METABOUSMOYCRECIMIENTO DE LAS BACTERIASCAPTULO 4 TRANSCRIPCIN Transaldolasa Ffucfosa6-fosfatQ Glueosa'fosfafo Eritfosa4-fosfato Transcetolasa Xlluiosa5-fosfato Fructosa 1,6difosfato ]m GlGeraidehcio" 3-ro5tato _AXTriosafosfcttosomerasa

DihidroxiaGetona-losfctfo , FIGURA 4-8. Ciclo de la pentosa fosfato o ruta de la hexosa monofos-fa t o . En e st e c i c l o e s fu n d a m e n t al el p a p e l d e l as en zi m as t ra n s ce t o l as a y t ra n s al d o l as a . sntesis de la pirimidina conocida como orotato, la cual seune posteriormente al fosfato de ribosa para formar mono-fosfato de orotidina. A su vez, este nucletido puede convertirseen monofosfato de citidina o monofosfato de uridina. Los de-soxinucletidos que forman parte del ADN se sintetizanmediante la eliminacin del grupo hidroxilo del tomo decarbono 2' de la porcin sacardica del ribonucletido. Laproduccin de timina, un nucletido exclusivo y necesariopara el ADN, tiene lugar a travs de la ruta del tetrahidrofo-lato, lo que hace que esta se convierta en un objetivo de accin de los antibiticos.La informacin existente en la memoria gentica del ADN setranscribe en una molcula de un ARN mensajero (ARNm)para su posterior traduccin en protenas. La sntesis delARNm ocurre de forma semejante a la replicacin del ADNpor medio de una ARN-polimerasa dependiente de ADN. El proceso comienza cuando el factor sigma reconoce unasecuencia especfica de nucletidos en el ADN (el llamado pro motor; vase captulo 5) y se une firmemente a ella. Las secuencias promotoras se disponen inmediatamente por delantedel comienzo de la secuencia de ADN que realmente codificauna protena. Los factores sigma se fijan a estos promotorescon el objeto de proporcionar un punto de acoplamiento a laARN-polimerasa. Asimismo, algunas bacterias codifican variosfactores sigma para permitir la transcripcin de un grupo degenes en condiciones especiales, como shock trmico, inanicin, metabolismo especial del nitrgeno o esporulacin. Trasla unin de la polimerasa a una secuencia adecuada del ADN,se inicia la sntesis del ARN mediante la

adicin secuencial delos ribonucletidos complementarios a aquella molcula. LaARN-polimerasa se disocia del ADN (un proceso que est mediado por seales existentes en el interior del ADN) cuandose ha transcrito la totalidad de un gen o un grupo de ellos (opern; vase captulo 5). La ARN-polimerasa dependientedel ADN es inhibida por la rifampicina, un antibitico utilizadoa menudo en el tratamiento de la tuberculosis. Igualmente, apartir del ADN se transcribe el ARN de transferencia (ARNt), elcual se utiliza en la sntesis de las protenas, y el ARN ribosmi-co (ARNr), el cual forma parte de los ribosomas. TRADUCCIN La traduccin es el proceso por el cual el cd igo gen tico (en forma de ARNm) se convierte (traduce) en una secuenciade aminocidos, el producto proteico. Para llevar a cabo latraduccin, la secuencia de nucletidos del ARNm se divideen grupos de tres nucletidos consecutivos. Cada grupo formado por tres nucletidos se denomina codn y se encargade la codificacin de un aminocido especfico. Puesto queexisten cuatro nucletidos diferentes, son posibles 64 (4 3 )combinaciones, aunque cada codn codifica un slo aminocido (o seal de parada de la protena). Sin embargo, dadoque tan slo existen 20 aminocidos, cada uno de ellos puedeestar codificado por ms de un triplete. Este fenmeno se de nomina degeneracin del cdigo gentico y puede actuar para proteger a la clula de los efectos de mutaciones leves delADN o el ARNm. Cada molcula de ARNt contiene una secuencia de tres nucletidos que es complementaria de una delas secuencias del codn. Esta secuencia de ARNt se conocecomo anticodn, y permite el apareamiento de bases y launin al codn presente en el ARNm. En el extremo opuesto delARNt se encuentra unido el aminocido que corresponde acada pareja especfica codn-anticodn.31

CAPITULO 4METABOLISMO Y CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS RAS Iniciacin Elongacin ARNt J P e pti d i l - tr a ns fe r a s a T r a ns l oc a c i n Siguiente ARNt(Seforma un puentepeptdico ^^ Finalizacin ARNrr JARNm Ribosomas movindose a lo largo del ARNm { Aminocido i i Codn de ARNmt j ARNt FIGURA 4-9. Sntesis de las protenas bacterianas. 1. La unin de lasubunidad 30S al ARN mensajero (ARNm) con la formilmetionina-ARNde transferencia (fmet-ARNt) situada en el codn

de iniciacin AUG perm i t e el e n s am b l a j e d e l ri b o so m a 7 0 S . E l fm e t- A R N t s e u n e a l si t i o p e p t i - dilo (P). 2. El siguiente ARNt se acopla al codn correspondiente en els i t i o A , 3. El ARNt acepta la cadena peptdica en formacin. 4. Antesd e l a tr an sl oc a ci n a l si t i o p e p t i d i l o. 5 . El p ro ce s o se r ep i t e h a st a l l eg ar a u n c od n d e te rm i n a ci n en el q u e l a p r ot e n a s e l i b e ra . El proceso de sntesis de protenas (figura 4-9) comienza conla fijacin de la subunidad ribosmica 3OS y un ARNt iniciador especial dela formil-metionina(fmet) al codn de iniciacin AUG (metionina) para formar el llamado complejo deiniciacin. A continuacin, la subunidad ribosmica 50S sefija al complejo para iniciar as la sntesis del ARNm. El ribosomacontiene dos zonas para la fijacin del ARNt, el sitio A (ami-noacilo) y el sitio P (peptidilo), cada uno de los cuales permi te el emparejamiento de bases del ARNt fijado yla secuencia del codn del ARNm. En una reaccin conocida como transpepti-dacin, el ARNt correspondiente al segundo codn ocupa el sitio A. El grupo amino del aminocido unido al sitio A forma unpuente peptdico con el grupo carboxilo del aminocido que seencuentra en el sitio P. Este proceso mantiene en el sitio P a lamolcula de ARNt sin carga (es decir, sin ningn aminocidounido), lo que permite su liberacin del ribosoma. A continuacin,el ribosoma avanza exactamente tres nucletidos en la molcula de ARNm, con lo que se transfiere el ARNt al nuevo pptidounido al sitio P y coloca el siguiente codn en el sitio A. UnARNt cargado se acerca al sitio A, y el proceso comienza denuevo. La traduccin contina hasta que el codn nuevo del sitio A corresponde a uno de los codones de terminacin (para elcual no existe ningn ARNt correspondiente). En ese momento, la nueva protena se libera al citoplasma y el complejo de traduccin se desmonta o el ribosoma se desplaza hasta el siguiente codn de iniciacin para comenzar la formacin de unanueva protena. La capacidad de desplazamiento a lo largo de la Pared celular| | Membrana celular O Cromosoma 1Cromosoma 2 FIGURA 4-10. Divisin de la clula bacteriana. La replicacin requiereu n a ex t en si n d e l a p a re d c el u l a r, as c om o l a re p l i c ac i n d e l c ro m o so m a y l a f or m a ci n d e u n ta b i q u e. La f i j a ci n d e l A DN a l a m em b r an a arrastra a cada molcula cromosmica hija hacia el interior de una nueva c l u l a. molcula de ARNm para formar una nueva protena caracteriza al ribosoma 70S de las bacterianas, pero no al ribosoma 80Sde los eucariotas. Esta diferencia tiene implicaciones en la sntesis de protenas de algunos virus.El proceso de sntesis de protenas por el ribosoma 70Sconstituye un objetivo importante de la accin de los agentesantimicrobianos. As, tanto los aminoglucsidos (p. ej., estreptomicina y gentamicina) como las tetraciclinas se unen ala subunidad menor del ribosoma y provocan una inhibicinde la funcin normal de este. De manera semejante, los antibiticos del grupo de los macrlidos (p. ej.,

eritromicina) ylincosamidas (p. ej., clindamicina) actan unindose a la subunidad mayor del ribosoma. CEf@B!@BfelSdD'DgD] La replicacin bacteriana es un proceso coordinado duranteel cual se producen dos clulas hijas idnticas. Su crecimiento exige la presencia de suficientes metabolitos para permitir lasntesis de los componentes bacterianos y, especialmente, delos nucletidos destinados a la sntesis del ADN. Al igual quepasa con una cuenta atrs en el Kennedy Space Center, paraque se inicie un proceso de replicacin debe producirse unacascada de distintos episodios reguladores (la sntesis de ARN 32

METABOLISMO Y CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS CAPITULO 4FIGURA4-11. Fases del crecimiento bacteriano a partir de un inoculo declulas en fase estacionaria. y protenas clave). Sin embargo, y una vez iniciada, la sntesis del ADN debe llegar hasta el final (aun en el caso de desaparicin de los nutrientes del medio). La replicacin cromosmica se inicia en la membrana ycada cromosoma hijo se ancla a una porcin diferente de lamisma. En algunas clulas, el ADN se asocia a mesosomas.Los procesos de formacin de la membrana bacteriana, sntesis de peptidoglucano y divisin celular se llevan a cabo de forma coordinada. A medida que crece la membrana

bacteriana,los cromosomas hijos se separan. El comienzo de la replicacin cromosmica tambin inicia el proceso de divisin celular, la cual se puede visualizar por el comienzo de la formacindel tabique que separar a las dos clulas hijas (figura 410;vase tambin captulo 3). Pueden ponerse en marcha nuevosepisodios de iniciacin incluso antes de que haya terminado la replicacin cromosmica y la divisin celular.El agotamiento de metabolitos (inanicin) o la aparicinde productos metablicos txicos (p. ej., alcohol) desencadena la produccin de alarmonas qumicas, las cuales provocan la interrupcin de la sntesis, aunque los procesos degradativos continan su curso. La sntesis de ADN prosiguehasta completar la formacin de todos los cromosomas y apesar del efecto perjudicial que ello pudiera tener sobre la clula. Los ribosomas se desintegran para formar precursoresde desoxirribonucletidos, el peptidoglucano y las protenasse degradan, y la clula se contrae. En estos casos puede comenzar la formacin del tabique, aunque es posible que la clula no se divida por lo que morir un gran nmero de clulas.En ciertas especies, algunas seales de este tipo pueden iniciar un proceso de esporulacin (vase captulo 3). DINMICA POBLACIONAL Cuando se aaden bacterias a un medio de cultivo, antes deempezar a dividirse ha de transcurrir un cierto tiempo de adaptacin al nuevo ambiente (figura 4-11). Este intervalo se conoce como fase de latencia del crecimiento. En cambio, durantela llamada fase logartmica o exponencial, las bacterias sedividen y d uplican su poblacin a intervalos regulares hastaalcanzar el mximo nivel posible segn el tipo de medio y lascondiciones imperantes. El nmero de bacterias aumenta a razn de 2 n , donde rc representa el nmero de generaciones (duplicacin del nmero de bacterias). Finalmente, los metabolitos del cultivo se agotan o bien aparece en su seno algunasustancia txica; en ese momento, las bacterias interrumpensu crecimiento y pasan a la llamada fase estacionaria. PREGUNTAS 1. Cuntos moles de ATP se generan por cada mol deglucosa en la gluclisis, el ciclo del ATC y el transportede electrones? Cules de estos procesos se dan encondiciones anaerobias y cules en condicionesaerobias? Cul es el ms eficiente? 2. Qu productos metablicos de la fermentacinanaerobia seran perjudiciales para el tejido del anfitrin(el ser humano) (p. ej., en el caso de C. perfringens)? 3. El nmero de bacterias que proliferan durante la fase decrecimiento puede calcularse segn la siguiente ecuacin:N, = N 0 x2 t/d

en la que N es el nmero de bacterias que han crecidodespus de un cierto tiempo (t), t/d es el cociente delti em p o tr an sc u r ri d o p or e l ti em p o d e d u p l i ca ci n , y N 0 ese l n m e ro i n i ci al d e b ac te ri a s . S i e l t i e m p o d e duplicacin es de 20 minutos y el inoculo bacterianoinicial contena 1000 bacterias cuntas bacterias habren el cultivo al cabo de 4 horas? B i b l i o g r af a Davis BDet al, editors: Microbiology, ed 4, Philadelphia, 1990, JB Lippincott. Jawetz Eet al: Review of medical microbiology, ed 16, Los Altos, Calif,1984,Lange. LehningerAL: Principies of biochemistry, NewYork, 1982, Worth.MandellGL,Bennet JE,DolinR,editors: Principies and practiceof infectious diseases, ed 6. Philadelphia, 2005, ChurchillLivingstone. Slots J, Taubman MA, editors: Contemporary oral microbiology and mmunology, StLouis, 1992, Mosby.Strauss JM, Strauss EG: Virues and human disease, SanDiego,2002, Academic Pres