo), diretamente proporcional atividade enzimtica, foi calculada e utilizada para os clculos de porcentagem de inibio. Os comprimentos de onda foram 540 nm para -amilase e 410 nm para a e -glicosidases. Ensaio da inibio das enzimas glicolticas A inibio das enzimas -amilase, e glicosidases foi obtida a partir dos ensaios na ausncia do inibidor (A), na ausncia do inibidor e da enzima (a), na presena do inibidor, enzima e substrato (B) e na ausncia da enzima (b) da mesma forma que o ensaio de atividade das enzimas. Em cada anlise de inibio os chs foram pr-incubados com a enzima por 20 minutos antes da adio do substrato e incio da contagem do tempo. A porcentagem de inibio (I) foi calculada pela equao:

MATERIAL E MTODO Preparo das enzimas A enzima -amilase pancretica suna foi do tipo VI da SIGMA. As e -glicosidases foram obtidas a partir de duodeno suno, cedido pelo Departamento de Zootecnia da UFLA. O tecido foi triturado em liquidificador para extrao da enzima das membranas dos entercitos e processado em mixer at completa homogeneizao. O homogeneizado foi filtrado em malha de nylon e centrifugado por 10 minutos a 3000 rpm. O sobrenadante foi recolhido e utilizado como extrato enzimtico. Preparo dos chs O ch verde tostado e o ch preto (Camellia sinensis) foram adquiridos em supermercado local, na forma de sachet. Foram pesados 2 gramas dos chs e colocados em infuso com 50 mL de gua fervente por 10 minutos. Aps esfriar, foram filtrados em papel de filtro e utilizados como inibidores nas anlises enzimticas. Simulao da digesto no estmago Os chs foram incubados com o fluido gstrico simulado preparado segundo a USP (1995), por 1 hora em banho-maria a 37C. Aps esse perodo, foram neutralizados com bicarbonato de sdio puro at pH fisiolgico. Ensaio da atividade das enzimas glicolticas A determinao da atividade de -amilase foi feita segundo Noelting & Bernfeld (1948), utilizando amido 1% em tampo Tris 0,05 M pH 7,0 como substrato. As atividades de -glicosidase e glicosidade foram determinadas segundo o mtodo proposto por Kwon et al. (2006) com modificaes. O substrato constitudo de p-nitrofenil--Dglicopiranosideo 0,005 mol L-1 e p-nitrofenil--Dglicopiranosideo, foram preparados em tampo citratofosfato 0,1 mol L-1 pH 7,0.

I%

( A a ) ( B b) x100 ( A a)

Determinao de polifenis Em 1 grama de ch foram adicionados 50mL de metanol 50% em e aquecidos em refluxo a 80C durante 15 minutos. O extrato foi filtrado em papel e a frao recolhida. O filtro de papel foi lavado com 50 mL de metanol 50% e procedeu-se extrao dos polifenis como descrito anteriormente. Esse processo foi repetido mais uma vez e as trs fraes foram reunidas, evaporadas at o volume de 25 mL e submetidas dosagem de polifenis, usando cido tnico como padro (Golsdtein & Swain, 1963).

RESULTADO E DISCUSSO A inibio das enzimas envolvidas na digesto de carboidratos foi verificada in vitro sem simulao e com o fluido gstrico e com simulao do fluido e est demonstrada na Tabela 1. Na avaliao da atividade glicoltica da amilase, e -glicosidases na presena dos chs verde e preto, foi verificada inibio destas. O ch preto apresentou inibio superior ao ch verde sobre estas trs enzimas, sendo a -amilase a mais inibida. Kwon et al. (2006), avaliando a inibio de vinhos e chs sobre a -glicosidase e -amilase, tambm encontraram maior inibio pelo ch preto. Essa inibio tem sido relacionada com a presena de compostos fenlicos nos chs, devido caracterstica

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TABELA 1. Percentual de inibio de -amilase, e -glicosidase pelo ch verde e ch preto.

Enzimas -amilase -glicosidase -glicosidase
*

Ch verde % Inibio 42,19 37,00 17,00

**

Ch pret o
**

% Inibio 0 0 0

% Inibio 73,44 48,00 37,00

% Inibio 0 48,00 37,00

**

Sem simulao da digesto

Com simulao da digesto

estrutural comum a todos eles que a presena de um anel aromtico hidroxilado, que interage com as protenas causando complexao (Salunkhe et al., 1990). O teor de compostos fenlicos encontrados foram de 80,8 0,43 mg g-1 no ch preto e 32,0 0,12 mg g-1 no ch verde. O elevado teor de polifenis encontrado no ch preto (80,8 mg g-1) pode estar associado a maior inibio das enzimas. Prado et al. (2005), quantificando polifenis em Camelia sinensis, encontraram para ch verde nveis entre 3,4 e 6,2% valores semelhantes aos obtidos neste trabalho (3,2%). Na ingesto do ch, a passagem pelo trato gastrintestinal pode acarretar modificaes estruturais no inibidor em decorrncia do pH cido do estmago, inativando-o. Alguns autores citam o uso do ch verde e ch preto como adjuvantes ao tratamento da hiperglicemia pela inibio da -amilase (Hara & Honda, 1990; Know et al., 2006; Kusano et al., 2008). No entanto, a simulao gstrica sugere que no h inibio in vivo. O inibidor das glicosidases presente no ch preto no perdeu a atividade aps incubao com fluido gstrico simulado, mostrando-se uma alternativa em potencial para o tratamento de diabetes tipo II e obesidade, por diminuir a absoro de carboidratos.

REFERNCIA
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CONCLUSO O ch verde e o ch preto em condies de consumo inibem as enzimas envolvidas na digesto de carboidratos. Porm aps a simulao do fluido gstrico o inibidor presente no ch verde perde a ao. O ch preto deixa de inibir a a-amilase e apresenta inibio inalterada nas a e b-glicosidases.

Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.12, n.4, p.516-518, 2010.