PROGRAMA DE PS- GRADUAO EM ZOOTECNIA

Descrio dos mtodos in situ e in vivo de digestibilidade em ruminantes.

ALEXSANDRA PALUDO

Rio Verde, GO 2011

INSTITUTO FEDERAL GOIANO CAMPUS RIO VERDE

PROGRAMA DE PS- GRADUAO EM ZOOTECNIA

Descrio dos mtodos in situ e in vivo de digestibilidade em ruminantes.

ALEXSANDRA PALUDO

Seminrio apresentado ao Instituto Federal Goiano Campus Rio Verde, como requisito parcial para a avaliao na disciplina de Seminrios I.

Orientadora: Prof. Dr. Ktia Cylene Guimares

Rio Verde - GO Setembro, 2011

1. INTRODUO
Com o surgimento de novas cultivares de plantas forrageiras assim como de novas fontes de nutrientes v-se necessrio o a avaliao do potencial dos mesmos para a utilizao na alimentao animal. A estimativa dos valores de digestibilidade reconhecidamente um dos primeiros aspectos do valor nutritivo do alimento. Todavia, experimentos para determinao de digestibilidade, por meio de coleta total de fezes, so onerosos e de difcil execuo, devido a adaptao dos animais as gaiolas e as praticas de manejo. A eficincia dos sistemas de produo de bovinos depende, entre outros, da oferta adequada de nutrientes aos animais. A qualidade nutricional de um alimento tem sido definida como o produto do seu consumo voluntrio, da sua digestibilidade e da eficincia de utilizao dos nutrientes digeridos. A princpio, o parmetro mais consistente para caracterizar o potencial de um determinado alimento ou dieta em suprir as exigncias nutricionais de uma determinada categoria animal, em um sistema especfico de manejo, o desempenho animal obtido com o seu uso. Porm, experimentos deste tipo so relativamente onerosos e demandam tempo para a obteno de resultados. Em funo disso, vrias tcnicas alternativas de avaliao dos alimentos foram desenvolvidas nas ltimas dcadas. Associado a elas, foram desenvolvidos tambm sistemas mecnicos e mais acurados de avaliao nutricional e de predio da produo animal, que tm por base anlises detalhadas do alimento e da fisiologia animal (SILVEIRA & KOZLOSK, 2006). A estimativa da digestibilidade pelo mtodo convencional, ou seja, in vivo, a medida que apresenta o maior grau de confiana. Contudo, um processo demorado e trabalhoso, no permitindo a avaliao simultnea de um grande nmero de alimentos. Alm do mais, exige um nmero mnimo de animais por alimento avaliado e grande quantidade de alimento. Um mtodo mais direto de medir a degradao ruminal dos alimentos colocando uma pequena quantidade de alimento em uma bolsa porosa no degradvel e suspend-la e o seu contedo no rmen foi proposto pela primeira vez por Quin et al (1938). Esta tcnica (variadamente chamada de nylon, dacron, bolsa de polister , in sacco, ou degradabilidade ruminal in situ) tem sido adotada pela AFRC(1992) como o

mtodo padro caracterstico da degradabilidade ruminal da protena. Esta tcnica foi escolhida por ser uma comparao com os resultados in vivo (FONTE). A tcnica in situ permite timas condies de temperatura, pH, tamponamento, substratos, enzimas e fatores de crescimento; no entanto, apresenta elevada contaminao do material nas bolsas com micro-partculas da dieta, sendo importante a avaliao dos efeitos da dieta sobre a degradao dos alimentos e fraes que o compem (Mertens, 1993). Portanto o objetivo dessa reviso comparar as tcnicas de avaliao de alimento in vivo e in situ,assim como a eficincia de ambas.

2. MTODOS DE DIGESTIBILIDADE

2.1.

Digestibilidade in Situ
A tcnica in situ consiste em determinar o desaparecimento de componentes

da amostra de alimentos acondicionados em sacos de nilon, ou outro material sinttico, e incubados no rmen por perodos variveis. Esta tcnica inicialmente foi usada por QUINN et al. (1939) que utilizaram sacos de seda incubados no rmen atravs de uma fstula. Com o advento das fibras sintticas, os pesquisadores passaram a utilizar este tipo de material por ser indigestvel nas condies prevalecentes no rmen. A popularidade desta tcnica esta ligada a sua rpida e fcil execuo requer pequena quantidade da amostra do alimento e possibilita sua exposio ao contato ntimo com o ambiente ruminal, apesar de no estar sujeita s experincias da mastigao e ruminao ou fluxo para o trato digestivo posterior (TEIXEIRA, 1997). Devido a sua ampla utilizao, pesquisas foram desenvolvidas com o intuito de se estabelecer padres apropriados e uniformizar a tcnica in situ, visando a obteno de repetibilidade aceitvel dos resultados, como a porosidade do tecido, tamanho da partcula, quantidade de amostra, lavagem dos sacos, etc. A suspenso de alimentos dentro do rmen (por exemplo: tcnica do saco in situ, tcnica in sacco, tcnica do saco de fibra artificial) permite o contato ntimo do alimento teste com o meio ruminal. A estimao da concentrao de indicadores internos em alimentos e fezes por procedimentos in situ parece ser mais exata que em

procedimentos in vitro. Apesar disso, ainda existem divergncias quanto forma de implementao e conduo desse mtodo (CASALI et al, 2008). O tempo de incubao ruminal uma das variveis de maior influncia sobre a representatividade dos resduos indigestveis em procedimentos de incubao in situ. No existe na literatura consenso sobre o tempo de incubao ruminal que permita representar melhor a frao indigestvel das amostras; observam-se perodos variveis, como: 96 (RUIZ et al., 2001), 144 (FREITAS et al., 2002), 192 (ZEOULA et al., 2002), 240 (CLIPES et al., 2006) e 288 horas (HUHTANEN et al., 1994). Conforme resultados obtidos por MORON et al (2001) quando comparou as tcnicas de degradabilidade ruminal in situ e a in vitro utilizando nove alimetos (fub de milho, farelo de soja, farelo de algodo, farelo de trigo, farinha de carne, capim-napier, capim-gordura, feno de alfafa e feno de coast cross), obteve que para os concentrados a tcnica in vitro, no foi apropriada, j para os volumosos a tcnica se mostrou mais adequada. Vrios aspectos da tcnica in situ sofrem interao naturalmente e podem influenciar a interpretao dos resultados. A discusso seguinte ir relacionar parmetros especficos que afetam a digesto in situ de acordo com a Tabela 1. Tabela 1 Recomendaes para o procedimento da digesto ruminal in situ. Varivel Porosidade do saco Tamanho da partcula Recomendao 40 a 60m Suplementos proticos e energticos, 2 mm Gros de cereais inteiros, subprodutos fibrosos, 5 mm Fenos (> 80% de MS), 5 mm Silagens (secas ao ar para 60-70% de MS ou secas ao frio e ento modas, 5 mm Descrever o tamanho da partcula (peneira) se no for modo. 10 a 20 mg/cm2 Sem considerar o marcador utilizado (DAPA, RNA, N15, S35, etc) a correo deve ser utilizada, principalmente, para forragens de baixa qualidade. Alimentar segundo s exigncias do animal

Relao quantidade de amostra por rea superficial do saco Contaminao microbiana

Dieta

Animal/Perodo

Incubao Pr-ruminal

Insero dos sacos

Lavagem Ps-Ruminal Tempos de Incubao

Ingrediente Padro

Expresso dos resultados Fonte: NOCEK (1997)

Documentar a composio da rao Alimentar com propores de forragem: concentrado de acordo com s exigncias do animal Fornecer os ingredientes na dieta basal que sero testados Fornecer uma rao total, vontade Utilizar o tipo de animal para o qual as determinaes sero utilizadas Pelo menos duas repeties no tempo devem ser utilizadas se um animal utilizado Inserir os sacos em um mesmo tempo em relao alimentao de cada animal e perodo. Mergulhar os sacos em gua ou soluo tampo antes da incubao Inserir em um determinado intervalo de tempo e retirar todo o grupo Lavar em gua corrente at a gua ficar clara 0 a 6 h: 3 a 6 tempos 6 a 24 h: 3 a 6 tempos 25 h: intervalos de 6 a 12 h Um saco por cada tempo de incubao, inseridos com o alimento teste. Estimar a disponibilidade ruminal por Orskov e McDonald (1979).

2.1.1. Principais caractersticas da tcnica

A porosidade apropriada um ajuste entre limitar o influxo de contedo ruminal, no associado com o alimento teste, e permitir o influxo de populaes microbianas para degradar o alimento teste enquanto ao mesmo tempo limita a sada de partculas alimentares no degradadas. Inerente a tcnica a perda solvel e mecnica de partculas do alimento do saco antes da incubao ruminal. A digestibilidade real dessa frao no quantificavel pelo mtodo in situ mas freqentemente assumido estar associada com a frao rapidamente degradvel e prontamente disponvel, o qual pode ou no ser exata (NOCEK, 1997).

O tipo de material utilizado na fabricao dos sacos geralmente o nylon, polister ou dracon (KITESSA et al., 1999). O nylon o tipo de material usado pela maioria dos pesquisadores (HUNTINGTON & GIVENS, 1995), porm o AAC- SCA (1990) recomenda o uso de polister para a padronizao da tcnica. A moagem do alimento reduz o tamanho de partcula e aumenta a superfcie de rea para a degradao microbiana. No entanto, a moagem excessiva pode resultar na sada de pequenas partculas pelos poros do saco, tendo como resultado uma superestimao das taxas de digesto (NOCEK, 1988). De acordo com WEAKELY et al. (1977) quando verificaram que a degradao in situ do farelo de soja foi menor quando modo em partcula 2000 m do que com tamanho de partcula mais fina (520 m). VANZANT et al. (1998) recomendam moer os alimentos com peneira com crivos de 2 mm para todos os tipos de alimentos.

2.1.2. Modelo de Desaparecimento da Matria Seca

Os resultados obtidos pela tcnica in situ so submetidos a algumas equaes para adequao dos valores obtidos em experimentos. As curvas de degradao obtidas (perdas versus tempos de incubao) so ajustadas pela equao proposta por ORSKOV & McDONALD (1979), a seguir: P = a + b (1 e ct) P = Degradabilidade aps um tempo t; a = frao de rpida degradao, representada pelo intercepto de curva de degradao no tempo zero; b = frao potencialmente degradvel; c = taxa constante de degradao de b; t = tempo de incubao. A degradabilidade total de uma amostra dada por a + b, a qual no poder ser maior que 100. Assim, 100 (a + b) representa a frao que no se degrada no rmen. Esta tcnica tem sido valorizada devido a tendncia de se utilizarem nas formulaes de raes os coeficientes a Frao solvel do alimento degradada no tempo zero, b frao insolvel mas potencialmente degradada e c taxa fracional de degradao da frao b por unidade de tempo (AFRC, 1993; NRC, 1996,2006). Atravs desses coeficientes possvel estimar os nutrientes necessrios para

crescimento microbiano, e aqueles requeridos pelo animal, maximizando assim a eficincia energtica e protica das raes (ANDRADE, 1994). O valor de a quando positivo, caracteriza rpida perda. Para saber se esta perda devido a degradao rpida ou apenas perda de material solvel, devemos colocar bolsas de nilon com amostra de molho em gua, com posterior secagem e pesagem dos mesmos. Se a for negativo, significa que h necessidade de um tempo prvio para ocorrer o incio da degradao, o qual denominamos de lag time. Para forrageiras tropicais, bastante lignificadas, o lag time situa-se entre cinco e seis horas. Portanto, a curva poderia ter apenas quatro tempos (0, 6, 12 ou 24 e 96 horas de incubao), sem perder em preciso. A degradabilidade efetiva pode ser calculada pela seguinte equao: DE = a + b c c+k DE = degradabilidade efetiva a = frao degradada rapidamente ou degradada no tempo zero; b = frao potencialmente degradvel; c = taxa de digesto da frao b; k = taxa de passagem da frao b.

2.2.

Digestibilidade in vivo
O mtodo padro para medir a digestibilidade envolve um ensaio com animais

recebendo a dieta a ser avaliada por um determinado tempo, perodo no qual medido o consumo de alimento e a produo fecal (KITESSA et al., 1999). Nesta tcnica no h exigncia de animais fistulados no rmen e o resultado a expresso mais real dos processos digestivos dos animais. No entanto, a acurcia dos resultados restrito ao nvel de consumo, tipo de animal e do alimento utilizado no ensaio. Por exemplo, o aumento do nvel de consumo pelos animais provocaria aumento na taxa de passagem do alimento pelo trato digestivo, com isso, o tempo que o alimento estaria sujeito degradao diminuiria, afetando a digestibilidade. A determinao da digestibilidade por intermdio do mtodo tradicional de coleta total de fezes requer controle rigoroso da ingesto e excreo, o que o torna

trabalhoso e oneroso. Isto levou idealizao de outros mtodos nomeados de mtodos indiretos dos indicadores ou dos marcadores (SILVA, 1990), os quais apresentam certas vantagens sobre o da coleta total de fezes, a exemplo da simplicidade e convenincia de utilizao, e podem proporcionar uma srie de informaes, incluindo-se a quantidade ingerida de alimentos ou nutrientes especficos, a taxa de passagem da digesta por todo o trato digestivo e a digestibilidade de todo alimento ou nutrientes especficos. Constituintes naturais da dieta que apresentam baixa digestibilidade tm sido utilizados como indicadores. Os indicadores internos apresentam a vantagem de j estarem presentes no alimento e, de modo geral, permanecerem uniformemente distribudos na digesta durante o processo de digesto e excreo (PIAGGIO et al., 1991). Segundo Lana, 2005, a tcnica in vivo consiste na medio do consumo e da produo fecal total diretamente em gaiolas de metabolismo- mtodo convencional, ou estimando-se a produo fecal pelo uso de indicadores. Existem indicadores externos, que adicionados aos alimentos, como xido crmico e internos, contidos no alimento, como a fibra em detergente cido ou indigestveis. Uma vez que esses indicadores no so digeridos e/ou absorvidos, a quantidade excretada diariamente deve ser a mesma consumida. Sabendo-se, ento, a quantidade do indicador consumida diariamente e a concentrao dos mesmos nas fezes, obtem-se as estimativas da produo fecal. Com base no consumo e nas anlises qumicas das dietas consumidas e da produo fecal e anlise qumica das fezes, obtem-se a digestibilidade dos alimentos e nutrientes, conforme as frmulas apresentadas a seguir:

Dig MS= 100-{(CoInA/CoInFe)*100} Dig Nutriente= 100 {(CoInAl/CoInFe)*(CoNuFe/CoNuAl)*100} Em que: CoInAl = Concentrao de Indicador no Alimento; CoInFe = Concentrao do Indicador nas Fezes; CoNuFe = Concentrao de Nutrientes nas Fezes; CoNuAl = Concentrao de Nutrientes nos Alimento.

A digestibilidade real maior ou igual a digestibilidade aparente, com exceo da celulose,em que a digestibilidade aparente igual a digestibilidade real, pois no existe perda endgena de celulose. Na conduo de alguns ensaios de

digestibilidade, utiliza-se animais machos, pois facilita a coleta de fezes e urina separadamente e,para reduzir os custos com experimentao utiliza-se ovinos como modelo animal representado os ruminantes e ratos representando os monogstricos. So necessrios pelo menos trs animais por tratamento, podendo-se fazer repeties no tempo, a exemplo do delineamento de quadrado latino, sendo desejvel um mnimo de 10 graus de liberdade no resduo ou 20 unidades experimentais (LANA, 2005). O alimento deve ser padronizado, evitando-se alterao no consumo e na digestibilidade, pelo uso de alimento armazenado (feno, silagem), uma vez que a composio do alimento verde muda durante o ensaio. O perodo de ensaio em um delineamento inteiramente casualizado deve ser de aproximadamente 30 das em ruminantes, com um perodo de sete dias de adaptao a gaiola e mudana progressiva de alimentao: um perodo de adaptao a rao de mais ou menos 15 dias em ruminantes para correr mudana na populao ruminal e permitir a determinao do consumo voluntrio e iniciar o fornecimento de xido crmico; e um perodo de coletas de 5 a 7 dias, para obter-se amostras dirias de alimentos, sobras e fezes e, posteriormente, amostra composta por animal. O nvel de ingesto de 90-95% do consumo voluntrio pode ser utilizado para no haver sobras, como tambm, diminuir o nmero e amostras a serem utilizadas. O consumo pode ser expresso em Kg/dia, percentagem do peso vivo em funo do peso metablico (g MS/kg0,75). O calculo do coeficiente de digestibilidade (CD) dado pela frmula CD =[(ingerido- excretado)/(ingerido)]*100 (LANA, 2005).

2.2.1. Indicadores de digestibilidade

A determinao da excreo fecal pelo mtodo dos indicadores baseia-se no emprego de uma substncia de referncia (indicador), a qual, sendo ingerida na dieta, deve ser recuperada totalmente nas fezes (COELHO DA SILVA et al., 1968). Entre os indicadores existentes, o xido crmico tem sido o mais amplamente empregado na determinao da excreo fecal (PRIGGE et al., 1981; ASTIGARRAGA, 1997). A recuperao de fraes indigestveis do alimento a base para os indicadores internos, que so utilizados em estudos nos quais so necessrias estimativas de digestibilidade (VAN SOEST, 1994).

O xido crmico o indicador externo mais comumente usado na estimativa da digestibilidade, principalmente por seu baixo custo e pela facilidade de anlise. Entretanto, recuperao diferente de 100%, variao entre animais na recuperao fecal e variao na concentrao nas fezes no decorrer do dia so alguns dos problemas relacionados a esse indicador (TITGEMEYER, 1997). Vrios indicadores internos tm sido testados para estimar a digestibilidade: cinza insolvel em cido, cinza insolvel em detergente cido, lignina em detergente cido indigestvel, FDNi e FDAi. A variabilidade nos resultados das estimativas de digestibilidade obtidas com o uso de indicadores internos pode ser decorrente da metodologia de anlise (DETMANN et al., 2001). Lippke et al.(1986) apontaram para falta de padronizao no mtodo de determinao. Fraes que tm demonstrado potencial como indicador so as fibras indigestveis em detergente neutro (FDNi) e em detergente cido (FDAi), obtidas aps 144 horas de incubao ruminal. Desse modo, o uso de indicadores constitui um recurso para estimar a digestibilidade dos alimentos quando a coleta total impraticvel, sendo necessrios estudos para determinao e correo das limitaes inerentes a cada indicador. O estudo da variao diria na excreo de indicadores permite determinar quantos dias so necessrios para determinar a digesibilidade, o que pode possibilitar redues no tempo e nos recursos necessrios para a realizao de ensaios de digestibilidade.

3. Consideraes Finais
O uso de ambas as tcnicas so eficientes na avaliao dos alimentos utilizados na nutrio de ruminantes, tanto de forrageiras quanto de concentrados. Assim podem ser utilizadas como ferramentas na avaliao de novos hbridos lanados no mercado e novas formulaes de concentrados utilizados na suplementao de ruminantes. A nica diferena se apresenta na dificuldade de execuo, sendo a tcnica in vivo mais onerosa e limitada nas instituies, por falta de mo-de-obra qualificada e instalaes adequadas.

Referncias Bibliogrficas
AAC-SCA. Australian Agricultural Council Standing Committee on Agriculture: Ruminant Subcommittee. Feeding standards for Australian livestock: Ruminants. (CSIRO Publications: East Melbourne), 1990.

ASTIGARRAGA, L. Tcnicas para la medicin del consumo de rumiantes en pastoreo. In: SIMPSIO SOBRE AVALIAO DE PASTAGENS COM ANIMAIS, 1997, Maring. Anais... Maring: UEM, 1997. p.1-23.

CASALI, A. O., DETMANN E., VALADARES FILHO, S. de C., PEREIRA, J. C., HENRIQUES L. T., FREITAS, S. G. de., PAULINO M. F., Influncia do tempo de incubao e do tamanho de partculas sobre os teores de compostos indigestveis em alimentos e fezes bovinas obtidos por procedimentos in situ, R. Bras. Zootec., v.37, n.2, p.335-342, 2008.

CLIPES, R.C.; DETMANN, E.; COELHO DA SILVA, J.F. et al. Evaluation of acid detergent insoluble protein as an estimator of rumen non-degradable protein in tropical grass forages. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinria e Zootecnia, v.58, p.694-697, 2006.

COELHO DA SILVA, J.F., CAMPOS, J., CONRAD, J.H. 1968. Uso do xido crmico na determinao da digestibilidade. Experientiae, 8(1):1-23.

DETMANN, E.; VALADARES FILHO, S.C.; PAULINO, M.F. et al. Cromo e indicadores internos na determinao do consumo de novilhos mestios, suplementados, a pasto. Revista Brasileira de Zootecnia, v.30, n.5, p.1600-1609, 2001.

FREITAS, D.; BERCHIELLI, T.T.; SILVEIRA, R.N. et al. Produo fecal e fluxo duodenal de matria seca e matria orgnica estimados atravs de indicadores. Revista Brasileira de Zootecnia, v.31, p.1521-1530, 2002.

HUHTANEN, P.; KAUSTELL, K.; JAAKKOLA, S. The use of internal markers to predict total digestibility and duodenal flow of nutrients in cattle given six different diets. Animal Feed Science and Technology, v.48, p.211-227, 1994.

HUNTINGTON, J.A.; GIVENS, D.I. The in situ technique for studying the rumen degradation of feeds: A review of the procedure. Nutrition Abstracts and Reviews (Series B), v.65, n.2, p.63-93, 1995.

KITESSA, S.; FLINN, P.C.; IRISH, G.G. Comparison of methods used to predict the in vivo digestibility of feeds in ruminants. Australia Journal Agricultural Research , v. 50, p.825-841, 1999.

LANA, R. P., Nutrio e alimentao animal (mitos e realidades) 2 edio, Viosa: UFV, 2005.

LIPPKE, H.; ELLIS, W.C.; JACOBS, B.F. Recovery of indigestible fiber from feces of sheep and cattle on forage diets. Journal of Dairy Science, v.69, n.2, p.403-412, 1986.

MORON, I. R., TEIXEIRA, J. C. BUENO FILHO, J. S. de S., PERE, J. R. O., MUNIZ, J. A., PAIVA, P. C. de A., VILELA, D. Cintica de degradao ruminal da matria seca de Alimentos concentrados e volumosos atravs das Tcnicas in vitro e in situ. Cinc. agrotec., Lavras, v.25, n.5, p. 1185-1194, set./out., 2001.

NOCEK, J.E. In situ and other methods to estimative ruminal protein and energy digestibility: a review. J. Dairy Sci., v.71, v.8, p.2051-2069, 1988.

NOCEK, J.E. In situ and other methods to estimate ruminal protein and energy digestibility: a review. In: SIMPSIO INTERNACIONAL DE DIGESTIBILIDADE EM RUMINANTES. Lavras: UFLA, FAEPE, 1997. P.197-240.

ORSKOV, E.R. & McDONALD, I. The estimation of protein degradability in the rumen from incubation measurements weighted according to rate of passage. J. Agric. Sci., v.92, p.499-503, 1979.

PIAGGIO, L.M., PRATES, E.R., PIRES, F.F. et al. 1991. Avaliao de cinzas insolveis em cidos indigestveis e lignina em detergente cido indigestvel como indicadores internos da digestibilidade. R. Soc. Bras. Zootec., 20(3): 306-312.

PRIGGE, E.C., VARGA, G.A., VICINI, J.L. et al. 1981. Comparison of ytterbium chloride and chromium sesquioxide as fecal indicators. J. Anim. Sci., 53(6):1629-1633.

QUINN, J.L.; VANDER WATH, J.G.; MYBURGH, S. Studies on the alimentary tract of merino sheep in soputh Africa. IV. Description of experiment technique. Onderstepoort J. Ver. Sci. Anim. Ind., v.11, n.2, p.341-360, 1939.

RUIZ, R.; van SOEST, P.J.; van AMBURGH, M.E. et al. Use of chromium mordanted neutral detergent residue as a predictor of fecal output to estimate intake in grazing high production Holstein cows. Animal Feed Science and Technology, v.89, p.155-164, 2001.

SILVA, D.J. 1990. Anlise de alimentos (Mtodos qumicos e biolgicos). 2.ed. Viosa, MG: UFV, Imprensa Universitria. 165p.

SILVEIRA, M. F., KOZLOSKI G. V., Comparao de Mtodos In Vivo e Laboratoriais para Estimar o Valor Nutritivo de Dietas para Bovinos de Corte Dissertao apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de Ps-Graduao em Zootecnia, rea de Concentrao em Produo Animal, da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Zootecnia. Santa Maria, RS, 2006.

TEIXEIRA, J.C. Introduo aos mtodos de determinao de digestibilidade em ruminantes. In: SIMPSIO INTERNACIONAL DE DIGESTIBILIDADE EM RUMINANTES. Lavras: UFLA FAEPE, 1997. P.7-27.

TITGEMEYER, E.C. Design and interpretation of nutrient digestion studies. Journal of Animal Science, v.75, n.8, p.2235-2247, 1997.

VAN SOEST, P.J. 1994. Nutritional ecology of the ruminant. 2ed. Ithaca: Cornell University Press. 476p.

ZEOULA, L.M.; PRADO, I.N.; DIAN, P.H.M. et al. Recuperao fecal de indicadores internos avaliados em ruminantes. Revista Brasileira de Zootecnia, v.31, p.1865-1874, 2002.