METODOS DE ESTERILIZACION Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCION La esterilizacin es un proceso a travs del que se logra la destruccin total de los

microorganismos viables presentes en un determinado material.Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. OBJETIVOS Conocer el material y equipo mas comn para la esterilizacin y el trabajo en condiciones de esterilidad Lavar , preparar y envolver correctamente el material que se someter a esterilizacin Seleccionar los mtodos de esterilizacin adecuados pra las diversas necesidades del laboratorio de microbiologa Comprobar la efectividad del mtodo de esterilizacin

FUNDAMENTO TEORICO ESTERILIZACION Es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto esterilizado en el sentido microbiolgico, esta libre de los microorganismos vivos. SANEAMIENTO Consiste en reducir la poblacin microbiana a niveles no peligrosos por medio de un agente, segn los requerimientos de salud publica, por lo regular es un agente qumica que mata 99.9 % de las bacterias en crecimiento. DESINFECCCION Destruccin de microorganismos potencialmente patgenos, como bacterias, hongos y protozoos. La desinfeccin puede lograrse por calor seco o hmedo, por radiacin, por auto clavado (calor hmedo a presin) o tratamiento con agentes qumicos. La cloracin es un procedimiento de desinfeccin importante en la potabilizacin de aguas. HIGIENIZACION Es un desinfectante concentrado basado en un complejo de Amonios Cuaternarios de ltima generacin, controla y elimina microorganismos patgenos. Presenta alta efectividad en el control de microorganismos asociados a enfermedades de alta incidencia, tales como: Bacterias: Staphilococus aureus, E coli, Salmonella typhi, Klebsiella pneumoniae.

AGENTES FISICOS DE ESTERILIZACION CALOR HMEDO Por lo tanto, la inactivacin por calor hmedo requiere menores temperaturas que la que se realiza en ausencia de agua. Algunos ejemplos de condiciones de inactivacin total por calor hmedo: Microorganismo condiciones La mayora de clulas vegetativas, de bacterias, levaduras y hongos 80oC , 5-10 min Bacilo tuberculoso 58oC , 30 min Bacilo tuberculoso 59oC , 20 min Bacilo tuberculoso 65oC , 2 min Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis 60oC , 60 min La mayora de esporas de bacterias patgenas 100oC , pocos min esporas del patgeno Clostridium botulinum 100oC , 5,5 horas esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 100oC , muchas horas esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 120oC , 15 minutos Los mtodos principales de lograr esterilizacin de materiales por calor hmedo: Autoclave Introducido por Chamberland en 1884. Es un aparato que permite calentar muestras por calor hmedo a temperaturas superiores a las de ebullicin del agua (sin que sta hierva), debido a que el tratamiento se efecta en un compartimiento estanco saturado con vapor de agua y a presiones superiores a la atmosfrica. Los parmetros de esterilizacin suelen ser: temperatura 121C y 10-15 min. Como se puede deducir, estos parmetros vienen fijados por la resistencia de las esporas de especies que son las formas de vida que ms aguantan el calor sin perder viabilidad. La accin rpida del calor hmedo depende en buena parte del alto valor de calor latente del agua (540 calg-1); ello hace que los objetos ms fros se calienten rpidamente por condensacin de agua en su superficie. Tindalizacin Nombre en honor de John Tyndall Es un mtodo de esterilizacin fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a ms de 100C. Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases sucesivas cada uno: a) En la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2 horas; b) En la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24 horas. Durante las fases de tipo a) mueren todas las clulas vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las esporas, que quedan activadas para germinar. Durante las fases de tipo b) se produce la germinacin de las esporas activadas en la respectiva fase anterior. En la siguiente fase de tipo a) morirn las clulas vegetativas procedentes de la germinacin en la fase anterior; y as sucesivamente, hasta que al cabo de unos cuantos ciclos no queda ningn microorganismo en la muestra. Aplicaciones principales del calor hmedo:

1. En la prctica cotidiana del laboratorio de microbiologa, en la esterilizacin de medios de cultivo y soluciones. 2. En la esterilizacin de material quirrgico. 3. En la esterilizacin o inactivacin parcial, en las industrias alimentaras (conservas, leche y derivados). a) En la industria lctea se emplean como mtodos de esterilizacin la llamada uperizacin. La uperizacin o tratamiento UHT consiste en un tratamiento de calor hmedo donde se emplean temperaturas muy altas durante unos pocos segundos (p. ej.: 135-150C durante 1-2 seg). b) Pero no siempre es imprescindible esterilizar la leche, sino que puede bastar eliminar los posibles microorganismos patgenos que pueden contaminarla, y que son ms sensibles al calor que los saprofitos inofensivos. Con esta inactivacin parcial de la poblacin microbiana de la leche logramos que sta se conserve durante unos das, sin alterar apenas sus cualidades organolpticas y nutricionales. He aqu los procedimientos ms habituales para conseguir esto: i. La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la introdujo en los aos 1860) consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y envasa rpidamente. ii. La pasteurizacin instantnea (tambin conocida por sus siglas en ingls HTST, de high temperature-short time) se logra calentando a 72C durante slo 15 segundos, tras de lo cual la muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms usada actualmente, ya que: mata ms rpidamente; mata mejor organismos ms resistentes; altera menos el sabor; acta en flujos continuos (y permite procesar grandes volmenes de leche). Tras la pasteurizacin, el nmero de bacterias viables desciende un 97-99%. Los potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo tuberculoso, Streptococcus, etc) son eliminados fcilmente. La pasteurizacin tambin se emplea para la preparacin de vacunas a base de microorganismos inactivados por el calor. CALOR SECO La esterilizacin por calor seco necesita recurrir a mayores temperaturas que la efectuada por el calor hmedo, ya que al no existir agua, la rotura de puentes de hidrgeno y la desnaturalizacin de protenas, as como la fusin de membranas, se efectan a mayores energas. Otros efectos del calor seco son los daos por oxidacin y el provocar un aumento de la concentracin de electrolitos. Aplicaciones del calor seco: 1. El llamado horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170C durante 2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metlico, aceites y jaleas, etc. 2. Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metlicas de siembra, con las que se inoculan las bacterias. 3. Incineracin de materiales de desecho. EBULLICION

Materiales contaminados u objetos expuestos a la ebullicin no pueden ser esterilizados eficazmente. Es cierto que todas las clulas vegetativas se destruyen en minutos al ser expuestas a la ebullicin, pero algunas esporas bacterianas resisten la ebullicin durante muchas horas. Con la practica de exponer instrumental durante periodos cortos al agua hirviente se obtiene mas desinfeccin que esterilizacin; por tal razn no se puede usar en el laboratorio como mtodo de esterilizacin. INCINERACIN Mata los microorganismos, este mtodo se emplea para destruir esqueletos, animales de laboratorio infectados y otros materiales de desecho infectados. La destruccin de microorganismos por incineracin tambin se practica rutinariamente en los laboratorios cuando se introduce a la llama de un mechero bunsen el asa de las siembras pero hay que tener cuidado de no producir chisporroteo pues de lo contrario se esparcirn gotitas que lleven microorganismos viables, el chisporroteo se reduce o elimina secando el asa de siembras fuera de la llama antes de meterla en esta. FILTRACION Algunos materiales, particularmente los lquidos biolgicos como el suero de los animales o las soluciones de sustancias como las enzimas y algunas vitaminas o antibiticos, son termolbiles, se destruyen por el calor. Asimismo otros agentes fsicos como las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprcticos para esterilizarlos, en consecuencia queda la opcin de hacerlo por filtracin. FILTROS BACTERIOLGICOS Durante muchos aos gran variedad de filtros bacteriolgicos han estado a disposicin de los microbilogos. Estos filtros se hacen de distintos materiales: placas de asbesto en los filtros seitz, tierra de diatomeas en los Berkefeld, porcelana en los Chamberland Pasteur, discos de fibra de vidrio en otros filtros. Los dimetros de los poros de los filtros bacteriolgicos miden desde aproximadamente 1 m hasta varios. Casi todos los filtros estn basados en el promedio de abertura de sus poros, la porosidad sola no es el nico factor que impide el paso de los microorganismos. Otros factores como la carga elctrica del filtro, la carga elctrica de los microorganismos y la naturaleza de los lquidos que se van a filtrar, tienen que ver con la eficacia de la filtracin. En los ltimos aos se han desarrollado un nuevo tipo de filtros (de membrana o moleculares) en los cuales los poros son de tamao uniforme y especifico y determinado. Los filtros de membrana o moleculares estn compuestos por esteres biolgicos inertes de celulosa. Se preparan como membranas circulares de aproximadamente 150 micras de grueso y contienen millones de poros microscpicos de dimetro muy uniforme. Los filtros de este tipo se pueden producir de porosidades que varan de aproximadamente 0.01 a 10 m. Tambin se han adaptado a procedimientos microbiolgicos para identificar y enumerar microorganismos en muestras de agua y otros materiales. El desarrollo de filtros de aire particulado de gran eficiencia (HEPA) ha hecho posible obtener aire limpio en lugares cerrados o cuartos. Este tipo de filtracin y

el sistema de flujo laminar, se usan mucho para obtener aire libre de polvo y bacterias.

EFECTO DE LAS RADIACIONES SOBRE LAS BACTERIAS CONCEPTOS GENERALES SOBRE RADIACIONES Y BIOMOLCULAS Se puede definir la radiacin como la propagacin de energa por el espacio. Los principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son: radiacin electromagntica l (longitudes de onda, en nm) radiacin infrarroja (IR) 800-106 radiacin visible 380-800 ultravioleta (UV) 13,6-380 rayos X 0.14-13.6 rayos g 0.001-0.14 rayos csmicos < 0.001 Los efectos derivados de la absorcin de radiacin dependen de: la energa de la radiacin absorbida; La naturaleza del material. 1) Si la energa es E>10 eV, hablamos de radiaciones ionizantes: son los rayos X y los rayos g (estos ltimos se emiten como resultado de la desintegracin de radioistopos). Un fotn de gran energa incide sobre un tomo, provocando la expulsin de un electrn de gran energa (fotoelectrn), y quedando el tomo en forma ionizada (cargado positivamente). El electrn expulsado suele tener energa suficiente para originar una nueva ionizacin, de la cual surge otro electrn de alta energa, etc. producindose una cadena de ionizaciones, con transferencia linear de energa, hasta que sta se disipa en el material: el ltimo electrn de la cadena es captado por otro tomo o molcula, que queda cargado negativamente. El resultado final es que se forman pares de iones (uno positivo y otro negativo). A su vez, esos iones originados tienden a experimentar reorganizaciones electrnicas ulteriores, que dan pie a cambios qumicos en el sistema que se haba sometido a la irradiacin. 2) Si la energa es E<10 eV, no se producen ionizaciones: los electrones del tomo o molcula pasan transitoriamente (de 10-8 a 10-10 segundos) a un nivel energtico superior (entonces se habla de que el tomo o molcula estn excitados), pero enseguida dicho electrn vuelve al estado energtico inicial. En su regreso a su nivel energtico previo, el electrn puede dar origen a una variedad de fenmenos: Fluorescencia: emisin de energa a una longitud de onda mayor que la del fotn incidente; Fotosensibilizacin: la energa se transfiere a otra molcula;

Reacciones fotoqumicas: se origina un cambio qumico; Emisin de calor: la energa simplemente se disipa en colisiones entre molculas. La luz visible y UV pueden dar origen a reacciones fotoqumicas, aparte de calor. Pero la radiacin infrarroja slo conduce a disipacin de calor, si bien ciertas bacterias fotosintticas anoxignicas pueden aprovechar el infrarrojo para la fotosntesis.

EFECTOS DE LAS RADIACIONES IONIZANTES Y SUS APLICACIONES Aunque la unidad de radiacin emitida es el roentgen (R), a efectos biolgicos se usan parmetros que miden la energa absorbida por el sistema: las unidades son el rad (100 erg/g) y el gigaray (1Gy = 100 rads). En general, los microorganismos son ms resistentes a las radiaciones ionizantes que los seres superiores. Por ejemplo, la dosis de reduccin decimal (D10) para las endosporas de ciertas especies de Clostridium es de 2000-3000 Gy. Las clulas vegetativas de la bacteria Deinococcus radiodurans es de 2.200 Gy. Otras especies ms normales poseen una dosis de reduccin decimal en torno a 200600 Gy. Las fuentes de radiaciones ionizantes son los aparatos de rayos X, los rayos g y los radioistopos, como el Co60 o el Cs137. Los efectos de las radiaciones ionizantes son letales, tanto directos como indirectos, as como mutagnicos. Los efectos letales directos se logran a altas dosis de radiacin, mientras que los letales indirectos y mutagnicos se consiguen a menores dosis. 1. Efecto letal directo: por impacto de cuantos de radiacin ionizante sobre alguna molcula esencial para la vida, que es el ADN (ya que obviamente es absolutamente esencial y suministra una sola copia de la mayora de los genes bacterianos). Los daos al ADN son, principalmente: roturas en ambas cadenas, y entrecruzamiento entre dichas cadenas, que no puedan repararse. 2. Efecto mutagnico: deriva de la produccin de daos menores al ADN que pueden repararse por mecanismos propensos a error. 3. Efecto letal indirecto: este tipo de efecto es el ms importante, y deriva de la radiolisis del agua, que genera hidrgeno naciente (H) y radical hidroxilo (OH). El radical hidroxilo reacciona fcilmente con macromolculas, sobre todo con ADN, provocando roturas en ambas cadenas, lo cual se traduce en efectos de letalidad. Si, adems, la bacteria est expuesta al oxgeno mientras se la est irradiando, el efecto es an ms intenso, debido a que el O2 reacciona con los radicales libres, originando cadenas de reacciones de auto oxidacin, muy destructivas, y promoviendo la formacin de perxidos y epxidos, asimismo letales. H + O2 HO2 2 HO2 H2O2 + O2 Las principales aplicaciones de las radiaciones ionizantes son la esterilizacin de: Material farmacutico (antibiticos, hormonas, etc); Material mdico-quirrgico (guantes de cirujano, suturas de nylon, jeringas desechables, agujas, bisturs, catteres, prtesis, etc);

Alimentos envasados (aunque en algunos pases an sigue abierta la polmica por parte de ciertos grupos sobre la seguridad de este tratamiento).

EFECTOS DE LAS RADIACIONES ULTRAVIOLETA La radiacin UV tiene un efecto letal y mutagnico, que depende de su longitud de onda. Ello se debe a la absorcin selectiva de longitudes de onda por parte de ciertas molculas biolgicas: Las protenas tienen dos picos (es decir, mximos) de absorcin: uno a 280 nm, debido a los aminocidos aromticos (Trp, Tyr, Phe), y otro a 230 nm, debido a los peptdicos. El ADN y el ARN absorben a 260 nm, debido al enlace doble entre las posiciones 4 y 5 de las bases pricas y pirimidnicas. Los rayos UV no tienen actividad ionizante, pero provocan cambios qumicos en las molculas absorbentes, de modo que aparecen molculas alteradas denominadas genricamente fotoproductos. Los fotoproductos originan la inactivacin de macromolculas, aunque, como veremos enseguida, el ADN dispone de mecanismos para paliar o eliminar estas modificaciones potencialmente lesivas. Las consecuencias de inactivar protenas o ARN no se dejan sentir a efectos de letalidad, ya que existen muchas copias de cada uno de estos tipos de macromolculas, y se pueden volver a sintetizar. En cambio, la inactivacin del nico cromosoma de la bacteria tiene efectos letales primarios y efectos mutagnicos secundarios. Por lo tanto, el espectro de accin biolgica de la luz UV equivale al de absorcin del UV por el ADN (260 nm).

CONTROL POR AGENTES QUMICOS. Los factores que deben considerar en la seleccin de agentes qumicos antimicrobianos son: 1. Naturaleza del material que ser tratado. 2. Tipos de microorganismos. 3. Condiciones ambientales. PRINCIPALES GRUPOS DE AGENTES QUMICOS ANTIMICROBIANOS FENOL Tiene la doble distincin de haber sido usado por Lister durante la dcada de 1860 en su trabajo para desarrollar tcnicas quirrgicas aspticas y de ser el patrn de comparacin con otros desinfectantes para evaluar su accin bacteriana. Desnaturalizando primero las protenas de las clulas y daando luego las

membranas celulares. Los compuestos fenolicos son bactericidas o bacteriostticos dependiendo de la concentracin a la que se usen. Las esporas bacterianas y los virus son ms resistentes que las clulas vegetativas. Algunos compuestos fenolicos son altamente funguicidas. La actividad de estos compuestos se reduce a pH alcalino y por material orgnico. Tambin disminuye la actividad antimicrobiana a baja temperatura y en presencia de jabn. ALCOHOLES El alcohol etlico a concentraciones entre 50% y 70% es efectivo contra clulas vegetativas y no productoras de esporas, al 70% es la concentracin bacteriana mas eficaz. Las concentraciones que actan contra las clulas vegetativas son prcticamente ineficaces contra las esporas bacterianas. El alcohol metilico es menos bactericida que el etlico y es adems altamente toxico y no se emplea de manera general para le destruccin de microorganismos. Los alcoholes superiores (proplico, butlico, amlico y otros) son ms germicidas que el etlico; hay un aumento en el poder germicida a medida que es mayor el peso molecular de los alcoholes. El alcohol proplico y el isopropilo en concentraciones entre 40% y 80% se han registrado como tiles para desinfectar la piel. La eficacia del alcohol para la desinfeccin de superficies debe ser atribuida a su accin limpiadora o detergente. El alcohol reduce la flora microbiana de la piel y sirve para la desinfeccin de los termmetros clnicos bucales. Concentraciones de alcohol superiores a 60% son eficaces contra los virus, esta accin esta influida considerablemente por la cantidad de material proteico extrao en la mezcla. Las protenas extraas reaccionan con el alcohol y as los virus quedan protegidos. HALOGENOS YODO Es uno de los agentes germicidas mas antiguos y eficaces. Reconocido por la farmacopea de Estados Unidos en 1830, el yodo puro es un elemento cristalino azul oscuro con brillo metlico. Es muy poco soluble en agua pero mucho en alcohol y soluciones acuosas de yoduro de sodio o potasio. Este elemento se usa tradicionalmente como agente germicida en la forma conocida como tintura de yodo. El yodo tambin se usa en las formas conocidas como yodoforas. Uno de los agentes es la polivinilpirrolidona (PVP); el complejo se expresa PVP-I, el yodo se libera lentamente de este compuesto. Las sustancias yodoforas poseen las caractersticas germicidas del yodo y las ventajas adicionales de producir muy poca irritacin y no teir. El yodo es un agente bactericida muy eficaz y el nico que tiene efectos contra toda clase de bacterias, tambin tiene propiedades esporocidas.

Posee propiedades funguicidas y antivirales importantes, las soluciones de yodo se usan principalmente para desinfectar la piel. Tambin sirve para otros propsitos, como la desinfeccin del agua, aire (vapores de yodo) y el saneamiento de los utensilios usados en alimentos. El yodo es un agente oxidante y esto cuenta en parte para su actividad antimicrobiana. CLORO El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina. El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas. El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcalino y en envases oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que deben utilizarse soluciones diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obtener cido hipocloroso. Generalmente, se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo. Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos. Compuestos Mercuriales Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate. PERXIDO DE HIDRGENO Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres. Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontaminante de gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo. COLORANTES Interfieren en la sntesis de cidos nucleicos y protenas (acridina) o interfieren en la sntesis de la pared celular (derivados del trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separndolas fsicamente. Esto provoca errores en la duplicacin del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de

genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloquean la conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido. R = HSO4- Verde Brillante R = Cl- Verde de Malaquita Violeta de Genciana Agentes alquilantes Son agentes esterilizantes, activos tanto sobre clulas vegetativas como sobre esporas, que ejercen su efecto letal por su accin alquilante de protenas y cidos nucleicos. Formaldehido (HCHO). La aniquilacion la produce reemplazando hidrgenos lbiles de ciertos grupos qumicos (-NH2, -OH, -COOH y -SH), produciendo: Hidroximetilaciones Condensaciones (entrecruzamientos). Usos comerciales: Como gas, en la descontaminacin de habitaciones; Como formalina (solucin acuosa al 35%); Como paraformaldehido (polmero slido de 91-99% de pureza). La formalina se emplea para preservar tejidos, en lquidos de embalsamamiento, y al 0,2-0,4% en la preparacin de vacunas de virus. Glutaraldehido. Es menos txico y ms potente que el formaldehido, y no se afecta por materiales con protenas.Cada vez se emplea ms como esterilizante fro de instrumental quirrgico. Es el nico recomendado para esterilizar equipamiento de terapia respiratoria. Oxido de etileno. Tiene un efecto similar al del formaldehido: Sustituciones y entrecruzamientos irreversibles en grupos amino, sulfhidrilo, etc., de protenas. Tambin reacciona con grupos fosfato y anillos nitrogenados de los cidos nucleicos. Es un agente empleado como esterilizante gaseoso, aunque es de accin lenta. Se emplea cuando no se puede recurrir a la esterilizacin por calor: esterilizacin de material de plstico, drogas, ciertos productos biolgicos, equipamiento electrnico. La operacin se realiza en cmaras parecidas al autoclave. Sin

embargo, es un mtodo caro y exhibe ciertos riesgos: presenta accin vesicante y toxicidad para el hombre (mutgeno y carcingeno). -propionil-lactona. Es 25 veces ms activa que el formaldehido. Acta como gas en presencia de 8090% de humedad relativa, aunque es poco penetrante. SALES CUATERNARIAS DE AMONIO (DETERGENTES CATINICOS) Son los detergentes ms potentes en cuanto a su actividad desinfectante, siendo activos contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Los principales son los llamados compuestos de amonio cuaternario: Sales de amonio cuaternario, sobre todo aquellas que van como cloruros o bromuros. Su frmula general se puede representar as: Los cuatro sustituyentes (R1 a R4) del N son cadenas de hidrocarburos variados. Las sales de amonio cuaternario ms activas son aquellas que tienen tres grupos alqulicos cortos y un grupo alqulico largo: cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio Mecanismo de accin: La porcin hidrfoba penetra en las membranas, mientras que el grupo polar catinico se asocia con los fosfatos de los fosfolpidos, provocando alteraciones en dichas membranas, reflejadas en la prdida de su semipermeabilidad, con salida de metabolitos de N y P desde el citosol. Es entonces cuando el detergente puede entrar al interior celular, con un efecto secundario de desnaturalizacin de protenas. Su actividad se mejora a pH alcalino. Son rpidamente bactericidas a concentraciones muy bajas (del orden de una parte por milln, 1 ppm), siempre que en el material a tratar no exista materia orgnica. Usos, ventajas e inconvenientes: Tienen baja toxicidad, por lo que se pueden emplear como desinfectantes y antispticos de la piel. Se emplean igualmente en la desinfeccin de material de industrias alimentarias.Su actividad se ve neutralizada por jabones y fosfolpidos, precipitando en su presencia.

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE ESTERILIZACIN A continuacin se presenta un esquema de los principales mtodos de esterilizacin, clasificados de acuerdo al tipo de agente que acta.

Agentes fsicos El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao. La radiacin, o emisin y propagacin de la energa a travs de un medio, puede ser utilizada como agente para la eliminacin de microorganismos. As tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden utilizar para la esterilizacin de materiales termolbiles, como por ejemplo materiales plsticos, y las radiaciones no ionizantes, como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control de reas cerradas.

Agentes mecnicos La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos presentes en un lquido o un gas retenindolos sobre la superficie de un material. Agentes qumicos Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los celulares de los microorganismos (protenas, membranas, etc.) CONTROL DEL PROCESO DE ESTERILIZACIN Todos los procesos de esterilizacin se deben controlar para poder asegurar quehan sido efectivos. Para ello se pueden utilizar indicadores fsicos, qumicos y/o biolgicos, los cuales deben ser colocados en cada carga de esterilizacin. Indicadores fsicos Entre los principales indicadores fsicos se encuentran los medidores de presin y los termmetros los cuales permiten constatar las condiciones fsicas dentro de la cmara de esterilizacin. Tambin existen los termgrafos los cuales, adems de registrar la temperatura alcanzada en el proceso, permiten conocer durante cunto tiempo sta se mantuvo. Indicadores qumicos La mayora de estos indicadores son cintas adhesivas que se adhieren al material a esterilizar. Estas cintas estn impregnadas con una sustancia qumica que cambia de color cuando el material ha sido sometido al proceso de esterilizacin. Este tipo de cintas no son completamente confiables debido a que muchas veces slo indican que se lleg a la temperatura deseada, pero no indican por cuanto tiempo sta se mantuvo. Tambin existen cintas diseadas de manera que el cambio de color es progresivo, estas cintas son un poco ms seguras porque permiten estimar si el tiempo de esterilizacin fue el adecuado. Indicadores biolgicos Son preparaciones de una poblacin especfica de esporas de microorganismos, las cuales son altamente resistentes a un proceso de esterilizacin en particular. Estos indicadores se deben colocar junto con la carga de esterilizacin, en el sitio que se considera que es ms difcil que llegue el vapor y despus del proceso, se deben incubar durante 24 horas en condiciones adecuadas. Si despus de este periodo hay evidencia de crecimiento microbiano (por ejemplo cambio de color del medio de cultivo), el proceso de esterilizacin no fue satisfactorio. Cuando se utilizan indicadores biolgicos se debe verificar: Tipo de microorganismo

 Tipo de proceso de esterilizacin Nmero de lote Fecha de expiracin Medio de cultivo utilizado Condiciones de incubacin del indicador despus de aplicado el proceso de esterilizacin Mtodos de descontaminacin para evitar la diseminacin de esporas en el medio ambiente Con este tipo de indicado MATERIALES Y METODOS Autoclave Papel craft Pipetas Tubo de ensayo Pavilo Algodn

Esterelizacion por autoclave

CONCLUSIONES Durante esta prctica aprendimos que la esterilizacin es muy importanteen la microbiologa, ya que el material con el que se trabaja debe estar libre decualquier forma de vida. Conocimos mtodos tanto fsicos como qumicos deesterilizacin, aunque solo utilizamos en esta prctica mtodos fsicos deesterilizacin seca y hmeda. BIBLIOGRAFIA http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M%C 3%A9todos_de_esterilizaci%C3%B3n.pdf http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacionlaboratorio.shtml http://medaflojera.blogspot.com/2007/01/metodos-de-esterilizacion.html