PRCTICA 5 REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS OBJETIVOS: Reconocer los principios inmediatos de los carbohidratos.

. Diferenciar experimentalmente monosacridos, disacridos y polisacridos. Familiarizarse con la clasificacin de los hidratos de carbono en reductores y no reductores. Estudiar las propiedades del almidn. FUNDAMENTO TERICO: Se denominan carbohidratos o glucsidos los derivados aldehdicos cetnicos, reales o potenciales de alcoholes polivalentes o sus productos de condensacin segn la cantidad de glucsidos o azcares sencillos que se obtengan por hidrlisis de los policarbohidratos. Se les clasifica como: Polisacridos (celulosa, almidn) Trisacridos (rafinosa) Disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa), y Monosacridos Los monosacridos por el grupo carbonilco pueden ser aldosas o cetosas por el. nmero de tomos de oxigeno, pueden ser hexoaas (glucosa, galactona, manosa, fructosa), pentosa (arabinosa, xilosa, ribosa, lixosa), terrosas (treosa y eritrosa). Los carbohidratos poseen algunas propiedades de las funciones carbonilo y oxhidrilo y, adems, algunas especficas. Todos son ptimamente activos. Por el calor y la accin de cidos fuertes se deshidratan, dando en algunos casos derivados del furfural. Los hidratos de carbono ms abundantes de la bisfera estn constituidos por el almidn y celulosa que son polmeros de glucosa presentes en plantas. El almidn est distribuido ampliamente en las plantas que lo almacenan en granos y en tubrculos como reserva alimenticia para el momento de la germinacin. Todos los tipos de almidn producen un color azul con el yodo, lo cual sirve de indicador cualitativo sensible, tanto para ensayar el yodo como el almidn. La hidrlisis del almidn catalizada por cidos lo convierte en varias clases de dextrinas, en maltosa y por ltimo en D (+) glucosa. El ensayo con yodo se utiliza para seguir la marcha de la hidrlisis puesto que la coloracin va cambiando de azul a rojo a medida que decrece el peso molecular del compuesto orgnico. Los grupos funcionales existentes en el almidn y en la celulosa son los grupos hidroxilo y acetal. Estos polisacridos tienen diferente configuracin, siendo el almidn un glucsido y la celulosa un f -glucsido. Tambin difieren en el tamao teniendo la celulosa un peso molecular medio mucho mayor que el del almidn. MATERIALES Y REACTIVOS Reactivo Molisch Reactivo Fehling Reactivo Tollens Reactivo Seliwanoff Reactivo Barfoed Tubos de ensayo Pipetas Bao de agua hirviente Pinzas Bao hirviente

Sol. glucosa 1% Sol. fructuosa 1% Sol. sacarosa 1 Sol. lactosa 1% Sol. almidn 1% Sol. sacarosa 5% Sol. HCl 10%

Vaso de precipitados Luna de reloj

Sol. NaOH 10% Sol. yodo - yodurado

PROCEDIMIENTO: Reacciones genricas de los carbohidratos Reaccin de Molisch En 6 tubos de ensayo ponga respectivamente 1 ml. de una solucin de glucosa al 1%, 1 ml. de solucin de fructuosa o levulosa al 1%, 1 ml. de una solucin de sacarosa al 1%, 1 ml. de una solucin de lactosa al 1%, 1 ml. de una solucin de almidn al 1% y en el ltimo 1 ml. de agua (testigo). A cada una agrguele 2 gotas de reactivo de Molisch; inclinando el tubo, deje resbalar por las paredes 2 ml. de cido sulfrico concentrado. Observe el color violceo del anillo formado en la interfase entre los dos lquidos. Anote aquellas soluciones que den positiva la prueba.

Fructuosa Violeta Intenso y cafe Glucosa Anillo violeta un poco debil Lactosa Anillo violeta debil Maltosa Anillo violeta con cafe Sacarosa Anillo Violeta fuerte Almidon Violeta Agua No presenta anillo
Reacciones Especficas Reacciones de Fehling

En 5 tubos de ensayo mezclar en cada uno 0.5 ml. de solucin A de Fehling con 0.5 ml. de la solucin B de Fehling, agrgueles 1 ml. de la solucin de los carbohidratos utilizados en el experimento anterior. Introducir los tubos en un bao hirviente, observe si hay cambios de color, formacin de precipitados.

Glucosa Forma Precipitado Cafe Fructuosa Si reacciona Sacarosa No Lactosa Forma precipitado Almidn Reacciona un poco Maltosa Forma precipitado poco
Reaccin de Tollens

En 5 tubos de ensayo colocar a cada uno 1. ml. de Reactivo de Tollens recientemente preparado, aadir a cada uno 2 ml. de las soluciones de carbohidratos utilizados anteriormente. Introducir los tubos en un bao hirviente, observe si hay formacin de espejo de plata y cuales carbohidratos dan negativa esta reaccin. Realice una comparacin de estos resultados con los de la prueba de Fehling.

Glucosa da Positivo Fructuosa Primero en reaccionar da espejo de plata Sacarosa Positivo Lactosa Positivo Almidn No reacciona Maltosa No reacciona
Reaccin de Seliwanoff En 5 tubos de ensayo coloque 1 ml. del reactivo Seliwanoff, luego aada 3 gotas de solucin de los carbohidratos utilizados anteriormente, luego lleve los tubos a bao hirviente. Anote el tiempo en que se colorea cadaa tubo y el color adquirido.

Glucosa Fructuosa Si reacciona cambia el color Sacarosa Si reacciona cambia el color Lactosa Almidn Maltosa
Reaccin de Barfoed En 5 tubos de ensayo coloque 1 ml. del reactivo Bartoed luego aada 1 ml. de solucin de los carbohidratos utilizados anteriormente, luego llevar los tubos a bao hirviente y observar la formacin de un precipitado de color rojo ladrillo, lo que indicar la presencia de monosacridos. Los disacridos tambin precipitan xido cuproso, pero muy lentamente.

Fructuosa Forma Precipitado primero Glucosa Segundo en precipitar (poco) Maltosa Precipita poco Lactosa No reacciona Almidn No reacciona Sacarosa No reacciona
Hidrlisis de la Sacarosa En 3 tubos de ensayo coloque 5 ml. de solucin de sacarosa al 5%, llvelos a bao hirviente y a cada tubo aada volmenes iguales de agua para el primer tubo, cido clorhdrico al 10% en el segundo tubo, e hidrxido sdico acuoso al 10% en el tercero. Calentar los tubos durante cinco minutos y ensaye a continuacin la reaccin de una porcin de cada mezcla con la solucin de Fehling. Qu conclusiones deduce?

En HCl precipita (Se hidroliza en glucosa y fructuosa los cuales son reductores).

Ensayo del Almidn frente al Iodo En un tubo de ensayo coloque 6 ml de solucin de almidn al 1%, aada una gota de solucin de Iodo - lodurada, observe el color de la solucin. Luego caliente la solucin coloreada a ebullicin y observe el efecto, observe tambin qu efecto produce el enfriamiento de la solucin.

La solucin se tinta azul debido a la formacin de un complejo entre el yodo y el almidn. Al momento de calentar los enlaces puente hidrogeno se abren provocando q el yodo no quede atrapado en el almidn.
Hidrlisis del Almidn En un vaso de precipitados coloque 50 ml de solucin de almidn al 1%, aada 1 ml de cido dorhdrico concentrado. Hierva la solucin y retire muestras de Y ml. a intervalos prximos, ensayando su reaccin frente al iodo. Anote el color en los diferentes ensayos. Cuando la solucin ya no produzca coloracin con el iodo, neutralcela y ensaye la reaccin de una muestra frente al Fehling. Formule estructuralmente los productos finales de la hidrlisis del almidn (un disacrido y un monosacrido).

CUESTIONARIO: Indique la composicin de los reactivos utilizados en la prctica (R. Molish, R. Seliwanoff, R Barfoed, R Fehling). Prueba de Molisch(-naftol): normalmente la primera prueba realizada para la identificacin de los carbohidratos es la prueba de Molisch. Consiste en mezclar 2ml de la solucin a determinar la presencia de carbohidratos con 2 gotas del reactivo de Molisch (alfa naftol al 10%) recin preparado y 2ml de H2SO4 concentrado, el cual causa hidrlisis de los enlaces glucosdicos del disacarido o polisacrido presente. La aparicin de un anillo de rojo violeta es indicativo de la presencia de carbohidratos en la muestra.

Prueba de Seliwanoff: esta prueba se realiza para la identificacin de cetosas y aldosas. Se agregan 0,5 ml de la solucin problema y 2 ml del reactivo, el cual esta constituido por el compuesto fenlico Resorcinol (m-dihidroxibenceno) disuelto en acido clorhdrico concentrado. Una tonalidad rojo cereza indica la presencia de cetosas. El cido clorhdrico deshidrata ms rpidamente las cetohexosas que las aldohexosas, ya que stas deben isomerizarse a aquellas, para formar el Hidroximetilfurfural por deshidratacin.

El hidroximetilfurfural es condensado por el resorcinol para formar un complejo de color rosado salmn.

Prueba de Fehling: los reactivos de Fehling, Tollons y Benedict, son agentes oxidantes moderados, oxidando a los grupos aldehdos al mismo tiempo que estos se reducen. A 1 ml de la muestra dada se adiciona 2 gotas del reactivo de Fehling, el cual consiste de dos partes: una parte esta constituida por una solucin de Sulfato Cprico, y la otra por Hidrxido de sodio y Tartrato de Sodio Potasio (Sal de Rochelle). Al mezclar cantidades iguales de estas dos soluciones, se forma un complejo soluble de Tartrato Cprico, de color oscuro, el cual proporciona una pequea concentracin de iones Cprico (Brewster, 1977). La presencia de carbohidratos reductores queda evidenciada, ya que el grupo aldehdo reduce la solucin de Fehling y forman un precipitado rojo ladrillo de xido Cuproso.

El Hidrxido de Sodio y el Tartrato que contiene el reactivo de Fehling, son empleados, ya que actan como agentes quelantes, para que el ion cuproso no se precipite como Hidrxido Cprico e interfiera con la reaccin.

Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los disacridos. El reactivo de Barfoed se prepara aadiendo 2.5 ml de cido actico al. 38% en agua a 100 ml de acetato cprico al 6.6% en agua. Elabore un diagrama de flujos del proceso de produccin de la glucosa a nivel industrial.

A qu se debe la coloracin azul del iodo sobre las muestras de almidn?

Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo. La amilosa, el componente del almidn de cadena lineal, forma hlices donde se juntan las molculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina, el componente del almidn de cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son incapaces de juntarse, conduciendo a un color entre naranja y amarillo.

Cmo se utiliza el ensayo del iodo para seguir la hidrlisis del almidn?

. Al romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay cambio de color. OBSERVACIONES CONCLUSIONES BIBLIOGRAFA