Prctica N 7 Extraccin e identificacin del carotenoide bixina a partir del achiote (Bixa Orellana)

1. Marco Terico:

Extraccin Slido -Lquido

Extraccin de reflujo

Extraccin asistida por ultrasonido (EAU)

2. Objetivos:

3. Materiales:
3.1 Material Vegetal 3.2 Reactivos:

3.3 Material de Vidrio:

3.4 Otros:

3.5 Equipos:

4. Procedimiento:
4.1 Extraccin por reflujo:

4.2 Extraccin asistida por ultrasonudo (EAU)

5.- Procedimiento detallado:

5.1.- Preparacin:
Material Vegetal Achiote Airampo Disolvente Acetato de etilo Agua (50 ml)

5.2 Extraccin :
Con ultrasonido o sonicador : Colocar el matras con la muestra en las zonas de cavilacin , este procedimiento se da a temperatura ambiente Reflujo: Con un matraz acondicionado a un refreigerante , el cual tiene entrada de agua y salida , se utiliza una cocina , colocamos el matraz en el hot plate

5.3 Identificacin :
Mediante la cromatografa en capa fina (TLC) Fase estacionaria : Conformada por placas de silica gel que absorben el agua Marcar los extremos de la placa de silica (0.5 cm) Sembrar con capilares 3 puntos : De Betacaroteno: 2 ml ( 95% de pureza disuelto en etanol), estndar De la muestra grupo 1 : 2ml airampo ultrasonido De la muestra grupo 2 : 2ml airampo reflujo

Fase mvil: Mescla de solventes Cloroformo .etanol Proporcin (94:6) 10 ml : 9,4 cloroformo , 0,6 etanol

Colocar la fase mvil en un beaker , taparlo por un momento y luego introducir la placa de silica gel con las muestras ya sembradas , el liquido por capilaridad subir.

6 .-Resultados y Discusin:
RF de la muestra de betacaroteno : RF= Distancia de la muestra Distancia de la fase mvil

RF=

3,4 3,6

= 0,94

RF de la muestra de airampo por ultrasonido: RF= Distancia de la muestra Distancia de la fase mvil

RF=

0.0 3,6

=0

RF de la muestra de airampo por reflujo: RF= Distancia de la muestra Distancia de la fase mvil

RF=

0.4 3,6

= 0,1

7. Conclusiones:
El ultrasonido transmite ondas que se expanden en el agua y genera burbujas mixroscopicas que chocan con la sustancia que vamos a extraer y facilita el proceso de extraccin En el reflujo se obtiene: Extracto Inerte Disolvente con colorante Semillas sin el colorante

En la identificacin separamos los componentes de una mescla por su polaridad: En el caso del betacaroteno solo presenta una mancha porque es puro El airampo queda retenido por lo tanto es una sustancia polar En el caso del achote las 3 manchas son apolares La mancha a mitad del cromatograma es la bixina

Observamos que aparecen mas manchas al sistema de reflujo que al de ultrasonido

8. Sugerencias:
Hay que tener cuidado al momento de utilizar el ultrasonido , pues si se toca el agua puede daar las articulaciones

9.- Cuestionario:
Enumera tres procedimientos en los cuales se utiliza el bao de ultrasonido.
1. La sonicacin se puede utilizar para eliminar los gases disueltos en lquidos (desgasificacin) aplicando la energa sonora al lquido mientras est al vaco. Esta es una alternativa a la congelacin-aplicacin de vaco-descongelacin y los mtodos de aspersin.

2.

En aplicaciones biolgicas, los ultrasonidos pueden ser suficiente para interrumpir o desactivar un material biolgico. Por ejemplo, los ultrasonidos se utilizan a menudo para romper las membranas celulares y conseguir la liberacin del contenido celular, debido a la intensa agitacin producida. Este proceso se llama sonoporacin. En funcin de la frecuencia, intensidad y energa aplicada se pueden llegar a destruir incluso las estructuras subcelulares o hacer solubles los complejos proteicos. Para evitar la desnaturalizacin de las protenas provocada por sobrecalentamiento, la sonicacin se suele aplicar en frio.1 La sonicacin tambin se usa para fragmentar molculas de ADN.

3.

La sonicacin tambin se puede utilizar para iniciar procesos de cristalizacin e incluso para controlar cristalizaciones polimrficas. Se utiliza para intervenir en las precipitaciones anti-disolvente (cristalizacin), para ayudar en procesos de mezcla y para aislar pequeos cristales.

Dibujar la estructura qumica de la bixina.

Dibujar la estructura qumica de cinco carotenoides adicionales y mencionar su procedencia.

anteraxantina

Presente en numerosas plantas como el maz astaxantina

Presente en : Salmn, gamba, langosta, plumas de flamencos y algas cantaxantina

presente en : Salmn, gamba, cantarel y otros hongos, algas y plumas de flamencos. capsantin

Presente en : pimiento y pimientos

a -caroteno

Presente en zanahoria, la mayora de plantas verdes -caroteno

Presente en zanahoria, la mayora de plantas verdes e-caroteno

Presente en la mayora de plantas verdes

Haga un comentario sobre las oportunidades comerciales de la produccin de carotenoides por biotecnologa.

Bibliografia http://farmacia.udea.edu.co/~ff/carotenoides2001.pdf http://www.cmr-ultrasonido.com.ar/lavadoporultrasonido.htm http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/pigmentos/carotenoides.html http://es.wikipedia.org/wiki/Carotenoide

Anexo 01 Actividad biolgica de los carotenoides

Es conocido que los carotenoides de las frutas y verduras de la dieta son la principal fuente de vitamina A. La molcula de b-caroteno se parte en dos molculas de vitamina A (retinol), en un proceso que ocurre en el intestino y en el que participa un complejo enzimtico dioxigenasa. Cualquiera de los carotenoides que posean el anillo b no sustituido, caracterstico del bcaroteno, es precursor de la vitamina A, por ejemplo a-caroteno, b,b-caroteno-5,6-epxido y bcriptoxantina. El uso biomdico de los carotenoides est fundamentalmente dirigido a la produccin de vitamina A, sin embargo actualmente se investiga el potencial del licopeno, la lutena y la zeaxantina, en la prevencin de enfermedades como el cncer y la enfermedad coronaria. Algunos estudios recientes son: El b-caroteno suplementado en la dieta ha mostrado alguna evidencia de accin antitumoral en ratas. Las bastadinas aisladas de esponjas marinas presentan accin antitumoral, contra el cncer de la piel y en leucoplasias orales. El Vesanoid, es un derivado de la vitamina A que presenta accin citotxica, y es usado para el tratamiento de leucemia promieloctica aguda La astaxantina, es el carotenoide responsable del color del salmn. Este carotenoide se produce comercialmente mediante sntesis qumica, para usarlo en la cra de salmn. Sin embargo, tiene uso potencial en medicina, debido a que ha mostrado efecto estimulante en el sistema inmune humano, reduce el cncer oral en ratas e inhibe el cncer de seno en ratones. Recientemente se ha logrado

mediante la ingeniera gentica producir este y otros carotenoides, con cultivos bacterianos y plantas como el tabaco