Flujodelainformacingentica

Dogmadela Transferenciahorizontal BiologaMolecular

Transferenciavertical

Mecanismos de transferencia horizontal de d material gentico t i l ti

Transformacin
Definicin:
TransferenciadegenescomoresultadodelacaptacindeDNAdeun T f i d lt d d l t i d DNA d donador.

Experimentosclaves:
Griffith en 1928 Avery, MacLeod, McCarty

Transformacin
NotodaslasbacteriascaptanDNAlibre enelambiente Los gneros en que ocurre la Losgnerosenqueocurrela transformacinenformanaturalson: Bacillus,Streptococcus,Azotobacter, Haemophilus,Neisseria,andThermus. Haemophilus Neisseria and Thermus Cuandounaclulareceptoraescapazde sertransformadasedicequese encuentraenunestadodecompetencia. t t d d t i Lacompetenciaesunfenotipoconferidoporunaomsprotenas. Elestadodecompetenciaocurrealfinaldelafaseexponencialde crecimiento. p p Laduracindelestadodecompetenciavariadepocosminutosen Streptococcus ahorasenBacillus.

Tiposdetransformacin
Transformacinnatural :Solamenteungrupodebacterias puedensertransformadas: DNAusualmentelinear Inducidaartificialmente :Muchas,peronotodoslasbacterias puedenserinducidasacaptarDNA UsualmenteDNAplasmidial

UnaclulacapazdecaptarDNAesdescritacomocompetente p p p

Bacteriascapacesdesertransformadas Bacterias capaces de ser transformadas

TransformacinenbacteriaGrampositiva
Streptococcuspneumoniae(1)
Estadodecompetencia Et d d t i

Transformacin

TransformacinenbacteriaGramnegativas
HaemophilusinfluenzaeyNeisseriaegonorrhoeae

Captasecuenciasespecficas 4 a 8 sitios de unin por clula 4a8sitiosdeuninporclula Noparticipanintermediarios enlaunin en la unin Importaalespacio periplasmicodsDNA Unahebraesdegradada duranteeltransportedentro delcitoplasma del citoplasma Recombinancinconla p receptora.
Dubnau.1999.Ann.Rev.Microbiol.53:217

Diferenciasentrelossistemasdetransformacinde Streptococcuspneumoniae yHaemophilusinfluenzae

Estadodecompetenciainducida
Unadelasmsbsicaseimportantestcnicasenbiologa moleculareslahabilidadparaintroducirDNAforneodentro deunabacteriahusped.

TiposdetransformacinartificialaplicadosenE.coli: CompetenciaQumica Electroporacin

Estado de competencia
El DNA es una molcula muy hidrofilica, normalmente no pasa a hidrofilica travs de la membrana celular bacteriana. Para que una bacteria pueda captar un plsmido, primero debe estar plsmido competente para captar el DNA. Competencia qumica:
El estado competente se logra creando pequeos hoyos en la clula bacteriana suspendiendo las clulas en una solucin con alta concentracin de calcio. DNA (plasmidial) puede ser entonces forzado a entrar a la clula por incubacin de la clulas y del DNA sobre hielo y posteriormente aplicando un shock trmico (42C) y luego a hielo hielo. Luego se debe determinar la presencia de clulas transformadas.

Competenciaqumica p q

Escherichiacoli

Elprocedimientopuededardistintosresultadosencuantoalnmerode p p clulastransformadas La competencia de un stock de clulas competentes es determinado por el Lacompetenciadeunstockdeclulascompetentesesdeterminadoporel calculodelnmerodecoloniasE.colitransformadassonproducidaspor microgramodeDNAadicionado. Unaexcelentepreparacindeclulascompetentesda~108 coloniaspor microgamodeDNAadicionado.Unapobrealrededorde104/ug.

Competencia qumica
La transformacin ocurre cuando un organismos husped capta el DNA forneo y expresa ese gen. Ejemplo:
En un experimento usted puede introducir un gen para la p p resistencia a un antibitico como la ampicilina dentro de una cepa que muere por accin de la ampicilina. Si la bacteria susceptible incorpora el gen forneo ser resistente a la ampicilina.

Procedimiento:Competenciaqumica

Competencia qumica
Enfrolosionescargadospositivamenteen En fro los iones cargados positivamente en bufferdetransformacinneutralizanla cargadelasuperficiedelaclulayDNA

Shocktrmicoayudaaquelosplsmidos Sh k i d l l id entrenalaclula

Mecanismomolecularpropuestopara latransformacindeE.coli

Electroporacin p

Pulsoscortossonaplicados

Conjugacin
DescubiertaporJoshuaLederbergyEdwardTatum en1946. Transferenciaunidireccionaldematerialgentico entreunacluladonadorayunaclulareceptora porcontactodirecto. por contacto directo

Puente conjugativo

pilis

Donadorreceptor Donador receptor

Segmentos(raramentetodo)delcromosomadonadorrecombinanconel cromosomahomlogoreceptor. h l ElreceptorquecontieneDNAdeldonadorsondenominados transconjugantes

Tiposdeconjugacin Tipos de conjugacin

ConjugacinF+:Conjugacinplasmidial ConjugacinHfr:Conjugacincromosomal Conjugacindeplsmidosderesistencia

Conjugacinplasmidial j g p
L t LatransferenciadeDNAdesdeunacepaaotraesmediada f i d DNA d d t di d porfactordefertilidad(F). EnE.coli aproximadamenteunterciodelosaisladosfrescos tienenplsmidos Losplsmidosconjugativohansidoestablecidosen aproximadamente30gnerosdebacterias,lamayoraGram i d t 30 d b t i l G negativa. AlgunosgnerosdebacteriasGrampositivas:Streptococci, Staphylococcus,Streptomyces,Clostridium, yBacillus.

FactorF

Secuenciasdeinsercin Funcinde transferencia 94.5 Kb

Inhibicindelafertilidad Origendereplicacin Incopatibilidad/replicacin p / p Inhibicindefagos

Conjugacinplasmidial
WilliamHayes(1953)demostrqueelintercambiogenticoenE.coli ocurreenunasoladireccin. LatransferenciagenticaesmediadaporelfactorF. LacluladonadoraesF+ylareceptoraesF. ElfactorFesunplsmidodeDNAcircular,autoreplicativo. p p ElplsmidoFcontieneunasecuenciadeorigen(OriT),lacualiniciala transferenciadeDNA.Tambincontienegenesparaelpili Fopilisexual, transferencia de DNA. Tambin contiene genes para el piliF o pili sexual, elcualpermiteelcontactoentreclulayclula. La conjugacin ocurre cuando el plsmido F es cortado en el origen y LaconjugacinocurrecuandoelplsmidoFescortadoenelorigeny unasimplehebraestransferidausandoelmecanismodecirculo rodante. Cuandolatransferenciaescompletada,ambasclulassonF+.

Mecanismodecirculorodante Mecanismo de circulo rodante

Conjugacinplasmidial Conjugacin plasmidial

F+ + F +F F+ + F+ +F

Conjugacinplasmidial

Conjugacincromosomal j g
RecombinacingenticaenlacualfragmentosdeDNA cromosomaldesdelacluladonadorasontransferidosauna clulareceptoraseguidoalainsercindeunplsmidoF+ dentrodelcromosomadelabacteriadonadora.
El l id Elplsmidopuedeintegrarsealcromosoma.Estocreaunacepade d i t l Et d

altafrecuenciarecombinanteoHfr(Highfrequencyof recombination). ElplsmidoFintegradodirigelatransferenciadelcromosoma, desdeelsitiodeorigen.Losgenescercanosalsitiodeintegracin puedensertransferidosprimero. La transferencia continua, con el orden de los genes en el Latransferenciacontinua,conelordendelosgenesenel cromosomahastaqueesinterrumpida.

CepaHfr Cepa Hfr

CepaHfr p

Etapas de la conjugacin cromosomal

1. UnplsmidoF+seinsertadentrodel 1 Un plsmido F+ se inserta dentro del cromosomabacterianoyseformauna cepaHfr.

2. Elpilisexualseadhiereaclulareceptora. UnahebraDNAdonadoraseescindeenla mitaddelplsmidoF+insertado. mitad del plsmido F+ insertado

Etapas de la conjugacin cromosomal

3. Elpilisexualseretraeyseformael puenteentrelasdosbacterias.Una hebradeDNAdonadorentraenla clulareceptora.PartedelDNAdonador estransferidoalaclulareceptora.

4. Labacteriadonadorasintetizala 4 L b t i d d i t ti l hebracomplementariaypermanece comocepaHfr.Lacepareceptora sintetizaunahebracomplementaria delDNAtransferido.

Etapas de la conjugacin cromosomal

5. ElfragmentodeDNAdonador

serecombinaconelDNAdela bi l d l clulareceptora.Elreceptor semantienecomoF.

EscisindeelfactorF+puede ocurrirespontaneamenteabaja frecuencia. OcurreenclulasHfr Unapequeaporcindel d l cromosomadelhusped puedeserescindido,creando puede ser escindido creando unplsmidoF. UnplsmidoFesdenominado p deacuerdoalgenqueporta. Ej.F(lac)

ConjugacinF +F
F +F F+F F + F F+F

Conjugacin de plsmidos de resistencia

Recombinacingenticaenlacualestransferidoun plsmidoR(plsmidoquecodificanresistenciapara plsmido R (plsmido que codifican resistencia para antibiticosyparapilisexual)desdeunacluladonadora ounareceptora.

Etapasdelaconjugacinde plsmidosderesistencia

Consecuencias de la conjugacin
Una bacteria puede recibir algunos genes nuevos y adquirir nuevas propiedades gentica. En algunos casos los genes pueden ser incorporados al cromosoma por recombinacin y losplsmidos son perdidos. Los plsmidos juegan un importante rol en la transferencia de d resistencia a los antibiticos entrelas bacterias. it i l tibiti t l b t i