UNIVERSIDAD TECNICA PRIVADA COSMOS

MICROBIOLOGIA

INFORME PRCTICO # 4 Preparacin y Esterilizacin de Materiales y Medios de Cultivvo

Docente: Gabi Mamani Alumno: Eder Silva Guedes Carrera de Medicina 3semestre Grupo 1 C

Cobija-Pando

2012

INFORME DE LA PRACTICA #4 Preparacin Y Esterilizacin de Materiales Y Medios de Cultivo

Uno preparadas en el de los sistemas El ms importantes alimenticio para en la el identificacin que crecen de los

microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales laboratorio. material microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes. El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. 1- disponibilidad de nutrientes adecuados Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles. Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,

magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica. Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos. 2- consistencia adecuada del medio Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio. 3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. 4- condiciones adecuadas de humedad Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio. 5- Luz ambiental La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos. 6- pH La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento

bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales. 7- Temperatura Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios. 8- Esterilidad del medio Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante) Objetivos: Aislamiento del virus. Lavar, preparar y envolver correctamente el material que se someter a esterilizacin. Seleccionar los mtodos de esterilizacin adecuados para las diversas necesidades del laboratorio demicrobiologa. Comprobar la efectividad del proceso de esterilizacin. Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes. Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso quese les dar. Relacionar la composicin de los diversos medios de cultivo con sus caractersticas y aplicaciones.

Fundamentos Terico: En muchos aspectos, el pequeo tamao de los microorganismos los hace sujetos ideales para la experimentacin. Se pueden cultivar millones de organismos en un solo mililitro de medio para su estudio. La rpida multiplicacin de estas diminutas criaturas constituye tambin una ventaja experimental, ya quese puede trabajar con muchas generaciones en un solo da, Es ms, los conocimientos adquiridos en el estudio de los microorganismos pueden ser, a menudo, generalizados a los sistemas celulares, plantas y animales, incluida la especie humana. Para llevar a cabo experimentos con microorganismos es usualmente necesario cultivarlos en el laboratorio. La Esterilizacin La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total de losmicroorganismos viables presentes en un determinado material. Este procedimiento es de gran utilidaddentro del campo farmacutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilizacin demateriales estriles.

Mtodos de Esterilizacin: Agentes Fisicos: o Por calor, Radiaccin Agentes Mecnicos: o Filtracin Agentes Qumicos: o Por gs, por glutaraldehido Medios De Cultivo Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condicionesfsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en elLaboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso,asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, lasque son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no seconocen todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintticos: Son los medios que tienen una composicin qumica definidacualitativa y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin.(Para bacteriascomo:Echerichia coli y Leuconostoc citrovorum) De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo demicroorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo.Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos conexcepcin de los que se quieren cultivar. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos yestn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos.(Para bacterias comoSalmonella typhi y Clostridium botulinum) Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividadmicrobiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividadantimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.(para bacteriascomo:Streptococcus pyogenes y Escherichia coli) Por su composicin los medios de cultivo se clasifican en: Slidos Lquidos Semislidos

Materiales y Equipo Matraz erlenmeyer Vidrio del reloj Tubos de Ensaye Cajas Petri Pepetas

Probetas Balana Mechero Autoclave Esptula

Sustancias: Medio Agar de Mac Conkey ; Medio EMB (Agar de Eosina y Azul de metileno); Sal Manitol Rojo de Fenol; Caldo nutritivo; Medio SIM.

Procedimentos y Resultados: Preparacin AGAR MACCONKEY:

Agar Macconkey

Pesar: 50___1000ml X ___150ml X= 7,5 E colocar em um Matraz

Adicionar 250ml de Agua Destilada

Mezclar com Calor

Esterelizar com matraz em AutoClave, durantes unos 15m em 121 grados

Resultados En la prctica del laboratorio identifico que temos que ter a principio concepto bsico para la preparacin de los medios de cultivo, como la esterilizacin, donde fue utilizado uno mtodo fsico, la presin a vapor utilizado a autoclave que posea los mtodos necesarios para la eliminacin los microorganismos que pueden ser adquirido en lo medio. Despus transfiri para cajas Petri pero que antes las cajas foram debidamente limpias. Se verifico que las substancias se solidificaron.

Conclusiones:

En esta prctica de Medio puede ver las ventajas de la creciente fr Con El Medio con calma y con cuidado, teniendo en cuenta de ellos en las reglas de uso, y siempre respetando los lmites que de cada instrumento. Por lo tanto, trabajar y bien ejecutado y alcanzar esas metas.
Informe Practico Referente la Clase del da 19 de mayo de 2012 Este da comenzamos lo docente pas en el cuadro el tema de la clase siguiente, donde es Toma de muestras, preparacin de frotis. Donde iremos obtener amuestras diversa como: Sangunea Fluidos biolgicos y secreciones Tejidos Lquidos biolgicos

Este practica iremos ejercer en la prxima clase prctica que se realizar en Lunes da 21 de mayo de 2012. con uno repaso con objetivo de diagnosticar nuestro desempeo, el repaso que se pas foi referente a Medio de cultivo de la clase anterior donde forran fetas cinco preguntas: 1) Mencione 2 exemplos de meios de cultivo enriquecidos no seletivo? Agar Chocolate Agar Sangre 2) Cual el objetivo del medio de cultivo? Aislamiento de virus. 3) Para que se utiliza o medio de cultivo Lowseein Jensen? Selectivo de Micobacterias. 4) Esquematize el procedimento de preparacin del medio de cultivo? Definicion de qual medio de cultivo ser utilizado; Regra de tres para la quantidade de aguay quantidade de medio de cultivo ser utilizado; Ajustar la balana con o vidro de relogio. Pesar lo meio de cultivo; Con la esptula colocar no matraz de elenmayer; Medir la quantidade de agua destilada na probeta; Acrescentar a destilada ao matraz de elenmayer; Levar ao mechero e em seguida ao auto clave; Conforme la regra de trs colocar os valores exatos em la caj petri; Deixar um pouco em la caj petri e em seguida levar ao refrigerador. 5) Preparar SS 34g ___1000ml (20 cajas X 25 ml _____500ml) 34g ___________1000ml X _____________ 500ml X=17g Agar SS

Bibliografa http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html

1.AMATO NETO, V. et al.Antibiticos na Prtica Mdica. 2.BAILEY, R. et al.Diagnstico Microbiolgico. Editora mdica PanAmericana S.A 1973. 3aed. 3. JAWETZ, E. et al. Microbiologia Mdica. 18. ed. GuanabaraKoogan, 1996. 4. KONEMAN E.W.; ALLEN S.D.; JANDA W.M.; SCHRECKENBERGER P.C. & WINN JNIOR W.C. Diagnstico Microbiolgico Texto e Atlas colorido 5 aed. Medsi,2001.