El auge de la terapia gnica

Incluso entre quienes han sido sujetos de pruebas con terapia gnica para enfermedades tipo SCID, no todo ha resultado perfecto. Aunque en la mayora de esos nios existe evidencia de que producen ADA, an requieren tratamientos de seguimiento, y nadie se ha sentido lo suficientemente confiado como para detener la terapia estndar con la enzima bovina. Sin embargo, no hay duda de que la historia de Ashanti abri las puertas a una nueva era. Despus de las primeras pruebas en enfermos con SCID se pusieron en marcha un gran nmero de protocolos clnicos, es decir, experimentos mdicos controlados en hospitales o clnicas. Los protocolos clnicos se realizan siguiendo un programa muy detallado y con reglas precisas de admisin de los participantes. En junio de 1992, un equipo de la Universidad de Michigan, comandado por James Wilson, report el tratamiento de una paciente de 29 aos que haba nacido con una forma severa de hipercolesterolemia causada por una completa disfuncin de sus receptores LDL, que son unas protenas que se encuentran en la superficie de muchas clulas, principalmente las del hgado, y se encargan de transportar el colesterol al interior de estas clulas. Cuando una persona tiene muy pocos receptores LDL o stos no funcionan (como era el caso de esta paciente), el colesterol se acumula en la sangre, pegndose en las paredes de los vasos sanguneos y formando placas en las paredes de las arterias, lo que eventualmente ocasiona que el corazn sufra un ataque o infarto. Aun con los ms completos tratamientos actuales dieta, frmacos para disminuir el colesterol y ciruga , estos pacientes normalmente mueren por falla cardiaca en su juventud. Los cirujanos extirparon a la paciente 10% de su hgado y los investigadores disgregaron el tejido en sus componentes: las clulas hepticas. stas fueron tratadas con un retrovirus (un tipo de virus que tiene como material gentico una molcula de ARN), al cual le haban introducido una copia normal del gen para hacer el receptor de LDL. Tres das despus regresaron estas clulas al hgado de la paciente a travs de un catter especial. Los resultados fueron satisfactorios. El nivel de colesterol en la sangre cay 30% sin utilizar ningn frmaco para disminuirlo. En la segunda mitad de la dcada de los noventa se aprobaron en los Estados Unidos protocolos clnicos para poco ms de 300 terapias gnicas Casi dos tercios de los tratamientos son contra distintos tipos de cncer, le siguen en importancia enfermedades causadas por la falla en un solo gen (llamadas monogenticas) como la fibrosis qustica y las SCID. Ms de 4 000 padecimientos son causados por el dao a un solo gen. En tercer lugar se encuentran las terapias dirigidas contra enfermedades infecciosas, principalmente el sida; en stas lo que se inserta son genes que producen protenas que ayudan a combatir la enfermedad. Hasta ahora, en todos los protocolos clnicos se ha hecho la adicin de un gen, en lugar del reemplazo (borrado y reescritura) de genes defectuosos, debido a que esto ltimo es tcnicamente mucho ms difcil. De hecho, en los protocolos clnicos aprobados hasta la fecha slo se transfieren genes a clulas somticas (terapia gnica somtica), es decir, todas las clulas del cuerpo excepto las reproductivas o germinales. La preocupacin tica en este tipo de ensayo se enfoca en la seguridad. Cmo calcular el riesgo para el paciente al infectar deliberadamente sus clulas con un gen extrao que puede incorporarse en cualquier sitio de su genoma? Podra esto crear el riesgo de cncer? La transferencia de genes a clulas germinales (vulo y espermatozoide), que nunca ha sido intentada en humanos, es actualmente un tema controversial y sumamente discutido por sus implicaciones ticas, ya que cualquier cambio hecho en estas clulas sera heredado a los descendientes de esos pacientes, diseminndose gradualmente al banco de genes humanos. La transferencia de genes a clulas somticas puede hacerse en el laboratorio (ex vivo) o directamente a las clulas en el cuerpo (in vivo). En la forma ex vivo, se extraen clulas del paciente

para ser transformadas (proceso por el cual se transfiere exitosamente un gen a una clula) con el vector que contiene la versin normal del gen, como se hizo para tratar a Ashanti. Este mtodo tiene la ventaja de que la transferencia de genes es ms eficiente y permite la propagacin de las clulas transformadas para generar grandes cantidades. La desventaja es que slo es utilizable para el paciente especfico del cual se extrajeron esas clulas, adems de ser costoso por la gran manipulacin y control de calidad requeridos. En el mtodo in vivo se administra el vector (que contiene el gen normal) a los pacientes. Este mtodo puede utilizarse con muchos pacientes, lo que disminuye su costo y la infraestructura necesaria, pero resulta complicado de controlar y la eficiencia es mucho menor. Sistemas para transferir genes Hemos dicho que los vectores son los vehculos microscpicos que se utilizan para transferir genes a las clulas, pero nada hemos explicado acerca de sus caractersticas y su relevancia. Hay tres principales tipos de vectores: virales, no virales y fsicos. Virales: El mtodo ms eficaz para llevar genes sanos a las clulas daadas es por medio Ilustracin: CAD de virus que han sido adaptados como Existen dos maneras de transferir genes: ex vivo e in vivo. En la forma ex vivo se remueven clulas vectores. Los virus sondel paciente para ser transformadas con el vector que contiene la versin normal del gen. El tiles ya que puedenmtodo in vivo involucra la administracin directa del vector a los pacientes. penetrar naturalmente las clulas, insertando en ellas su material gentico. Sin embargo, antes de poder usarlos como vectores deben modificarse para eliminar los genes virales que les permiten replicarse y causar enfermedad. A estos virus se les llama virus modificados o atenuados, y entre los ms utilizados como vectores se encuentran los retrovirus, adenovirus y virus adeno-asociados. Tambin se han desarrollado poxvirus (especialmente el virus de la vaccinia) para vacunas y terapias gnicas. Actualmente, los vectores virales son los ms eficientes para transformar clulas, aunque no carecen de desventajas: son de manufactura costosa, hay lmites a la cantidad de genes (es decir, la longitud de los fragmentos de ADN) que pueden ser insertados en los vectores y que pueden llegar a desencadenar una respuesta inmune (inmunogenicidad). No virales: Bsicamente se trata de inyectar el fragmento de ADN que contiene el gen de inters directamente a las clulas o empacado dentro de otras molculas como son los liposomas (pequeas vesculas de grasa que pueden transportar sustancias al interior de las clulas). Los vectores no virales son menos eficientes para transformar clulas, pero no tienen limites para el tamao del inserto (el tamao del ADN que se va a inyectar), son menos inmunognicos y ms fciles de elaborar.

Fsicos: Involucran sobre todo inyectores sin aguja y electroporacin. Los inyectores sin aguja utilizan alta presin para insertar el ADN en clulas de la piel o en clulas en cultivo, mientras que la electroporacin utiliza pulsos elctricos que abren temporalmente agujeros en las membranas de las clulas, permitiendo insertar el ADN. Los mtodos fsicos an son ineficientes en la transformacin y tienen un rango limitado de aplicacin. Los riesgos de la terapia gnica continan siendo difciles de cuantificar. Por ello cada ensayo debe comenzar lentamente, con un control muy cuidadoso de la dosis de vectores que contengan los genes que se pretende insertar. Estos riesgos tomaron una nueva dimensin en el otoo de 1999, cuando un joven de 18 aos muri cuatro das despus de haber iniciado un tratamiento con terapia gnica.

TERAPIA GNICA EN ENFERMEDADES AUTOINMUNES Dra. GLORIA MARA VSQUEZ D Internista _Reumatloga Candidata a PhD en Inmunologa Resumen En la actualidad la terapia gnica para las enfermedades inflamatorias y autoinmunes constituye un amplio tema de estudio, al comienzo de la utilizacin de la terapia gnica como herramienta teraputica los investigadores pensaban que sta era slo til en enfermedades monognicas, hoy el conocimiento ms profundo de las enfermedades autoinmunes ha hecho de ella una posible herramienta teraputica con promisorios resultados. La AR dentro de este grupo de entidades es la ms frecuentemente evaluada, los sinoviocitos y fibroblastos constituyen las clulas ms utilizadas y los genes de citoquinas o de sus bloqueadores los de ms utilizacin. Dentro de este grupo de molculas cabe destacar el IL-1Ra, es uno de los genes ms utilizados en los protocolos actuales y es el primero utilizado en un protocolo clnico en humanos. Otras molculas de activacin celular o de muerte (apoptosis) tambin han sido de inters. La terapia gnica es an un "futuro" teraputico pero ella constituye en la actualidad una herramienta muy valiosa para el entendimiento de la fisiopatologa de estas entidades. La transferencia de genes en humanos es una estrategia por medio de la cual el repertorio gentico de las clulas somticas es modificado con propsitos teraputicos o de ayuda en el entendimiento de los fenmenos biolgicos1-2.

En el ao de 1963 Joshua Lerderberg escribi "Nosotros podemos predecir que se utilizarn los cultivos "in vitro" de clulas germinales y la manipulacin de ellas por el intercambio de cromosomas o genes"3. En el ao de 1966 Edward Tatum en una conferencia denominada "Reflexiones sobre la investigacin y el futuro de la medicina" deca "El triunfo de la ingeniera gentica puede obtenerse cuando las propias clulas del paciente, por ejemplo, las clulas hepticas, crecidas en cultivo sean transformadas con un nuevo gen originado por mutacin directa de clulas normales, genes de un donador insertados por transduccin o por transferencia directa de DNA"3. Despus de aos de mltiples estudios e investigaciones, la terapia gnica en humanos ha progresado desde la especulacin a la realidad en corto tiempo. El primer estudio clnico (aun solo utilizando un gen marcador) se realiz en 1989 y el primer protocolo clnico aprobado por la FDA para el manejo de la inmunodeficiencia por defecto en la produccin de ADA (adenosin desaminasa) comenz en septiembre de 1990. Para el ao de 1992 ya existan 11 protocolos clnicos activos en los tres continentes para hoy existen ms de 532 protocolos clnicos en ejecucin3. Los primeros investigadores sugeran que esta terapia era solo til en enfermedades monogenticas her ias, en la actualidad representa una forma de "tratamiento" de otras entidades en forma local o sistmica1-3. Sus aplicaciones se extienden desde enfermedades genticas hasta el cncer, infecciones adquiridas, enfermedades neuro-degenerativas, enfermedades autoinmunes y otras. Esencialmente la transferencia de genes incluye: La forma de transporte o vectorizacin del gen La clula blanco El gen elegido Control de la expresin del gen. Este procedimiento puede ser llevado a cabo "ex vivo", procedimiento en el cual "el material gentico elegido", es introducido a las clulas en el laboratorio y las clulas modificadas son posteriormente reinfundidas al receptor. Alternativamente la transferencia de genes puede hacerse "in vivo" en un procedimiento en el cual el "material gentico elegido es introducido

directamente a las clulas del individuo; a su vez ste puede ser de dos clases "in situ" o "en forma sistmica o parenteral". En ambas estrategias el proceso de transferencia es usualmente realizado por un vector que ayuda a dispensar el material gentico dentro del sistema celular donde este puede funcionar apropiadamente1,4. Forma de transporte o insercin del gen Varios mtodos han sido desarrollados para liberar y expresar genes exgenos estos incluyen.2 Sistemas qumicos: precipitacin con fosfato de calcio, DEAE- dextran, polybreno, liposomas neutros, aninicos, catinicos, y conjugados e polilisina. Sistemas fsicos: microinyeccin, electroporacin, biobalistica. Sistemas biolgicos: Retrovirus, virus derivados del Herpes (HSV), los adenovirus y los virus asociados a los adenovirus. En la actualidad para protocolos clnicos los vectores ms utilizados son los retrovirus, los adenovirus y los liposomas. Los retrovirus fueron aislados inicialmente por su capacidad oncognica en aves y ratones, estos virus son muy similares en su genoma y son capaces de causar enfermedad neoplsica en sus respectivos huspedes naturales. Los retrovirus poseen dos cadenas idnticas de RNA simple que se encuentran al igual que sus enzimas de replicacin, contenidas dentro de una cubierta proteica viral, esta estructura est rodeada por la envoltura viral, cuya funcin es mediar la infeccin de la clula husped. La infeccin se inicia cuando el virion penetra a la clula blanco a travs de interacciones especficas entre las glicoprotenas de la envoltura del virion y los receptores expresados en la superficie externa de la clula. La fusin entre la membrana celular y la envoltura viral, permite la internalizacin del virion ya sea por fusin directa entre estas membranas o endocitosis; posteriormente en el citoplasma de la clula se produce la liberacin de la cubierta viral, quedando libre el RNA viral, el cual es transcrito por la transcriptasa reversa a una doble cadena de DNA que posteriormente se transporta al ncleo de la clula. En el ncleo, el DNA viral es integrado establemente en el genoma de la clula blanco. Este DNA integrado se denomina provirus, el cual se replicara durante el ciclo celular junto con el material gentico de la clula. El DNA proviral es transcrito a RNA y transportado al citoplasma de la clula donde las protenas y las enzimas

de replicacin son transcritas y ensambladas junto con el RNA viral, formando una nueva particular viral con el potencial de infectar a otras clulas. Todos los retrovirus poseen tres genes estructurales (gag, pol y env). gag codifica para las protenas que forman la capside, pol codifica para las enzimas de replicacin como la transcriptasa reversa y la integrasa y env codifica para las glicoprotenas de la envoltura; estos genes estructurales estn localizados entre dos secuencias idnticas denominadas LTR (Long, Terminal, Repeat) colocadas a cada extremo del genoma viral. Debido a que los retrovirus pueden integrarse en el genoma de la clula infectada y expresar posteriormente los genes virales en todas las clulas que infectan y en su progenie, los retrovirus han sido utilizados para introducir genes de inters en las clulas somticas. Para ello, son manipulados y convertidos en virus defectivos para la replicacin, capaces de infectar e integrarse en la clula blanco, en un ciclo de infeccin abortivo. Los vectores retrovirales se obtienen entonces a partir de retrovirus naturales, a los cuales se les reemplaza parte de sus genes estructurales (gag, pol, env), por uno o varios genes, bien sea un gen reportero o bien, el gen teraputico deseado. La expresin de ambos tipos de genes puede ser dirigida por el mismo promotor retroviral (LTR) o por promotores exgenos introducidos en el vector. Despus de suprimir los genes que codifican las estructuras proteicas virales y las protenas que median la replicacin viral, estos vectores retrovirales pueden ser producidos nicamente en unas lneas celulares de empaquetamiento, que son capaces de aportar por transcomplementacin las protenas retrovirales estructurales. La lnea de empaquetamiento es construida por transfeccin estable de los genes estructurales gag, pol y env eliminados del vector retroviral, de tal manera que estas protenas son producidas y ensambladas en las clulas de empaquetamiento. Estas clulas son transfectadas con el vector retroviral que posee el gen de inters y por transcomplementacin se generan partculas virales recombinantes defectuosas con altos ttulos de infeccin y libres de virus competentes para la replicacin. Estos vectores retrovirales, tienen la capacidad de integrarse en el cromosoma de la clula infectada y de transmitir informacin gentica de generacin en generacin, permitiendo la expresin de un gen o genes insertados por un perodo ms largo, evitando la necesidad de infecciones repetidas. El tamao del gen insertado puede ser de hasta 8 Kb. Una vez integrado en el genoma de la clula blanco este es estable, lo cual reduce la posibilidad de rearreglos genticos que puedan potencialmente dar origen a mutaciones o

reestructuraciones cromosmicas que afecten la expresin de otros genes, son poco inmunognicos, son ideales para aplicaciones "ex vivo" y adems poseen un amplio espectro de hospederos e infectan slo clulas que estn activas mitoticamente. Su biologa ha sido bien comprendida y por esto su utilizacin en protocolos experimentales y teraputicos se incrementa da a da7-11. Los adenovirus que ha perdido los genes que le dan capacidad de replicacin, son buenos vehculos para dispensar genes "in vivo" ellos son capaces de infectar clulas quiescentes y persisten como DNAs no integrados; por su baja eficiencia es necesario utilizar virus a ttulos muy altos que podran desencadenar respuesta inflamatoria inespecfica1-3. Estos virus tienen la capacidad de acomodar material gentico de hasta 20Kb, pero la expresin de la protena es limitada a solo semanas o meses por la falta de integracin del DNA, por esto se requiere readministracin que puede desencadenar respuesta inmune y limitar su eficiencia. Estos vectores entran a la clula por medio de dos receptores: el receptor de la fibra del adenovirus y el avb3/avb5 esto dos ltimos receptores, tienen la capacidad de disparar seales a travs de las MAPKinasas que pueden resultar en activacin de la cox-2 y por ende del foco inflamatorio observado cuando se usan estos vectores adenovirales5. Otros sistemas vectoriales menos bien desarrollados que pueden tener aplicacin en la terapia gnica han sido derivados de virus adenoasociados (AAV), Herpes virus, vaccinia virus y varios virus RNA. Los AAV son virus relativamente pequeos, estables y pueden infectar clulas humanas. Su integracin dentro del genoma receptor u hospedador es menos precisa ya que las repeticiones en tandem (que facilitan la integracin viral) sufren deleciones o rearreglos que dificultan est insercin1-2 slo en el caso de los virus vectores, ya que los salvajes se conocen tienen integracin especfica en el cromosoma 19. Se ha atribuido a estos virus la capacidad de insertarse en clulas quiescentes, pero son pocas las evidencias de esta caracterstica2. El herpes virus puede ser una herramienta muy valiosa en clulas del sistema nervioso central pero an queda en duda la existencia de un Herpes virus no replicativo o sin capacidad de producir derivados txicos, lo que pone en duda la seguridad de su utilizacin. Otros mtodos vectoriales son los qumicos entre ellos los liposomas los cuales tienen varias composiciones entre ellas por ejemplo: cadenas de lpidos cationinos sintticos.

El liposoma positivamente cargado se une al plasmido conteniendo el gen de inters, el cual est negativamente cargado. El complejo entra a la clula blanco por fusin con la membrana plasmtica1-3. Este sistema vectorial no tiene ningn componente estructural que conlleve un transporte especfico al ncleo como consecuencia de esto la mayora de los nuevos genes introducidos se pierden dentro de las organelas citoplasmticas y los que alcanzan el ncleo en terapias realizadas "in vivo", funcionan como material epicromosomal. En teora los complejos plasmido-liposoma tienen algunas ventajas como vectores de transferencia de genes ya que ellos pueden usarse con material gentico de tamao ilimitado, no se replican o recombinan como los vectores virales y generan poca respuesta inflamatoria e inmune por no poseer componente proteico. La desventaja es su ineficiencia requirindose concentraciones muy altas de plasmidos para lograr una transferencia eficiente

REPRODUCCIN ASISTIDA Reproduccin asistida o fecundacin artificial es la tcnica de tratamiento de la esterilidad o infertilidad que conlleva una manipulacin de los gametos. Historia El 25 de julio de 1978 naci en la ciudad inglesa de Oldham una nia singular: Louise Joy Brown, el primer beb probeta de la historia. Su concepcin se haba producido en un laboratorio nueve meses antes mediante la tcnica de fecundacin in vitro. Los especialistas extrajeron un vulo de su madre y lo unieron a un espermatozoide en una placa de laboratorio. Dos das y medio despus, el huevo se haba dividido hasta formar una pequea masa de ocho clulas microscpicas, por lo que fue implantado en el tero materno y se inici una gestacin normal. El nacimiento de Louise abri una pgina totalmente nueva en el tratamiento de la esterilidad. El xito de la fecundacin in vitro dio impulso a las actuales tcnicas de reproduccin asistida, que comprenden todos los tratamientos de la esterilidad en los que se manipulan vulos y espermatozoides. As, en 1984 naci en California (EE.UU.) un nio concebido con un vulo donado, y en Australia, una mujer dio a luz un beb procedente de un embrin congelado. En 1994, una italiana de 62 aos tuvo un hijo gracias a un vulo donado que fue fecundado con el esperma de su esposo. Mtodos La reproduccin asistida puede ser llevada a cabo empleado diferentes tcnicas. La tcnica ms adecuada a emplear en cada caso depender de las circunstancias y problemas particulares de la pareja que desea tener un hijo y est encontrando dificultades. Sin embargo

la secuencia de tcnicas a emplear, de menos a ms compleja e invasiva, es la siguiente: coitos programados, inseminacin artificial y fecundacin in vitro/transferencia de embriones. Coitos programados Est indicado en parejas muy jvenes (menores de 35 aos), que lleven poco tiempo intentando quedar embarazada (menos de 6 meses), presenten poca ansiedad y la causa de la esterilidad sea de origen desconocido ya que todas las pruebas bsicas a las que han sido sometidos han dado resultados normales. Al paciente se le puede mantener su ciclo natural (no es sometido a estimulacin) o ser inducida la ovulacin de forma controlada. Ciclo natural Est indicado en parejas con alergia a medicamentos o convicciones ticas o religiosas que les llevan a rechazar cualquier otra tcnica de reproduccin asistida que no sea natural. En esta tcnica la paciente no recibe ningn tipo de medicacin, sino que simplemente se controla el crecimiento del folculo dominante. El momento de las relaciones sexuales viene determinado por el pico de LH, que ocurre 24 horas antes de la ovulacin espontnea. Debe ser monitoriada desde el noveno da despus de la regla, para ello existe un kit de orina muy sencillo y cmodo de usar para la paciente. Induccin de la ovulacin Para evitar el seguimiento del pico endgeno de LH necesario en la tnica anterior, los mdicos se adelantan con la administracin intravenosa de 5000 UI de hCG en el momento en que se constata mediante ecografa la existencia de un folculo maduro ovulatorio. Tras la administracin de 5000 y 10000 UI hCG, el folculo ovular entre 37 y 38 horas ms tarde. La hCG y la LH son hormonas muy similares ya que provocan y mantienen la luteinizacin. La hCG se elimina ms lentamente y su actividad biolgica e smayor (se requiere menos unidades). La LH produce menos complicaciones (sndrome de hiperestimulacin, SHO) pero la presentacin comercial impide usar miles de UI (15 y 30000 UI). Esta tnica permite un mayor ocntrol sobre el momento de la ovulacin, lo que permite programas el coito (0 y 48 horas), la inseminacin (24 y 48 horas) o la aspiracin folicular (por las maanas 36 horas despus). De esta forma se facilita la planificacin de la clnica y sobre todo del laboratorio FIV. Inseminacin artificial Introduccin mdica del semen o esperma en la vagina de la mujer con la finalidad de conseguir una gestacin. Esta va recibe el nombre de 'inseminacin artificial'. Normalmente, con esta tcnica, de cada 100 ciclos de inseminacin 13 resultan en gestacin, y de cada 100 parejas que completan 4 ciclos, 60 consiguen gestacin. De todos los embarazos conseguidos, un 15-20% son gemelares y otro 15% se malogran.

Para poder someterse a un ciclo de inseminacin artificial se han de cumplir una serie de requisitios: las trompas de Falopio han de ser permeables, el semen ha de ser de buena calidad, y se han de considerar otros factores como la edad de la mujer, el tiempo de esterilidad y los ciclos de inseminaciones anteriores para decidir si es conveniente realizar un nuevo ciclo de inseminacin artificial o por el contrario sera ms recomendable someterse a otra tcnica ms compleja como la fecundacin in vitro y transferencia de embriones, la cual ofrecera ms garantas de xito. Se distinguen dos situaciones segn el origen del semen: - Inseminacin artificial homloga o conyugal (IAH): el semen procede de la pareja. Se lleva a cabo la inseminacin de manera artificial cuando hay alguna dificultad para que se deposite el esperma en la vagina de la mujer de manera natural (el coito), por ejemplo debido a problemas de eyaculacin precoz, vaginismo, impotencia o eyaculacin retrgrada. Tambin puede recurrirse al IAH cuando la mujer presente malformaciones uterinas, un moco cervical demasiado espeso, disfunciones ovulatorias, etc... o simplemente cuando la causa de esterilidad en la pareja sea desconocida (15% de los casos). - Inseminacin artificial con donante (IAD): el semen proviene de un donante annimo. Se recurre a un banco de semen cuando el integrante masculino de la pareja presenta azoospermia, una enfermedad gentica her ia o una enfermedad de transmisin sexual, cuando la paciente es una mujer sin pareja... y cuando ya ha fallado la tcnica ICSI, ya sea por fallo de fecundacin o por mala calidad de los embriones (gentica o morfolgica) La inseminacin artificial consta de tres fases: estimulacin hormonal del ovario, para aumentar el nmero de ovocitos maduros. preparacin del semen, seleccionando y concentrando los espermatozoides mviles. inseminacin de la mujer, que se realiza en una consulta.

Fecundacin in vitro (FIV)

Extraccin del ovocito femenino para fecundarlo fuera del organismo de la mujer con espermatozoides obtenidos previamente del hombre. Tras la fecundacin, el embrin es implantado en el cuerpo de la mujer. Esta va recibe el nombre de fecundacin in vitro (FIV). La FIV consta de seis fases: estimulacin del ovario con hormonas. extraccin de ovocitos; en el caso de infertilidad femenina, se puede recurrir a la donacin de ovocitos. inseminacin de los mismos, que puede producirse: o de forma clsica, poniendo juntos los ovocitos y los espermatozoides previamente seleccionados y tratados. o mediante inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides (ICSI) en el caso de que los gametos masculinos presenten problemas de movilidad. cultivo in vitro del embrin; durante el periodo de cultivo el embrin pasa por diferentes estados de desarrollo. Habitualmente los embriones permanecen en cultivo un total de tres das. En algunas ocasiones, es conveniente prolongar el cultivo de los embriones en el laboratorio hasta el estadio llamado de blastocisto (~6 das).

transferencia embrionaria; se puede realizar bien en el tero o en las trompas y tiene lugar por va transcervical, sin anestesia. Las tasas de embarazo con FIV e ICSI estn alrededor del 50%, siendo superiores al 60% en el caso de donacin de ovocitos. congelacin y descongelacin de embriones en su caso; una vez que se ha transferido el nmero de embriones adecuado para cada caso, los embriones viables sobrantes se someten a un proceso de congelacin, lo que permite conservarlos durante un tiempo. De esta forma, estos embriones estn disponibles en el momento en que sean requeridos por la pareja. Las tasas de xito con transferencia de embriones congelados son similares al resto de los tratamientos, superando el 40%, sin aumento del riesgo de aborto o malformaciones. En la actualidad la reproduccin asistida (in tero o in vitro) es una prctica muy comn, aunque dependiendo de los centros, los resultados pueden cambiar. Problemas de la reproduccin asistida Los principales problemas asociados a la fecundacin in vitro pueden estar derivados de la estimulacin ovrica o del embarazo. Tambin se presentan consideraciones bioticas o malformaciones. Riesgos derivados de la estimulacin Sndrome de hiperestimulacin ovrico. Se da durante la fase ltea del ciclo menstrual y consiste en una respuesta anormalmente alta de los ovarios ante la estimulacin hormonal, y que adems es persistente en el tiempo. Se trata de una complicacin derivada de los tratamientos hormonales de estimulacin ovrica en reproduccin asistida, principalmente relacionados con la administracin de hCG. Los sntomas ms destacados de este sndrome son la ascitis, el crecimiento ovrico y el dolor abdominal. La probabilidad de que ocurra una respuesta exagerada (hiperestimulacin) con riesgo para una paciente es inferior al 1%, siendo la complicacin ms grave la torsin de ovarios, que puede desembocar en hemorragias internas. Embarazos mltiples: En ciclos donde se transfieren dos embriones la probabilidad de tener un embarazo gemelar es del 6%. En ciclos donde se transfieren tres embriones la probabilidad de tener un embarazo gemelar es del 12% y de tener un embarazo triple es del 3%. Es importante llevar a cabo controles ecogrficos y medir los niveles de estradiol para cancelar el ciclo de reproduccin asistida en el caso de que se detecten ms de dos o tres folculos ovulatorios. Un embarazo mltiple tiene importantes riesgos de salud tanto para la madre como para los fetos, y normalmente desemboca en un parto prematuro.

TCNICAS DE REPRODUCCIN ASISTIDA DE BAJA COMPLEJIDAD:

En este artculo trataremos de definir y explicar los mecanismos por medio de los cuales realizamos las Tcnicas de Reproduccin Asistida de Baja Complejidad.

Entre estas incluimos a la Induccin de Ovulacin ms coito programado y la Inseminacin Intrauterina (IIU). Ambas son tcnicas naturales, poco costosas y de bajo riesgo para las parejas que las requieren.

Inseminacin Intrauterina:
Definicin: Por definicin nos referimos a la IIU cuando realizamos un depsito no natural de espermatozoides en el tracto reproductivo de la mujer con el fin de conseguir gestacin. Para realizar esta tcnica se utiliza el semen del esposo o semen de un donador si el varn no tiene espermatozoides Indicaciones: Realizamos esta tcnicas cuando el varn tiene poca cantidad de espermatozoides (oligozoospermia), poca movilidad (astenozoospermia) ambas (Oligoastenozoospermia). Tambin est indicada en los casos en que el varn produce espermatozoides de formas anormales (Teratozoospermia) o cuando hay algn trastorno en el tracto genital femenino como ulceras o inflamacin cervical recurrente, estenosis cervical (canal cervical demasiado estrecho), alteraciones en la posicin de la matriz (retroflexin forzada) y en casos de endometriosis. Condiciones: Para realizar esta tcnica las Trompas de Falopio debern estar permeables y funcionales. La cavidad uterina deber estar libre de inflamacin, infecciones o tumores que impidan el libre paso de los espermatozoides o la implantacin del embrin si se logra el embarazo. Debemos tambin de lograr una Concentracin de Espermatozoides mviles post-capacitacin mayor de 3 millones, por lo que recomendamos antes de realizar est tcnica hacer estudios en la mujer para evaluar sus trompas, cavidad endometrial y funcin ovrica y en el varn una prueba de capacitacin espermtica para ver si su semen es til para la inseminacin. Hiperestimulacin Ovrica Controlada (HOC): Es indispensable para obtener xito con estos tratamientos realizar Estimulacin folicular para obtener poli ovulacin, aun que los estudios de perfiles hormonales funcionales del ovario estn normales, debido que al liberar varios vulos ser mayor la probabilidad de embarazo, aunque esto incrementa el riesgo de embarazo mltiple. Durante la aplicacin de las hormonas estimulantes del ovario se debe realizar un seguimiento ultrasonografico del ovario para Determinar el da y la hora de la ovulacin ya que tambin es indispensable la Coincidencia entre ovulacin y momento de la IIU para lograr el embarazo. Las tasas de Embarazo son superiores cuando se emplea HOC que en ciclo natural donde solamente se produce un solo ovulo. Existen en la actualidad mltiples medicamentos estimulantes de la ovulacin, desde el Citrato de clomifeno, pasando por las menotropinas y llegando hasta lo ms actualizado que son las Hormonas obtenidas por medio de tcnicas recombinantes como la FSH-recombinante y los anlogos de la GnRH. Lo ms utilizado en la actualidad son las hormonas recombinantes ya que por su alto grado de purificacin el xito del tratamiento casi esta asegurado en pacientes bien estudiadas, son fciles de aplicar, sus efectos colaterales son

mnimos y la calidad de los vulos y embriones obtenidos son mejores que utilizando menotropinas o clomifeno. Generalmente la FSH-r la aplicamos con jeringas de Insulina por va subcutnea en la grasa alrededor del ombligo, que es la parte menos dolorosa y que fcilmente puede ser aplicada por el mismo paciente. Aunque tambin puede aplicarse en la cara externa del brazo o en la regin gltea. Las ampolletas vienen en diferentes presentaciones desde 50 hasta 600 UI. Generalmente iniciamos con una dosis baja de 50 a 100 UI diarias en las mujeres que inician tratamiento por primera vez y cada 3 a 4 das se realiza un seguimiento folicular por medio de ultrasonido para medir el numero y tamao de los folculos en cada ovario y el grosor endometrial. Esta vigilancia es de suma importancia ya que por un lado nos permite regular las dosis de hormona aplicada para evitar la hiperestimulacin ovrica y por ende los embarazos mltiples y por otro lado nos permite detectar problemas de baja respuesta, ya que si no hay desarrollo folicular para el sexto da de estimulacin los ciclos debern cancelarse ya que sin folculos no hay vulos y si no hay vulos la probabilidad de embarazo es nula. Cuando por medio del ultrasonido detectamos 2 a 3 folculos de 18 a 20 mm de dimetro, es el momento oportuno para aplicar una hormona llamada Gonadotropina Corionica Humana (GCH) en dosis de 10000 UI por va intramuscular. La funcin de esta hormona es programar la ruptura folicular y la liberacin de los vulos, que generalmente ocurre 36 horas despus de su aplicacin. Con este medicamento controlamos el da y la hora de la ovulacin para poder programar la inseminacin. Esta hormona tambin la encontramos en la actualidad en su forma recombinante, sin embargo sus costos han limitado su uso generalizado. Proceso de la muestra: El da de la programacin de la IIU se cita 2 horas antes al varn para que de la muestra de semen en el laboratorio. Esta muestra es procesada y revisada inicialmente en campanas de flujo laminar que proveen aire filtrado y altamente purificado para evitar la contaminacin de las muestras. Posteriormente la muestra es incubada en incubadoras especiales que les proveen de temperatura, oxigeno, bixido de carbono y humedad relativa, otorgando un micro ambiente apropiado para que los espermatozoides se capaciten y puedan incrementar su capacidad fecundante. Las muestras son revisadas a conciencia para detectar bacterias, espermas anormales, espermas muertos, etc. Los cuales debern ser separados de los espermas sanos. Para lograr esta separacin las muestras de semen son colocadas en una maquina que se llama centrifuga que separa el liquido seminal de los espermatozoides. Una vez separados los espermas son colocados en tubos cnicos estriles y son lavados y filtrados hasta obtener la muestra final que va a ser transferida, donde solamente se

incluyen los espermas, sanos y mviles y con mayor capacidad de fecundacin. La cantidad de espermas obtenidos en el proceso final de preparacin son evaluadas en cmaras especiales de conteo celular, siendo la ms utilizada en la actualidad la cmara Meckler por su facilidad y rapidez para contabilizar los espermas. Estas muestras capacitadas son video grabadas para que el paciente pueda, si lo desea ver la muestra capacitada antes de ser transferida al tero materno. Las muestras capacitadas son mezcladas antes de su transferencia con medios de cultivo especiales que les proveen de nutrientes que prolongan su vida til y su capacidad fecundante, adems muchos de ellos estn adicionados con antibiticos que protegen contra infecciones.

Tcnica de IIU: Una vez preparada la muestra, esta se transfiere al interior de la cavidad uterina a travs de una cnula especial de inseminacin. Esto, en si es un procedimiento rpido y sencillo, no es doloroso y con el se incrementa al doble o triple la probabilidad de embarazo por varias razones. 1.-Los espermas transferidos adquieren mayor capacidad fecundante con la capacitacin, 2.-Al colocarlos en la cavidad uterina evitamos que la acidez vaginal los dae y 3.- Los acercamos al sitio de fecundacin natural que es la trompa de Falopio. Soporte de Fase Ltea: Despus de la Inseminacin la paciente se manda a reposo a su domicilio para que permanezca acostada durante 3 a 4 hrs. y posteriormente podr levantarse a realizar sus actividades normales. Las relaciones no se prohben a menos que durante la capacitacin espermtica se detecten datos de infeccin. Se recomienda utilizar Progesterona natural para la preservacin del embarazo ya que la administracin de gonadotropinas exgenas durante la estimulacin ovrica hace que la hipfisis quede inhibida disminuyendo la liberacin de LH y FSH endgenas lo cual repercute en la liberacin de progesterona por el ovario. Generalmente utilizamos perlas de Progesterona de 100 o 200 mg por va oral o vaginal, aunque tambin existen las presentaciones en crema vaginal y ampolletas intramusculares. Este aporte con progesterona inicia el mismo da de la inseminacin y lo prolongamos hasta las 8 semanas de embarazo si la prueba sale positiva. Complicaciones de la IIU: La IIU es una tcnica natural y las complicaciones son mnimas. La complicacin mas frecuente es la hiperestimulacin ovrica y el embarazo mltiple y ambos son poco frecuentes en la actualidad por la vigilancia que tenemos de estos tratamientos. Las infecciones se presentan en menos de 0.7 por cada 1000 ciclos realizados gracias a los medios de cultivo adicionados con antibiticos y que las transferencias la realizamos en reas

Cnulade Ins em inacin

estriles y con materiales 100% desechables. Las reacciones alergias en la actualidad son sumamente raras utilizando hormonas recombinantes. A veces los medicamentos usados pueden provocar algn efecto secundario leve como dolor de cabeza, cambios en el estado de animo, inflamacin abdominal, aumento gradual de peso. Sin embargo se llegara a presentar sntomas como visin borrosa, dolor de cabeza intenso o aumento acelerado de peso es indispensable informar a su medico. IIU con semen de donacin: La donacin de semen es una opcin alterna para aquellas parejas que tienen azoospermia (ausencia de espermas en el eyaculado y dentro del testculo) o cuando la pareja no puede costear otras tcnicas de reproduccin asistida avanzada o complejas como la FIV o el ICSI. En estos casos se utilizan muestras de semen cri preservado o congelado. Son muestras de alta calidad y donadas por hombres sanos y frtiles. Estas muestras son debidamente estudiadas para que estn libres de enfermedades infectocontagiosas como SIDA, hepatitis y brucelosis. Las tasas de embarazo son buenas cuando la muestra es debidamente capacitada.

ARTICULO REALIZADO Y REVISADO POR: DR. JESUS ANTONIO LOPEZ NAVARRETE Medico especialista en Tcnicas de Reproduccin Asistida y Biologa de la Reproduccin humana. Actual Director del programa de Reproduccin Asistida del Centro Mexicano de Fertilidad (CEMEF).

INTRODUCCION Las nuevas tcnicas de reproduccin humana han supuesto un salto muy importante para el hombre en el campo de la medicina. Nos hallamos ante realidades de extraordinaria trascendencia: el hombre moderno puede lograr la procreacin humana con tcnicas no naturales consideradas en su da como pura imaginacin. Como suele ser habitual, el mundo del Derecho va un poco retrasado con respecto a los cambios sociales, culturales, cientficos, etc. Trata de adaptarse y hacer confluir toda una serie valores jurdicos, ticos, filosficos fruto de la situacin en la que se plasman los Ordenamientos Jurdicos de cada Estado. Con estas nuevas tcnicas se rompe el esquema reproductivo por el cual hombre y mujer, en unin de una relacin entre ambos daban vida a un nuevo ser. Ahora se da la posibilidad de sumar a dichos actos procreadores a terceros o cuartos individuos, sin que su posicin jurdica (filiacin, derechos y obligaciones) estuviera prevista por la Ley hasta la aprobacin de la Ley 35/1988, de 22 de noviembre, sobre Tcnicas de Reproduccin Asistida (BOE 282/1988 de 24-11-1988, pg. 33373) Las nuevas tcnicas nacen con el fin de resolver los problemas reproductivos vigentes en la especie humana, siendo estos problemas considerados como enfermedades irreversibles. Dichas enfermedades reproductivas pueden dar lugar a trastornos dentro del seno familiar cuando el objetivo natural de la unin hombre mujer es la misma reproduccin en s. Hasta

ahora exista la posibilidad de las adopciones pero esta opcin no puede llegar a cubrir todas las expectativas de las personas. La familia es un mbito a defender por su bien social como institucin familiar para fomentar la individualidad, la responsabilidad y el sentido de identidad del que ha de nacer. La Constitucin Espaola diferencia el matrimonio (articulo 32) de la familia (articulo 39) La familia hace mencin explcita de los hijos y de la madre, independientemente del hecho de su estado civil. La madre que puede ser soltera y ello podra llevar a admitir la idea de quien es madre por va natural, tambin pueda serlo por estas tcnicas de reproduccin asistida. La interpretacin que debemos hacer consiste en establecer proteccin constitucional a las madres solteras que ya lo son. No a las mujeres solteras para que sean madres. Se plantea la duda de s el mbito necesario para la familia deber ser el estable y el heterosexual para aplicar las tcnicas de reproduccin. Ante esto resulta difcil dar una definicin de lo que es pareja estable pero la Ley determina, entre otras cosas, que las tcnicas se apliquen en parejas heterosexuales o bien en mujeres solas. Articulo 6.1 LTRA Dentro de la paternidad y maternidad, conviene separar entre el papel biolgico reproductivo del hombre y el de la mujer, dado que esta lleva a termino la gestacin que no participa el hombre. Las dos parte aportan el material gentico necesario para el nuevo ser pero tras el alumbramiento, ambos consagraran su vida al cuidado y educacin del recin nacido. Es en este punto donde la aportacin del donante, ya sea mujer u hombre, termina. La situacin resultante ser distinta en funcin de las circunstancias. Numerosos son los problemas que se presentan en el terreno de la filiacin, ya sean de carcter normativo, terminolgico y conceptual. Dejando a un lado, en la medida de lo posible, las cuestiones morales, ticas y filosficas: estamos en algunos casos y situaciones derivadas de ciertas fecundaciones asistidas ante una simple y verdadera filiacin? Se puede seguir hablando de paternidad y maternidad cuando el hijo nace por inseminacin artificial con semen de un tercer donante (IAD), con consentimiento del marido o de la madre, o de un vulo de otra mujer fecundado in vitro (con semen del marido o de un tercero) implantado en la que lo va gestar y alumbrar? Si donante y receptora se conocieran fruto de la casualidad tras el nacimiento de un nuevo ser, cual serian los derechos y obligaciones recprocos entre las partes? Si en una pareja de lesbianas, una de ellas decidiera presentarse como soltera a una inseminacin y con el tiempo se descubriera su relacin tras el alumbramiento de un nuevo ser, qu ocurrira? En el caso de una pareja de homosexuales, por su propia naturaleza es imposible. No obstante si se permitiese a lesbianas, se estara privando de un derecho igual a los hombres pese a las diferencias existentes? Con este trabajo pretendo arrojar un poco de claridad a estas cuestiones tan interesante y que tanta polmica suscitan hoy en da. DEFINICION: INSEMINACION ARTIFICIAL La inseminacin artificial puede describirse con las palabras siguientes: Salva los obstculos mdicos que impiden la fecundacin mediante la practica completa de las relaciones sexuales entre marido y mujer. En algunos casos, la pareja es infecunda debido a causas que ataen exclusivamente a la mujer. No superndose estos trastornos mediante

tratamiento teraputico, puede recurrir a la inseminacin artificial con semen del marido (inseminacin homologa) Por otro lado, es posible que la esterilidad del marido se la causa de falta de concepcin de hijos pudiendo recurrir al esperma frtil de un tercero (inseminacin heterloga). En ese caso la inseminacin no es solo una tcnica o mtodo para permitir la fecundacin genticamente conyugal, sino que, adems aporta un componente gentico ausente en la pareja para fecundar. Tanto la inseminacin homologa como heterloga participan de un carcter comn: la fecundacin se obtiene sin copula o coito. CLASIFICACIONES LEGALES DE LA FILIACION Inseminacin artificial con semen del cnyuge: Este supuesto es el que menos problemas plantea. Los nacidos de un caso de inseminacin artificial con semen del cnyuge (IAC) llevado a cabo por una pareja casada son indudablemente hijos matrimoniales de esa pareja (artculos 108, 115 y siguientes del Cdigo Civil). La misma calificacin deben tener los supuestos de fecundacin in vitro con semen del marido y transferencia del embrin al tero de su mujer, tanto si se opera con el vulo de la misma como con vulo de otra mujer. Dentro de esta categora de supuestos, los ms sencillos son aquellos en los que inseminacin y parto se producen durante el matrimonio con normalidad, no hay separacin legal ni de hecho. El mismo tratamiento cuando el parto o nacimiento tienen lugar dentro de los trescientos das siguientes a su disolucin, o a la separacin legal o de hecho de los cnyuges. Articulo 116 del Cdigo Civil. Si la inseminacin se realiza antes de la celebracin del matrimonio y el hijo nace dentro de los ciento ochenta das siguientes a dicha celebracin, tambin se trata de una filiacin matrimonial. Articulo 117 del Cdigo Civil. El consentimiento del marido para que se proceda a la inseminacin artificial de futura madre, cualquiera que sea la forma en que haya sido prestado supone un reconocimiento expreso o tcito de su paternidad. No obstante para mayor facilidad de prueba es recomendable que el consentimiento se otorgue en escritura publica. Si la inseminacin se lleva a cabo estando separados legalmente o de hecho los cnyuges y el parto ocurre una vez transcurridos los trescientos das siguientes a la separacin, el nacido en esas circunstancias es un hijo matrimonial (a pesar de la separacin, tanto la inseminacin como el nacimiento tienen lugar durante el matrimonio) y puede inscribirse como tal con el consentimiento de ambos cnyuges (articulo 118 del CC) La doctrina admite que el consentimiento del art. 118 del CC se preste antes del parto. La inseminacin artificial con semen del marido ya fallecido. Presenta la peculiaridad de que el consentimiento de aqul se ha producido necesariamente antes de la fecundacin y no es posible saber si el mismo se mantendra todava. La respuesta la podemos tener por aplicacin analgica del articulo 118 del CC. La prueba de la inseminacin reflejada en el expediente medico refuerza especialmente el valor del consentimiento como prueba de verdad biolgica. Inseminacin artificial de pareja no casada con semen propio: Son supuestos semejantes a los anteriores pero aqu varia el hecho de que el sujeto de quien procede el semen no esta

casado con la mujer as fecundada. Tanto si es pareja estable como si no lo es, la filiacin ser no matrimonial. Esa filiacin no matrimonial quedara determinada normalmente a travs de la inscripcin practicada en el Registro Civil al tiempo del nacimiento basada en el reconocimiento de ambos progenitores en ese momento. Hay que sealar que el reconocimiento constituye una declaracin de voluntad irrevocable. Cuando el reconocimiento en escritura publica consta el tiempo de la inseminacin el mismo no plantea problemas, puesto que, al amparo del articulo 29 CC cabe reconocer al nasciturus. Pero en cambio el reconocimiento del feto concebido parece contrario a toda lgica que no tiene que ser entendida as. No es tan contrario cuando la inseminacin tenga lugar dentro de una pareja estable. Adems dichos sujetos de someten de manera consciente a tcnicas de fecundacin asistida. El expediente medico es una prueba directa, se debe permitir la inscripcin de la filiacin no matrimonial correspondiente en el momento del nacimiento. En una filiacin no matrimonial, si no existe reconocimiento del padre debidamente prestado, habr que acudir a resolucin legal por sentencia firme para la determinacin de la filiacin paterna (artculos 120.2 y 3 del CC) La determinacin legal de la filiacin no matrimonial por sentencia firme nos remite a las acciones de reclamacin, que corresponden al hijo durante toda su vida y tambin a sus herederos en los trminos del articulo 133 del CC cuando no exista posesin de estado. Si hay posesin de estado la accin de reclamacin corresponde a cualquier persona con inters legitimo en cualquier momento, salvo si la filiacin reclamada contradice otra legalmente determinada (articulo 131 del CC) Esta ultima excepcin no se aplica cuando quien ejercita la accin es uno de los progenitores o el hijo (articulo 134 del CC) A todo lo anteriormente dicho, destacar la relevancia que puede tener en el procedimiento el expediente medico como prueba directa de la generacin. Inseminacin artificial de mujer casada con semen que no es de su marido: Representa el supuesto normal de inseminacin con semen de un donante annimo y contando con el consentimiento del marido (por supuesto, tambin de la mujer) Se produce una filiacin no matrimonial como consecuencia inevitable de la falta de nexo matrimonial entre el donante (persona de quien procede el semen) y la mujer inseminada. El momento relevante para entender producida una nueva generacin equivale a la inseminacin. Se trata de una filiacin no matrimonial, derivada de la fecundacin de una casada por un varn desconocido, el donante de semen. El hijo nace de personas no casadas entre si, fuera del matrimonio, aunque la mujer este casada. El consentimiento de su marido no altera la calificacin anterior, como tampoco la alterara si diese su consentimiento para que, mediante coito, su mujer tuviese un hijo con un tercero. La presuncin de paternidad permite inscribir una filiacin matrimonial (aparente) en el Registro Civil mediante la inscripcin del nacimiento junto con la del matrimonio de la madre con el padre aparente (artculos 115.1 del CC, 48 de la LRC, 181 y 183 del RRC) De esta forma se logra el fin perseguido por el matrimonio. La practica de la fecundacin mediante inseminacin artificial permanece totalmente en secreto.

Sobre la reclamacin de la verdadera filiacin paterna solo podr prosperar en la medida en que nuestros tribunales (en su caso, el Tribunal Constitucional, puesto que el tema afecta al articulo 39 de la Constitucin Espaola) admitan la ruptura del anonimato del donante para la libre investigacin de la paternidad. Si se admite la investigacin de la paternidad, nicamente el hijo estar legitimado durante toda su vida para reclamar su filiacin natural paterna. Sealar que aunque el anonimato del donante y de la receptora con respecto a l no se mantenga, ese donante no podr reclamar su paternidad, de acuerdo con el Cdigo Civil, por la sencilla razn de que se trata de una filiacin no matrimonial, no hay posesin de estado y, adems se contradice con otra filiacin matrimonial legalmente determinada (artculos 131 y 133) Inseminacin artificial de mujer no casada con semen que no es de su compaero: La fecundacin se produce con semen de un varn distinto al que, por su relacin con la mujer, esta dispuesto a asumir la paternidad del hijo. Normalmente se tratara de parejas estables. La filiacin es no matrimonial. El padre que va a asumir ejercicio de las funciones paternofiliares no es el biolgico. La filiacin quedara normalmente determinada mediante la inscripcin en el Registro Civil basada en el reconocimiento de la madre y del compaero de esta en el momento del nacimiento. La legitimacin activa para el ejercicio de la accin de impugnacin es mas amplia en estos supuestos. Existiendo posesin de estado, la accin corresponde al hijo, al progenitor y a los herederos forzosos. De no existir posesin de estado, la accin corresponde a cualquiera de aquellos a quienes perjudique. Adems, en todo caso, el hijo tiene la accin de impugnacin durante un ao despus de haber llegado a la plena capacidad. Articulo 140 Hay que diferenciar entre el reconocimiento que se hace de manera libre y consentida (no debera prosperar)frente al consentimiento realizado con violencia e intimidacin (si seria posible la ejecucin de la accin) Se permite la libre investigacin de la paternidad al tratarse de un caso de filiacin no matrimonial y al no existir posesin de estado. CARACTERISTICAS DE LA LEY SOBRE TECNICAS DE REPRODUCCION ASISTIDA La LTRA considera la relacin que se establece entre el Centro o Banco de esperma y el donante como un contrato gratuito, formal y secreto. Art. 5.1 La forma del consentimiento ser por escrito para mayor seguridad jurdica. Hay que sealar que no es exactamente un contrato porque es un negocio hasta hora no tipificado, por su gratuidad lo llamamos donacin. Articulo 10.1 de las LTRA Algunas de las caractersticas son estas: El consentimiento: Se exige una doble declaracin de voluntad, tanto del donante de semen como del Centro receptor. Dicha declaracin debe ser libre para ser valida. Adems, la declaracin del donante es de carcter personalsimo, siendo imposible la sustitucin de cualquier tipo. El donante debe ser informado de los fines y consecuencias de ese acto. Articulo 5 LTRA Requisitos del donante: La Ley exige que el donante de esperma sea mayor de edad y plenamente capaz, sin estar privado de ninguno de sus derechos. As mismo, al donante se le

realizaran toda una serie de pruebas medicas y biolgicas con el fin de asegurar la calidad del semen. Se exigir tener buena salud, sin padecer taras o enfermedades transmisibles, venreas, etc. Art. 5.6 Revocacin de la donacin: Es posible la revocacin de la donacin por el donante bajo una circunstancia excepcional. Solamente cuando el donante sufra una infertibilidad sobrevenida, siempre que dicha revocacin sea posible por la disposicin de la muestra donada cuando esta no se haya usado. Articulo 5.2 Gratuidad de la donacin: En lnea con lo establecido para la donacin de sangre u rganos, se establece que la donacin de semen nunca tendr carcter lucrativo o comercial. Esto es as para lograr una mayor seguridad dentro del sistema donatario. Art. 5.3 El carcter secreto y annimo de la donacin: Especial consideracin tiene este apartado. Se pretende salva guardar la donacin realizada por una persona como forma de proteger su derecho a la intimidad. El anonimato tiene una doble vertiente entre donante de semen y receptora, ninguno de los dos debe conocer al otro. Con este objetivo se puso en marcha en nuestro pas un sistema (Registro Nacional de donantes) que custodia en el mas estricto secreto, los datos personales del donante. Art. 5.5 No obstante se permite al hijo fruto de la inseminacin artificial o alguno de sus representantes legales, optener informacin de carcter general de los donantes, siendo este derecho aplicable tambin a las receptoras de gametos. Pese a esto no se permite el conocimiento pleno de la identidad del donante salvo en circunstancias extraordinarias que pongan en peligro la vida del hijo o cuando as lo determinen las leyes procesales penales. El conocimiento publico de la identidad del donante no lleva consigo la determinacin legal de la filiacin. Articulo 8.3 LTRA De la responsabilidad del donante: El donante es responsable ante diversas situaciones. De realizar una donacin de semen estando casado sin el permiso de esta, podra violar algn deber conyugal como el deber de respeto. Esto no quiere decir que la esposa tenga un derecho sobre el semen del marido, mas bien son circunstancias que surgen al amparo de los deberes entre los cnyuges. Otra idea seria la responsabilidad del donante por su donacin cuando este supiera de manera consciente que sufre alguno de los mltiples impedimentos mdicos. Demostrar esta mala fe del donante se presenta en principio complicado, suponiendo que se desvelara la identidad del donante. POSICIONES JURIDICAS ANTE EL ANONIMATO DEL DONANTE Remontndonos antes de la promulgacin de la LTRA, ya se haba criticado en su momento el carcter annimo del contrato de donacin de gametos y embriones. Con la LTRA el debate es ms amplio. Estudiando la posicin de los distintos autores encontramos el principio constitucional que invocan los autores como infringido para rechazar la constitucionalidad del anonimato del donante es el articulo 10.1 de la Constitucin. Rivero Hernndez (Las nuevas formas de reproduccin humana, Cuadernos Civitas, Madrid 1988) entiende que no es suficiente que el hijo conozca los datos genotpicos e incluso fenotpicos del donante, que le son suministrados con una finalidad sanitaria. Pienso -dice- que la preocupacin de toda persona por su origen

no queda satisfecha con saber nicamente que lleva genes de un hombre alto, rubio, con RH positivo y sano, pero depresivo. Hay muchos datos que interesan menos a los mdicos y ms a la persona, como son los caracterologicos y dems, datos que la propia identidad de la persona del donante, no veo razn suficiente para serle negados a quien los va arrastrar toda la vida sin haberlos elegido Carcaba Fernndez (Los problemas jurdico planteados, Jos Mara Bosch EDITOR, 1995), en contra de lo manifestado por otros autores, estima que no parece que sea inconstitucional el anonimato atendiendo al articulo 39.2 de la Constitucin Espaola en s mismo considerado, aunque si lo es atendiendo a su relacin con otro precepto constitucional, el articulo 14. Desde mi humilde opinin considero legitima tanto la posicin del donante de salvaguardar su anonimato como el querer el hijo encontrar a su padre, ante este conflicto de intereses abogo por la posicin del descendiente como elemento esencial para el buen desarrollo de la personalidad de este. El donante puede elegir dentro de su libertad que hacer con el semen pero el fruto de ese acto y posterior anonimato repercute en un ser que no ha tenido ninguna decisin sobre la cuestin pero que afecta de manera personalisima.

La gentica del desarrollo sexual femenino

Javier Flores.* Uno de los hallazgos cientficos ms importantes en la primera dcada del siglo XXI es, sin duda, el descubrimiento de las bases genticas del desarrollo sexual femenino. Se trata de un acontecimiento histrico que echa por tierra multitud de concepciones arraigadas en la ciencia y la filosofa, y que, dada su importancia, modifica de raz nuestras creencias acerca de lo humano. Por qu? Desde Aristteles se pensaba que la mujer era una especie de hombre imperfecto. Un ser pasivo lleno de carencias. En el siglo XX, la gentica se situ dentro de un marco conceptual semejante. Se avanz en las explicaciones sobre el desarrollo sexual masculino y se encontr en el cromosoma Y (se supone que los hombres tienen un arreglo de cromosomas 46, XY y las mujeres 46, XX) un gen llamado SRY, el cual explicaba la cadena de eventos que, en el embrin, llevan a la formacin del testculo. Pero para explicar la formacin del ovario, y del desarrollo sexual femenino (me refiero a los caracteres sexuales o fenotipo), se recurra a la carencia, es decir, biolgicamente una mujer era el resultado pasivo de la ausencia del SRY y punto. Sin embargo, ahora todo parece haber cambiado.

La historia es apasionante. Todo comenz este siglo en Italia, con el estudio mdico de una familia numerosa en el sur de ese pas, cuyos integrantes mostraban un conjunto de anomalas que condujeron en 2005 a Radi y Micali a describir un nuevo sndrome. Consiste en el engrosamiento de las palmas de las manos y la planta de los pies (hiperqueratosis), as como la predisposicin a desarrollar cncer de las clulas escamosas de la piel, entre otros signos. Lo ms interesante, para el caso que nos ocupa, fue que todos los integrantes de esta familia, afectados por la hiperqueratosis, eran hombres, independientemente del arreglo masculino (46, XY) o femenino (46, XX) de sus cromosomas. De este modo nos encontramos ante un caso en el que ocurre una reversin del sexo, esto es, individuos con cromosomas tpicamente femeninos (que en condiciones normales se desarrollaran como mujeres), que se desarrollan como hombres (en ausencia de SRY) y presentan incluso clulas testiculares, como fue reportado luego por Tomaselli en 2008. Pero quedmonos por ahora slo con esta imagen, surgida de la patologa que, segn mi querido maestro y amigo Luis Bentez Bribiesca, es la madre de las ciencias biomdicas. Pero, qu ocurre a nivel gentico? En 2006, Parma y sus colaboradores presentaron en la Universidad de Pavia la primera evidencia de que la alteracin de un solo gen, llamado RSPO1, localizado en el cromosoma 1, es lo que explica en este sndrome la reversin del sexo. Lo anterior sugiere que en condiciones normales este gen podra estar encargado de la formacin del ovario y, en consecuencia, de una ruta de desarrollo femenina. Aqu pareciera que hay un salto del terreno de las patologas al campo de la normalidad. Pues s lo hay, porque la funcin normal de los genes puede hacerse visible cuando stos sufren cambios (mutaciones) que producen daos en diferentes funciones orgnicas.

Esto, sin embargo, parece todava un dato muy indirecto. Pero hay ms. Aunque no siempre es as, me parece fascinante cuando la investigacin se desarrolla a partir de datos en humanos y luego es llevada a la indagacin en modelos animales, y no a la inversa. A partir de los hallazgos que he descrito, en 2008 Chassot y su equipo en la Universidad de Niza, en Francia, crearon un modelo animal mediante la clonacin en ratones, encontrando

que la introduccin del rspo1 (el nombre del gen se escribe con minsculas cuando se trata de especies distintas de la humana) induce el desarrollo del ovario en esta especie. Por su parte, Smith y sus colegas en el Royal Childrens Hospital de Melbourne, Australia, concluyen, tambin en 2008, que este gen es una parte antigua de la va de formacin del ovario. Al estudiar comparativamente tres especies animales con diferentes mecanismos de determinacin del sexo: ratones, pollos y tortugas, encuentran, en todas, la formacin de ovarios inducida por este gen. As, uno de los descubrimientos ms importantes de la primera dcada de este siglo es la identificacin de un fundamento gentico de la formacin del ovario. Se trata del gen RSPO1. Esto significa que: a) hay al menos un gen responsable de la diferenciacin sexual femenina; b) es falsa la idea de ausencia o carencia como explicacin para el desarrollo femenino como se desprende del pensamiento aristotlico y de otras concepciones que le han seguido; c) es falso que la determinacin del sexo radique en los cromosomas sexuales, pues el gen determinante del desarrollo del ovario se encuentra en un autosoma, el cromosoma 1; y d) La formacin del testculo no depende exclusivamente del gen SRY, pues en ausencia de ste, el desarrollo de hombres (46, XX) puede explicarse, al menos en parte, por la mutacin del RSPO1. ABERRACIONES CROMOSMICAS La mutacin cromosmica se traduce en cambios del material her io, como consecuencia de la reordenacin de parte de los cromosomas, existiendo conjuntos anormales en el complemento normal del individuo. Esta mutacin cromosmica es una fuente importante de variabilidad en los individuos de ciertas poblaciones, tanto en estructura como en nmero de cromosomas, de forma que adems van asociados a otros cambios fenotpicos, que pueden ser vistos si se observan al microscopio. Todas las mutaciones hacen que las clulas funcionen anmalamente, tanto en cuanto, este funcionamiento suele ser incorrecto, pues un elevado porcentaje de mutaciones son dainas para el organismo. Lo ms normal es que tengamos un nmero anormal de genes o un nmero anormal de cromosomas. Tambin podemos encontrar una disposicin anormal de los genes, lo que implica reordenaciones. Tambin puede producirse la rotura de un fragmento de un cromosoma, lo que provocar la eliminacin de la expresin del gen que se haya perdido. Si la rotura se produce en el interior de la secuencia de un gen, este gen se har afuncional, pero si la rotura implica la secuencia de inicio de la transcripcin, entonces no se transcribir el gen. TIPOS DE CAMBIO: MUTACIONES CROMOSMICAS Podemos encontrar cambios numricos y cambios estructurales. En los primeros, observamos cambio en el nmero de cromosomas, ya sea sin cambiar prcticamente la dotacin cromosmica (fusiones y fisiones), o bien provocando gran cambio del material her io, con aneuploidas, monoploidas y poliploidas. En el segundo caso, tenemos cambio en la disposicin de los genes y cambio en el nmero de genes o cantidad del material gentico; incluyen las delecciones y las duplicaciones, aunque tambin podemos considerar las

translocaciones y las inversiones. En las delecciones podemos perder dos genes, los cuales dejarn de ser expresados. Las inversiones son rotaciones de 180 de un segmento cromosmico que se separa, volvindose a unir luego al mismo cromosoma. Suelen ser mutaciones viables que no implican anormalidad fenotpica alguna. Puede ocurrir que una de las roturas de la inversin, se produzca en un gen esencial, de forma que el sitio de ruptura, actuar como una mutacin gnica letal ligada a la inversin, ello provoca que no pueda darse en homocigosis; pueden ser de dos tipos; pericntricas cuando implican la inversin del centrmero, y paracntricas, que implican inversin de genes que no incluyen el centrmero. Las translocaciones son el intercambio de dos fragmentos de cromosomas no homlogos. Pueden ser recprocas, que son las ms frecuentes. En estas, un segmento de un cromosoma se intercambia con otro de un cromosoma no homlogo, de forma que se producen simultneamente dos cromosomas portadores de translocacin. En las no recprocas nicamente tenemos traspaso de un fragmento cromosmico en una direccin, sin que recprocamente se traspase otro; este caso, se denomina transposicin. Dentro de los cambios numricos, tenemos las euploidas que implican cambios en toda la dotacin cromosmica, pudiendo tener organismo triploides, diploides, hexaploides, etc. Podemos encontrar fusin y fisin. La fusin implica la unin de dos cromosomas acrocntricos no homlogos, dando lugar a la aparicin de un gran cromosoma metacntrico y otro pequeo que puede perderse en la divisin de la clula. La fisin es el proceso contrario, de forma que un cromosoma se rompe a nivel del centrmero originando dos cromosomas acrocntricos ms pequeos. Las aneuploidas implican cambio numrico en slo una parte de la dotacin, pudiendo encontrar adiciones de algn cromosoma (como el sndrome de down con un cromosoma adicional en el 21), o prdida de algn cromosoma. CAMBIOS ESTRUCTURALES Los cromosomas pueden romperse de forma espontnea, bien por fuerza fsica, bien por ciertos compuesto qumicos, pudiendo actuar, adems a dos niveles; tanto cromatnico como cromosmico. El cambio ser cromatnico si la rotura se produce antes de la replicacin del DNA, de forma que la rotura se replica y afecta a las dos cromtidas. El cambio cromosmico se produce cuando la rotura tiene lugar tras la replicacin, afectando slo a una cromtida. Por cada rotura de una cromtida, se producen dos extremos pegajosos, no poseyendo proteccin, pues no encontramos telmero, cuya estructura molecular es conocida, y nica, siendo crucial para que los cromosomas se comporten normalmente, sirviendo de proteccin para evitar el desgaste del cromosoma. Estos extremos pegajosos suelen ser unidos de nuevo por enzimas celulares, de forma que esos extremos ya no tienden a unirse a los extremos cromosmicos normales, porque los extremos poseen la proteccin que les dan los telmeros, impidiendo que los extremos se unan, as al final, no tienen ms remedio que volverse a unir como estaban originalmente, aunque en ocasiones puede permanecer rotos largo tiempo.

Si los extremos fragmentados entran en contacto, pueden volver a unirse de forma distinta a como estaban originalmente unidos, formndose as nuevas combinaciones de alelos, etc. Podemos hablar de varios tipos de roturas, tales como las centromricas, donde incluimos la fusin y fisin, y las no centromricas, donde incluimos las delecciones, translocaciones, etc. En las roturas no centromricas, podemos hablar de roturas cromatnicas y cromosmicas, que incluyen deleciones, inversiones o translocaciones. En este tipo de roturas (cromatnicas), la primera consecuencia ser una restitucin, volvindose a unir los extremos pegajosos; en este caso, no tendremos consecuencias. La segunda consecuencia es una delecin. Si se produce una rotura, obtendremos un fragmento acntrico (sin centrmero) y otro con centrmero; en este caso, el fragmento acntrico se perder, aunque puede volverse a unir. Este se perder, porque al no tener centrmero, no se puede producir la migracin a uno de los polos de la clula en la divisin mittica, puesto que carece de centrmero. En la rotura cromosmica, puede producirse un puente dicntrico, de forma que los extremos se unen y obtendremos un cromosoma con dos centrmeros en cromosomas homlogos. Cuando el cromosoma tenga que emigrar al polo celular que le corresponda, el cromosoma tender a romperse por estiramiento de los centrmeros, de forma que si la rotura se produce en el centro, no habr problemas, aunque si no, tendremos por una parte un cromosoma con delecin y por otra, un cromosoma con duplicacin. Por tanto, la consecuencia de la rotura del puente dicntrico es una delecin y una duplicacin. DELECIONES Las deleciones pueden producirse gracias a dos mecanismos principales, por un lado, gracias a la superposicin cromosmica, que se da gracias a la recombinacin entre regiones de homlogos. Encontramos rotura a dos niveles de los cromosomas, de forma que los fragmentos pueden unirse de forma diferente, produciendo deleciones y duplicaciones. Otra fuente de deleciones son las recombinaciones a consecuencia de desigual entrecruzamiento. Esta, es otra forma asociada a la duplicacin, pudindose producir deleciones. La recombinacin se da entre regiones homlogas presentes en un cromosoma con la misma orientacin. Cabe destacar que podemos tener dos tipos de deleciones, las terminales, que se producen con una nica rotura en el cromosoma y las intersticiales, que se producen cuando en el cromosoma se producen dos roturas. Las deleciones en un homocigoto (que los dos homlogos tengan la misma delecin), suelen ser letales, lo que sugiere que la mayora de las regiones de los cromosomas son esenciales para la viabilidad celular, y que la eliminacin completa de cualquier segmento del genoma, resulta ser deletrea. Incluso los individuos heterocigotos para una delecin (aquellos con un cromosoma normal y el homlogo portador de una delecin), pueden morir, debido a que el genoma se ha ido adaptando a finalmente durante la evolucin para conseguir un equilibrio entre la mayora de los genes, y la presencia de una delecin puede perturbar el equilibrio. En general, un 1% del genoma delecionado, no suele ser letal, pero adems, en los heterocigotos con una nica copia normal, podremos observar fenotipos anormales.

El ejemplo clsico es el sndrome del cri-du-chat, que se produce por una delecin en el extremo del brazo corto del cromosoma 5 de los humanos. Es una enfermedad que se manifiesta en heterocigosis, de forma que los sntomas son microcefalia, y grave retardo mental, adems de llorar de forma semejante a como lo hacen los gatos. Existe desde un 2040% de retardo mental, presentando anormal crecimiento. Estos nios suelen morir en la infancia. Podemos destacar otros sndromes relacionado, por ejemplo, con la leucemia. Una delecin en el brazo largo del cromosoma 22 puede ser causa de esta enfermedad. Observacin de deleciones; si el organismo vive, podemos comparar bandeos de cromosomas, observando individuos con la delecin e individuos normales. Cuando tengamos individuos heterocigotos, ser ms fcil observar la delecin, porque se forman fragmentos sin apareamiento; se produce un bucle de delecin, as, podemos asignar deleciones a cromosomas concretos. Adems, podemos observar fenmenos de pseudodominancia, en los cuales, cuando tenemos un individuo heterocigoto y se produce una delecin en la porcin dominante, observamos que ahora, pueden manifestarse los alelos recesivos de los diferentes genes que se encuentran en la regin del cromosoma homlogo que abraza la delecin, pasando a ser pseudo-dominantes. Este efecto desenmascarador es importante para entender la escasa viabilidad de las deleciones, porque muchos organismos diploides poseen mutaciones recesivas deletreas o incluso letales, enmascaradas por sus alelos normales dominantes. Al eliminar los segmentos que contienen estos alelos normales, la delecin provoca la expresin de los alelos recesivos. Este fenmeno, puede ser usado para determinar la longitud de la regin delecionada, segn los genes que hayan sido delecionados (rea que es abarcada por la citogentica). Tambin nos permite localizar fsicamente el gen, mediante determinacin de las posiciones que ocupan las deleciones que convierten al gen en pseudo-dominante. Esto refleja que los mapas de ligamiento son un reflejo de los mapas fsicos cromosmicos. Tambin cabe destacar que las deleciones no revierten a la situacin normal, no poseen reversibilidad, no se puede producir la retromutacin. Otro factor que nos muestra la existencia de deleciones es la existencia de la letalidad recesiva, aunque este factor no es determinante. Adems, no puede producirse recombinacin en la regin afectada por la delecin, pero este criterio tampoco es determinante. Citolgicamente, slo podemos basarnos en la existencia de los bucles de delecin. Por ltimo, debemos destacar que existen diferencias en las deleciones que se producen en plantas y animales. Mientras que un animal macho con una delecin cromosmica en heterocigosis produce esperma funcional tanto si se presenta el cromosoma normal como si lo hace el delecionado, las plantas diploides portadoras de una delecin en heterocigosis, producen esperma de dos tipos; uno funcional y otro no funcional, segn se presente el cromosoma normal o el delecionado. Es decir, que mientras que en los animales el esperma parece funcionar independientemente del contenido gentico, las plantas diploides son sensibles a cambios en la cantidad de su material cromosmico, cosa que puede servir para eliminar deleciones, no pasando a la descendencia. DUPLICACIONES

Observamos dos formas de duplicacin asociadas a deleciones. Segn la posicin y orden de la regin duplicada respecto del original, podemos hablar de duplicacin en tndem cuando la regin duplicada se encuentra adyacente y en el mismo orden que la regin original. Tambin podemos hablar de duplicacin en tndem invertida, cuando, aunque es adyacente, presenta una disposicin de los genes contraria al original. Por ltimo, podemos hablar de duplicacin desplazada cuando la regin duplicada no est adyacente al segmento original, sino en otra posicin bien del mismo cromosoma, bien de otro. Otra forma de producirse duplicaciones con deficiencias asociadas es cuando tenemos cabalgamiento de los cromosomas homlogos en algn momento determinado, producindose roturas en ambos cromosomas por diferentes lugares, de forma que si la posterior reunin tiene lugar en diferentes partes de los cromosomas homlogos, obtendremos por un lado, una duplicacin en tndem y por otro lado, una delecin de la zona duplicada. Obtendremos una delecin y una duplicacin, aunque tambin podemos obtener este fenmeno mediante entrecruzamiento desigual (o asimtrico). Cuando tenemos una duplicacin en un heterocigoto, observamos un proceso similar al que ocurra con las deleciones; observamos lazos o bucles producidos por la falta de apareamiento entre los homlogos, estos bucles pueden ser producidos por duplicaciones en tndem, invertidas, etc. Las duplicaciones pequeas para heterocigotos y homocigotos suelen ser viables, aunque el llevar una duplicacin puede provocar modificaciones fenotpicas y comportarse como una mutacin gnica. El que una duplicacin sea viable implica un gran potencial evolutivo, pues implica que cuando ese fragmento duplicado est presente, mientras que el fragmento original puede seguir con las funciones bsicas, el fragmento duplicado puede sufrir mutaciones gnicas, lo que permite diversidad de las zonas duplicadas, lo que puede resultar ventajoso para la evolucin genmica, aunque los segmentos tambin pueden mutar desfavorablemente, de forma que obtendremos un pseudogen que se perder y no ejercer ningn tipo de funcin (ser un gen que ha perdido su funcin). RECOMBINACIN ASIMTRICA; MUTACIN BAR y HEMOGLOBINA HUMANA Por tanto, una duplicacin puede hacer las veces de mutacin puntual, tal y como ocurre con Drosophila y la mutacin Bar. Esta mutacin se encuentra ligada al sexo en el cromosoma X y es dominante, constituyendo una duplicacin en tndem, consecuencia de una recombinacin asimtrica (tal vez). Esta mutacin se produce en la regin 16A y provoca ojos ms estrechos y alargados de lo normal, con un menor nmero de facetas. Podemos obtener individuos Bar con la mutacin, pero adems, podemos obtener individuos doble Bar, con un nmero an menor de facetas, lo que refuerza la hiptesis de la recombinacin asimtrica. La recombinacin asimtrica se produce de la siguiente manera. Debemos tener un homocigoto para una duplicacin, de forma que, la duplicacin derecha de un homlogo aparea con la duplicacin izquierda del otro, producindose entrecruzamiento y recombinacin, de forma que podemos obtener un homlogo con la secuencia triplicada y otro homlogo con la secuencia normal. En el caso de la mutacin Bar, podemos tener

entrecruzamiento entre dos homlogos con la secuencia 16A, producindose recombinacin. Obtendremos un homlogo con dos secuencias 16A y uno normal, pero esto puede producirse debido a un pequeo desplazamiento de los cromosomas homlogos. A partir de ah, explicar los individuos doble Bar es fcil, porque es lo mismo, pero partiendo de dos homlogos con duplicacin en la regin 16A, de forma que ahora obtendremos un homlogo con tres secuencias y otro con una. A mayor nmero de secuencias Bar, tendremos menos facetas, pero debemos destacar que doble Bar nicamente puede darse en hembras, pues la mutacin est ligada al cromosoma X.. Por ltimo, destacamos el efecto de posicin, que implica que las secuencias 16A poseen mayor eficacia en la disminucin de facetas cuando estn en un mismo cromosoma. Los gametos que poseen la delecin (asociada a la duplicacin), mueren o se convierten en cigotos inviables, mientras que los gametos con la duplicacin dan descendencia, bien a machos hemicigotos para la duplicacin que presentan ojos reducidos, o bien a hembras heterocigotas (16A16A/16A), con ojos ligeramente reducidos. En la siguiente generacin podremos obtener hembras homocigotas para Bar, etc. Puede darse el caso de tener muchos fragmentos duplicados, lo que probablemente llevar a inviabilidad del individuo. Por ltimo, decir que la duplicacin siempre se produce en tndem. El caso de la hemoglobina es similar. Una de las mejores evidencias de las duplicaciones en tndem y las deleciones recprocas, tienen origen en el entrecruzamiento desigual, las encontramos estudiando los genes que determinan la estructura de la hemoglobina humana. Esta molcula est formada por cuatro cadenas, de forma que a medida que avanzamos en el desarrollo, las cadenas evolucionan. Los fetos presentan hemoglobina formada por dos cadenas alfa y dos gamma, mientras que el adulto presenta dos alfa y dos beta. Las estructuras de las diferentes subunidades, vienen determinadas por genes diferentes, algunos de los cuales, estn ligados. En este caso, podemos encontrar entrecruzamiento desigual, gracias al grupo de genes --. Podemos observar individuos que poseen la denominada hemoglobina Lepore, pues poseen parte de la subunidad y parte de la , aunque tambin podemos encontrar la hemoglobina Kenia, con parte de la subunidad y parte de la , de forma que podemos explicar estos hechos mediante entrecruzamiento desigual, pues estas hemoglobinas extraas son producto de cromosomas portadores de duplicaciones. Tambin existen los productos recprocos de los entrecruzamientos, obteniendo las hemoglobinas anti-Kenia y anti-Lepore. Por ltimo, cabe destacar que las duplicaciones en tndem son poco frecuentes en los seres humanos. De hecho, la mayora de duplicaciones descritas en humanos son causadas por la presencia de brazos cromosmicos extra o parte de ellos, generalmente en cromosomas no homlogos. INVERSIONES Es la rotura por 2 partes de un cromosoma, obteniendo un fragmento que si llega a rotar 180, puede cambiar de sentido y volver a unirse a la estructura. Es importante hacer notar que, por la naturaleza antiparalela de las hlices, aparte de rotar 180 en horizontal, debe girar otros 180 en perpendicular, para restablecer la polaridad entre las dos cadenas.

En estos casos, tenemos cambio de la ordenacin cromosmica, habr cambiado la ordenacin salvaje o estndar. Podemos tener inversiones simples, cuando en un cromosoma slo tenemos un fragmento invertido; o complejas, cuando intervienen simultneamente diversos segmentos de un mismo cromosoma. Segn la relacin con el centrmero, podemos tener inversiones simples paracntricas y pericntricas si implican o no el centrmero en la inversin. Es interesante observar como, cuando tenemos una inversin y se da la meiosis, se forman bucles de inversin, debido a la necesidad de apareamiento de los genes, pero teniendo en cuenta que ahora ciertos alelos estn cambiados de orden, ello provoca los citados bucles y que en las inversiones paracntricas, un entrecruzamiento en el bucle, provoca la conexin de los centrmeros homlogos por medio de un puente dicntrico, generando adems, un fragmento acntrico (sin centrmero). As, cuando los cromosomas se separan en la anafase I, los centrmeros, permanecen unidos por el puente. Esto provoca que los centrmeros se orienten de tal modo que las cromtidas que no han intervenido en la recombinacin, sean las ms extremas. El fragmento acntrico, no puede alinearse ni migrar, de forma que se perder. Finalmente, la tensin rompe el puente, dando lugar a dos cromosomas con dos deleciones terminales. Los gametos portadores de estas deleciones no son viables, y aunque lo fueran, formaran cigotos inviables. As, un hecho usual de recombinacin que suele originar productos meiticos recombinantes, da lugar a productos letales. Con ello, el resultado global, es una reduccin de la frecuencia de individuos recombinantes. De hecho, la frecuencia de los genes implicados en la inversin es 0 y la frecuencia entre genes situados a ambos lados de la inversin se reduce en concordancia con el tamao relativo de la inversin. Dentro de las inversiones complejas, podemos destacar las solapantes, que se producen cuando una parte de un segmento incluido en una inversin, se ve afectado por otra inversin. Tambin pueden ser independientes, cuando entre cada segmento invertido, tenemos una zona que no ha experimentado inversin. Tambin puede ser en tndem cuando los dos segmentos invertidos, se presentan adyacentes. Por ltimo, tenemos las incluidas, cuando dentro de un fragmento invertido, se produce la inversin de un fragmento menor. Podemos denotar la ordenacin estndar por la sigla S y la ordenacin invertida, por la I, podremos tener tres situaciones. SS: individuos homocigotos estructurales para la ordenacin estndar. SI: individuos heterocigotos estructurales II: individuos homocigotos estructurales para la ordenacin invertida. Podemos distinguir los heterocigotos estructurales y los homocigotos debido al patrn de bandas caracterstico de cada ordenacin (en homocigotos) y a la formacin de un bucle (ya comentado), en los heterocigotos estructurales. Estos heterocigotos estructurales son los individuos ms importantes evolutivamente, porque lo heterocigotos estructurales suelen ser viables. Es importante destacar que las inversiones pueden detectarse genticamente porque suprimen la recombinacin en heterocigotos para los genes del interior de la inversin. La heterocigosis para una inversin reduce el nmero de individuos recombinantes entre los descendientes de un heterocigoto, mediante dos mecanismos diferentes: por eliminacin de

los productos procedentes de entrecruzamientos en el bucle de inversin, y por inhibicin del emparejamiento cromosmico en la regin ocupada por la inversin. Cuando hablamos de inversiones, hemos dicho que se producen por rotura en dos partes del cromosoma. Por tanto, los individuos portadores de inversiones, se observarn cuando tengamos apareamiento meitico, porque los individuos portadores de inversiones, pueden tener entrecruzamientos; si la recombinacin se produce fuera de la zona de inversin, tendremos la recombinacin usual, pero si se produce en una zona donde tenemos un bucle de inversin, podremos observar diferentes sucesos, dependiendo de si el entrecruzamiento es pericntrico o paracntrico. Podremos obtener dos cromosomas normales y dos anormales que no tienen todos los marcadores (genes) para estar completos. Los cigotos formados por los gametos portadores de esos cromosomas anormales, sern inviables o letales. Slo son viables los cigotos a partir de cromosomas normales (50% viables y 50% no). Podemos considerar las inversiones como un mecanismo supresor de la recombinacin gentica, pues los individuos heterocigotos para una inversin, suelen tener problemas mecnicos para aparear en la regin de la inversin; esto reduce la frecuencia de entrecruzamiento y, por consiguiente, la frecuencia de recombinacin en la regin. Cuando se produce una inversin, la combinacin gentica presente en los loci incluidos en la misma, presentan una fuerte tendencia a mantenerse constante, constituyendo un supergen; un grupo de genes ligados que tienden a ser transmitidos como una unidad her ia y que se mantienen juntos en el cromosoma. Las inversiones suelen estar presentes en los cariotipos de los humanos, en aproximadamente un 2% de los casos, de forma que 2 de 100 individuos aproximadamente, pueden sufrir inversiones. TRANSLOCACIN Es la rotura de fragmentos cromosmicos en cromtidas no hermanas, pudiendo ser recproca y no recproca. La podemos definir como una mutacin que se caracteriza por un cambio de posicin de segmentos cromosmicos. Podemos encontrar elementos transponibles, relativamente frecuentes en el genoma. Estos elementos pueden ir de un sitio a otro de los cromosomas. Translocacin recproca: podemos distinguir entre intercambio fraternal, entre cromosomas homlogos, o bien, intercambio externo, entre cromosomas no homlogos. Es importante denotar que las translocaciones pueden modificar los grupos de ligamiento, pudiendo cambiar la longitud del cromosoma e incluso cambiar el lugar donde se encuentra el centrmero. Existen fenmenos interesantes en heterocigotos, tanto genticos como citolgicos para dos cromosomas en los que se ha producido translocacin, respecto de sus homlogos normales. As, el apareamiento entre regiones homlogas en la meiosis, provoca la aparicin de una configuracin en cruz caracterstica. Adems, cuando llega la anafase I, pueden tener lugar dos tipos principales de segregacin, una en la que los centrmeros alternos migran al mismo polo (segregacin alternante) y otro en el que son los centrmeros adyacentes los que migran al mismo polo (segregacin adyacente-1). Podemos destacar un tercer tipo de

segregacin, aunque es poco frecuente, si se produce la migracin al mismo polo de los centrmeros homlogos (segregacin adyacente-2). En la segregacin alternante, tenemos productos gamticos equilibrados, pues presentan un grupo completo de cromosomas, constituido, bien por los dos no translocados, bien por los dos translocados compensados. En los casos en los que los centrmeros adyacentes son los que segregan juntos (segregacin adyacente-1), tendremos productos gamticos desequilibrados, pues se producen gametos con cromosomas portadores de duplicaciones y deleciones. En humanos, las translocaciones se presentan siempre en heterocigosis. Como veremos, el sndrome de Down suele estar causado por la presencia de un cromosoma 21 extra, aunque tambin puede presentarse en la descendencia de individuos heterocigotos para translocaciones que afectan a este cromosoma. Las personas portadoras de la translocacin, son normales fenotpicamente, pero una segregacin adyacente-1 produce gametos con gran parte del cromosoma 21 duplicado, y probablemente, gametos con una deficiencia correspondiente a alguna parte del otro cromosoma implicado en la translocacin, que es usualmente el cromosoma 14. Este segmento extra es el que causara el sndrome de down en descendientes de este individuo. Adems, la mitad de los descendientes normales, sern portadores de la translocacin. Adems, puede producirse por la translocacin, una reordenacin producida por la rotura que inactive un gen especial y que pase a comportarse como una mutacin puntual. CAMBIOS NUMRICOS Podemos clasificarlos en aquellos que afectan al nmero de conjuntos cromosmicos completos (euploidas) y aquellos que afectan slo a partes, a algunos cromosomas en concreto de estos conjuntos cromosmicos. El nmero de cromosomas que constituye el conjunto bsico de cualquier organismo, recibe el nombre de nmero monoploide, representndose por x. Pero la mayora de seres vivos, presentan ms un nmero mltiple de conjuntos de cromosomas, hablando, en general de organismos euploides. Podemos tener diploides, que sern 2x (dos conjuntos cromosmicos), triploides, tetraploides...podemos llegar a tener poliploides. El nombre haploide, se representa por la letra n y se refiere al nmero de cromosomas que aparecen en las clulas gamticas de un organismo. Como muchos seres son diploides, su nmero haploide coincide con el monoploide, siendo usadas las letras x y n indistintamente; pero en los organismos poliploides, x y n son distintos. El trigo es hexaploide y posee 42 cromosomas, de forma que x=7, mientras que su nmero haploide es n=21, debido a que este es el nmero de cromosomas que poseen las clulas gamticas. Si los cambios se producen en cromosomas determinados, tendremos individuos aneuploides, pudiendo encontrar hipoploida (prdida de algn cromosoma) e hiperploida (ganancia de algn cromosoma). Podemos tener, as, monosomas, para la prdida de un cromosoma (2n-1) o trisomas, cuando ganamos 1 cromosoma; e incluso, trisomas dobles, cuando tenemos 2n +1 +1 (con tres cromosomas 21 y 14, para el sndrome de Down). Tambin existen individuos nulismicos, con falta de un par cromosmico. Cuando un organismo monoploide gana un cromosoma, se denominar disoma.

Existe una 2 forma de producirse cambios numricos que afectan a parte del conjunto cromosmico, de un organismo, que son la fusin y la fisin cromosmicas, en las cuales, bien dos cromosomas acrocntricos no homlogos pueden juntarse a nivel de sus centrmero, para dar un gran cromosoma metacntrico y otro pequeo que puede perderse en la divisin de la clula (fusin); o un cromosoma puede romperse a nivel del centrmero, dando dos cromosomas acrocntricos pequeos (fisin). Se piensa que las fusiones son ms frecuentes que las fisiones. ANEUPLOIDIA Se debe a un retraso en la meiosis de un cromosoma, perdiendo dicho cromosoma en la anafase, o a una no disyuncin meitica, en la primera o segunda divisin meitica. En el primer caso, podemos tener en la meiosis, machos con posibles gametos XX, gametos sin cromosomas; mientras que en el segundo caso, tenemos trismicos para X, con individuos a los que les falta el cromosoma X (monosoma). Los individuos nulismicos no suelen manifestarse, puesto que es una condicin de letal en diploides, aunque parece que en trigo, los otros cuatro cromosomas homlogos suplen la falta de los dos cromosomas eliminados. Los complementos cromosmicos monosmicos son perjudiciales, por dos razones. Por un lado, porque ponen de manifiesto genes recesivos deletreos en hemicigosis, y por otro, porque se produce un desequilibrio cromosmico, que ha sido establecido por la evolucin durante millones de aos y necesario para un ajuste sutil de la homeostasis celular. Los efectos son los mismos que en las deleciones. Estos individuos aparecen gracias a procesos de no-disyuncin meitica o mittica, produciendo gametos que son el origen de individuos monosmicos, trismicos y otros aneuploides. La disyuncin es la separacin normal de los cromosomas o cromtidas hacia los polos opuestos de la clula durante la divisin nuclear. La no-disyuncin es un defecto de este proceso y finaliza con dos cromosomas emigrando hacia el mismo polo, mientras que hacia el otro no emigra ninguno. Se producen gametos n+1 y n-1, de forma que si los segundos se combinan con gametos n, obtendremos un individuo 2n-1. Dos gametos n+1 pueden producir un individuos tetrasmico si est implicado el mismo cromosoma, o un doble trismico si son cromosomas diferentes. En los humanos, la monosoma autosmica produce la muerte en el tero, mientras que la monosoma X0, provoca el sndrome de Turner. Los afectados son hembras estriles, de estatura baja y un repliegue membranoso entre el cuello y los hombros. Poseen el pecho con forma de escudo y pezones muy separados, as como ovarios rudimentarios y manchas marrones en las piernas. Su inteligencia se acerca a la normal, poseyendo una frecuencia de 1/5000 en la poblacin. Las trisomas tambin son alteraciones cromosmicas, que pueden dar alguna anormalidad o a la muerte, aunque suelen ser individuos viables, pudiendo ser incluso frtiles. Cuando observamos clulas de individuos trismicos durante el emparejamiento de cromosomas en la meiosis, podemos observar trivalentes (un grupo de tres cromosomas emparejados), mientras que los otros cromosomas presentan bivalentes normales. En la segregacin, tendremos que dos cromosomas emigrarn juntos y otro lo har slo con igual probabilidad para cada uno.

Las trisomas ms frecuentes son; XXY, denominado sndrome de Klinefelter, que produce individuos altos, con fsico ligeramente feminizado, coeficiente intelectual algo reducido, disposicin femenina del vello del pubis, atrofia testicular y desarrollo mamario. Tenemos una mezcla de ambos sexos (individuos ginandromorfos). Tambin podemos encontrar el sndrome de Down, que es la aneuploida ms viable, con un 0.15% de individuos en la poblacin. Es una trisoma del cromosoma 21 (aunque puede producirse por translocacin), que incluye retraso mental (C.I de 20-50), cara ancha y achatada, estatura pequea, ojos con pliegue apicntico y lengua grande y arrugada. Tambin existen aneuploides somticos, que son individuos constituidos por diferentes lneas celulares con diferente nmero de cromosomas. Se denominan quimeras y se producen por una no-disyuncin en la mitosis; al principio del desarrollo puede originarse un individuo mosaico, como los ginandromorfos a nivel sexual. Son individuos con cromosomas de ambos sexos, pudiendo existir individuos X0/XYY o XX/XY. POLIPLOIDES Son individuos que presentan tres o ms conjuntos cromosmicos por ncleo celular. Es relativamente comn en plantas (patata; 4x=48; x=12 y n=24), pero mucho ms infrecuente en animales, dndose en algunos escarabajos y gusanos de tierra. Una caracterstica interesante de los poliploides es el hecho de que la mayora son ms grandes que los individuos diploides correspondientes. El motivo es la determinacin del sexo en animales, que es ms sensible a la poliploida, o la posibilidad de autofertilizacin de las plantas frecuentemente, permitiendo al nuevo poliploide poder reproducirse. Podemos tener autopoliploides, que han recibido todos sus conjuntos cromosmicos a partir de la misma especie y los alopoliploides, que se han originado a partir de conjuntos cromosmicos provenientes de diferentes especies. Podemos conseguir organismos autotetraploides mediante la fertilizacin de un vulo diploide con un grano de polen no reducido (diploide) y alotetraploides, si por ejemplo, un grano de polen diploide de una especie, fertiliza un vulo diploide de una especie prxima. Mientras que en el autopoliploide todos los conjuntos cromosmicos son homlogos, en el alopoliploide los diferentes conjuntos cromosmicos pueden variar ligeramente, de forma que para denotarlo, los denominaremos homelogos o parcialmente homlogos. Los poliploides pueden obtenerse de forma natural, aunque con baja frecuencia, si una clula experimenta mitosis o meiosis anormales. Generalmente, la produccin de un gameto diploide dar lugar al unirse a uno normal, a la aparicin de un organismo triploide. Tambin pueden ser generados artificialmente mediante el uso de colchicina, un agente qumico que interfiere con la formacin de las fibras del huso, provocando el no desplazamiento de los cromosomas hacia los polos y como consecuencia, que se origine un tetraploide. Los organismos con dotaciones pares suelen ser ms viables. En cuanto a los autopoliploides, la mayora de los organismos triploides son de este tipo, pues son resultado de la fertilizacin entre un gameto haploide y otro diploide originado bien por meiosis incorrecta en un organismo diploide, o por una meiosis correcta en un organismo tetraploide. Suelen ser estriles, por el tpico problema del emparejamiento de los cromosomas durante la meiosis. El resultado neto de las posibles formas de emparejamiento

es una segregacin desequilibrada, en la que dos cromosomas emigran en una direccin y uno emigra en la otra, teniendo bivalentes y cromosomas nicos, aunque tambin pueden segregar formando trivalentes. Los gametos presentan la misma probabilidad de recibir uno o dos cromosomas de cada grupo de homlogos, y por tanto, la probabilidad de producir un gameto equilibrado, con n o 2n cromosomas, es (1/2)n-1. La inmensa mayora de gametos, al ser no equilibrados, sern no funcionales. Los organismos tetraploides pueden originarse naturalmente por la duplicacin accidental de un genoma 2x a 4x, y artificialmente usando colchicina. Pueden presentar meiosis normales si sus cromosomas forman bivalentes o tetravalentes, de forma que no presentan tantos problemas a la hora de reproducirse como los triploides. Podemos tener otra posibilidad de segregacin no viable, que sera mediante univalentes y trivalentes. Los alopoliploides son un tipo de poliploides que se originan a partir de conjuntos cromosmicos que provienen de especies diferentes. Podemos destacar el trigo, que es hexaploide y parece descender de tres especies diploides diferentes. En l, el apareamiento en la meiosis se produce entre los cromosomas homlogos de cada grupo, de forma que los productos son gametos equilibrados cada uno con 21 cromosomas. En este grupo, se encuentran la mayora de poliploides naturales, pudiendo generarse cuando un grano de polen A fertiliza una planta u vulo B distinto al de su especie. En general, se producir un hbrido estril AB, el cual, si experimenta en algn momento un error en la mitosis, puede originar clulas tetraploides AABB. Si estas pueden autofertilizarse, ya nos encontramos frente a una planta alopoliploide, que suelen denominarse anfidiploides y que se fijar como especie. Artificialmente, podemos obtenerlos usando colchicina sobre hbridos que sean estriles, para que se produzca un error en la meiosis. Otra forma de obtenerlos es mediante hibridacin de clulas somticas, tratadas con polietilenglicol para que se fusionen con mayor probabilidad. Realizamos suspensiones de clulas de dos especies distintas. Tratamos las clulas de forma enzimtica para hacer fina la pared celular, obteniendo protoplastos. En ocasiones obtendremos fusin de ncleos, obteniendo colonias, constituidas en algunos casos por clulas hbridas semejantes a alopoliploides y que presentan un nmero total de cromosomas igual a la suma del nmero de cromosomas de cada especie. El problema es que no siempre obtenemos los resultados que pretendemos, que es lo que ocurri en la primera experiencia realizada con anfidiploides, en la que se pretenda obtener un hbrido entre rbano y col, de forma que queremos conseguir una planta con hojas de col y races de rbano, pero se consigui lo contrario.

Mutacin
La mutacin en gentica y biologa, es una alteracin o cambio en la informacin gentica (genotipo) de un ser vivo y que, por lo tanto, va a producir un cambio de caractersticas, que se presenta sbita y espontneamente, y que se puede transmitir o heredar a la

Tipos de mutacin segn sus consecuencias

Las consecuencias fenotpicas de las mutaciones son muy variadas, desde grandes cambios hasta pequeas diferencias tan sutiles que es necesario emplear tcnicas muy desarrolladas para su deteccin.2 3

Mutaciones morfolgicas
Afectan a la morfologa del individuo, a su distribucin corporal. Modifican el color o la forma de cualquier rgano de un animal o de una planta. Suelen producir malformaciones. Un ejemplo de una mutacin que produce malformaciones en humanos es aquella que determina la neurofibromatosis. Esta es una enfermedad her ia, relativamente frecuente (1 en 3.000 individuos), producida por una mutacin en el cromosoma 17 y que tiene una penetrancia del 100% y expresividad variable. Sus manifestaciones principales son la presencia de neurofibromas, glioma del nervio ptico, manchas cutneas de color caf con leche, hamartomas del iris, alteraciones seas (displasia del esfenoide, adelgazamiento de la cortical de huesos largos). Con frecuencia hay retardo mental y macrocefalia.

Mutaciones letales y deletreas

Son las que afectan la supervivencia de los individuos, ocasionndoles la muerte antes de alcanzar la madurez sexual. Cuando la mutacin no produce la muerte, sino una disminucin de la capacidad del individuo para sobrevivir y/o reproducirse, se dice que la mutacin es deletrea. Este tipo de mutaciones suelen producirse por cambios inesperados en genes que son esenciales o imprescindibles para la supervivencia del individuo. En general las mutaciones letales son recesivas, es decir, se manifiestan solamente en homocigosis o bien, en hemicigosis para aquellos genes ligados al cromosoma X en humanos, por ejemplo.2 5

Mutaciones condicionales
Son aquellas que slo presentan el fenotipo mutante en determinadas condiciones ambientales (denominadas condiciones restrictivas), mostrando la caracterstica silvestre en las dems condiciones del medio ambiente (condiciones permisivas). Un ejemplo es la mutacin Curly en Drosophila melanogaster que se manifiesta como las puntas de las alas del insecto curvadas hacia arriba. A temperaturas permisivas de 20 a 25 C (las cuales son, por otro lado, las tpicas del cultivo de este organismo) las moscas homocigticas para el factor Curly no se diferencian de las moscas normales. No obstante, bajo condiciones restrictivas de temperaturas menores a 18 C, las moscas Curly manifiestan su fenotipo mutante.5

Mutaciones bioqumicas o nutritivas

Son los cambios que generan una prdida o un cambio de alguna funcin bioqumica como, por ejemplo, la actividad de una determinada enzima. Se detectan ya que el organismo que presenta esta mutacin no puede crecer o proliferar en un medio de cultivo por ejemplo, a no ser que se le suministre un compuesto determinado. Los microorganismos constituyen un material de eleccin para estudiar este tipo de mutaciones ya que las cepas silvestres solo necesitan para crecer un medio compuesto por sales inorgnicas y una fuente de energa

como la glucosa. Ese tipo de medio se denomina mnimo y las cepas que crecen en l se dicen prototrficas. Cualquier cepa mutante para un gen que produce una enzima perteneciente a una va metablica determinada, requerir que se suplemente el medio de cultivo mnimo con el producto final de la va o ruta metablica que se encuentra alterada. Esa cepa se llama auxotrfica y presenta una mutacin bioqumica o nutritiva.6

[ ] Mutaciones de prdida de funcin

Las mutaciones suelen determinar que la funcin del gen en cuestin no se pueda llevar a cabo correctamente, por lo que desaparece alguna funcin del organismo que la presenta. Este tipo de mutaciones, las que suelen ser recesivas, se denominan mutaciones de prdida de funcin. Un ejemplo es la mutacin del gen hTPH2 que produce la enzima triptfano hidroxilasa en humanos. Esta enzima est involucrada en la produccin de serotonina en el cerebro. Una mutacin (G1463A) de hTPH2 determina aproximadamente un 80% de prdida de funcin de la enzima, lo que se traduce en una disminucin en la produccin de serotonina y se manifiesta en un tipo de depresin llamada depresin unipolar.7

[ ] Mutaciones de ganancia de funcin

Cuando ocurre un cambio en el ADN, lo ms normal es que corrompa algn proceso normal del ser vivo. Sin embargo, existen raras ocasiones donde una mutacin puede producir una nueva funcin al gen, generando un fenotipo nuevo. Si ese gen mantiene la funcin original, o si se trata de un gen duplicado, puede dar lugar a un primer paso en la evolucin. Un caso es la resistencia a antibiticos desarrollada por algunas bacterias.

[ ] Tipos de mutacin segn el mecanismo causal

Segn el mecanismo que ha provocado el cambio en el material gentico, se suele hablar de tres tipos de mutaciones: mutaciones cariotpicas o genmicas, mutaciones cromosmicas y mutaciones gnicas o moleculares. En el siguiente cuadro se describen los diferentes tipos de mutaciones y los mecanismos causales de cada una de ellas.2 3 Por sustitucin de bases

molecular

Por inserciones o deleciones de bases

Inversiones

Mutacin cromosmica

Deleciones o duplicaciones

Translocaciones

Poliploida

genmica

Aneuploida

Hay una tendencia actual a considerar como mutaciones en sentido estricto solamente las gnicas, mientras que los otros tipos entraran en el trmino de aberraciones cromosmicas.

Mutacin de ADN

Mutaciones cromosmicas

Tipos de mutaciones cromosmicas

Definicin
Las mutaciones cromosmicas son modificaciones en el nmero total de cromosomas, la duplicacin o supresin de genes o de segmentos de un cromosoma y la reordenacin del material gentico dentro o entre cromosomas. Pueden ser vistas al microscopio, sometiendo a los cromosomas a la tcnica de bandas. De esta manera se podr confeccionar el cariotipo.

[ ] Introduccin
Las alteraciones de la dotacin diploide de cromosomas se denominan aberraciones cromosmicas o mutaciones cromosmicas. Hay 3 tipos de mutaciones cromosmicas: 1. Reordenamientos cromosmicos: implican cambios en la estructura de los cromosomas (duplicacin, delecin, inversin y traslocacin). 2. Aneuploidas:supone un aumento o disminucin en el nmero de cromosomas. 3. Poliploidia: presencia de conjuntos adicionales de cromosomas.

La aneuploidia: da lugar a monosomas, trisomas, tetrasomas, etc. La poliploidia: dotaciones de cromosomas pueden tener orgenes idnticos o distintos, dando lugar a autopoliploides y alopoloploides, respectivamente. Las deleciones y duplicaciones pueden modificar grandes segmentos del cromosoma. Las inversiones y translocaciones dan lugar a una pequea o ninguna prdida de informacin gentica. Los lugares frgiles son constricciones o brechas que aparecen en regiones particulares de los cromosomas con una predisposicin a romperse en determinadas condiciones. El estudio de las series normales y anormales de cromosomas se conoce como citogentica.

[ ] Variacin en el nmero de cromosomas

En las clulas somticas hay un mecanismo que inactiva a todos los cromosomas X menos uno, la ganancia o perdida de un cromosoma sexual en genoma diploide altera el fenotipo normal , dando lugar a los sndromes de Klinefelter o de Turner, respectivamente. Tal variacin cromosmica se origina como un error aleatorio durante la produccin de gametos. La no disyuncin es el fallo de los cromosomas o de las cromatidas en separarse y desplazarse a los polos opuestos en la meiosis. Cuando esto ocurre se desbarata la distribucin normal de los cromosomas en los gametos. El cromosoma afectado puede dar lugar a gametos anormales con dos miembros o con ninguno. La fecundacin de estos con un gameto haploide normal da lugar a zigotos con tres miembros (trisoma) o con solo uno (monosoma) de este cromosoma. La no disyuncin da lugar a una serie de situaciones aneuploides autosmicas en la especie humana y en otros organismos. [ ] Sndrome de Klinefelter El sndrome de Klinefelter se considera la anomala gonosmica ms comn en los humanos. Los afectados presentan un cromosoma X supernumerario lo que conduce a fallo testicular primario con infertilidad e hipoandrogenismo. A pesar de la relativa frecuencia del padecimiento en recin nacidos vivos, se estima que la mitad de los productos 47, XXY se abortan de manera espontnea. [ ] Sndrome de Turner El sndrome de Turner o Monosoma X es una enfermedad gentica caracterizada por presencia de un solo cromosoma X. La falta de cromosoma Y determina el sexo femenino de todos los individuos afectados, y la ausencia de todo o parte del segundo cromosoma X determina la falta de desarrollo de los caracteres sexuales primarios y secundarios. Esto confiere a las mujeres que padecen el sndrome de Turner un aspecto infantil e infertilidad de por vida.

[ ] Aneuploida
La aneuploida es la alteracin en la cantidad de uno de los tipos de cromosomas homlogos.

[ ] Variaciones en estructura y ordenacin de los cromosomas

El otro tipo de aberracin cromosmicas incluye cambios estructurales que eliminan, aaden o reordenan partes sustanciales de uno o ms cromosomas, se encuentran las deleciones y las

duplicaciones de gene o de parte de un cromosoma y las reordenaciones del material gentico mediante las que segmentos de un cromosoma se invierten, se intercambian con un segmento de un cromosoma no homologo o simplemente se transfieren a otro cromosoma. Los intercambios y las transferencias se denominan translocaciones, en las que la localizacin de un gen esta cambiada dentro del genoma. Estos cambios estructurales se deben a una o ms roturas distribuidas a lo largo del cromosoma, seguidas por la prdida o la reordenacin del material gentico. Los cromosomas pueden romperse espontneamente, pero la tasa de roturas puede aumentar en clulas expuestas a sustancias qumicas o a radiacin. Aunque los extremos normales de los cromosomas, los telmeros, no se fusionan fcilmente con extremos nuevos de cromosomas rotos o con otros telmeros, los extremos producidos en los puntos de rotura son pegajosos y pueden reunirse con otros extremos rotos. Si la rotura y reunin no restablece las relaciones originales y si la alteracin se produce en el plasma germinal, los gametos tendrn una reordenacin estructural que ser heredable. Si la aberracin se encuentra en un homologo, pero no en el otro, se dice que los individuos son heterocigotos para la aberracin. En tales casos se producen configuraciones raras en el apareamiento durante la sinapsis meitica. Si no hay prdida o ganancia de material gentico, los individuos que llevan la aberracin en heterocigosis en uno de los dos homlogos probablemente no quedaran afectados en su fenotipo. Los complicados apareamientos de las ordenaciones dan lugar a menudo a gametos con duplicaciones o deficiencias de algunas regiones cromosmicas. Cuando esto ocurre, los descendientes de portadores de ciertas aberraciones tienen a menudo una mayor probabilidad de presentar cambios fenotpicos. [ ] Mutaciones cromosmicas y cncer La mayora de los tumores contienen varios tipos de mutaciones cromosmicas. Algunos tumores se asocian con deleciones, inversiones o translocaciones especficos. 1. Las deleciones pueden eliminar o inactivar los genes que controlan el ciclo celular; 2. Las inversiones y las translocaciones pueden causar rupturas en los genes supresores de tumores, fusionar genes que producen protenas cancergenas o mover genes a nuevas ubicaciones, donde quedan bajo la influencia de diferentes secuencias reguladoras. El papel de las mutaciones en el cncer. Las mutaciones en los genes regulatorios claves (los supresores de tumor y los protooncogenes) alteran el estado de las clulas y pueden causar el crecimiento irregular visto en el cncer. Para casi todos los tipos de cncer que se han estudiado hasta la fecha, parece que la transicin de una clula sana y normal a una clula cancerosa es una progresin por pasos que requiere cambios genticos en varios oncogenes y supresores de tumor diferentes. Esta es la razn por la cual el cncer es mucho ms prevalente en individuos de edades mayores. Para generar una clula cancerosa, una series de mutaciones deben ocurrir en la misma clula. Ya que la probabilidad de que cualquier gen sea mutado es muy baja, es razonable decir que la probabilidad de varias mutaciones en la misma clula es an ms improbable.

[ ] Mutaciones genmicas o numricas

La trisoma en el par cromosmico 21 en los humanos ocasiona el Sndrome de Down Son las mutaciones que afectan al nmero de cromosomas o todo el complemento cromosmico (todo el genoma). Poliploida: Es la mutacin que consiste en el aumento del nmero normal de juegos de cromosomas . Los seres poliploides pueden ser autopoliploides, si todos los juegos proceden de la misma especie, o alopoliploides, si proceden de la hibridacin, es decir, del cruce de dos especies diferentes. Haploida: Son las mutaciones que provocan una disminucin en el nmero de juegos de cromosomas. Aneuploida: Son las mutaciones que afectan slo a un nmero de ejemplares de un cromosoma o ms, pero sin llegar a afectar al juego completo. Las aneuploidas pueden ser monosomas, trisomas, tetrasomas, etc, cuando en lugar de dos ejemplares de cada tipo de cromosomas, que es lo normal, hay o slo uno, o tres, o cuatro, etc. Entre las aneuplodas podemos encontrar diferentes tipos de trastornos genticos en humanos como pueden ser: o Trisoma 21 o Sndrome de Down que tienen 47 cromosomas. o Trisoma 18 o Sndrome de Edwards. Tambin tienen 47 cromosomas. o Monosoma X o Sndrome de Turner. o Trisoma sexual XXX o Sndrome del triple X. o Trisoma sexual XXY o Sndrome de Klinefelter. o Trisoma sexual XYY o Sndrome del doble Y. o Cromosoma extra Sndrome de Down.

[ ] Mutaciones gnicas o moleculares

Son las mutaciones que alteran la secuencia de nucletidos del ADN. Estas mutaciones pueden llevar a la sustitucin de aminocidos en las protenas resultantes (se denominan mutaciones no sinnimas). Un cambio en un solo aminocido puede no ser importante si es

conservativo y ocurre fuera del sitio activo de la protena. As, existen las denominadas mutaciones sinnimas o "mutaciones silenciosas" en las que la mutacin altera la base situada en la tercera posicin del codn pero no causa sustitucin aminoacdica debido a la redundncia del cdigo gentico. El aminocido insertado ser el mismo que antes de la mutacin. Tambin, en el caso de las mutaciones neutras, el aminocido insertado es distinto pero con unas propiedades fisicoqumicas similares, por ejemplo la sustitucion de glutmico por asprtico puede no tener efectos funcionales en la protena debido a que los dos son cidos y similares en tamao. Tambin podran considerarse neutras aquellas mutaciones que afecten a zonas del genoma sin funcin aparente, como las repeticiones en tndem o dispersas, las zonas intergnicas y los intrones.8 De lo contrario, la mutacin gnica o tambin llamada puntual, puede tener consecuencias severas, como por ejemplo: La sustitucin de valina por cido glutmico en la posicin 6 de la cadena polipptidica de la beta-globina da lugar a la enfermedad anemia falciforme en individuos homocigticos debido a que la cadena modificada tiene tendencia a cristalizar a bajas concentraciones de oxgeno. Las protenas del colgeno constituyen una familia de molculas estructuralmente relacionadas que son vitales para la integridad de muchos tejidos incluidos la piel y los huesos. La molcula madura del colgeno est compuesta por 3 cadenas polipeptdicasunidas en una triple hlice. Las cadenas se asocian primero por su extrempo C-terminal y luego se enroscan hacia el extremo N-terminal. Para lograr este plegado, las cadenas de colgeno tienen una estructura repetitiva de 3 aminocidos: glicina - X - Y (X es generalmente prolina y Y puede ser cualquiera de un gran rango de aminocidos). Una mutacin puntual que cambie un solo aminocido puede distorsionar la asociacin de las cadenas por su extremo Cterminal evitando la formacin de la triple hlice, lo que puede tener consecuencias severas. Una cadena mutante puede evitar la formacin de la triple hlice, aun cuando haya 2 monmeros de tipo salvaje. Al no tratarse de una enzima, la pequea cantidad de colgeno funcional producido no puede ser regulada. La consecuencia puede ser la condicin dominante letal osteognesis imperfecta.

[ ] Bases moleculares de la mutacin gnica

Mutacin por sustitucin de bases: Se producen al cambiar en una posicin un par de bases por otro (son las bases nitrogenadas las que distinguen los nucletidos de una cadena). Distinguimos dos tipos que se producen por diferentes mecanismos bioqumicos:8 o Mutaciones transicionales o simplemente transiciones, cuando un par de bases es sustituido por su alternativa del mismo tipo. Las dos bases pricas son adenina (A) y guanina (G), y las dos pirimdicas son citosina (C) y timina (T). La sustitucin de un par AT, por ejemplo, por un par GC, sera una transicin. o Mutaciones transversionales o transversiones, cuando un par de bases es sustituida por otra del otro tipo. Por ejemplo, la sustitucin del par AT por TA o por CG.

Mutaciones de corrimiento estructural, cuando se aaden o se quitan pares de nucletidos alterndose la longitud de la cadena. Si se aaden o quitan pares en un nmero que no sea mltiplo de tres (es decir si no se trata de un nmero exacto de codones), las consecuencias son especialmente graves, porque a partir de ese punto, y no slo en l, toda la informacin queda alterada. Hay dos casos: o Mutacin por prdida o delecin de nucletidos: en la secuencia de nucletidos se pierde uno y la cadena se acorta en una unidad. o Mutacin por insercin de nuevos nucletidos: Dentro de la secuencia del ADN se introducen nucletidos adicionales, interpuestos entre los que ya haba, alargndose correspondientemente la cadena.8 Mutaciones en los sitios de corte y empalme (Splicing) Las mutaciones de corrimiento del marco de lectura tambin pueden surgir por mutaciones que interfieren con el splicing del ARN mensajero. El comienzo y final de cada intrn en un gen estn definidos por secuencias conservadas de ADN. Si un nucletido muta en una de las posiciones altamente conservada, el sitio no funcionar ms, con las consecuencias predecibles para el ARNm maduro y la protena codificada. Hay muchos ejemplos de estas mutaciones, por ejemplo, algunas mutaciones en el gen de la beta globina en la beta talasemia son causadas por mutaciones de los sitios de splicing.

[ ] Mutaciones espontneas o inducidas

Las mutaciones pueden ser espontneas o inducidas. Las primeras son aquellas que surgen normalmente como consecuencia de errores durante el proceso de replicacin del ADN. Tales errores ocurren con una probabilidad de 10 ^ -7 en clulas haploides y 10 ^ -14 en diploides.8 [ ] Mutaciones inducidas Las mutaciones inducidas surgen como consecuencia de la exposicin a mutgenos qumicos o biolgicos o a radiaciones. Entre los mutgenos qumicos se pueden citar: los anlogos de bases del ADN (como la 2-aminopurina), molculas que se parecen estructuralmente a las bases pricas o pirimidnicas pero que muestran propiedades de apareamiento errneas; los agentes alquilantes como la nitrosoguanidina, que reacciona directamente con el ADN originando cambios qumicos en una u otra base y produciendo tambin apareamientos errneos; y, por ltimo, los agentes intercalantes como las acridinas, que se intercalan entre 2 pares de bases del ADN, separndolas entre s. Como mutgenos biolgicos podemos considerar la existencia de transposones o virus capaces de integrarse en el genoma. Las radiaciones ionizantes (rayos X, rayos csmicos y rayos gamma) y no ionizantes (sobre todo la radiacin ultravioleta) tambin inducen mutaciones en el ADN; las primeras se originan por los radicales libres que reaccionan con el ADN inactivndolo, y las segundas aparecen como consecuencia de la formacin de dmeros de pirimidina en el ADN, es decir, como consecuencia de la unin covalente de 2 bases pirimidnicas adyacentes.

Un agente utilizado a menudo para inducir mutaciones (mutagnesis) en organismos experimentales es el EMS (sulfato de etilmetano). Este mutgeno puede alterar la secuencia del DNA de diversas maneras como modificar qumicamente las bases de G en DNA. Esta alteracin en la secuencia de un gen se conoce como mutacin puntual. [ ] Mutaciones espontneas Las principales causas de las mutaciones que se producen de forma natural o normal en las poblaciones son tres: los errores durante la replicacin del ADN, las lesiones o daos fortuitos en el ADN y la movilizacin en el genoma de los elementos genticos transponibles.
[ ] Errores en la replicacin

Durante la replicacin del ADN pueden ocurrir diversos tipos de errores que conducen a la generacin de mutaciones. Los tres tipos de errores ms frecuentes son: La tautomera: las bases nitrogenadas se encuentran habitualmente en su forma cetnica y con menos frecuencia aparecen en su forma tautomrica enlica o imino. Las formas tautomricas o enlicas de las bases nitrogenadas (A*, T*, G* y C*) muestran relaciones de apareamiento distintas que las formas cetnicas: A*-C, T*-G, G*-T y C*-A. El cambio de la forma normal cetnica a la forma enlica produce transiciones. Los errores en el apareamiento incorrecto de las bases nitrogenadas pueden ser detectados por la funcin correctora de pruebas de la ADN polimerasa III. Las mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura: se trata de inserciones o deleciones de uno o muy pocos nucletidos. Segn un modelo propuesto por Streisinger, estas mutaciones se producen con frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En las regiones con secuencias repetidas, por ejemplo, TTTTTTTTTT..., o por ejemplo, GCGCGCGCGCGCG...., durante la replicacin se puede producir el deslizamiento de una de las dos hlices (la hlice molde o la de nueva sntesis) dando lugar a lo que se llama "apareamiento errneo deslizado". El deslizamiento de la hlice de nueva sntesis da lugar a una adicin, mientras que el deslizamiento de la hlice molde origina una delecin. En el gen lac I (gen estructural de la protena represora) de E. coli se han encontrado puntos calientes (regiones en las que la mutacin es muy frecuente) que coinciden con secuencias repetidas: un ejemplo es el punto caliente CTGG CTGG CTGG. Deleciones y duplicaciones grandes: las deleciones y duplicaciones de regiones relativamente grandes tambin se han detectado con bastante frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En el gen lac I de E. coli se han detectado deleciones grandes que tienen lugar entre secuencias repetidas. Se cree que estas mutaciones podran producirse por un sistema semejante al propuesto por Streisinger ("Apareamiento errneo deslizado") o bien por entrecruzamiento desigual.8
Lesiones o daos fortuitos en el ADN

Pueden darse tres tipos de daos fortuitos en el ADN: La despurinizacin consiste en la ruptura del enlace glucosdico entre la base nitrogenada y el azcar al que est unida con prdida de una adenina o de una guanina . Como consecuencia aparecen sitios apurnicas (o sea, sin bases pricas). Existe un sistema de reparacin de este tipo de lesiones en el ADN. Este tipo de lesin es la ms

recurrente o frecuente: se estima que se produce una prdida de 10.000 cada 20 horas a 37 C. La desaminacin consiste en la prdida de grupos amino. La citosina por desaminacin se convierte en uracilo y el uracilo empareja con adenina producindose transiciones: GCAT. El uracilo no forma parte del ADN, existindo un enzima llamada glucosidasa de uracilo encargada de detectar la presencia de este tipo de base en el ADN y retirarlo. Al retirar el uracilo se produce una sede o sitio apirimidnica. La 5-Metil-Citosina (5-Me-C) por desaminacin se convierte en Timina (T). La Timina (T) es una base normal en el ADN y no se retira, por tanto estos errores no se reparan. Este tipo de mutacin tambin genera transiciones. Los daos oxidativos en el ADN. El metabolismo aerbico produce radicales superoxido O2, perxido de hidrgeno H2O2 e hidroxilo. Estos radicales producen daos en el ADN, y una de las principales alteraciones que originan es la transformacin de la guanina en 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina que aparea con la Adenina. La 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina recibe el nombre abreviado de 8-oxoG. Esta alteracin del ADN produce transversiones: GCTA.8

[ ] Elementos genticos transponibles

Los elementos genticos transponibles son secuencias de ADN que tienen la propiedad de cambiar de posicin dentro del genoma, por tal causa tambin reciben el nombre de elementos genticos mviles. Por tanto, cuando cambian de posicin y abandonan el lugar en el que estaban, en ese sitio, se produce un delecin o prdida de bases. Si el elemento transponible estaba insertado en el interior de un gen, puede que se recupere la funcin de dicho gen. De igual forma, si el elemento gentico mvil al cambiar de posicin se inserta dentro de un gen se produce una adicin de una gran cantidad de nucletidos que tendr como consecuencia la prdida de la funcin de dicho gen. Por consiguiente, los elementos genticos transponibles producen mutaciones. Su existencia fue propuesta por Barbara McClintock (1951 a 1957) en el maz. Sin embargo, su existencia no se demostr hasta mucho ms tarde en bacterias. En el fenmeno de la transposicin no se ha encontrado una relacin clara entre la secuencia de la sede donadora (lugar en el que est el transposn) y la sede aceptora (lugar al que se incorpora el transposn). Algunos transposones muestran una preferencia por una determinada regin (zona de 2000 a 3000 pares de bases), pero dentro de ella parecen insertarse al azar. Transposones en Bacterias En Bacterias existen dos tipos de transposones: Transposn Simple, Secuencia de Insercin o Elemento de Insercin (IS): los transposones simples contienen una secuencia central con informacin para la transposasa y en los extremos una secuencia repetida en orden inverso. Esta secuencia repetida en orden inverso no es necesariamente idntica, aunque muy parecida. Cuando un transposn simple se integra en luna determinado punto del ADN aparece una repeticin directa de la secuencia diana (5-12 pb). Transposn Compuesto (Tn): contienen un elemento de insercin (IS) en cada extremo en orden directo o inverso y una regin central que adems suele contener

informaciin de otro tipo. Por ejemplo, los Factores de transferencia de resistencia (RTF), poseen informacin en la zona central para resistencia a antibiticos (cloranfenicol, kanamicina, tetraciclina, etc.). Tanto los elementos IS como los transposones compuestos (Tn) tienen que estar integrados en otra molcula de ADN, el cromosoma principal bacteriano o en un plasmidio, nunca se encuentran libres. Transposones en eucariotas Transposones en plantas Los transposones fueron descubiertos por Barbara McClintock (entre 1951 y 1957) en maz, sin embargo, cuando postul su existencia la comunidad cientfica no comprendi adecuadamente sus trabajos. Aos ms tarde, ella misma compar los "elementos controladores" que haba descrito (elementos cromosmicos transponibles) de maz con los transposones de los plasmidios. Sus trabajos recibieron el Premio Nobel en 1983. Dentro de las familias de elementos controladores de maz se pueden distinguir dos clases: Los elementos autnomos: capaces de escindirse de la sede donadora y transponerse. Los elementos no autnomos: son estables, y solamente se vuelven inestables en presencia de los autnomos en posicin trans. En el sistema Ac-Ds (Activador-Disociacin) estudiado por McClintock, Ac es el elemento autnomo y Ds es el elemento no autnomo. Adems del sistema Ac-Ds en maz se han descrito otros sistemas como el Mu (Mutador), sistema Spm (Supresor-Mutador), sistema Rstippled y sistema MrRm. Tambin se han encontrado transposones en otras especies de plantas, tales como en la "boca de dragn" o "conejito" (Anthirrhinum majus), en Petunia y en soja (Glycine max), etc.. Transposones en mamferos En mamferos se conocen tres clases de secuencias que son capaces de transponerse o cambiar de posicin a travs de un ARN intermediario: Retrovirus endgenos: semejantes a los retrovirus, no pueden infectar nuevas clulas y estn restringidos a un genoma, pero pueden transponerse dentro de la clula. Poseen largas secuencias repetidas en los extremos (LTR), genes env (con informacin para la protena de la cubierta) y genes que codifican para la trasnrciptasa inversa, como los presentes en retrovirus. Retrotransposones o retroposones: carecen de LTR y de los genes env (con informacin para la protena de la cubierta) de retrovirus. Contienen genes para la transcriptasa inversa y pueden transponerse. Tienen una secuencia rica en pares A-T en un extremo. Un ejemplo, son los elementos LINE-1 (elementos largos dispersos) en humanos y ratones. Retropseudogenes: carecen de genes para la transcriptasa inversa y por consiguiente son incapaces de transponerse de forma independiente, aunque si pueden cambiar de posicin en presencia de otros elementos mviles que posean informacin para la trasncriptasa inversa. Poseen una regin rica en pares A-T en un extremo y los hay de dos tipos:

Pseudogenes procesados: estn en bajo nmero de copias y derivan de genes transcritos por la ARN Poilimerasa II, siendo genes que codifican para polipptidos. Estos pseudogenes procesados carecen de intrones. SINES (elementos cortos dispersos): estn en alto nmero de copias en mamferos. Dos ejemplos son la secuencia Alu de humanos y B1 de ratn, que derivan de genes transcritos por la ARN polimerasa III utilizando un promotor interno. La secuencia Alu es la ms abundante en el genoma humano, existiendo 750.000 copias dispersas por el genoma, aproximadamente existe una copia cada 4000 pb. Esta secuencia posee un contenido relativamente alto en (G+C) y presenta una elevada homologa (70-80%) con la secuencia B1 de ratn. Se la denomina secuencia Alu por poseer en su interior una diana para la endonucleasa de restriccin Alu. Las secuencias Alu humanas tienen alrededor de 280 pb y estn flanqueadas por repeticiones directas cortas (6-18 pb). Una secuencia tpica Alu es un dmero repetido en tandem, la unidad que se repite tiene un tamao aproximado de 120 pb y va seguida de una corta secuencia rica en pares A-T. Sin embargo, existe una asimetra en las unidades repetidas, de manera que la segunda unidad contiene una secuencia de 32 pb ausente en la primera. Las unidades repetidas de la secuencia Alu muestran un elevado parecido con la secuencia del ARN 7SL, un componente que juega un papel importante en el transporte de las protenas a travs de la membrana del retculo endoplasmtico.

Dominancia y recesividad de las mutaciones

[ ] La mayora de las mutaciones son recesivas La mayora de las mutaciones son recesivas debido a que la mayor parte de los genes codifica para enzimas. Si un gen es inactivado la reduccin en el nivel de actividad de la enzima puede no ser superior al 50% ya que el nivel de transcripcin del gen remanente puede aumentarse por regulacin en respuesta a cualquier aumento en a concentracin del sustrato. Asimismo, la protena en si misma puede estar sujeta a regulacin (por fosforilacin, por ejemplo) de tal forma que su actividad pueda ser aumentada para compensar cualquier falta en el nmero de molculas. En cualquier caso, a menos que la enzima controle la velocidad del paso limitante en la ruta bioqumica, una reduccin en la cantidad de producto puede no importar. l fenotipo. Esta enfermedad es causada por mutaciones en el gen que codifica para la enzima fenilalanina hidroxilasa, la cual convierte el aminocido fenilalanina a tirosina. Si un individuo es homocigota para alelos que eliminen completamente cualquier actividad de esta enzima, la fenilalanina no podr ser metabolizada y aumentar sus niveles en sangre hasta un punto en el cual comienza a ser daina para el cerebro en desarrollo. Es de rutina determinar esta condicin en los recin nacidos mediante el anlisis de una pequea gota de sangre (Test Guthrie). Este estudio ha revelado que existen pocas personas con una condicin conocida como Hiperfenilalaninemia Benigna. Estos individuos tienen niveles moderadamente altos fenilalanina en sangre. Sus niveles de fenilalanina hidroxilasa constituyen aproximadamente el 5% del normal. A pesar de esto, son aparentemente perfectamente saludables y no sufren de las anormailidades cerebrales causadas por la falta total de la actividad enzimtica.

Mutaciones dominantes
Haploinsuficiencia

En este caso, la cantidad de producto de un gen no es suficiente para que el metabolismo sea el normal. Quizs la enzima producida sea la responsable de regular la velocidad del paso limitante en una reaccin de una ruta metablica. La telangiectasia hemorrgica her ia es una displasia vascular autosmica dominante que lleva a telangiectasias y malformaciones arteriovenosas de la piel, mucosas y vsceras, provocando ocasionalmente la muerte por sangrados incontrolados. Est causada por una mutacin en el gen ENG, que codifica para la endoglina, protena receptora del factor beta transformante de crecimiento (TGF-beta). Quizs el TGF-beta no sea capaz de ejercer un efecto suficiente en las clulas cuando slo est presente la mitad de la cantidad normal del receptor.9 10 11
[ ] Efecto dominante negativo

Ciertas enzimas tiene una estructura multimrica (compuesta por varias unidades) y la insercin de un componente defectuoso dentro de esa estructura puede destruir la actividad de todo el complejo. El producto de un gen defectuoso, entonces, interfiere con la accin del alelo normal. Ejemplos de este efecto son las mutaciones que causan la osteognesis imperfecta y ciertos tumores intestinales.12 13
[ ] Ganancia de funcin

Es imposible imaginar que por una mutacin un gen pueda ganar una nueva atividad, pero quiz el sitio activo de una enzima pueda ser alterado de tal forma que desarrolle especificidad por un nuevo sustrato. Si esto es as, cmo puede ocurrir la evolucin? Ejemplos en gentica humana de genes con 2 alelos tan diferentes son raras pero un ejemplo est dado por el locus ABO. La diferencia entre los loci A y B est determinada por 7 cambios nucleotdicos que llevaron a cambios en 4 aminocidos. Probablemente slo uno de estos cambios es responsable del cambio en especificidad entre las enzimas alfa-3-N-acetilD-galactosaminiltransferasa (A) y alfa-3-D-galactosiltransferasa. Tambin hay muchos ejemplos de la evolucin humana donde muchos genes se han duplicado y en consecuencia han divergido en sus especificidades por el sustrato. En el cromosoma 14 hay un pequeo grupo de 3 genes relacionados, alfa-1-antitripsina (AAT), alfa-1-antiquimotripsina (ACT) y un gen relacionado que ha divergido de tal forma que probablemente ya no sea funcional. Las relaciones estructurales entre AAT y ACT son muy obvias y ambos son inhibidores de proteasas, pero ahora claramente cumplen roles levemente diferentes debido a que tienen diferentes actividades contra un rango de proteasas y estn bajo una regulacin diferente.
[ ] Dominancia a nivel organsmico pero recesividad a nivel celular

Algunos de los mejores ejemplos de esto se ecuentran en el rea de la gentica del cncer. Un ejemplo tpico sera el de un gen supresor de tumor como en retinoblastoma.

Tasas de mutacin
Las tasas de mutacin han sido medidas en una gran variedad de organismos. En mamferos la tasa de mutacin de 1 en 2.2 * 109 bases ncleotdicas,14 mientras que, en el otro extremo de la escala los virus de ARN tienen una tasa de mutacin del orden de 1 en 106.15 La cantidad de mutaciones tiene relacin con el tipo de enzima involucrada en la copia del material gentico. Esta enzima (ADN o ARN Polimerasa, segn el caso) tiene distintas tasas

de error y esto incide directamente en el nmero final de mutaciones. A pesar de que la incidencia de las mutaciones es relativamente grande en relacin con el nmero de organismos de cada especie, la evolucin no depende solo de las mutaciones que surgen en cada generacin, sino de la interaccin de toda esta acumulacin de variabilidad con la seleccin natural y la deriva gentica durante la evolucin de las especies.

Mutaciones y polimorfismos
Las mutaciones pueden considerarse patolgicas o anormales, mientras que los polimorfismos son variaciones normales en la secuencia del ADN entre unos individuos a otros y que superan el uno por ciento en la poblacin, por lo que no puede considerarse patolgico. La mayora de los polimorfismos proceden de mutaciones silentes.

Mutacin y evolucin
Las mutaciones son la materia prima de la evolucin. La evolucin tiene lugar cuando una nueva versin de un gen, que originalmente surge por una mutacin, aumenta su frecuencia y se extiende a la especie gracias a la seleccin natural o a tendencias genticas aleatorias (fluctuaciones casuales en la frecuencia de los genes). Antes se pensaba que las mutaciones dirigan la evolucin, pero en la actualidad se cree que la principal fuerza directora de la evolucin es la seleccin natural, no las mutaciones. No obstante, sin mutaciones las especies no evolucionaran. La seleccin natural acta para incrementar la frecuencia de las mutaciones ventajosas, que es como se produce el cambio evolutivo, ya que esos organismos con mutaciones ventajosas tienen ms posibilidades de sobrevivir, reproducirse y transmitir las mutaciones a su descendencia. La seleccin natural acta para eliminar las mutaciones desventajosas; por tanto, est actuando continuamente para proteger a la especie de la decadencia mutacional. Sin embargo, la mutacin desventajosa surge a la misma velocidad a la que la seleccin natural la elimina, por lo que las poblaciones nunca estn completamente limpias de formas mutantes desventajosas de los genes. Esas mutaciones que no resultan ventajosas pueden ser el origen de enfermedades genticas que pueden transmitirse a la siguiente generacin. La seleccin natural no acta sobre las mutaciones neutrales, pero las mutaciones neutrales pueden cambiar de frecuencia por procesos aleatorios. Existen controversias sobre el porcentaje de mutaciones que son neutrales, pero generalmente se acepta que, dentro de las mutaciones no neutras, las mutaciones desventajosas son mucho ms frecuentes que las mutaciones ventajosas. Por tanto, la seleccin natural suele actuar para reducir el porcentaje de mutaciones al mnimo posible; de hecho, el porcentaje de mutaciones observado es bastante bajo.

|Mutacin y cncer
El cncer est causado por alteraciones en oncogenes, genes supresores de tumores y/o genes de micro ARN. Un solo cambio gentico es usualmente insuficiente para que se desarrolle un tumor maligno. La mayor parte de la evidencia indica que tal desarrollo involucra un proceso de varios pasos secuenciales en los cuales ocurren alteraciones en varios, frecuentemente

muchos, de estos genes.16 Un oncogn es un gen que, cuando es desregulado, participa en el inicio y desarrollo del cncer. Las mutaciones gnicas que dan como resultado la activacin de los oncogenes incrementan la posibilidad de que una clula normal se convierta en una clula tumoral. Desde la dcada de los '70 se han identificado docenas de oncogenes en los seres humanos. Los oncogenes, al menos en sentido figurado, son los perpetuos antagonitas de los genes supresores tumorales, los cuales actan previniendo el dao del ADN y mantienen las funciones celulares bajo un equilibrado control. Existe mucha evidencia que apoya la nocin de que la prdida o inactivacin por mutaciones puntuales de los genes supresores de tumores puede llevar a una clula a transformarse en cancerosa.17 Los oncogenes se originan a partir de mutaciones en genes normales, llamados proto-oncogenes. Los proto-oncogenes usualmente codifican para protenas que ayudan a regular el ciclo celular o la diferenciacin celular y se hallan frecuentemente involucrados en la transduccin de seal y en la ejecucin de seales mitognicas.<.18 Se ha descubierto, por otro lado, que los micro ARNs (pequeos ARNs de 20 a 25 nuclotidos de longitud) pueden controlar la expresin de los oncogenes regulndolos negativamente.19 Por esa razn, las mutaciones en los micro ARNs pueden llevar a la activacin de los oncogenes.20

Hipermutacin somtica
Artculo principal: Hipermutacin somtica

La hipermutacin somtica (o SHM, por sus siglas en ingls) es un mecanismo celular, que forma parte del modo en cmo se adapta el sistema inmune a nuevos elementos extraos (por ejemplo bacterias). Su funcin es diversificar los receptores que usa el sistema inmunitario para reconocer elementos extraos (antgeno) y permite al sistema inmune adaptar su respuesta a las nuevas amenazas que se producen a lo largo de la vida de un organismo.21 La hipermutacin somtica implica un proceso de mutacin programada que afecta a las regiones variables de los genes de inmunoglobulina. A diferencia de muchos otros tipos de mutacin, la SHM afecta solo a clulas inmunitarias individuales y sus mutaciones, por lo tanto, no se trasmiten a la descendencia.21

Diferentes tipos de mutacin

La mutacin se define tradicionalmente como una modificacin en la informacin gentica, producida por un cambio brusco y de tipo her io, interviniendo uno o varios caractres. Sin embargo, la puesta en evidencia del ADN como soporte qumico de la informacin gentica y la posibilidad de acceder al conocimiento especfico de la secuencia de nucleotidos que caracteriza cada cromosoma a llevado a proponer una nueva definicin: Todo cambio que afecta la sequencia de nucleotidos es una mutacin22 .

Mutaciones y Gentica de Poblaciones

Ademas, a nivel de la gentica de poblacin se define como un error en la reproduccin conforme al mensaje her io. Ella va a transformar un alelo en otro, nuevo o ya existente en la poblacin. El rol de la mutacin en la evolucin es primordial, porque es la nica fuente de genes nuevos. Sin embargo, una vez que un nuevo gen ha aparecido en la poblacin, ya no es l mismo quien va a determinar su futuro: si este nuevo alelo es ms favorable o desfavorable

que los antiguos, ser la Seleccin natural que va a determinar la evolucin posterior de su frecuencia en la poblacin 23 . A nivel de poblacin, la persistencia depende de la mantencin de la informacin gentica. Para lograr esto, los organismos intentan disminuir la tasa de mutacin y limitar las mutaciones deletereas. Sin embargo, la adaptacin a nuevas situaciones necesita un cierto nivel de variacin gentica para obtener mutaciones raras y benficas. El numero de mutaciones de una poblacin es determinado por el tamao de ella, ademas de la tasa de mutacin del organismo. En consecuencia, para todo tamao de poblacin determinado, un organimos deber desarrollar una tasa de mutacin que optimise entre las mutaciones deletereas comunes, y las raras mutaciones beneficiosas, que aumentan la fitness a largo plazo. La relacin optima entre costo y beneficio deber cambiar de acuerdo a las circunstancias y los habitos de vida. Una tasa de mutacin elevada podria ser ms costosa para un organismo bien adaptado a su medioambiente constante, que para un organismo mal adaptado a un medioambiente que esta en continuo cambio 24 . De cualquier manera y en general, la tasa de mutacin es minimizada por la seleccin. Hay, por otro lado, argumentos teoricos que muestran que las mutaciones pueden ser seleccionados positivamente por el hecho de crecer en un medioambiente determinado, donde la seleccin necesita de mutantes raros repetidos y que la variabilidad gentica es limitada. Esto sucede cuando la poblacin es pequea y los mutantes raros pueden ofrecer una ventaja selectiva (por ejemplo resistencia a los antibiticos) ms importante que el costo selectivo para la fitness. Por ejemplo, en el caso de VIH, numerosas mutaciones aleatorias se producen a cada ciclo de la replicacin viral, debido a la poca fidelidad que posee la transcriptasa inversa durante la transcripcin. Algunas de estas mutaciones seran seleccionadas, por la presin que ejercen los Linfocitos T Citotoxicos (CTL) especificos para los epitopes salvajes. O las respuestas citotoxicas tempranas parecen tener una actividad anti-viral ms eficaz, y el escape a esta respuesta explicaria la progresin vira

Transferencia horizontal de genes

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La transferencia de genes horizontal (TGH), tambin conocida como transferencia de genes lateral (TGL), es un proceso en el que un organismo transfiere material gentico a otra clula que no es descendiente. Por el contrario, la transferencia vertical ocurre cuando un organismo recibe material gentico de sus ancestros, por ejemplo de sus padres o de una especie de la que ha evolucionado. La mayora de los estudios sobre gentica se han centrado en la prevalencia de la transferencia vertical, pero actualmente existen evidencias que indican que la transferencia horizontal es un fenmeno significativo [1]. La transferencia artificial de genes horizontal es una forma de ingeniera gentica.

[ ] Descripcin
"Cada vez ms, los estudios sobre genes y genomas indican que una considerable transferencia de genes horizontal ha ocurrido entre los procariotas". [2] "Mientras que la transferencia de genes horizontal es un fenmeno conocido entre las bacterias, no ha sido hasta los ltimos 10 aos que su existencia ha sido reconocida para las plantas complejas y los animales. El mbito de la transferencia de genes horizontal es esencialmente toda la biosfera, donde las bacterias y los virus actan tanto como intermediarios del trfico de genes y como almacenes para la multiplicacin y recombinacin de genes (el proceso de creacin de nuevas combinaciones de material gentico)". [3] La transferencia de genes horizontal se trata de publicitar equivocadamente entre algunos grupos como "El nuevo paradigma de la Biologa" [4]; aunque para la comunidad cientfica sera solo otro mecanismo biolgico ms de la evolucin biolgica, que tambin produce variacin gentica. Igualmente se utiliza como argumento de "Los peligros ocultos de la ingeniera gentica".

[ ] TGH en Procariotas
La transferencia de genes horizontal es comn entre las bacterias, incluso entre aquellas que son distantes. Este proceso es el principal mecanismo de expansin de los genes de resistencia a antibiticos. Cuando una clula bacteriana consigue esta resistencia, puede transferir rpidamente estos genes a otras especies. Bacterias entricas intercambian material gentico a travs del aparato digestivo en el que viven. Existen 3 mecanismos comunes de transferencia de genes horizontal: Transformacin, la alteracin gentica de la clula resultante por la introduccin, absorcin y expresin del material gentico (DNA o RNA) del entorno, que puede quedar libre como consecuencia de lisis celulares. Este proceso es relativamente comn en las bacterias, pero menos comn en los eucariotas. La transformacin normalmente se usa para insertar nuevos genes en bacterias para experimentos, o para aplicaciones industriales y mdicas. Vase tambin biologa molecular y biotecnologa. Transduccin: Es el proceso por el que el ADN de una bacteria pasa a otra a travs de un virus bacteriano (un bacterifago). Conjugacin bacteriana, un proceso por el que una clula bacteriana viva transfiere material gentico a travs del contacto con otra clula mediante una estructura proteica que se conoce como pilus y a travs de la formacin de un puente de conjugacin que conecta los citosoles de ambos organismos.

[ ] TGH en Eucariotas
El anlisis de secuencias de ADN sugiere que la transferencia de genes horizontal tambin ha ocurrido entre los eucariotas, desde su cloroplasto y el genoma mitocondrial hasta el genoma nuclear. Como se afirma en la teora endosimbitica, los cloroplastos y las mitocondrias se originaron probablemente como endosimbiosis de un progenitor con una clula eucariota. La transferencia de genes horizontal de las bacterias a algunos hongos est muy bien

documentada, especialmente la levadura Saccharomyces cerevisiae. Tambin hay evidencias recientes de que el escarabajo de la juda adzuki ha conseguido material gentico de su endosimbiosis (sin beneficio) con la Wolbachia. Sin embargo, esta afirmacin es discutida y la evidencia no es concluyente. "La comparacin de secuencias sugiere la gran y reciente transferencia de genes horizontal entre muchas especies, incluso a travs de las fronteras de los dominos filogenticos. As, determinar la historia filogentica de una especie no puede hacerse en todos los casos, slo determinando los rboles de evolucin de cada gen" por separado. [5]; por lo que igualmente se utiliza la comparacin entre los resultados obtenidos de varios genes, para evitar este problema.