METABOLISMO DE COMPUESTOS NITROGENADOS

Dra. Silvia Quesada Por Tamara Chinchilla y Karina Jimenez Los nucletidos pricos y pirimdicos participan en muchas funciones celulares, entre ellas : 1. Servir como precursores de los cidos nucleicos. 2. Son mediadores de la accin de al actuar como segundos mensajeros (AMPc, GMPc) 3. Forman parte de coenzimas como NAD+, FAD y NADP, entre otros. 4. Servir como fuente de energa : ATP, GTP. 5. Poseen acciones farmacolgicas, lo que los hace muy tiles en tratamiento de diversas enfermedades: teofilina en el tratamiento del asma. Los nucletidos en la clula son sintetizados a partir de aminocidos, ribosa, CO2 y formilo, a esto se denomina sntesis de novo. En estas vas se requiere una alta cantidad de energa. Esto se logra limitar por las vas de recuperacin en donde las bases ya preformadas de purinas y pirimidinas pueden ser reutilizadas. Existen varias enfermedades o sndromes como producto de defectos enzimticos en las vas ya sea de sntesis (de novo o de recuperacin) o de degradacin de los nucletidos, estas incluyen entre otras la gota, el sndrome de Lesch-Nyhan y algunas formas de inmunodeficiencia severa combinada (SCID).

DIGESTIN DE LOS CIDOS NUCLECOS DE LA DIETA

Los cidos nucleicos de la dieta son degradados en el intestino A mononucletidos por las enzimas pancreticas ribonucleasa y desoxirribonucleasa A nuclesidos por las mononucleotidasas A bases libres por nucleosidasas. Las purinas se degradan a cido rico por la accin de la enzima xantina oxidasa presente, el cual puede ser absorbido y excretado por orina o excretado por las heces.

BIOSNTESIS DE NUCLETIDOS
La sntesis de los nucletidos pricos y pirimdicos puede llevarse a cabo de dos formas : 1. Sntesis de Novo: se inicia con sus precursores metablicos: aminocidos ribosa 5-fosfato, CO2 y NH3. 2. Vas de Recuperacin: se reciclan los nuclesidos y las bases libres de la degradacin de los cidos nucleicos.

NUCLEOTIDOS PURICOS
Bases puricas

Adenina Guanina

SNTESIS DE NOVO DE NUCLETIDOS PRICOS. Los dos nucletidos de purina que se sintetizan son el AMP (cido adenlico, adenosina monofosfato) y el GMP (cido guanidlico, guanosina monofosfato). El fosfo-ribosil-pirofosfato (PRPP) es el primer precursor importante, que se forma a partir de la ribosa 5-fosfato por medio de la enzima Fosforribosil Pirofosfato Sintetasa (PRPP Sintetasa) 1. Al PRPP se le une un grupo amino donado por la Glutamina, por medio de la enzima Glutamin -PRPP amidotransferasa dando como resultado 5fosforibosilamina y el anillo prico es formado subsecuentemente sobre esta estructura. La enzima es estimulada por la PRPP e inhibida por los productos AMP, GMP e IMP, por lo que es una reaccin irreversibel 2. El siguiente paso es la adicin de 3 tomos del aminocido Glicina, se consume un ATP para activar al grupo carboxilo de la glicina y que pueda ocurrir la reaccin de condensacin. 3. La enzima N10-formiltetrahidrofolato dona el grupo monocarbonado y se convierte en tetrahidrofolato 4. Un nitrgeno es aportado por la glutamina 5. Luego ocurre una deshidratacin y cierre del anillo para dar origen al anillo imidazol de las purinas, conocido como ribonucletido 5-amino imidazol 6. Tres de los seis tomos de segundo anillo se encuentran en su lugar, el proceso contina con una carboxilacin, la cual utiliza el HCO3- como fuente de CO2. 7. Luego el aspartato dona su grupo amino al anillo imidazol 8. Se da la salida de fumarato 9. El carbono final lo dona el N10-formiltetrahidro-folato 10.El segundo anillo se cierra y el forma el IMP (Inosina o Hipoxantina Monofosfato). La base prica del IMP se denomina Hipoxantina La conversin de IMP a AMP requiere de la insercin de un grupo amino derivado del aspartato, por medio de la enzima Adenilosuccinato Sintetasa, que utiliza como fuente de energa al GTP. La sntesis de GMP est dada por la oxidacin del IMP por medio de la enzima IMP Deshidrogenasa, para dar XMP (Xantilato), seguido por la adicin de un grupo amino derivado de la glutamina. Su sntesis requiere adems de ATP el cual se hidroliza hasta AMP + PPi

REGULACIN DE LA SNTESIS DE NOVO DE LOS NUCLETIDOS PRICOS La sntesis de novo de los nucletidos pricos se realiza en hgado y de all se exportan a encfalo, polimorfonucleares (PMN), linfocitos y eritrocitos. La regulacin de esta sntesis est dada principalmente por retroalimentacin negativa. Existen los siguientes puntos de control: 1. La enzima Glutamin -PRPP amidotransferasa es estimulada por la PRPP e inhibida por los productos AMP, GMP e IMP, por lo que es una reaccin irreversibel

2. El ADP y el 2,3 DPG inhiben la sntesis del PRPP 3. Un exceso de GMP inhibe la formacin del xantilato (XMP 4. La acumulacin de AMP inhibe a la Adenilosuccinato Sintetasa sin afectar la sntesis de GMP 5. El ATP estimula la sntesis de GMP y el GTP estimula la sntesis de AMP. VAS DE RECUPERACIN DE NUCLETIDOS PRICOS En estas vas las bases preformadas provenientes de fuentes exgenas como la dieta o de la degradacin de los cidos nucleicos pueden ser reutilizadas. La adenina, guanina e hipoxantina pueden provenir como producto del catabolismo de los nucletidos pricos. Dos enzimas se encuentran involucradas: Adenina Fosforibosil Transferasa (APRTasa): el AMP es el producto de la reaccin y es a su vez un inhibidor de esta reaccin. Hipoxantina-Guanina Fosforibosil Transferasa (HGPRTasa) : la cual es regulada por IMP o GMP como inhibidores competitivos del PRPP, lo cual significa que a altas concentraciones de PRPP queda sin efecto tal inhibicin. La generacin de AMP y GMP a travs de estas reacciones desconecta la sntesis de novo a partir del paso de la Glutamina-PRPP amidotransferasa. Primero porque el PRPP es consumido, disminuyendo as la tasa de formacin del 5-fosforibosilamina y segundo porque el AMP y el GMP sintetizados de esta forma sirven como inhibidores de la sntesis de novo por retroalimentacin negativa.

NUCLEOTIDOS PIRIMIDICOS
Bases pirimidicas Citosina Uracilo Timina SNTESIS DE NOVO DE NUCLETIDOS PIRIMDICOS La sntesis de los nucletidos pirimdicos se diferencia de las purinas en que primero se sintetiza el anillo de pirimidina y luego este es unido a la ribosa 5-fosfato. 1. Se requiere del carbamoilfosfato sintetizado en el citoplasma por la enzima Carbamoilfosfato Sintetasa II, a partir de Glutamina y CO2 necesitando para esto 2 ATP que se convierten en 2 ADP. 2. El carbamoilfosfato reacciona con el aspartato por medio de la enzima Aspartato Transcarbomoilasa 3. Oocurre luego una remocin de agua y el compuesto es oxidado para dar como producto el Orotato (Acido Ortico), el cual es la base pirimdica precursora. 4. Las primeras tres enzimas de la va forman parte de una enzima trifuncional, la cual es conocida como Acromin CAD. 5. Una vez que el orotato se forma este es unido a la ribosa 5-fosfato la cual es provista por el PRPP y se produce de esta forma el Orotidilato (OMP)

6. 7.

Luego descarboxilado por la OMP Descarboxilasa para dar el UMP, que se fosforila y forma el UTP El CTP se forma a partir del UTP por accin de la enzima Citidilato Sintetasa, esta reaccin consume ATP y en los animales el donador del grupo amino es la glutamina

REGULACIN DE LA SNTESIS DE LOS NUCLETIDOS PIRIMDICOS La regulacin de la sntesis de los nucletidos pirimdicos se lleva a cabo en tres puntos 1. La enzima Carbamoilfosfato Sintetasa II es inhibida por el UTP 2. La enzima OMP Descarboxilasa es inhibida por el UMP 3. La enzima CTP sintetasa es inhibida por su producto con el fin de prevenir que todo el UTP se transforme en CTP. VA DE RECUPERACIN DE NUCLETIDOS PIRIMDICOS Las pirimidinas pueden ser recuperadas por reacciones que involucran a la enzima Pirimidina Fosforribosil Transferasa (Pirimidina PRTasa). La reaccin general :

Esta enzima ha sido aislada de eritrocitos humanos y utiliza como sustratos al orotato, uracilo y la timina. La citosina no es sustrato de esta enzima.

SNTESIS DE DESOXI-RIBONUCLETIDOS
Los dRibonucletidos se forman por la reduccin directa del C2 de la ribosa de los ribonucletidos correspondientes por medio de la accin de la enzima Ribonucletido Reductasa, la cual tiene como coenzima a la Tiorredoxina reducida (Tiorredoxina SH) que en la reaccin se oxida (Tioredoxina S-S). Para su regeneracin, la reduccin de la Tiorredoxina se lleva a cabo por la enzima Tiorredoxina Reductasa, la que tiene como coenzima al NADPH + H+ La sntesis de los cuatro dNTP en las cantidades requeridas para la sntesis de ADN posee un mecanismo de control por retroalimentacin. El mantenimiento de las concentraciones adecuadas de dNTP es esencial para el crecimiento normal, dado que un disturbio en este balance puede ser mutagnico. El dATP es un inhibidor muy potente de la Ribonucletido Reductasa de los cuatro sustratos NDP, por eso es muy txico para una variedad de clulas animales. SNTESIS DE DTMP

Se puede formar por 2 vas. Por CDP o UDP. Se requiere la ribonucletido reductasa para convertir los nucletidos en desoxi-nucletidos. Quinasas luego los transforman en dCTP y en dUTP. El dCTP se puede convertir en dUTP por medio de una deaminasa que le quite el grupo amino. La enzima timidilato sintasa se utiliza como blanco para medicamentos y es una enzima reguladora. Si se limita la enzima se limita la disponibilidad de dTMP y por lo tanto se limita la replicacin y proliferacin de la clula. Utiliza la coenzima metilentetrahidrofolato que cede un grupo metilo (diferencia entre Uracilo y Timina). La coenzima se convierte en dihidrofolato que puede ser recuperada por medio de la dihidrofolato reductasa. Esta enzima es tambin blanco de medicamentos puesto que al restringir la recuperacin de la coenzima se restringe la formacin de nucletidos pricos y dTMP

DEGRADACION DE NUCLEOTIDOS

DEGRADACIN DE NUCLETIDOS PRICOS

El catabolismo del AMP, GMP e IMP produce como producto final el cido rico. Estos 3 tienen compuestos intermediarios en comn: AMP e IMP producen hipoxantina y GMP produce xantina. La enzima xantina oxidasa produce xantina a partir de hipoxantina y la misma enzima produce cido rico a partir de xantina. Aberraciones genticas en el metabolismo de purinas puede tener serias consecuencias, por ejemplo la deficiencia de la enzima Adenosina Deaminasa produce una inmunodeficiencia combinada severa (SCID) en los humanos, como resultado de un desarrollo no apropiado de los linfocitos T y linfocitos B. En esta enfermedad se produce un aumento de casi 100 veces en la concentracin de dATP, un fuerte inhibidor de las ribonucletido reductasas, lo cual produce una reduccin general en las concentraciones de los otros dNTP, lo que inhibe la replicacin y por ende produce un defecto en la proliferacin de las clulas. GOTA La sobreproduccin de cido rico o una defectuosa excrecin renal pueden ocasionar Gota, al depositarse el cido rico como cristales de urato en las articulaciones siendo estos fagocitados por macrfagos y polimorfonucleares, dando inicio as a un proceso inflamatorio. Los defectos metablicos primarios que producen un aumento en la produccin de nucletidos pricos y por ende un aumento en la sntesis de cido rico al aumentar su degradacin, son: 1. Mutaciones en la enzima PRPP Sintetasa, la cual no responde a la inhibicin por retroalimentacin de IMP, GMP y AMP. 2. Deficiencia parcial de la enzima HGPRTasa (Hipoxantina-Guanina PR Transferasa): la prdida de esta actividad disminuye la cantidad de Guanina e

Hipoxantina que pueden ser recuperadas, por lo tanto aumenta la concentracin de PRPP. a. Esto estimula un aumento en la actividad de la Gln-PRPP amidotransferasa, aumentando as la sntesis de novo de los nucletidos pricos. b. Adems sin esta va de recuperacin los niveles de IMP y GMP disminuyen y as no es inhibida la sntesis de novo. c. La deficiencia de esta enzima produce el Sndrome de Lesch-Nyhan. La Gota primaria puede ser tratada efectivamente por medio de una combinacin de dieta y medicamento. El medicamento ms utilizado es el Alopurinol, sobre este acta la enzima xantina oxidasa y lo transforma en Aloxantina, la cual inhibe a la xantina oxidasa. As los productos excretados son la xantina y la hipoxantina, los cuales son ms solubles en agua que el cido rico. As el efecto del alopurinol se debe a tres mecanismos: Efecto de la aloxantina sobre la xantina oxidasa Al formarse ribonucletidos de Aloxantina y de Alopurinol por las vas de recuperacin se da el consumo del PRPP, el cual es un activador de la enzima Glutamina-PRPP Amidotransferasa Ademas, estos ribonucletidos son inhibidores de esa misma enzima.

La gota secundaria se puede presentar en enfermedades con tasa de recambio celular aumentado como en la psoriasis, en las leucemias y en los perodos de tratamiento de las mismas. Adems se presenta en la deficiencia de la enzima Glucosa-6 fosfatasa (enfermedad del almacenamiento de glucgeno tipo I), en donde la imposibilidad de convertir Glucosa-6-fosfato a glucosa produce un incremento en la actividad de la va del Shunt de las Pentosas. Al aumentar la utilizacin de esta va de la glucosa 6-fosfato resulta en un incremento de los niveles de ribosa-5-fosfato y por lo tanto un aumento en la concentracin de PRPP y con esto la activacin de la sntesis de novo de los nucletidos pricos y por ende un incremento en su degradacin.

DEGRADACIN DE NUCLETIDOS PIRIMDICOS

La degradacin de los cidos nucleicos produce la liberacin de nucletidos pirimdicos. La conversin de estos nucletidos a nuclesidos se realiza por fosfatasas inespecficas. El uracilo y la citosina son degradados a -alanina, NH4+ y CO2, mientras que la degradacin de la timina produce cido amino-butrico, NH4+ y CO2. El cido amino-butrico es excretado en humanos por la orina y se origina exclusivamente de la degradacin de la timina, por lo que sus niveles se incrementan en la orina de pacientes con cncer bajo quimioterapia o radioterapia en donde gran cantidad de clulas mueren y su ADN es degradado.

AGENTES QUIMIOTERAPEUTICOS

La sntesis de novo de los nucletidos pricos y pirimdicos es crtica para mantener normal la funcin y replicacin celular. Muchos compuestos que interfieren con estas vas han sido sintetizados o aislados de bacterias, plantas u hongos. Estas drogas se clasifican como: antimetabolitos, antifolato y antagonistas de glutamina, segn su mecanismo de accin.

ANTIMETABOLITOS
Son por lo general anlogos estructurales de bases pricas y pirimdicas o de nuclesidos. 6-MERCAPTOPURINA. Es un anlogo de purina muy usado como droga antitumoral en humanos, su actividad citotxica se da con la formacin del ribonucletido de 6-mercaptopurina por la clula tumoral. Utilizando el PRPP y la enzima HGPRTasa es convertido en nucletido. Acta a nivel de las siguientes enzimas: 1. Inhibe a la Gln-PRPP amidotransferasa en la sntesis de novo de los nucletidos pricos. 2. Inhibe la IMP deshidrogenasa y la Adenilosuccinato sintetasa, por tanto afecta la sntesis directa de IMP, GMP y AMP Ya que la 6-mercaptopurina es sustrato de la xantina oxidasa, la administracin de alopurinol inhibe su degradacin y de esta manera potencia sus propiedades antitumorales.

5-FLUORURACILO Es un anlogo de pirimidina que debe ser activado y transformarse en nucletido para tener sus propiedades antitumorales. El metabolito activo es el FdUMP y es un potente inhibidor especfico de la Timidilato sintasa

ANTIFOLATOS
Los antifolatos son compuestos que interfieren con la regeneracin del tetrahidrofolato (H4 folato) a partir del dihidrofolato (H2 folato) o del folato por inhibicin de la enzima Dihidrofolato Reductasa. El Metotrexate es un ejemplo de estas drogas, es un anlogo estructural del tetrahidrofolato usado comnmente como agente antitumoral. Provoca la disminucion tanto de nucletidos de purina como de timina. Otros medicamentos que actan a este nivel son: Aminopterina y el Trimetoprim. El trimetoprim se une con ms afinidad a la Dihidrofolato Reductasa bacteriana que a la de los mamferos y por lo tanto es de gran utilidad como agente antibacteriano.

ANTAGONISTAS DE LA GLUTAMINA

Las reacciones donde la glutamina sirve como donador de un grupo amino son crticas en la sntesis de novo de nucletidos pricos, en la conversin de IMP a GMP y en la conversin de UTP a CTP. Los compuestos que inhiben estas reacciones son los antagonistas de la glutamina. Azaserina y Acivicin son inhibidores muy efectivos de la utilizacin de la glutamina, estos inhiben a la enzima irreversiblemente y son extremadamente txicos.

AGENTES ANTIVIRALES
El virus Herpes (HSV) y el virus de la inmunodeficiencia (HIV) pueden ser controlados por dos antimetabolitos: el aciclovir (acicloguanosina) un anlogo de purina y el AZT (3-azido-3-deoxitimidina) un anlogo de pirimidina respectivamente. El aciclovir es activado a Aciclovir-monofosfato por una kinasa especfica codificada por el genoma del HSV. Luego es fosforilado por enzimas celulares a Aciclovirtrifosfato, este sirve de sustrato para la ADN polimerasa viral y es incorporado en la cadena creciente de ADN causando la terminacin de la cadena. La especificidad del aciclovir radica en que solo las clulas infectadas pueden formar el aciclovir monofosfato. Por otro lado el AZT es fosforilado por kinasas de la clula a AZT-trifosfato, este bloquea la replicacin del HIV inhibiendo la ADN polimerasa viral (ADN polimerasaARN dependiente). La selectividad del AZT por las clulas infectadas ocurre ya que la ADN polimerasa del HIV es 100 veces ms sensible al AZT-trifosfato que la ADN polimerasa-ADN-dependiente de la clula.