TRABAJO PRACTICO N5 Trabajo de Laboratorio

Pequeas Molculas
Reacciones de identificacin de monosacridos, almidn y aminocidos.
Fundamentos Identificacin de azcares: Los azcares reductores reaccionan con el reactivo de Benedict que contiene sales de Cu++ de color azul-celeste reduciendo el Cu++ a Cu+ y generando asi un precipitado rojoladrillo de Cu2O. Identificacin de almidn: El reactivo de Lugol (I2 soluble) de color marrn-rojizo se compleja con la molcula de almidn dando un color azl-violaceo oscuro. Identificacin de aminocidos: Los aminocidos se complejan con Ninhidrina (compuesto cclico carbonlico) dando un colorante violceo Materiales a utilizar
Muestras A, B y C Agua destilada Reactico de Benedict cualitativo Reactivo de Lugol Ninhidrina Tubos de ensayo Pipetas graduadas. Pipeta automtica Tips Propipeta Gradillas Vaso de precipitado Platina de calentamiento Guantes de goma descartables. Recipiente para descarte

Mtodo de trabajo Rotular 12 tubos y proceder segn el siguiente esquema de trabajo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 agua 1ml 1ml 1ml MA 1ml 1ml 1ml MB 1ml 1ml 1ml MC 1ml 1ml 1ml Lugol 1 gt. 1 gt 1 g. 1 gt Benedict 1ml 1ml 1ml 1ml Ninhidrina 100l 100l 100l 100l - Observar los tubos 1, 2, 3 y 4 - Colocar los tubos 5, 6, 7 y 8 en bao Mara durante aprox. 5 min - Colocar los tubos 9, 10,11 y 12 en bao Mara durante 1-2 min

- Analizar y discutir los resultados obtenidos identificando la naturaleza de las muestras utilizadas.

Macromolculas
Reaccin de Identificacin de Protenas. Desturalizacin de protenas: utilizacin de distintos agentes desnaturalizantes Fundamentos:
Reaccin de Biuret En medio alcalino los polipptidos se complejan con Cu++ para dar un color violceo. La reaccin se debe a la unin peptdica por lo que los aminocidos dan negativa esta reaccin. Agentes desnaturalizantes El calor, aumento de la fuerza inica, cambios de pH, solventes orgnicos, etc., desnaturalizan las protenas hacindolas menos solubles, no funcionales pero ms digeribles (cocinamos la mayora de los alimentos antes de ingerirlos).

Materiales a utilizar.
Clara de huevo Leche Reactivo de Biuret (solucin de NaOH 40% + solucin de CuSO4 1%) Vinagre de alcohol Limn exprimido etanol 96 HCl concentrado Vasos de precipitado mechero Tubos de ensayo Pipetas graduadas. Pipeta automtica Tips Gradillas Guantes de goma descartables. Recipiente para descarte Propipeta de goma.

Mtodo de trabajo
- Reaccin de Biuret Rotular tres tubos de ensayo. En uno poner 1 ml de agua, en el otro 1 ml de solucin de aminocidos (la misma que identificaron anteriormente) y en el tercero 1 ml de clara de huevo diluida con agua. Agregar a cada tubo 0,5 ml de NaOH 40% y luego unas gotas de CuSO4 1%. Observar - Reacciones de desnaturalizacin En tres tubos de ensayo colocar 1 ml de clara diluida. El primer tubo se toma con broche de madera y se expone a la llama del mechero. Observar. Al segundo tubo se le agregan gotas de HCl conc. (tener precaucin). Observar Al tercer tubo se le agrega igual volumen de etanol 96. Observar al cabo de unos minutos. En otro dos tubos colocar unos ml de leche. A uno agregar aprox igual volumen de vinagre y al otro un chorro de limn exprimido. Observar.

Enzimas
Objetivo:
1. Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal. 2. Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de la enzima.

Fundamento:
La Catalasa es una enzima presente en muchos tipos de clulas. Su funcin es proteger a las clulas del efecto txico del perxido de hidrgeno (agua oxigenada) producido en distintas reacciones redox Cataliza la reaccin: 2 H2O2 -----------> 2 H20 + O2 Fue una de las primeras enzimas purificadas y ha sido muy estudiada. Es una de las enzimas ms eficientes con una velocidad de aproximadamente 200.000 transformaciones/segundo/subunidad. La protena es un tetrmero formado por cuatro subunidades idnticas (350.000 kD). Cada monmero contiene un grupo prosttico Hemo en el centro activo. La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patgenas son anaerobias (no pueden vivir con oxgeno), mueren con el desprendimiento de oxgeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta sobre el agua oxigenada

Materiales a utilizar.
1 trozo de hgado bovino Agua destilada vaso de precipitado para homogeneizar el tejido varilla de vidrio tubos de ensayo Pipeta de 5 y 10 ml Perxido de Hidrgeno comercial (10 volumenes) Mechero

Mtodo de trabajo
- Demostracin de la actividad catalasa Tomar un trozo de hgado y colocarlo en un vaso de precipitado. Agregarle 10 ml de agua destilada. Homogeneizar con varilla de vidrio. Inclinar el vaso y trasvasar 1 ml del homogenato en sendos tubos de ensayo. Calentar uno de los tubo en el mechero, lentamente hasta ebullicin suave. Retirar y enfriar. Luego agregar a cada tubo 2 ml de agua oxigenada. Observar e interpretar.

- Realizar un informe final en el que conste el objetivo del trabajo, los resultados obtenidos y las conclusiones a las que se arrib.