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Separacin de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante cromatografa en capa fina

Introduccin La cromatografa en capa fina (CCF) es una forma de cromatografa de adsorcin slido-lquido que constituye una tcnica importante en Qumica Orgnica para el anlisis rpido de muestras que en algunos casos puede estar en el rango de los 10-9 g. Frecuentemente se usa para el seguimiento de la evolucin del progreso de una reaccin, o para el control y seguimiento de las separaciones que se producen mediante una cromatografa en columna preparativa. Para realizar el anlisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente slido como gel de slice (SiO2. H2O) o almina (Al2O3), unido a una placa rectangular de de vidrio o plstico. El adsorbente sirve de fase estacionaria. La muestra se aplica en disolucin con un capilar de vidrio en un extremo de la placa, pero no sobre el mismo borde. A continuacin se introduce la placa en un tanque cerrado conteniendo un disolvente o mezcla de disolventes (fase mvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del lquido. El tanque contiene una atmsfera saturada en el disolvente para lo cual se introduce un trozo de papel de filtro que debe. La fase mvil asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor o menor avance de los componentes de de la mezcla, segn su polaridad.

Procedimiento a. Preparacin de la muestra En un mortero, machacar una hoja de espinaca con una mezcla de 4 ml de hexano y 2 ml de etanol. Con una pipeta Pasteur transferir el extracto a un tubo de ensayo y agitar con mucha suavidad con una cantidad igual de agua, evitando la formacin de

http://www.ugr.es/~quiored/doc/p23.pdf

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emulsiones. Eliminar la fase acuosa con ayuda de una pipeta Pasteur, y el lavar sucesivamente dos veces con 2 ml de agua para eliminar el etanol. Transferir la fase orgnica a un tubo de ensayo y aadir con una esptula sulfato sdico anhidro para eliminar el agua.

b.- Preparacin de la placa de cromatografa. Marcar la placa, con ayuda de un lpiz los puntos en donde se va depositar la muestra (tres puntos). Con un capilar, tomar un poco de la disolucin orgnica

conteniendo los pigmentos y pinchar la placa de cromatografa en los tres puntos con concentraciones diferentes. Para evitar que la mezcla difunda por la placa, vaciar el contenido del capilar poco a poco sobre el punto, y soplar suavemente cada vez, para secar el disolvente.

c.- Desarrollo de las placa Preparar varias mezclas de disolventes, desarrollar las placas. Preparar unos 10 ml de eluyente cada vez, empezando por una mezcla de Hexano/Acetona 7:3 Disolventes Hexano Cloroformo Acetona Etanol Mezclas

Una buena separacin revela la presencia de al menos siete puntos coloreados Pigmento Carotenos Clorofila a Xantofilas Clorofila b Naranja Verde azulado Amarillo Verde Color

1. Dibujar en cada caso la placa con los resultados obtenidos 2. Calcular el Rf de cada uno de los puntos obtenidos 3. Indicar cual sera la mezcla de disolventes ms adecuada para realizar la separacin

Bibliografa Experimental Organic Chemistry 3th Edition. Gilbert & Martin. Harcourt, pgina 171

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