El cultivo in vitro se define como el cultivo en un medio nutritivo, en condiciones estriles, de plantas, semillas, rganos, explantos, tejidos, clulas

y protoplastos de plantas superiores. Estas tcnicas se caracterizan porque:

Ocurren a microescala, sobre todo en una superficie pequea; y hormonales;

Se optimizan las condiciones ambientales, en lo que se refiere a factores fsicos, nutricionales Se excluyen todos los microorganismos (hongos, bacterias y virus), as como tambin las plagas de las plantas superiores (insectos y nematodos). Generalmente no se reproduce el patrn normal de desarrollo de una planta, resultando que un tejido aislado puede dar origen a un callo o puede desarrollarse de otras formas poco usuales (por ejemplo, formacin de rganos, embriogenesis somtica). La capacidad de cultivar protoplastos o clulas individuales permite manipulaciones que antes era imposibles. El nombre de cultivo in vitro (que generalmente quiere decir en vidrio), se utiliz porque, al menos inicialmente, se usaron recipientes de vidrio para el cultivo

CULTIVO IN VITRO EN EL JARDN BOTNICO En 1988, en el Jardn Botnico se mont un laboratorio de cultivo in vitro con el fin de recuperar plantas en peligro de extincin, multiplicndolas lo ms rpidamente y en un corto periodo de tiempo. As se realiz con varias especies:

Artemisia granatensis se multiplic a partir de yema, obtenindose muchas plantitas en poco tiempo que se adaptaron bien en maceta, ms tarde en el campo, en un hbitat semejante al suyo.

Betula pendula subsp. fontqueri, se multiplic a partir de la base de la hoja joven, y se ha conseguido recuperar, de tal forma que en el conservatorio hay ejemplares grandes totalmente adaptados.

Narcissus spp. a partir de la base del catfilo del bulbo. embriognesis nuevas plantas.

Rosmarinus tomentosus, utilizndose como explanto la base de la hoja, obtenindose por Euonymus latifolius, que aunque es una planta difcil de multiplicar, se han obtenido nuevas plntulas.

PROPAGACIN COMERCIAL DE PLANTAS ORNAMENTALES POR CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES PARA BENEFICIO SOCIAL DE LA COMUNIDAD INTRODUCCIN El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una tcnica de reproduccin en condiciones totalmente aspticas, en la que a partir de un pequeo segmento inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genticamente iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estmulo por medio de variables fsicas y qumicas controladas en un medio de cultivo. A diferencia de las tcnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la propagacin de grandes volmenes de plantas en menor tiempo; as como el manejo de las mismas en espacios reducidos. Por otro lado, la tcnica es de gran utilidad en la obtencin de plantas libres de patgenos; plantas homocigotas, en la produccin de plantas en peligro de extincin, en estudios de ingeniera gentica, etc. El enorme potencial que posee esta metodologa ha propiciado que en los ltimos 25 aos se haya incrementado el nmero de laboratorios de cultivo de tejidos en el pas para la produccin comercial de plantas ornamentales y frutales al lo que ha motivado que algunos floricultores la estn utilizando como una alternativa viable en sus programas de produccin. Es por esto que en el Colegio Profesional de Bilogos del Estado de Veracruz, A.C. con el apoyo de la Secretara de Desarrollo Social (SEDESOL) y el Gobierno del Estado de Veracruz; se desarrolla un proyecto de produccin de plantas de ornato utilizando la tcnica antes mencionada con el propsito de aprovechar sus bondades, adecundola a la problemtica econmica de algunas colonias populares de la Ciudad de Xalapa y municipios circunvecinos; para lo cual se empez, a partir del primero de noviembre de 1994, la instalacin de un Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales en donde se contempla la produccin de especies ornamentales de inters econmico. A la fecha, se tienen resultados satisfactorios en la produccin de Gloxinia (Sinningia speciosa) cuyas caractersticas se mencionan a continuacin: Sinningia speciosa o Gloxinia speciosa; plantas perennes tuberosas de floracin estival (estacin ms caliente del ao). Sensible a las heladas; mnimo 15 C. Han de instalarse en lugares con abundante luz aunque no bajo la accin directa del sol. Prefieren una atmsfera hmeda y suelos tambin hmedos aunque no encharcados, turbosos con abundante materia orgnica. El riego no debe aplicarse directamente al follaje dado que este es muy pubescente y no seca rpidamente lo cual favorece la proliferacin de organismos que causan enfermedades. Se multiplican mediante semillas en primavera y verano a travs de esquejes caulinares; pueden tambin multiplicarse por divisin de los tubrculos en secciones provistas de un brote joven. Gloxinia speciosa tiene forma de roseta y de tallos cortos, las hojas ovales y aterciopeladas llegan a medir hasta 20 cm de longitud. Las pndulas y en forma de embudo, son carnosas y de color violeta, rojo o blanco, florece en verano. La regeneracin de plantas de gloxinia por cultivo in vitro se logra utilizando secciones de tejido foliar sobre un medio nutritivo MS (1962) complementado con fitorreguladores de crecimiento; una vez enraizadas las plantulitas, deben pasar por un periodo de aclimatacin en un invernadero con caractersticas (humedad, iluminacin y temperatura) semejantes a las del laboratorio, despus de 4-6 semanas se transfieren a un invernadero comn donde terminan su ciclo. ANTECEDENTES En octubre de 1994, se inici la operacin de un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales in vitro, en el Colegio Profesional de Bilogos del Estado de Veracruz A.C. con la finalidad de desarrollar tcnicas para la propagacin de especies vegetales de inters ecolgico y econmico. En enero de 1995, se iniciaron las labores de siembra de tejidos en especies ornamentales de inters econmico en la regin. A la par de estas actividades, se ha hecho promocin del proyecto en los medios de comunicacin locales con el fin de dar a conocer al

pblico las ventajas de utilizar la tcnica mencionada para la propagacin de plantas ornamentarles difciles de obtener por los mtodos tradicionales. As mismo, hemos participado en exposiciones de carcter cultural como la Feria de la Flores de Xalapa y la Feria del Caf en Coatepec, Ver.; se han dado plticas a estudiantes de la Facultad de Biologa y Agronoma y se ha facilitado el laboratorio para que alumnos de biologa se puedan capacitar en esta disciplina y en la Horticultura en general. Actualmente contamos con un inventario de 10,000 plantas ornamentales de las cuales 5,000 han sido donadas a un grupo social de 30 personas recientemente integrado en la poblacin de Mazatepec, Mpio. de Acajete, Ver., para lo cual se di capacitacin integral para el manejo en invernaderos de las mismas; con este primer lote iniciarn su propio negocio. De esta manera, no slo se incide en la generacin de fuentes de empleo, sino se colabora en la conservacin de los recursos forestales, pues esta zona padece de una elevada presin sobre estos. Por lo expuesto, se considera necesaria la continuidad de este proyecto para apoyar a otros grupos sociales y aprovechar la infraestructura existente. REVISIN BIBLIOGRFICA El fundamento terico del cultivo in vitro es el concepto de la totipotencialidad celular. Schleiden y Schwan (1887) describen en su teora celular, que la clula es capaz de subsistir por si sola si las condiciones externas le son favorables. A Morgan (1901) se le atribuye el trmino de la totipotencialidad celular propiamente dicho, que dice que una clula es capaz de desarrollarse hasta formar un organismo completo si las condiciones ambientales le son favorables y si se le aplican los estmulos adecuados. Haberlandt (1902) con la idea de la totipotencialidad celular desarrolla el primer cultivo in vitro de tejidos vegetales. Desafortunadamente sus trabajos fueron inexitosos debido a que utiliz un medio de cultivo relativamente simple y por otra parte, tejidos vegetales demasiado diferenciados. White (1932) logra el primer cultivo in vitro estable utilizando en sus experimentos pices de races de jitomate. Los tejidos meristemticos del pice radical propiciaron crecimiento en longitud de los mismos en el medio de cultivo. La falla en los intentos realizados por varios investigadores entre 1902 y 1932 se debi, como lo menciona White, a la mala eleccin del material vegetativo y a la simplicidad de los medios de cultivo utilizados. El logro de White le da un buen impulso al desarrollo de las tcnicas de cultivo in vitro; sin embargo en sus trabajos realizados hasta entonces no obtiene proliferacin celular en forma, los pices de raz solo crecen en longitud como lo haran normalmente como parte de la raz de la planta intacta. No es sino hasta 1934 cuando Gautheret logra proliferacin celular in vitro en tejidos cambiales provenientes de plantas adultas. En 1939 el mismo Gautheret, Nobecourt (en tejidos de zanahoria) y White (en tejidos de tabaco) publican casi simultneamente la formacin de una masa de clulas parenquimatosas (callo) a partir de los explantes (tejidos) utilizados en sus experimentos. Este hecho significativo constituye en s el despegue de las tcnicas de cultivo in vitro. Un factor importante en el desarrollo de las tcnicas de cultivo de tejidos vegetales, fue el descubrimiento de los reguladores de crecimiento. Overbeek (1941) observa el efecto de una sustancia presente en el agua de coco que estimulaba la divisin celular (efecto citocinnico). Cuando el agua de coco se combinaba con 2,4-D, tenia un efecto positivo en el desarrollo de tejidos de zanahoria y papa (Caplin y Steward 1948, 1952). Skoog y colaboradores observaron que el esperma de arenque, desnaturalizado por calor, tena un efecto muy marcado en la formacin de brotes a partir de tejidos de tabaco. De este cido desoxirribonucleico (ADN) desnaturalizado Miller y colaboradores (1955) aislaron un compuesto de naturaleza purnica enominado 6- furfuril-aminopurina o cinetina.

En 1926 dos cientficos japoneses descubrieron un compuesto hormonal, actualmente de uso ordinario en el cultivo in vitro de tejidos vegetales denominado giberelina el cual es producido por un hongo Gibberella fujikoroi; este compuesto fue descubierto cuando ellos estudiaban la causa de la pudricin en plntulas de arroz. El efecto que produca dicha sustancia era un alargamiento excesivo en los tallos, sin desarrollo proporcional de la raz. Actualmente se le atribuyen otros efectos como la induccin de germinacin en semillas, brotacin en algunos tubrculos como la papa etc. OBJETIVO GENERAL Implementar un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales para el incremento de la produccin de plantas ornamentales que genere un beneficio social a los habitantes de las colonias marginadas de Xalapa y municipios circunvecinos. En este proyecto se vern beneficiados un grupo de pobladores de la congregacin de Mazatepec, municipio de Acajete, Ver. OBJETIVOS ESPECFICOS
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Investigar en el mercado local el tipo de plantas ornamentales de mayor consumo. Investigar sus caractersticas botnicas y biogeogrficas. Desarrollar las tcnicas de cultivo in vitro de las especies propuestas por los grupos sociales formados, en base a sus caractersticas biolgicas y a su demanda en el mercado. Producir 5,000 plntulas para beneficio social de la comunidad antes mencionada. METODOLOGA Fase I: Establecimiento de los cultivos in vitro Para la realizacin de este proyecto se implement un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales con el equipo y materiales bsicos para estos fines. El material biolgico inicial consisti en plantas de gloxinia (Gloxinia speciosa) las cuales se adquirieron en viveros de la localidad. Predesinfestacin: los explantes iniciales se obtuvieron de tejido foliar para lo cual se separaron las hojas jvenes ms vigorosas y se lavaron con agua y detergente. Desinfestacin: dentro de una campana de flujo laminar las hojas de gloxinia se sumergieron en una solucin de hipoclorito de sodio al 1% en constante agitacin durante 10 minutos, se aplicaron tres enjuagues de tres minutos cada uno con agua destilada estril. Despus se cortaron y se sembraron secciones de tejido de aproximadamente 1 cm 2. Paralelamente se adquirieron semillas de gloxinia hbrida F1 doble, mezcla de colores y se desinfestaron de la misma manera que las hojas. Tanto la siembra de tejidos como de semillas se realiz en un medio nutritivo de acuerdo a la formulacin de Murashige & Skoog (1962) complementado con 100 mg/l de myo-inositol glysina 2 mg/l, cido nicotnico 0.5 mg/l, pyridoxina 0.5 mg/l, tiamina 0.1 mg/l, sacarosa 30 gr/l, agar 7 gr/l, el pH se ajust a 5.8. La esterilizacin de los medios de cultivo fue a 20 libras de presin durante 20 minutos en todos los casos. El medio para germinacin de semillas fue el mismo pero a la mitad de la concentracin original y adicionado con 1.5 gr/l de carbn activado, el medio para las secciones de tejido se complement con 1 mg/l de benzilaminopurina (BAP) y 0.3 mg/l de alfa cido naftalenacetico ( ANA). Los tejidos se trasladaron a una cmara de incubacin a una temperatura de 25 2 C, y bajo una intensidad luminosa de 2000 lux (lmparas slime line marca Phillips). Las semillas fueron incubadas a la misma temperatura pero en ausencia de luz.

Fase II: Multiplicacin Debido a que las secciones de tejido foliar de gloxinia sufrieron oxidacin muy severa, no fue posible lograr la diferenciacin de plntulas, esto motiv a que la multiplicacin de propgulos se hiciera a partir de las plntulas obtenidas por germinacin asptica. El medio de cultivo utilizado en esta fase fue el mismo MS (1962) aumentando la concentracin de BA a 2 mg/l y ( ANA) 0.3 mg/l mg/l. Para alcanzar el nmero acordado de plntulas, se realizaron dos resiembras. Las condiciones de incubacin fueron las mismas que se describieron con anterioridad. Fase III: Enraizamiento de plntulas Para esta fase, se utilizaron las mismas sales MS en el medio de cultivo, omitindose las citocininas (BA). Complementado con 1.5 gr/l de carbn activado y 20 gr/l de sacarosa. Las condiciones de incubacin fueron las mismas que para las etapas anteriores. RESULTADOS Fase I: Establecimiento de los cultivos No fue posible la obtencin de plntulas a partir de tejidos por problemas de oxidacin debido a esto, las primeras plantas se obtuvieron por germinacin asptica, en las etapas posteriores se sigui la metodologa normal de cultivo in vitro. Fase II: Proliferacin En esta fase se lograron tazas de multiplicacin de 1x3 en un periodo de 6 a 8 semanas para la primera resiembra y de 1x5 en el mismo periodo de tiempo en la segunda resiembra bajo las condiciones anteriormente descritas. Con estos resultados la cantidad acordada de produccin se rebas en tan slo 9 meses de trabajo. Fase III: Enraizamiento Muchas especies de la familia de las herbceas, producen races an en medios conteniendo citocininas; sin embargo, estas raicillas no son funcionales ya que son demasiado delgadas y por lo tanto frgiles; entonces, es necesario transferirlas a un medio con hormonas promotoras de races (auxinas) con lo cual adems se evita que las plntulas continen proliferando, el fortalecimiento de tallos y hojas se obtiene tambin de este modo. En gloxinia el enraizamiento de propgulos se logr en un medio conteniendo las sales MS a la concentracin normal complementado con 1.5 gr/l de carbn activado, las plntulas enraizaron exitosamente en 4 semanas y adquirieron mayor vigor en tallos y hojas. VINCULACIN SOCIAL DEL PROYECTO "Floricultores de Mazatepec" Acajete, Ver. A travs del Colegio Profesional de Bilogos del Estado de Veracruz A.C., estamos desarrollando, con el apoyo econmico de la Secretara de Desarrollo Social (SEDESOL), proyectos productivos cuya finalidad es la de provocar un impacto positivo en las comunidades con problemas de marginalidad, uno de los cuales es el de "Produccin de Plantas Ornamentales por Cultivo in vitro". Elegimos esta Biotecnologa debido a que ofrece una serie de ventajas, algunas de las cuales se mencionan a continuacin:
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Uniformidad gentica Manejo de grandes volmenes de plantas en reas pequeas Florecimiento temprano Las plantas producidas in vitro estn exentas del control sanitario Facilita el movimiento de grandes cantidades de plantas entre distintas zonas geogrficas etc.

Aprovechando las bondades de sta tcnica para su aplicacin en problemas especficos de comunidades con problemas de desempleo, se estn produciendo masivamente plantas de ornato de inters econmico en la regin, las cuales son donadas a grupos sociales legalmente constituidos y capacitados en forma integral, para que ellos mismos lleven a cabo las actividades emanadas del proyecto desde que reciben las plntulas, hasta la fase adulta cuando son comercializadas. En la realizacin de este proyecto se ha contado con la destacada colaboracin del Patronato de Apoyo Voluntario a la Sierra de Perote de la Secretara de Finanzas y Planeacin (SEFIPLAN), la Secretara de Desarrollo Agropecuario y Pesquero (SEDAP), del Servicio Estatal de Empleo, el H. Ayuntamiento de Acajete, Ver., y el CBTIS 13 de Xalapa, Ver., entre otros. Bajo este esquema, se ha formado y capacitado un grupo social de 30 personas en la poblacin de Mazatepec, Municipio de Acajete, Ver., el cual ha concluido la construccin de un invernadero en donde se encuentra en la fase de adaptacin una cantidad de 5000 plntulas de la especie Sinningia speciosa (gloxinia), mismas que fueron producidas y donadas por el Colegio de Bilogos. Con este modelo de trabajo se crearon 30 empleos directos y se estima que con el efecto multiplicador se rebase la cifra de 100 empleos en aproximadamente un ao, ya que en el laboratorio se producen las flores que debern sembrarse en cada parcela factible, pasando a la integracin de sistemas unifamiliares de produccin; otro de los beneficios del proyecto consiste en que se disminuir en adelante la presin ejercida por los pobladores de esta regin sobre los recursos naturales particularmente sobre los bosques ya que al ofrecerles alternativas de empleo no tienen que talar rboles para cubrir sus necesidades ms urgentes. Cabe agregar que Mazatepec es una localidad situada en el Municipio de Acajete, que cuenta con una poblacin de 706 habitantes; de stos 421 son personas de ms de quince aos de edad de los cuales el 48.2% son analfabetas. La principal ocupacin laboral es la agricultura (jornaleros que laboran en otras regiones y/o trabajan su parcela para el autoconsumo) y la venta clandestina de madera; de manera secundaria existe un grupo de personas que se dedican a la comercializacin de flores en la Ciudad. de Xalapa. Esta primera donacin se considera til para enfrentar al grupo en los principales procesos de produccin en invernadero, bajo un programa de capacitacin tcnico-administrativa, as como para generar la capacitacin inicial del mismo, que al momento ha invertido en base a un crdito sin inters y condicionado a la produccin, promovido por el Patronato de Apoyo Voluntario a la Sierra de Perote. Para el ao 1996, se tiene previsto el proceso intensivo de capacitacin, entrenamiento y organizacin, as como la produccin en laboratorio de 5000 plntulas de "Crisantemo", que el grupo ha decidido sea su producto definitivo a desarrollar, toda vez que de el dominan el mercado. CONCLUSIONES De este trabajo se deben destacar los siguientes aspectos fundamentales:
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Que el desarrollo sustentable del estado de Veracruz, requiere de la aplicacin de estrategias agresivas, siendo una de ellas la transferencia de biotecnologas a procesos productivos, de base social, en el medio rural. Que la vinculacin entre las instancias productoras de biotecnologas y los sectores marginados, puede lograrse en la medida en que se establezcan los canales adecuados en cuanto a localizacin y adquisicin de apoyos de todo tipo: de investigacin, de inversin social, administrativos, financieros y de capacitacin. Que en base a la integracin de grupos de autogestin productiva, es posible constituir empresas sociales generadoras de empleos como alternativa a los fenmenos de marginalidad y depredacin de los recursos naturales.

Que los proyectos de autogestin productiva y de aplicacin interinstitucional, son capaces de integrar recursos y apoyos con un elevado efecto sinrgico, propiciando la sustentabilidad del grupo y del proyecto mismo. Los resultados obtenidos permitirn en el futuro aplicar esta metodologa a otras comunidades con problemas de marginacin con lo cual se contribuir por una parte a la creacin de empleos y por otra a impulsar fuertemente la actividad de la floricultura en el estado de Veracruz , produciendo plantas ornamentales de calidad para ser ms competitivos en esta rea. BIBLIOGRAFA: 14. Davies R.D. et al, (1980). Proceeding of the Fourth John Innes Symposium the Plant Genoma and Second. 15. International Haploid Conference Hold in Norwich. John Innes Institute Norwich, England. 16. Doods H.J. y Roberts W.L. 1982. Experimentes in Plant Tissue Culture. Cambridge University Press. 17. Washington D.C. Dixon, R.A. (1986). Plant Cell Culture A Practical Aproch, I. R. L., Press

18. Evans, D.A. et, al. (1983). Handbbook of Plant Cell Culture Vol.I, II, III y IV. McMillan Publishing Co. New York. 19. Earle, E.D. and Demarly (1982). Variavility in Plants Regenerated from tissue Culture. Praeger, U.S.A. 20. 16 Board. U.S.A. 21. 18 Board. U.S.A. Fiechter, A. (1980). "Plant Cell Culture I". In Biochemical Enginnering, Vol. Fiechter, A. (1980). "Plant Cell Culture II". In Biochemical Enginnering, Vol.

22. Helgeson, J.P. and B.J. Deveral (1983). Use of Tissue Culture and Protoplast in Plant Pathology. Academic Press. New York. 23. Igran, D.S. and J.P. Helgeson, (1980). Tissue Culture Methods for Plant Pathologist. Blakwell Scientific Publications. Oxford, U.S.A. 24. Kite, L. (1983), Plant from Test Tubes: an Introductions to Micropropagation. Timber Press Oregon U.S.A. 25. Margara, J. (1984), Les Meristems et L'Orgagenese. Instituto National de la Reserche Agronomique, Paris. 26. Morosch, K. And H. Hiruni (1979). Practical Tissue Culture Aplications. Academic Press, New York. 27. Pierick, R.L.M. (1987). In vitro Culture of Higher Plants. Marthinus Nihoff Publishers, Dordechet. Netherlands. 28. Reinert, J. And V.P.S., Baja (1977). Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell, Tissue an Organ Culture. Springer Verlag, New York. 29. Street, H.E. (1989). "Plant Tissue Culture and Cell Culture". In Botanical Monographs, Second Edition, University of California Press. 30. Thorpe, T.A. (1981), Plant Tissue Culture: Methods and Aplications in Agriculture. Academic Press. New York.

Vasil, I.K. (1980), Perspectives in Plant Cell and Tissue Culture (Suplement II A y II B), Academic Press. . Cultivo in vitro de rboles frutales Multiplicacin o reproduccin de frutal in vitro

Cultivo in vitro El cultivo in vitro es un mtodo de propagacin de plantas de aplicacin profesional, puesto que se realiza en laboratorio, en unas condiciones estriles y con unas instalaciones especiales. Un dato para dar una idea comercial es que en Espaa haba en 1.990 28 laboratorios dedicados a la produccin de plantas por cultivo in vitro como negocio. El cultivo in vitro consiste en tomar un trocito de hoja, un embrin, una porcin pequeita de tallo (de 0,2 a 1 milmetro) o cualquier otra parte de una planta y ponerla a cultivar en un tubo de ensayo sobre un medio acuoso nutritivo. Lo fundamental es que se hace en unas condiciones muy controladas y totalmente estriles: utensilios, cmara de manipulacin, etc., todo est desinfectado en autoclave. El cultivo in vitro es muy caro, entre otras cosas porque no se puede mecanizar. Slo son rentables aquellos laboratorios muy grandes y con mucho mercado. La planta ya desarrollada en el cultivo in vitro necesita una primera aclimatacin en el laboratorio; en el invernadero y despus una segunda aclimatacin en el campo. Los viveros grandes realizan ambas operaciones; otros slo se encargan del primer paso.

Fase de aclimatacin en invernadero Aplicaciones prcticas del cultivo in vitro:

Propagacin vegetativa. Esto es lo ms prctico. Dos tcnicas: - Micropropagacin de estaquillas - Organognesis de callos

Produccin de plantas libres de virus mediante dos tcnicas: - Cultivo de meristemos - Microinjerto in vitro

Permite hacer germinar semillas que son muy difcil de hacer en condiciones normales. Ejemplo: algunas Orqudeas tienen en los campos unos parsitos obligados y en viveros no se pueden reproducir; se inoculan esos parsitos o in vitro. Eliminar la inhibicin de germinacin de las semillas. El cultivo in vitro es lo ms eficaz porque tiene determinados inhibidores y algunos huesos de frutales no son capaces de germinar ya que no tiene desarrollado el embrin. Prevencin del aborto embrionario como resultado de incompatibilidad. Se da en cruces de inters cientfico o intergenticos, sobre todo en plantas herbceas. Los cruces incompatibles dan abortos. Aplicacin en mejora gentica para obtener hbridos, para introducir material gentico, etc. Acortar los ciclos de mejora gentica. No hay que esperar que pase el periodo juvenil del rbol para ver resultados. Produccin de haploides. Cruzamientos o cultivo de polen (anteras). Ventajas: - Obtencin rpida de homocigotos. - Produccin de hbridos (frutos puros). Equipo necesario para el cultivo in vitro - Autoclave - Cmara de flujo laminar - Medio de cultivo - Planta - Cmara de cultivo - Autoclave

Es donde se "esteriliza" todo lo que vamos a utilizar: agua, algunos nutrientes, material, etc. No se pueden meter proteinas. Es como una olla a presin, pero de mayor tamao, donde se controla la presin y la temperatura (hasta 120). - Cmara de flujo laminar

Es donde se realizan todas las manipulaciones con la planta. Es un habitculo con un operario en un ambiente estril. Se usan rayos ultravioletas para esterilizar el aire. - Medio de cultivo

Agua y nutrientes (hormonas) en un tubo de ensayo, que se tapa con un tapn. Dependiendo del material que se va a propagar, el tubo se pone vertical o un poco inclinado. - Planta

El material vegetal de partida puede ser del campo, pero esto conlleva un alto riesgo de enfermedades y contaminacin, aunque se lave mucho y bien. Lo ms corriente es utilizar

brotes que crecen en condiciones controlada para que halla menos infecciones. - Cmara de cultivo

La cmara de cultivo es una habitacin de dimensiones muy variables, en la que se controlan las condiciones de luz, temperatura, humedad, variacin da-noche, etc.. Condiciones del cultivo in vitro

En la cmara de flujo laminar no puede entrar material contaminado. El problema ms importante en todo el proceso del cultivo in vitro son las contaminaciones. En el autoclave no se pueden meter determinadas sustancias, como vitaminas, antibiticos, cido giberlico, sacarosa, encimas, extractos vegetales, etc., ni tampoco recipientes que no soporten altas temperaturas. El vidrio ha de ser de muy buena calidad para que no suministre al medio sustancias contaminantes para la planta. Normalmente se prepara el medio y se filtra directamente. El problema es que se absorben en el filtro determinadas sustancias. Los reguladores de crecimiento (hormonas) son imprescindibles, ya que sin ellos no se puede hacer el medio de cultivo. El pH ideal es 6, pero puede oscilar entre 5,5 y 6,5. Se necesita agar y medio slido 0,6-0,9%. El medio de cultivo realmente slo tiene que llevar agua, fuente de energa (azcares) y reguladores de crecimiento. El medio de cultivo es secreto, y se pueden tardar dos aos en prepararlo. En la cmara de cultivo se aplican cantidades variables de luz (16-20 horas). Tambin existen plantas que se desarrollan en la oscuridad. Las temperaturas tambin varan. Lo normal son 22-26C, aunque en ocasiones se exigen fros de 4C y tambin 28-30C para plantas tropicales. Igualmente, en el xito de esta tcnica de propagacin tambin influyen determinadas caractersticas de la planta, como el tipo, gentica e incluso el tipo de implante, parte ms juvenil o ms adulta. En cuanto a los recipientes, deben permitir el intercambio de gases, pero evitar la prdida de agua, lo que provocara un aumento de la concentracin de sales, y por tanto la muerte de la planta. De ah la importancia del cierre. Subcultivos o replicado Cuando sembramos microestaquillas en cultivo in vitro, no nos interesa que se emitan races ni hojas, sino que se produzca una proliferacin (crecimiento) para obtener nuevas

microestaquillas. Son lo que se denominan subcultivos. No se pueden hacer infinitamente ya que se agota el material vegetal; tan slo se hace 8-10 veces. Ocurre entonces lo siguiente: - El medio nutritivo se agota y se seca. - El material vegetal ocupa todo el tubo. - Se produce un cambio de olor en el medio (sustancias txicas). - El medio se hace lquido. Fases del cultivo de meristemos 1. Toma un pice meristemtico (0,2-1 mm). 2. Siembra en el medio del tubo. 3. Fase de proliferacin: crecimiento de brotes. Subcultivos. 4. Fase de enraizamiento (cambiar el medio). 5. Primera fase de aclimatacin. Es muy importante el que la planta pueda llegar o no al campo. Invernaderos, bolsas de plstico, bandejas de vidrio, etc.. 6. Segunda fase de aclimatacin. Siempre en invernadero. 7. Plantacin en el campo. Fases del cultivo de embriones Se utiliza mucho en manzano. 1. Se desinfecta el fruto en alcohol. Se flamea. 2. Se coge el embrin de la semilla. 3. Se inocula en el tubo. 4. A las 1-2 semanas, la planta est ms o menos reconocible. 5. Se deja crecer y se pasa por las fases de aclimatacin. Micropropagacin

Se parte de una yema, de brctea o axilar. Se empieza a desarrollar en el medio de cultivo. Entre la fase de proliferacin y de enraizamiento hay muchos subcultivos (para obtener ms plantas). El nmero de subcultivos depende del material vegetal. Ejemplo de micropropagacin de Kiwi: - Se parte de un trozo de tallo. - Al cabo de 4 semanas se obtiene una yema y crece un brote. - En la fase de proliferacin intentamos obtener gran cantidad de brotes. - Sacamos microestaquillas del primer brote, haciendo subcultivos cada 6-8 semanas hasta llenar el vidrio. - Al aumentar la concentracin de auxinas se obtienen plantas enraizadas. - Puede hacerse de forma industrial y la fase de enraizamiento se hace en vivo. Cultivo de callo in vitro Se parte de un trozo de hoja o de tallo; bien de una planta madre de maceta o de una planta que viene de cultivo in vitro. El medio puede ser slido o lquido. Se forma entonces una estructura de callo, de la que parten brotes, o tambin proembriones, que al unirse forman una estructura similar al embrin. A partir de entonces se desarrolla normalmente. Obtencin de plantas haploides Normalmente se trabaja con la antera en su totalidad, no con granos de polen en particular. De una yema de flor se coge una antera antes de que se abra y se hace un cultivo; bien por

embriognesis u organognesis.

Embriognesis: se forman clulas (poliembriones). Organognesis: se forma una estructura de callo que puede venir o bien de tejidos de la antera (diploide), o bien del grano de polen (haploide). No se riega nunca por aspersin (riesgo de patgenos), siempre con regadera. Problemas en el cultivo in vitro

* Contaminacin: es grave. * Vitrificacin: es una reaccin de las plantas que las hace adquirir apariencia de vidrio. La nica solucin es hacer un subcultivo de material sano, es decir, se saca y se cortan los trocitos que estn bien.

TCNICAS DE CULTIVO IN VITRO Cuando se habla del cultivo de plantas, generalmente nos referimos a cultivarlas en macetas, arriates o cultivarlas en el campo. En 1904 Hanning desarroll un nuevo mtodo de cultivo de plantas al que se llam cultivo de embriones. Aisl in vitro embriones inmaduros de algunos miembros de la familia Crucferas, obteniendo plntulas viables. El cultivo in vitro se define como el cultivo en un medio nutritivo, en condiciones estriles, de plantas, semillas, rganos, explantos, tejidos, clulas y protoplastos de plantas superiores. Estas tcnicas se caracterizan porque:

" Ocurren a microescala, sobre todo en una superficie pequea;

" Se optimizan las condiciones ambientales, en lo que se refiere a factores fsicos, nutricionales y hormonales;

" Se excluyen todos los microorganismos (hongos, bacterias y virus), as como tambin las plagas de las plantas superiores (insectos y nematodos). Generalmente no se reproduce el patrn normal de desarrollo de una planta, resultando que un tejido aislado puede dar origen a un callo o puede desarrollarse de otras formas poco usuales (por ejemplo, formacin de rganos, embriogenesis somtica). La capacidad de cultivar protoplastos o clulas individuales permite manipulaciones que antes era imposibles. El nombre de cultivo in vitro (que generalmente quiere decir en vidrio), se utiliz porque, al menos inicialmente, se usaron recipientes de vidrio para el cultivo

CULTIVO IN VITRO EN EL JARDN BOTNICO En 1988, en el Jardn Botnico se mont un laboratorio de cultivo in vitro con el fin de recuperar plantas en peligro de extincin, multiplicndolas lo ms rpidamente y en un corto periodo de tiempo. As se realiz con varias especies:

" Artemisia granatensis se multiplic a partir de yema, obtenindose muchas plantitas en poco tiempo que se adaptaron bien en maceta, ms tarde en el campo, en un hbitat semejante al suyo. " Betula pendula subsp. fontqueri, se multiplic a partir de la base de la hoja joven, y se ha conseguido recuperar, de tal forma que en el conservatorio hay ejemplares grandes totalmente adaptados.

" Narcissus spp. a partir de la base del catfilo del bulbo.

" Rosmarinus tomentosus, utilizndose como explanto la base de la hoja, obtenindose por embriognesis nuevas plantas. " Euonymus latifolius, que aunque es una planta difcil de multiplicar, se han obtenido nuevas plntulas. UNIDAD V Tcnicas de manejo del material volumtrico y preparacin de soluciones. Objetivo de la unidad. Dar a conocer el correcto manejo y precisin del material volumtrico, as como la metodologa y tcnica adecuada para preparar soluciones valoradas requeridas en los diferentes anlisis clnicos.

MATERIAL VOLUMTRICO. 5.1 Importancia de las mediciones correctas con el material volumtrico. Es de gran importancia el manejo correcto del material volumtrico, ya que este material es utilizado en cualquier tipo de anlisis clnicos, es decir, se utiliza muy seguido en la elaboracin de anlisis, y el buen manejo del material es de vital importancia para obtener resultados correctos. Existen materiales de mayor precisin que otros, como es el caso de los materiales volumtricos (probeta de 10 ml y matraces aforados de 100 y 250 ml)T que presentan marcas de aforo establecidas a una temperatura determinada, generalmente todo el material de medicin, viene con una descripcin del proveedor dando marca, temperatura a la qu es calibrado, (si el material esta calibrado ) y el rango de error , # de catlogo y en que pas ha sido hecho , algunos instrumentos de medicin marcan con una lnea roja la clase de vidrio de la que est hecho. Tambin algunos traen escala. El uso correcto del material volumtrico es esencial para las mediciones analticas y dichos equipos deben ser adecuadamente mantenidos, y cuando sea necesario, calibrados. En general, debern verificarse las especificaciones de calidad del material volumtrico a su recepcin. Para que la verificacin no sea necesaria, el material volumtrico debe haber sido certificado para una tolerancia especfica por unidad o por lotes, segn sea necesario. Se debe prevenir cualquier contaminacin del material volumtrico. Son factores esenciales para la realizacin de los ensayos, entre otros, el tipo de material (vidrio, tefln -PTFE- etc.), su limpieza, almacenamiento y separacin. Esto es especialmente importante en el caso de anlisis de trazas, en los que la lixiviacin y absorcin puedan tener un efecto significativo. Los aparatos de medicin tienen que elegirse segn la aplicacin y la precisin exigida. Incluso el aparato de anlisis automtico ms caro ofrece resultados fiables slo cuando el material volumtrico empleado en la preparacin de las muestras es adecuadamente precioso.

Las pipetas Serolgicas o graduadas nos sirven para medir volmenes cuando el soluto por adicionar es lquido. Las buretas se utilizan para agregar volmenes cuando el soluto no se puede pipetear. Las probetas nos sirven para medir volmenes aproximados que se van a adicionar a la preparacin de soluciones como solvente. El matraz aforado se utiliza en la preparacin de soluciones valoradas. Se le mostrar lo que es el aforo, la accin de aforar y su lectura correcta. A continuacin se presentan algunas definiciones acerca de el uso del material volumtrico: 5.2 Definiciones de: AFORO: Es la manera o seal que delimita la capacidad o volumen de un recipiente. AFORAR: Es la accin de agregar a un liquido o un utensilio volumtrico hasta que su menisco coincida con el aforo. En lquidos transparentes las lnea o marca del aforo debe quedar tangente al menisco en la parte inferior, en los lquidos obscuros se toma en la medida en la parte superior del menisco. Al aforar la vista del operador debe estar perpendicular y en la misma altura del aforo para evitar error de paralaje. EXACTITUD: Puntualidad y fidelidad en la ejecucin de una cosa. PRESICION: Obligacin o necesidad indispensable a ejecutar una cosa. MEDIR: Es comparar una magnitud con otra de la misma especie que convencionalmente se a tomado como patrn. MENISCO: Curvatura que presenta los lquidos un su superficie y pueden ser cncavos o convexos. 5.3 Tcnicas de manejo del material volumtrico. El material volumtrico tal y como su nombre lo dice; nos sirve para medir algn volumen determinado. El material se constituye de: 1. Probeta. 2. Pipeta. 3. Bureta. 4. Matraz aforado. PROBETA:

Las probetas graduadas y las probetas con tapn ofrecen un mximo nivel de exactitud. El estricto control estadstico asegura el elevado nivel de calidad. Es un cilindro de vidrio de un dimetro grande, sostenida por una base cilndrica o hexagonal que puede ser de vidrio o de plstico, tiene graduaciones a lo largo de su cuerpo, comenzando cerca de la base y terminando en la parte superior, su capacidad esta dada por la ultima graduacin, puede ser desde 5ml hasta 2000ml a 20C, su exactitud no es muy grande debido al dimetro del menisco que se forma, nos sirve para hacer mediciones rpidas con mas o menos exactitud, sirve para trasvasar lquidos rpidamente. PIPETA: EXISTEN DE 2 TIPOS: PIPETAS AFORADAS Y PIPETAS GRADUADAS. Son cilindros de vidrio de pequeo dimetro y con abertura en sus dos extremos; existen dos tipos, uno llamado pipeta graduada que puede ser terminal o subterminales, tienen graduacin a lo largo de todo su cuerpo, pueden tener la ultima graduacin en la punta y la llamaremos terminal, o antes de la punta llamndose subterminal; el otro tipo de pipetas tiene un ensanchamiento o ampolla en su parte media, en la cual viene indicado el volumen que pueden emitir no para contener, sirven para transvasar pequeas cantidades de lquidos. La forma correcta de tomar una pipeta es con los dedos pulgar y cordial y obturar con el ndice, introducir dentro del lquido que se va a pipetear, hasta cerca del fondo del recipiente que lo contienen, absorber lentamente observando como sube la columna permitiendo que le lquido llegue arriba del aforo deseado, obturar con el dedo ndice sacar la punta del lquido y aforar la presin, teniendo los ojos a la altura del aforo deseado, aforar, limpiando el exterior de la pipeta con un papel absorbente y llevarlo al recipiente donde se va a trabajar, iniciar el recipiente de tal manera que el liquido escurra por las paredes, lenta o rpidamente de acuerdo con las necesidades y caractersticas e los lquidos, quedara una pequea porcin en la punta, esta no debe introducirse por ningn motivo o caer dentro del recipiente (no soplar o escurrir). BURETA. Material que se encuentra diseado para medir el volumen de una sustancia con muy buena precisin. Es un instrumento que cuenta con una llave que controla la salida del lquido cuando sta se abre. La escala se encuentra distribuida a lo largo del cuerpo de la bureta. Normalmente se utiliza para llevar a cabo valoraciones o titulaciones. Para trabajar con ella primero verificar que este perfectamente limpia y seca, colocarla en un soporte universal con unas pinzas para bureta con la punta hacia abajo y verificar que la llave est cerrada. Por medio de un embudo y un vaso de precipitados, llenar hasta arriba del ultimo aforo, sacar el embudo y aforar permitiendo que se llene la punta inferior de la bureta por medio de las llave de paso es de vidrio hay necesidad de lubricarla con vaselina neutra (una pequesima cantidad); Se toma la llave de paso con los dedos pulgar e ndice de la mano izquierda abrazando con estos dedos con objeto de no aflojar la clave y provocar la salida del lquido por los bordes de esta, con la mano derecha se toma el recipiente y se agita cuando se recibe el lquido emitiendo por la bureta, para tomar la lectura en la bureta una vez terminada la

relacin, se espera un minuto con objeto de permitir que resbale el lquido adherido a las paredes y no cometer errores, para hacer la lectura colocar la bureta a la altura de la bureta. (Si la bureta no esta seca y urge trabajar con ella, se conjuga dos o tres veces con la solucin que va a contener). MATRAZ AFORADO: Los matraces aforados son indispensables para preparar disoluciones y soluciones medidas. Si no se expresa otro deseo, los matraces aforados se suministran con tapn de PP, parte superior cuadrada, con punta de goteo. Este tapn reduce notablemente el peligro de rotura en caso de vuelco y evita que el matraz aforado se caiga al rodar por la mesa del laboratorio. Es un recipiente de vidrio pyrex, forma de pera en su parte inferior y un cuello largo, en el cual se encuentra la marca o aforo, de su capacidad a diferencia de los otros utensilios volumtricos, no emite sino que contiene el volumen indicado, consta de un tapn esmerilado que permite taparlo y evitar en esta forma que se evapore el liquido de su interior, as como mantenerlo limpio de polvo. Se usa para preparar sustancias valoradas, por ello; verificar que est limpio, la sustancia a aforar, si es liquido se diluye primeramente en un vaso de precipitados y se vierte por medio de un embudo y un agitador dentro del matraz aforado, enjuagar dos o tres veces con agua destilada y vertirlo dentro del matraz, proceder a aforar con agua, teniendo la precaucin de que las ultimas gotas no sobre pasen el aforo, para esto usar una pipeta y permitir que la gota escurra a lo largo del cuello, no aadir la siguiente hasta verificar el aforo. Si la sustancia por disolver es slida, colocarla en un vaso de precipitados, aadiendo agua una pequea cantidad y agitar por medio de un agitador, dejar sedimentar y verter el liquido al anterior del matraz, repetir esta operacin hasta verificar que dentro del vaso no queda ninguna partcula sin disolver, enjuagar dos o tres veces, verter dentro del matraz, llevar el aforo, tapar y agitar tomando del cuello y sostenindolo el tapn invirtiendo varias veces, no tomar l matraz aforado del cuerpo para no elevar la temperatura y variar su capacidad. SOLUCIONES. 5.6 Definicin de solucin, solvente y de soluto. Solucin: A la mezcla homognea de un Soluto y un solvente se le da el nombre de solucin. Soluto: puede ser slido, liquido o gaseoso. Solvente: Se puede presentar en los tres estados. A la incorporacin del soluto al solvente se le conoce como el poder de dispersin y a la facilidad con la que el soluto se dispersa en el solvente se le llama solubilidad, la que es caracterstica particular de cada solvente. El solvente de mayor empleo en el anlisis es el agua en la que muchos solutos son solubles por lo que las soluciones se clasifican como: 5.7 Tipos de soluciones.

Las soluciones empricas son aquellas en las que no se considera la relacin de las cantidades exactas que existen entre soluto y solvente. Soluciones empricas ? Insaturadas: En las que la cantidad de soluto con relacin al volumen de solvente, es menor a la cantidad que se puede disolverse a la temperatura ambiente. Se consideran a la diluida y la concentrada. ? Saturadas: Son las que el soluto ha logrado ocupar todos los espacios intermoleculares del solvente y no se puede diluir mas del mismo, o sea la cantidad mxima que se puede disolver a la temperatura ambiente. ? Sobresaturada: Es aquella en la que al aumentar la temperatura de la solucin los espacios intermoleculares se abren y permiten que entre ms soluto.

Las soluciones valoradas son en las que la relacin de soluto y solvente es definida y entre stas tenemos las siguientes: Soluciones valoradas: ? Porcentual (%):Se define como la cantidad de soluto expresada en gramos disueltos y aforados en 100 mililitros de solucin. %------------- soluto g---------------100ml. de solucin ? Molar (M): Es la que tiene un mol o el peso molecular del soluto expresado en gramos disueltos y aforados en 1000 mililitros de solucin. 1 Molar------- peso molecular g ----------1000 ml de solucin. ? Molal (m): Es la que tiene disuelto el peso molecular del soluto expresado en gramos en 1000 g de solvente. 1 molal --------peso molecular g ------------1000 g de solvente. ? Normal (N): Es la que tiene el peso equivalente del soluto expresado en gramos disueltos y aforados en 1000 mililitros de solucin. 1 Normal------peso equivalente g----------1000 ml de solucin ? Formal (F): Es la que contiene el peso frmula del soluto expresada en gramos disuelto y aforada a 1000 de solucin. 1 Formal ----- peso frmula g ----------------1000 ml de solucin 5.8 Soluciones valoradas.

Porcentuales: Se define como la cantidad de soluto expresada en gramos disueltos y aforados en 100 mililitros de solucin. Molares: Es la que tiene un mol o el peso molecular del soluto expresado en gramos disueltos y aforados en 1000 mililitros de solucin. Normales: Es la que tiene el peso equivalente del soluto expresado en gramos disueltos y aforados en 1000 mililitros de solucin. Soluto 1 mol 1 mol 1 p eq 1 pf Ml de solucin 1000 1000g de solvente ** 1000 1000 Concentracin 1M 1m 1N 1F

Tabla de soluciones valoradas Un mol es igual al peso molecular del solvente, que es la suma de los pesos atmicos de los elementos que hay en la frmula. Peso equivalente qumico es el peso en gramos de un elemento o radical capaz de reaccionar o desplazar una molcula gramo de hidrogeno o el peso molecular de compuesto entre el nmero de hidrgenos sustituibles o la valencia neta positiva. Existen en la naturaleza compuestos que para cristalizar necesitan incluir en su formula molculas de agua, en estos casos el peso molecular se designa como Peso Formula. 5.9 Clculo de la cantidad de soluto y solvente de soluciones valoradas de diferentes concentraciones. Soluciones porcentuales. Para calcular la cantidad de soluto: X g -------------- 100 ml ? -------------- y ml Ejemplo: Se requieren 3.2 ml de solucin al 5%. 5g -------------- 100 ml ? -------------- 3.2 ml ? = 0.16 grs Soluciones molares: 1. Calcular el peso molecular gramo/mol de soluto. 2. Sumar los pesos de la frmula. 3. Se mide el peso en gramos o volumen correspondiente. 4. Se afora en el matraz volumtrico de 1000 ml. Para calcular la molaridad de una solucin:

X g -------------- 1M -------------- 1000 ml Y g -------------- ? M -------------- 1000 ml ? = Z m X g -------------- Z M -------------- 1000 ml X g -------------- ? M -------------- A ml ? = M Final Ejemplo: Calcular la molaridad de una solucin de 316 grs. de MgBr2 en 859 ml. Mg = 240312 grs./mol. 24.312 Br = 79.909 grs./mol. 159.818 184.130 Peso molecular de MgBr2 184.130 grs. MgBr2 -------------- 1 M -------------- 1000 ml 316 grs. MgBr2 -------------- ? M -------------- 1000 ml ? = 1.716 M 316 grs. MgBr2 -------------- 1.716 M -------------- 1000 ml 316 grs. MgBr2 -------------- ? M -------------- 859 ml ? = 1.4741 M Resultado Final = 1.471 grs. MgBr2 Para calcular la cantidad de soluto de una sustancia. X grs. -------------- 1 M -------------- 1000 ml ? grs. -------------- Y M -------------- 1000 ml ? = Z grs. Z grs. -------------- Y M -------------- 1000 ml ? grs. -------------- Y M -------------- A ml ? = grs. Final Ejemplo: Se requiere preparar una solucin de NaOH 0.2 Molar en 250 ml. Na = 22.9898 grs. mol O = 15.994 grs. mol H = 1 grs. mol 40 grs. NaOH -------------- 1 M -------------- 1000 ml ? NaOH -------------- 0.2 M ------------- 1000 ml ? = 8 grs. NaOH 8 grs. NaOH -------------- 0.2 M -------------- 1000 ml ? NaOH -------------- 0.2 M -------------- 1000 ml ? = 2 grs. NaOH Resultado Final = 2 grs. NaOH Soluciones Normales.

Para poder calcular la normalidad o la cantidad de soluto de una solucin se requiere del equivalente qumico. El Eq. Se calcula:

El Eq. De un cido es igual al M gramo de la sustancia sobre el total de Hidrgenos positivos:

El Eq. De un Hidrxido es igual al peso molecular gr. del Hidrxido sobre el nmero de iones oxidrilos negativos:

Tcnica de soluciones Normales. 1. Calcular el peso molecular. 2. Sacar el Eq. 3. Calcular grs. o ml. 4. Calcular pureza. Calcular grs. X grs. -------------- 1N -------------- 1000 ml ? grs. -------------- Y N -------------- 1000 ml ? = Z grs. Calcular pureza X grs. -------------- 1 N -------------- Y % ? Grs. -------------- 1 N -------------- 100 % ? = grs. Final. Ejemplo: Preparar una solucin de NaOH 2 Normal AL 37% Na = 22.9898 grs. mol O = 15.994 grs. mol H = 1 grs. mol Eq.= 40 grs./1 Eq. = 40 grs. 40 grs. NaOH -------------- 1 N -------------- 1000 ml ? Grs. NaOH -------------- 2N -------------- 1000 ml ? = 316.2162 grs. 5.10 Tcnicas para preparar soluciones valoradas.

1. Se calcula la cantidad de soluto de la sustancia requerida. 2. En un matraz aforado se mezclan las sustancias. 5.11 Preparacin de una solucin valorada. Se requiere preparar una solucin .4 N de HCl con una pureza de 37.6% y una densidad de 1.1 85 g/ml. Calcular la cantidad de soluto: H = 1.0079 Cl =35.453 36.4609 Eq.= 36.4609/1 36.4609 grs. HCl -------------- 1 N -------------- 1000 ml. ? grs. HCl -------------- 0.4 N -------------- 1000 ml ? = 14.58436 grs. 14.58436grs. HCl -------------- 1 N -------------- 1000 ML ? grs. HCl -------------- 1 N -------------- 100 ml ? = 1.458436 grs Calcular pureza: 1.458436 grs. HCl -------------- 1 N ------------ 37.6% ? grs HCl -------------- 1 N -------------- 100% ? grs.= 3.87881914 grs. ? = 1.185 g7ml V = m/? V = 3.87881914/1.185 V = 3.273265 ml BIBLIOGRAFIA: CLIFTON, E MELOAN. Problemas y Experimentos en Anlisis Instrumental. Editorial Reverte Mexicana, S. A. 1973. Mxico FLASCHKA, H. A. Qumica Analtica Cuantitativa Vol. II. Compaa Editorial Continental S.A. Mxico. 1980. GARZON G. GUILLERMO Fundamentos de Qumica General serie Skgaum segunda edicin 1989. HOMER, D. CHAPMAN. Mtodos de Anlisis para suelos, plantas y aguas. Editorial Trillas. Mxico. 1979. OROZCO, D. FERNANDO. Anlisis Qumico Cuantitativo. Editorial Porrua. 1981 SAUNDERS, L. Fisicoqumica para estudiantes de biologa, farmacia y medicina