Cromatografia

La cromatografa engloba a un conjunto de tcnicas basadas en la separacin de los componentes de una mezcla y su posterior deteccin.

Fundamento
Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas existe: una fase mvil: un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra la muestra a travs de Una fase estacionaria: un slido o un lquido fijado en un slido.

Fundamento
Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria y con la fase mvil: Adsorcin: El soluto se adsorbe en la superficie de las partculas slidas de la fase estacionaria. Es un fenmeno superficial, aumentado con la formacin de puentes de hidrgeno. Particin o reparto: El soluto se equilibra entre el lquido de la fase estacionaria y la fase mvil, por diferencia de solubilidad. Hasta llegar a un equilibrio

base a una columna rellena con un intercambiador de iones ( resina). Exclusin molecular, filtracin o permeacin en gel: No existen interacciones entre la fase estacionaria y el soluto. Se separa por tamao de partcula.

Intercambio inico: los aniones o cationes se separan en

De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando.

Fundamento
Despus de haber pasado los componentes por la fase estacionaria y haberse separado pasan por un detector que genera una seal que puede depender de la concentracin y del tipo de compuesto.

ES NECESARIA OTRA TCNICA DE ANLISIS INSTRUMENTAL!!!! LA CROMATOGRAFA SLO ES UNA TCNICA DE SEPARACIN

Clasificacin
Las tcnicas cromatogrficas se pueden clasificar atendiendo a la disposicin de la fase estacionaria:
Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel Cromatografa en capa fina

Cromatografa en columna: La fase estacionaria se sita dentro de una columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
- Cromatografa de lquidos - Cromatografa de gases - Cromatografa de fluidos supercrticos

CCF
La principal aplicacin de la tcnica de cromatografa en capa fina (CCF) es su utilizacin para separar los componentes puros que forman parte de una mezcla. Esta separacin se consigue mediante la diferencia entre las fuerzas de adhesin de las molculas de los componentes a una fase mvil (normalmente, un disolvente) y a una fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de slice). Esta diferencia se traduce en un mayor o menor desplazamiento o movilidad de cada componente individual, lo cual permite su separacin e identificacin. Tiene numerosas ventajas: es rpida, sencilla, barata y necesita poca cantidad de muestra.

CCF
El disolvente en contacto con la placa de cromatografa, asciende y arrastra las sustancias a distinta velocidad segn la mayor o menor retencin que experimenten.

Cromatografia sobre columna

La separacin se produce en el interior de una columna cromatogrfica. Dependiendo del estado de la fase mvil se distingue: Cromatografa Gas- Lquido
Fase mvil gas Fase estacionaria - columna

Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC)

Fase mvil lquido Fase estacionaria - columna

Etapas:
Inyeccin de la muestra Transporte de la muestra por el interior de la columna Separacin de sus componentes Deteccin de los componentes Identificacin y/o Cuantificacin de cada componente CROMATOGRAMA

Cromatografia de gases
Inyeccin de la muestra
La muestra se inyecta con un jeringa a travs de un septup de goma y se vaporiza. Generalmente 0.1 a 10 L. Se controla la temperatura del horno de inyeccin. Slo el 0.1 a 10 % del volumen de 0.1 a 2 L de muestra inyectada llega a la columna; el resto se elimina.

Cromatografia de gases
Transporte de la muestra por el interior de la columna
Columnas empaquetadas Son de acero inoxidable o vidrio, tienen un dimetro de 3 a 6 mm y una longitud de 1 a 5 m. Se rellenan con la fase estacionaria slida o un soporte inerte recubierto con la fase estacionaria Columnas tubulares abiertas o capilares Son de slice fundida, son mucho ms finas y mas largas que las empaquetadas. Tienen mayor resolucin y sensibilidad. Tienen menor tiempo de anlisis y se maneja menor cantidad de muestra

Cromatografia de gases

Cromatografia de gases
Deteccin de los componentes
Se necesita disponer de dispositivos que detecten y cuantifiquen los eluidos a la salida de la columna.

Cromatografia de gases
Las propiedades de un buen detector han de ser:
Elevada sensibilidad- Buena selectividad Respuesta rpida a cambios de concentracin Amplio intervalo de linealidad Estabilidad en el ruido Poco sensible a cambios de caudal, presin y temperatura Respuestas facilmente manejables

Cromatografia de gases
Los dispositivos ms utilizados son:
Conductividad trmica ( general-no destructivo)
Consiste en un filamento caliente de tungsteno. La resistencia elctrica del filamento aumenta con su temperatura. Cuando de la columna emerge un soluto, la conductividad trmica de la corriente de gas disminuye, de modo que el filamento se enfra, baja la resistencia y se observa un cambio en la seal de salida. Muy sensibles a H2 y He.

Cromatografia de gases
Ionizacin en llama (destructivo)
La seal es proporcional al nmero de carbonos susceptible de ionizarse. Los tomos de carbono de compuestos orgnicos pueden producir radicales CH, los cuales a su vez producen iones CHO+ en la llama:

CH + O

CHO+ + e-

Slo uno de cada 10 000 tomos produce un in. No es sensible a CO2, H2O y NH3

Cromatografia de gases
Captura electrnica (especfico-no destructivo)
El N2 que entra al detector es ionizado por electrones de alta energa (rayos ) que se emiten de una lmina delgada que contiene 63Ni o 3H. Se produce una corriente hacia el nodo constante. Cuando llega una molcula de analito con alta afinidad electrnica, capturan algunos de los electrones y la corriente hacia el nodo disminuye. Muy sensible a molculas que contienen halgenos, grupos carbonilo conjugados, grupos nitrilo, compuestos nitro y compuestos organometlicos. No es sensible a hidrocarburos, alcoholes y cetonas.

Cromatografia de gases
Identificacin y/o Cuantificacin de la muestra
Todos los componentes separados en un cromatgrafo y detectados por el mtodo adecuado de deteccin dan como resultado un cromatograma.
Cada pico corresponde a un componente y su rea es proporcional a su concentracin

Cromatografia de gases
Anlisis cualitativo
Comparar el tiempo de retencin del pico del problema con el de un patrn. Agregacin al problema de una muestra conocida. Si el tiempo de retencin es idntico al de un componente del problema, el rea de ese pico aumentar. Se debe identificar en dos o ms tipos de columna.

Cromatografia de gases
Anlisis cuantitativo
El rea de un pico es proporcional a la cantidad de ese componente. Los cromatgrafos modernos tienen integradores y ordenadores que calculan las reas.

Cromatografia de gases

HPLC

HPLC
Fase estacionaria
Un soporte comn es el partculas microporosas de slice con dimetro de 5 a 10 m.

Fase mvil (Disolventes)

Los disolventes utilizados deben ser muy puros. Se puede utilizar un solo disolvente (eleccin isocrtica). Se puede cambiar un solo disolvente por otro luego de un tiempo apropiado. Se puede cambiar continuamente de composicin del disolvente (eleccin por gradiente).

HPLC
Bombas
La calidad de una bomba es determinada por el grado de estabilidad y reproducibilidad del flujo que genera Se trabaja hasta 10 mL/min a presiones hasta de 40 Mpa (400 atm)

Sistemas de inyeccin

HPLC
Sistema de deteccin
Sirve cualquier dispositivo basado en una propiedad que responda la concentracin del eluido. Los ms utilizados son: Espectrofotometria UV
Es el detector ms utilizado, porque muchos solutos absorben dicha radiacin y es bastante sensible a ella El sistema ms simple emplea la emisin a 254 nm de una lmpara de mercurio y deteccin a una sola longitud de onda Tambin se utilizan una lmpara de deuterio y un monocromador para mediciones a longitud de onda variable. El intervalo lineal comprende cinco rdenes de magnitud de concentracin de soluto

HPLC
Refractmetria
Es casi universal, responde a casi cualquier soluto. La sensibilidad es unas mil veces menor que la de un detector ultravioleta, y no es til en gradiente.

Electroqumica
Es bastante selectivo, porque slo cientos analitos se oxidan o se reducen con facilidad. Pueden detectarse por oxidacin: fenoles, aminas aromticas, perxido y mercaptanos. Y por reduccin: cetonas, aldehidos y nitrilos.

HPLC vs Cromatografia de gases

Son a da de hoy dos poderossimas herramientas de anlisis Ambas admiten acoplamiento con otras tcnicas de deteccin. Ambas tcnicas por su versatilidad, y por las diversas posibilidades que ofrece la seleccin de la columna cromatogrfica, permiten abordar: anlisis de multicomponentes en muestras de diversa procedencia con elevada precisin y sensibilidad (dependiendo del detector). La cromatografa de gases, requiere muestras gaseosas o fcilmente volatilizables El resto de muestras que no poseen esas caractersticas pueden ser analizadas por HPLC.

Resumen
Todo el proceso de separacin se lleva a cabo en el interior de una columna - A la salida de la columna existe un detector que detecta cada componente eludo - La respuesta adopta la forma de un pico mas o menos Gaussiano. - La separacin es tanto mas eficaz cuanto mas resueltos aparezcan los picos.