La ingeniera gentica, tambin llamada biogentica es la tecnologa del control y transferencia de ADN de un organismo a otro, lo que posibilita la creacin

de nuevas especies, la correccin de defectos genticos y la fabricacin de numerosos compuestos.

Planta de tabaco que expresa el gen de la luciferasa de lucirnaga.

Manipulacin gentica.

Aparicin de la Ingeniera Gentica

Los granos de trigo modificados genticamente con bacterias como las que colonizaron esta placa de Petri son casi inmunes contra una enfermedad mictica que destruye las races. El gel de secuenciacin en el fondo muestra el cdigo gentico de las enzimas bacterianas que sintetizan antibiticos naturales.

En 1953 se descubri el fenmeno llamado de restriccin: ciertos fagos (virus bacteriano) que parasitan a E. coli podan desarrollarse en ciertas cepas de esta bacteria, pero no podan hacerlo en otras (se dice que estn "restringidos" en determinadas cepas). A finales de los 60, Werner Arber, en Basilea, descubre las enzimas de restriccin responsables de ese fenmeno: la cepa de bacteria restrictiva produce unas endonucleasas ("enzimas de restriccin, o restrictasas") que escinden el ADN del fago crecido en otra cepa diferente. Esas primeras enzimas de restriccin eran inespecficas en cuanto al sitio del ADN donde cortaban, pero en 1970 Hamilton O. Smith, en Baltimore, descubre un nuevo tipo de enzima de restriccin totalmente especfica: capaz de reconocer una determinada secuencia de ADN, de unos pocos pares de bases, y de cortar en ambas cadenas en lugares concretos. En 1972, Mertz y Davis aadieron a una mezcla de ADN de diferentes orgenes una enzima ADN-ligasa, procurando que se reparasen los enlaces fosfodister. Y esto les hizo darse cuenta de que podan constituir la base para la produccin de molculas recombinantes in vitro, con material gentico de diferentes especies. Pero este ADN recombinante, generado en el tubo de ensayo, es inerte, no es ms que una macromolcula hbrida que por s sola no hace nada. Si queremos que el ADN recombinante haga algo, hay que introducirlo en clulas vivas que sean capaces de expresar su informacin gentica. Esto nos lleva ya a la idea de lo que es la Ingeniera Gentica: la formacin in vitro de nuevas combinaciones de material gentico, por medio de la insercin de un ADN de inters en un vehculo gentico (vector), de modo que tras su introduccin en un organismo hospedero el ADN hbrido (recombinante) se pueda multiplicar, propagar, y eventualmente expresarse.

Experimento de Ingeniera Gentica

Un experimento de Ingeniera Gentica podra ser: 1. Se corta por separado el ADN del organismo a estudiar y el ADN del vector con la misma restrictasa, de modo que se generan extremos compatibles entre s (mutuamente cohesivos). 2. Se juntan ambos ADN y se les aade ADN-ligasa: de esta forma, las uniones entre ADN pasajero y ADN del vector se sellan mediante un enlace covalente, generndose molculas hbridas (quimricas o recombinantes). 3. Ahora hay que introducir las molculas generadas en los organismos husped. En el caso de bacterias se recurre a una tcnica sencilla denominada transformacin, que permite la entrada del ADN a travs de las envueltas del microorganismo. 4. Finalmente, hay que localizar las bacterias que han captado el ADN que ha entrado. A menudo este es el paso ms laborioso, pero el hecho de que el vector posea uno o varios genes de resistencia favorece al menos la eliminacin de las bacterias que no

han recibido ADN del vector: basta aadir al medio de cultivo el antibitico para el que el vector confiere resistencia. Para localizar los transformantes recombinantes, muchos vectores incorporar un gen marcador que produce alguna sustancia coloreada. Si insertamos el gen a aislar dentro de ese marcador, lo rompemos, por lo que las colonias bacterianas no producirn la sustancia coloreada, sino que permanecen incoloras o blancas. 5. El resultado del experimento es la obtencin de al menos una colonia (clon) de bacterias que portan la combinacin buscada de vector con el inserto de ADN pasajero. Se dice entonces que hemos clonado dicho ADN. En 1973 los investigadores Stanley Cohen y Herbert Boyer producen el primer organismo recombinando partes de su ADN en lo que se considera el comienzo de la ingeniera gentica. En 1997 se clona el primer mamfero, la Oveja Dolly. Actualmente la Ingeniera Gentica est trabajando en la creacin de tcnicas que permitan solucionar problemas frecuentes de la humanidad como, por ejemplo, la escasez de donantes para la urgencia de trasplantes. En este campo se estn intentando realizar cerdos transgnicos que posean rganos compatibles con los del hombre. El ADN es una base fundamental de informacin que poseen todos los organismos vivos, hasta el ms simple y pequeo. Esta informacin est a su vez dividida en determinada cantidad espacios llamado loci (plural) o locus (singular); que es donde se encuentran insertados los genes, que varan dependiendo de la especie. A su vez, cada gen contiene la informacin necesaria para que la clula sintetice una protena, por lo que el genoma y, en consecuencia, el proteoma, van a ser los responsables de las caractersticas del individuo. Los genes controlan todos los aspectos de la vida de cada organismo, incluyendo metabolismo, forma, desarrollo y reproduccin. Por ejemplo, una protena X har que en el individuo se manifieste el rasgo de "pelo oscuro", mientras que la protena Y determinar el rasgo de "pelo claro". Vemos entonces que la carga gentica de un determinado organismo no puede ser idntica a la de otro, aunque se trate de la misma especie. Sin embargo, debe ser en rasgos generales similar para que la reproduccin se pueda concretar, ya que una de las propiedades ms importantes del ADN, y por la cual se ha dicho que fue posible la evolucin, es la de dividirse y fusionarse con el ADN de otro individuo de la misma especie para lograr descendencia diversificada. Otra particularidad de esta molcula es su universalidad. A raz del concepto de gen, surgen algunas incgnitas: Son compatibles las cargas genticas de especies distintas? Puede el gen de una especie funcionar y manifestarse en otra completamente distinta? Se puede aislar y manipular el ADN?

Tcnicas

La ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas, entre las que destacan:

La tecnologa del ADN recombinante; La secuenciacin del ADN; La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).

La tecnologa del ADN recombinante

A. tumefaciens adhirindose a una clula de zanahoria. Con la que es posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en otro. Si se quieren unir dos ADNs, cada uno de los cuales procede de una especie diferente podemos utilizar dichas enzimas como herramientas. Cada ADN se trata con una endonucleasa de restriccin que origina en este caso un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN. Los extremos escalonados del ADN1 y el ADN2 son complementarios, con lo cual, una condicin que tiene que tener los dos ADNs que se quiere unir es que tengan un pequeo fragmento igual en sus secuencias. Los dos DNAs as cortados se mezclan, se calientan y s enfran suavemente. Sus extremos cohesivos se aparearn dando lugar a un nuevo ADN recombinado, con uniones no covalentes. Las uniones covalentes se consiguen aadiendo ADN ligasa y una fuente energtica para formar los enlaces. Otra enzima clave para unir ADNs es la transferencia terminal, que puede adicionar muchos residuos de desoxirribonucletidos sucesivos al extremo 3de las hebras del ADN. De este modo pueden construirse colas de poli G (nucletico de guanina) en los extremos 3 de las dos hebras de ADN dplex y colas de poli C (nucletico de citosina) en los extremos del otro ADN. Como estas colas son complementarias, permitirn que los dos ADNs se unan por complementariedad. Posteriormente, se forman los enlaces covalentes por el ADN ligasa.

El ADN vector es el vehculo de clonacin, ya que transporta el inserto de ADN a una molcula hospedadora, donde puede ser replicado. Los vectores o transportadores ms utilizados son los plsmidos y el ADN del fago lambda. Plsmidos: Estos son pequeos ADNs de cadena doble y circular, que se encuentran en el citoplasma de la mayora de las bacterias. Cada plsmido contiene varios genes que se replican, transcriben y traducen independientemente de los genes del cromforo bacteriano, pero simultneamente en el tiempo. Se pueden unir genes extraos a los plsmidos con mucha facilidad, y despus ser transportados como pasajeros al interior de las clulas de E. coli. ADN del fago lambda. Es otro vector que puede ser utilizado para introducir genes en bacterias. Cuando el ADN recombinado del fago lambda, con su gen pasajero, se mezcla con la cubierta del virus lambda, se producen partculas fgicas infecciosas, si el tamao del ADN recombinado no es muy distinto del ADN natural del virus lambda. Los procesos de clonacin y de aislamiento de estos fragmentos se inician con la construccin de una biblioteca de ADN o un banco de ADN. stas estn formadas por todas las molculas de plsmidos o fagos recombinantes originados al unir un ADN a un vector. Las bibliotecas deben cumplir la caracterstica de poder introducirse en clulas donde cada recombinante pueda aplicarse in vivo.

La secuenciacin del ADN

Tcnica que permite saber el orden o secuencia de los nucletidos que forman parte de un gen. Abreviadamente, ste sera el mtodo a seguir:

Como la tcnica se basa en la sntesis de ADN, para hacer la reaccin de secuenciacin se necesita: Como "molde" se utiliza una de las cadenas del fragmento de ADN que se va a secuenciar. Como "cebador" para iniciar la sntesis, se necesita un corto oligonucletido complementario del extremo de la cadena. Desoxinucletidos de las cuatro bases: dAMP, dTMP, dGMP, dCMP. Didesoxinucletidos de una base en cada una de las cuatro reacciones de secuenciacin.

Al aadir la ADN-polimerasa, comienza la polimerizacin en el cebador, pero cesa al incorporarse un didesoxinucletido. Se produce un conjunto de cadenas dobles cuyas longitudes dependen de la situacin del didesoxinucletido incorporado. Deben prepararse cuatro reacciones de secuenciacin, cada una con un didesoxi distinto. Los fragmentos resultantes se separan por tamao mediante electroforesis, se autorradiografa, y la sucesin

de bandas de cada una de las cuatro reacciones, comparndolas entre s, dan la secuencia del ADN.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Con la que se consigue aumentar el nmero de copias de un fragmento determinado de ADN, por lo tanto, con una mnima cantidad de muestra de ADN, se puede conseguir toda la que se necesite para un determinado estudio. La tcnica de la PCR consiste en: 1. En un tubito se mezcla el ADN molde, los dos cebadores (oligonucletidos), los cuatro dNTPs y la ADN-polimerasa termorresistente. 2. Se calienta a 94 C durante 5 min, con lo que se separan las cadenas del ADN molde a amplificar, generndose las correspondientes cadenas sencillas. 3. Se baja la temperatura en torno a los 60 C, de modo que cada cebador se empareja con el extremo correspondiente de una de las cadenas del molde. Se dice que ahora tenemos los moldes cebados. 4. Se sube la temperatura hasta 72 C (la ptima de funcionamiento de la Taq), y se deja durante 5 min, tiempo durante el que se est produciendo la sntesis in vitro de las cadenas complementarias de cada hebra molde. 5. Se sube la temperatura a 94 C durante 20 segundos, suficientes para separar la cadena recin sintetizada respecto del molde original. 6. Las cadenas sencillas generadas entran ahora en un nuevo ciclo (pasos 1 al 5), y as sucesivamente, de modo que tras 30-60 ciclos obtenemos una amplificacin del ADN original de millones o miles de millones de veces. 7. Las aplicaciones de la ingeniera gentica: Son numerosas las aplicaciones prcticas y comerciales de la estudios de la ingieneria, entre otras cosas, se emplea para organismos transgnicos.

Biotecnologa gentica
En la dcada de 1970 se abrieron nuevas perspectivas en el campo de las biotecnologas gracias a la elaboracin de nuevas tcnicas que permiten llegar directamente al material que est en el origen de todas las caractersticas y procesos vitales, es decir, el ADN. Este conjunto de tcnicas moleculares de manipulacin gentica recibe el nombre de ingeniera gentica. Su objetivo es la manipulacin in Vitro del ADN, la introduccin de este ADN as modificado en clulas vivas y la incorporacin del mismo como parte del material hereditario de dichas clulas. De este modo, ADN de diversas procedencias, por ejemplo, la fraccin de ADN humano regula la sntesis de insulina, puede introducirse en bacterias de manera que pasa a formar parte de su genoma y lograr as que la bacteria adquiera la capacidad de elaborar insulina.

Terapia gentica
La terapia gentica consiste en sustituir o aadir, segn el caso, una copia normal de la regin defectuosa del ADN para poder solucionar y restablecer la funcin alterada, evitando el desarrollo de enfermedades de origen gentico, como por ejemplo la facultad defensiva ante las enfermedades infecciosas. Las enfermedades con las que se ha empezado a trabajar son, entre otras, la deficiencia de la enzima ADA (adenosina desaminasa), conocida como la de los nios burbuja y la DMD o distrofia muscular de Duchenne. La posibilidad de curar las enfermedades genticas con un tratamiento especfico justifica lo esfuerzos que se estn realizando en este sentido.

Implicaciones ticas
La ingeniera tiene aplicaciones en campos muy diversos; dos de los ms importantes son la medicina y la creacin de nuevas especies o mejora de las existentes. El progreso en estos mbitos puede aportar resultados capaces de aliviar algunos problemas de gran importancia, pero no se debe olvidar que la explotacin comercial de las tecnologas requeridas slo est al alcance de unas pocas empresas multinacionales. Como era de esperar, la tradicional dependencia econmica de los pases subdesarrollados tiene en la ingeniera gentica un nuevo elemento de desequilibrio. En otro orden de cosas, la ingeniera gentica puede plantear graves problemas ticos. Hay opiniones muy diversas sobre dnde han de situarse los lmites de manipulacin del material que est en la base de todos los procesos vitales. Al inicio de los experimentos del ADN recombinante, varios investigadores mostraron su preocupacin por los riesgo que se pueden realizar con dichas tcnicas, en varios pases se crearon comits para discutir el uso y la aplicacin de tcnicas de ingeniera gentica. Lamentablemente est limitada por fuerzas polticas y por la presin de las empresas involucradas en el desarrollo y la comercializacin de los productos biotecnologas.1 Es necesario la participacin de cada ciudadano sobre la informacin para tener un criterio respecto al tema ya que esto no puede ser resuelto solo por expertos, quien tiene la decisin final es la sociedad en decidir qu se debe hacer.2

Ingeniera gentica en seres vivos

Ingeniera gentica en bacterias
Son los seres vivos ms utilizados en Ingeniera Gentica. La ms utilizada es la Escherichia coli. Se usa prcticamente en todos los procesos de I.G.

Ingeniera gentica en levaduras y hongos

Son junto con las bacterias los sistemas ms utilizados. El Saccharomyces cerevisiae fue el primer sistema eucariota secuenciado completamente. Otra levadura importante es P.

pastoris, utilizada para conseguir proinsulina en cultivo discontinuo y quitinasa en cultivo continuo. En el campo de los hongos destaca por su labor mdica el Penicillium.

Ratones knockout.

Ingeniera Gentica en animales

La manipulacin gentica de los animales persigue mltiples objetivos: aumentar el rendimiento del ganado, producir animales con enfermedades humanas para la investigacin, elaborar frmacos, etc.

Ingeniera Gentica en plantas

Actualmente se han desarrollado plantas transgnicas de ms de cuarenta especies. Mediante ingeniera gentica se han conseguido plantas resistentes a enfermedades producidas por virus, bacterias o insectos. Estas plantas son capaces de producir antibiticos, toxinas y otras sustancias que atacan a los microorganismos. Tambin se han conseguido otro tipo de mejoras, como la produccin de distintas sustancias en los alimentos que aumentan su calidad nutricional, mejorar las cualidades organolpticas de un producto o que ciertas plantas sean ms resistentes a determinados factores ambientales, como el fro. Las tcnicas de ingeniera gentica tambin permiten el desarrollo de plantas que den frutos de maduracin muy lenta. As, es posible recoger tomates maduros de la tomatera y que lleguen al consumidor conservando intactos su sabor, olor, color y textura. La mejora de la calidad de las semillas es tambin un objetivo. Las aplicaciones farmacuticas son otro gran punto de inters. La biotecnologa permite desarrollar plantas transgnicas que producen sustancias de inters farmacolgico, como anticuerpos, ciertas protenas y hormonas, como la hormona del crecimiento.

Aplicaciones de la Ingeniera Gentica en medicina e industria farmacutica

Obtencin de protenas de mamferos
Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores de coagulacin, etc., tienen un inters mdico y comercial muy grande. Antes, la obtencin de estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a partir de tejidos o fluidos

corporales. En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los genes de ciertas protenas humanas en microorganismos adecuados para su fabricacin comercial. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la levadura Sacharomyces cerevisae, en la cual se clona el gen de la insulina humana.

Obtencin de vacunas recombinantes

El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos patgenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial. Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por ingeniera gentica. Como la mayora de los factores antignicos son protenas lo que se hace es clonar el gen de la protena correspondiente.

Diagnstico de enfermedades de origen gentico

Artculo principal: Diagnstico gentico preimplantacional

Conociendo la secuencia de nucletidos de un gen responsable de una cierta anomala, se puede diagnosticar si este gen anmalo est presente en un determinado individuo.

Obtencin de anticuerpos monoclonales

Este proceso abre las puertas para luchar contra enfermedades como el cncer y diagnosticarlo incluso antes de que aparezcan los primeros sntomas.

Logros
El 7 de marzo de 2010 fue publicado en lnea y rectificado el 25 de marzo del mismo ao en la revista Nature, una de las revistas cientficas ms prestigiosas del mundo, una investigacin del cinvestav Irapuato en colaboracin con cientficos de Estados Unidos y Francia en la cual hallaron una protena llamada argonauta 9 con la que se podra llegar a inducir la clonacin natural de las plantas, esto tendra un fuerte impacto en la industria de semillas, y algunos dicen que podra revolucionar la produccin agrcola internacional.