Qumica Biolgica I TP 3 LPIDOS

OBJETIVOS: -Poner de manifiesto ciertas propiedades de lpidos. -Comprobar la presencia de los lpidos complejos en cerebro de vaca luego de extraccin con diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos. FUNDAMENTOS: Los lpidos, son un grupo heterogneo de compuestos, de naturaleza antiptica, es decir que contienen regiones hidrofbicas y regiones hidroflicas. La mayor parte de los lpidos abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), estn formados por cidos grasos de cadenas hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados. Los lpidos llevan a cabo mltiples funciones en el organismo, como: almacenamiento de energa, de transporte, cumplir funciones hormonales, actuar como vitaminas, formar parte de las membranas celulares confirindoles la propiedad de permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en determinada direccin, as como la conduccin nerviosa y el transporte activo como la bomba
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de Na /K . A diferencia de los carbohidratos, protenas y cidos nucleicos, no forman polmeros, son mas bien molculas pequeas que presentan una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lpidos pueden ser usadas para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos coloreados, desprendimiento de vapores, formacin de jabones, entre otros. El tejido adiposo est constitudo principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro contiene relativamente pocas, los constituyentes lipdicos de estos tejidos son los lpidos complejos como: fosfolpidos y colesterol. Basados en la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos, es posible extraer y purificar lpidos del cerebro por sucesivas extracciones con diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles,

glicerofosfolpidos y esfingolpidos. El esquema se basa en los siguientes hechos: Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lpidos complejos. Algunos glicerofosfolpidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y la fosfatidilserina, son solubles el ter e insolubles en acetona.
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Los glucsidos de esfingosina se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en acetona y ter.

Los productos finales de este experimento son sustancias de una pureza relativa y sern identificados una vez efectuadas las extracciones. PARTE EXPERIMENTAL I - Extraccin de lpidos Pesar 20 g de cerebro triturarlo en mortero y secarlo parcialmente en un vaso de precipitado. Agregar 50 ml de alcohol etlico, llevar a ebullicin y mantenerlo por 3 minutos, luego filtrar por gasa. El filtrado se concentra en manta calefactora hasta unos 30 ml y se agregan luego 25 ml de ter de petrleo, agitar y separar en ampolla de decantacin. Se obtienen dos fracciones: Fraccin superior A : etrea, que tendr disueltos lecitina, cefalina, grasas, colesterol y restos de esfingomielina y cerebrsidos. Fraccin inferior B : alcohlica que tendr disueltos esfingomielina y cerebrsidos. Fraccin A: concentrar en bao Mara a mitad de volumen inicial y agregar 25 ml de acetona: se observar un precipitado que corresponde principalmente a fosfolpidos, quedando en solucin el colesterol y las grasas. Separar por centrifugacin obteniendo un sobrenadante C y un precipitado D. Sobrenadante C: separar en dos fracciones, en una reconocer grasas y en la otra extraer el colesterol con 10 ml de ter, separar en ampolla de decantacin y reconocer el colesterol. Precipitado D: reconocer lecitina y cefalina como fosfolpidos. Fraccin B: reconocer cerebrsidos. II - Reacciones de reconocimiento 1 - Reconocimiento de grasas: Es una prueba para identificar cidos grasos, por lo tanto, general para los lpidos que los contengan. Los jabones se define qumicamente como, las sales metlicas de los cidos grasos superiores. Prueba de saponificacin

Se separan las grasas por saponificacin, para esto se coloca 1 ml de la muestra, 1 ml de etanol y 0,5 ml de hidrxido de sodio al 40%. Calentar suavemente. Agregar unas gotas de cido sulfrico. La presencia de enturbiamiento indica liberacin de cidos grasos.

2 - Reconocimiento de colesterol: reaccin de Liebermann Burchard. El colesterol reacciona con anhdrido actico y cido sulfrico concentrado. Se produce una prdida de agua y una protonizacin del colesterol. Se constituyen en medio anhidro polmeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado. Secar la muestra sobre manta calefactora. Resuspender en 2 ml de cloroformo. En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de anhdrido actico y 1 ml de cloroformo. Enfriar a 0C en bao de hielo. Agregar al tubo los 2 ml de la muestra y colocar en hielo. Agregar por las paredes 1 gota de cido sulfrico cc. Enfriar y observar . Una coloracin verde azulada en la fase superior indica la presencia de grupo esteroide, colesterol en nuestro caso. 3 - Reconocimiento de cerebrsidos: Mediante la reaccin de Molish para hidratos de carbono. ( Ver TP H de Carbono). 4 - Reconocimiento de fosfolpidos: lecitina y cefalina mediante la determinacin de la presencia de fsforo.

La reaccin se basa en que el fosfato inorgnico, en medio cido, con el molibdato (reactivo 1) da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el cido ascrbico (reactivo 2) a azul de molibdeno, color azul verdoso. El reactivo 3 (arsenito/citrato) se combina con el exceso de molibdato impidiendo su reaccin posterior con fosfatos liberados de steres lbiles, lo que se aprovecha cuando se quiere determinar fosfato inorgnico libre en presencia de, por ejemplo, fosfolpidos (que no es nuestro caso). Muestra soluble de ppdo D Reactivo 1 Mezclar y esperar 30 segundos. Reactivo 2 Mezclar y esperar 30 segundos. Reactivo 3 0,75 ml 0,5 ml 1 ml

0,5 ml

Mezclar. Luego de 10 minutos la presencia de color azul demuestra la presencia de fosfato unido a lecitina y cefalina en el tejido.
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