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4.2 - Identificao Estrutural dos Alcalides do Tipo Cantinnicos Os alcalides cantinnicos possuem o esqueleto bsico19:
11 12 13

14 N 15 4 5 H

2 N

Figura 15 - Esqueleto bsico dos alcalides do tipo cantinnicos Devido ao anel lactmico, as constantes de acoplamento entre H-4 e H-5 so cerca de 10Hz e as multiplicidades so dois dubletos com deslocamentos qumicos entre 8,8 8,4 (H-4) e 6,75-6,95 (H-5), podem ser vistos no espectro de RMN 1H. Os hidrognios do anel piridnico apresentamdois dubletos relativos a H-1 e H-2 com J entre 5,0-6,0 Hz, e deslocamentos qumicos 8,3 - 8,9 (H-2) e 7,7-8,4(H-1). Foram observados todos os sinais dos hidrognios de orto-benzeno dissubstitudo, e, em alguns casos foi possvel observar todas as correlaes entre todos os hidrognios deste anel, utilizando RMN 1H (multiplicidades e constantes de acoplamentos) e COSYGR. O H-8 o hidrognio mais desblindado deste anel devido o efeito anisotrpico de desproteo provocado pelo grupo carbonila. O que no acontece no caso dos -carbolnicos.20-21

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4.2.1- Substncia1 2-metxi-cantin-6-ona15 (8) A substncia 8 foi isolada a partir da partio metanlica das fraes 7-14 (fluxograma 2 p. 18) como um precipitado amarelo identificado posteriormente como alcalide do tipo cantinnico.
10 9 8 11 12 A 13 N 15 O 5 H 16 4 H 14 1 N OCH3

8 O espectro de RMN 1H de 8 (Figura 16, p. 36) apresentou o padro de sinais tpicos de alcalides cantinnicos. O anel A apresenta quatro conjuntos de sinais, sendo observadas todas as constantes de acoplamento o (7,6) m (1,2), p (0,8). As constantes de acoplamento de cerca de 5Hz entre H-1 e H-2 no foram observadas, porm, foram observados um sinal de metoxila em 4,12 e um simpleto em 7,25 referente a H-1. A posio da metoxila foi definida atravs de experimentos de NOE (NOEDIFF) e tambm por comparao entre os deslocamentos qumicos. Observou-se as constantes de 9,7 Hz entre H-4 e H-5, que so caractersticas do anel lactmico.

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Figura 16- RMN de 1H da substncia 8 - Espectrmetro DRX400 , CDCl3. Aplicao de Funes Matemticas ao FID9 Os experimentos em RMN possuem vrias tcnicas que podem ser usadas para obter um melhor resultado experimental, isto significa uma melhor resoluo ou uma melhor relao sinal-rudo. Para isto uma srie de operaes matemticas pode ser aplicada ao FID antes da tranformada de Fourier. H um perodo depois da metade do tempo de aquisio, onde a maioria dos sinais decaem a zero devido a relaxao transversa e o FID ento contm rudos. Isto pode ser reduzido drasticamente por aplicao de uma funo exponencial no qual os tempos mais altos so menos afetados pela funo, diminuindo o rudos. H um compromisso entre a largura de linha e a reduo da relao sinal-rudo, que deve ser considerada.

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Na maioria dos casos, a multiplicao do FID por uma funo exponencial positiva, pode prover uma melhora na relao sinal-rudo e na resoluo digital. A funo mais efetiva para aumento da resoluo digital o produto das funes: FG t a t2 b

exp

exp

Onde a e b so determinados empiricamente e o primeiro termo corresponde ao aumento de resoluo por uma multiplicao exponencial e o segundo como uma transformao gaussiana (Lorentz- Gauss) do sinal. A desvantagem que isto pode levar a artefatos na base do espectro e pequenos sinais podem ser perdidos exigindo assim, uma anlise a priori do espectro e tambm uma integrao correta do mesmo. O interessante que se pode ter uma melhor reproduo dos sinais, sem aumentar o tempo de aquisio, e sem ocupar espao de memria do computador, uma vez que so adicionados vrios blocos de zeros ao FID zero-filling).

Nos casos especficos de H-9 e H-11 na substncia 8 (Figuras 17 - 20, p. 38 -41), pode-se observar os resultados da aplicao desta funes ao FID, obtendo-se assim uma melhor definio das multiplicidades e conseqentemente a identificao das respectivas constantes de acoplamentos.

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Figura 17 - Ampliao do espectro de RMN1H sem aplicao de LB e GB a H-9.

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Figura 18 - Ampliao do espectro de RMN1H com aplicao de LB-0.3, GB 0.5 a H-9

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Figura 19 - Ampliao do espectro de RMN1H sem aplicao de LB e GB a H-11.

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Figura 20- Ampliao do espectro de RMN1H com aplicao de LB 0.3, GB 0.5 a H-11.

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As atribuies dos sinais de 1H e respectivamente:

13

C esto indicadas nas tabelas 2 e 3

Tabela 2- Dados de RMN de 1H do alcalide cantinnico 8 H H-8 H-11 H-4 H-9 H-10 H-1 H-5 O-Me (ppm) Multiplicidade 8,62 ddd 7,95 ddd 7,74 d 7,67 7,48 7,25 6,93 4,19 ddd ddd s d s J (Hz) 8,1; 1,2; 1,0 8,1; 1,2; 1,0 9,7 8,1; 7,6; 1,2 8,1; 7,6; 1,2 9,7

A anlise do espectro de RMN 1H forneceu informaes dos deslocamentos qumicos do alcalide cantinnico e, quando se observa o espectro de RMN 13C, (Figura 21, p.43) confirma-se a presena da metoxila como substituinte. Atravs do espectro de HMBC (Figura 22, p.44) foram atribudos os carbonos quaternrios: o carbono em 157, 6 como C-13 devido ao acoplamento com H-9; o acoplamento de H-4, define o C6. O carbono C-12 ( 142,3) foi definido atravs dos acoplamentos com H-8, H-11, H-9; C-14 foi definido devido ao acoplamento entre H-11; C-16 pelo acoplamento com H-5; C-4 definido atravs do acoplamento com H-1. As atribuies dos outros carbonos foram obtidas atravs do espectro de HMQC, (Figura 23, p. 45)

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Figura 21- RMN de 13C da substncia 8 - Espectrmetro DRX400, CDCl3. Tabela 3- Dados de RMN de 13C do alcalide caninnico 8 Carbono (ppm) 6 157,8 13 157,6 12 142,3 14 135,7 9 132,3 5 128,3 10 126,4 4 123,7 11 123,4 16 123,3 15 123,3 8 117,9 1 115,0 OMe 64,7

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O espectro de HMQC permitiu a identificao dos carbonos do alcalide 8.

Figura 22 Dados de

HMQC de 8 Espectrmetro ARX200 - CDCl3

O espectro de HMBC (Figura 12,p. 49) permitiu principalmente a atribuio dos carbonos quaternrios que no foram possveis atravs do HMQC. Este espectro foi adquirido em um programa que no desacopla as correlaes a uma ligao, observam-se correlaes a longa distncia e tambm a uma ligao.

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Figura 23 - Espectro de HMBC de 8,CDCl3 Espectrmetro DRX400

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Substncia 9 - 4-metxi, 5-hidrxi, cantin-6-ona 9

11 10 9 12 14 1 2 N

A
13 N 15 8 O

5
OH

OCH3

Esta substncia foi isolada da subfrao metanlica atravs de separaes por cromatografia, conforme mostra o fluxograma 2, pgina 20. Apresentou uma cor verdefosforescente intensa, tpica dos alcalides do tipo cantinnicos, com alta polaridade e sendo solvel apenas em DMSO. Ao analisar o espectro de RMN 1H (Figura 24,25 p.47 e 48), observam-se os sinais tpicos do anel aromtico A com as respectivas constantes de acoplamentos. Os sinais relativos aos hidrognios 1 ( 8,10) e 2 ( 7,48), com constantes de 5Hz, caracterizam a no substituio nas referidas posies e observase ainda a presena de um sinal relativo a metoxila e 3,92 integrando para 3 hidrognios, sendo este, portanto, um substituinte do anel lactmico. O segundo substituinte foi caracterizado como uma hidroxila, uma vez que no se observam os sinais relativos aos hidrognios H-4 e H-5. Na tabela 4 podemos observar os deslocamentos qumicos e constantes de acoplamentos de todos os hidrognios do composto, caractersticas deste anel quando no substitudo.

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Figura 24- Espectro de RMN de 1H de 9 Espectrmetro DRX400, DMSO Tabela 4 - Dados Espectroscpicos de Hidrognio de 9 H H1 H2 H8 H9 H10 H11 metoxila OH (ppm) 7,48 8,10 8,46 7,71 7,56 8,30 3,90 6,00 Multiplicidade d d dd dt dt dd s s J (Hz) 7,0 7,0 8,0;1,0 8,0; 1,0 8,0; 1,0

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Figura 25 - Ampliao da regio aromtica do espectro de RMN de 1H de 9 A dificuldade encontrada na elucidao desta estrutura foi a definio das posies da metoxila e da hidroxila, mas atravs do espectro de HMBC (Figura 26, p.49) nota-se o sinal da metoxila correlacionando a longa distncia com o carbono em C-4. Observa-se ainda as correlaes dos hidrognios do anel A. A confirmao do esqueleto do alcalide cantin-6-ona se deu tambm atravs de dados de RMN 13C (Figura 27 tabela 5), e principalmente atravs do espectro de HMBC (Figura 26 p. 49,) que foi de fundamental importncia na determinao das posies dos substituintes na estrutura. Quando se observa as correlaes do hidrognio da hidroxila, nota-se um acoplamento com o carbono em C-6 e outro com o carbono em C14 , H-1 com C-14 e demais carbono vizinhos

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Figura 26 - Espectro de HMBC de 9

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Figura 27 - Espectro de RMN de 13C de 9, Espectrmetro DRX400 , DMSO

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Tabela 5- Dados de 13C de 9 Carbono (ppm) modelo 1 113,7 2 145,8 4 109,8 5 154,4 6 155,2 8 117,4 9 130,5 10 125,7 11 122,6 12 125,1 13 138,9 14 129,2 15 127,3 16 136,7 OMe 56,8 N.O. No observado (ppm) observado 104,2 136,6 125,0 140,0 157,0 116,1 130,0 125,6 123,0 N.O. N.O. N.O. N.O. 137,0 40,9

4.2.3 - Alcalide do tipo cantinnico 10- 1 Metxi cantin-6-ona

OCH3 10 9 8 11 12 13 2 N 4 O 5 H H N

10

Atravs do espectro de RMN 1H deste alcalide (Figura 28e 29, p. 52 e 53) foi possvel observar as correlaes entre todos os hidrognios do anel A, atravs da multiplicidade ddd para todos os sinais. Isto significa que o anel A encontra-se livre de substituies em H-8 a H-11 Observa-se as constantes de acoplamento de 9,8 Hz entre os hidrognios H-4 e H-5, caracterstica do anel lactmico. No foram observados os dubletos e constantes de acoplamentos relativos ao H-1 e H-2, onde verifica-se apenas
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um simpleto relativo a H-2. No deslocamento qumico do hidrognio H-2, observa-se uma forte desblindagem no do H-2 indicando a presena de um grupo eletronegativo vizinho a esse hidrognio, determinando assim a metoxila em C-3.

Figura 28 - Espectro de RMN de 1H de 10

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Figura 29 - Ampliao da regio aromtica do espectro de RMN de 1H de 10. interessante observarmos o espectro de 1H deste alcalide 10, isolado de Simaba cuneata e o espectro de 1H do alcalide 8 (pgina 36) isolado de Simaba cedron. A relao entre o deslocamento qumico de H-1 e H-2 nos certifica a forma de substituio destes alcalides. Em 10, H-2 tem deslocamento qumico 8,24 e em 8 o deslocamento qumico de H-1 7,25 sendo que, em 8, a forma de substituio foi determinada atravs de NOEDIFF, no segundo caso, uma comparao entre os deslocamentos qumicos possibilitou a elucidao da mesma. Um aspecto a ser observado a polaridade da amostra, devido substituio da metoxila em outra posio, sendo que a mesma se mostrou bem mais polar, no solubilizando em clorofrmio, como ocorreu com amostra do ismero (8). No entanto, outras caractersticas como por exemplo a cor da amostra, um verde-fluorescente intenso, se mantiveram. Outra observao interessante a troca nos deslocamentos qumicos dos hidrognios H-4 e H-9. No espectro de 8, onde foi utilizado como solvente clorofrmio deuterado, H-4 apresentou deslocamento qumico em 7,74 ppm e H-9 em 7,67 ppm. No espectro de 10, onde foi utilizado metanol deuterado, H-9 apresentou 7,75 e H-4
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7,68. Ocorre, portanto uma inverso na ordem dos deslocamentos qumicos, devido provavelmente mudana na constante dieltrica do solvente.

OCH3 10 9 8 11 12 13 2 N 4 O 5 H H N 10 9 8 11 12 A 13 N 15 O 5 H 16 4 H 14 1 N OCH3

10

Tabela 6 - Atribuies para o espectro de hidrognio de 10. Espectrmetro DRX 400. H 8 2 11 9 4 10 5 OMe Deslocamento Qumico (ppm) 8,63 8,54 8,24 7,75 7,68 7,57 6,82 4,21 Multiplicidade dd s dd dt d dt d s Constantes de acoplamento (Hz) 0,9; 8,1 0,9; 8,1 0,9; 7,8 9,8 0,9; 8,1 9,8

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O espectro de COSYGR ( Figura 30) de 10 nos mostrou claramente todas as correlaes entre os hidrognios do anel aromtico A.

Figura 30 - Espectro de COSYGR de 10.

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