Actividad Pre laboratorio

1) Propiedades fisicoqumicas de los aminocidos y protenas. Solubilidad, pH, pKa, ismeros pticos.

Los aminocidos son compuestos slidos; incoloros; cristalizables; de elevado punto de fusin (habitualmente por encima de los 200 C); solubles en agua; con actividad ptica y con un comportamiento anftero. La actividad ptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolucin de aminocidos, y es debida a la asimetra del carbono, ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminocidos en Dextrgiros (+) si desvan el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levgiros () si lo desvan hacia la izquierda.

El comportamiento anftero se refiere a que, en disolucin acuosa, los aminocidos son capaces de ionizarse, dependiendo del pH, como un cido (cuando el pH es bsico), como una base (cuando el pH es cido) o como un cido y una base a la vez (cuando el pH es neutro). En este ltimo caso adoptan un estado dipolar inico conocido como zwitterin.

El pH en el cual un aminocido tiende a adoptar una forma dipolar neutra (igual nmero de cargas positivas que negativas) se denomina Punto Isoelctrico. La solubilidad en agua de un aminocido es mnima en su punto isoelctrico.

2) Fundamento bsico de los aminocidos y protenas. Clasificacin, mtodo de separacin, cromatografa de papel (monodimensional bidimensional), electroforesis (libre y de zona).

Los aminocidos se pueden clasificar:

Segn presencia o no en las protenas:

Proteicos: se obtienen de la hidrlisis de protenas y pueden ser codificables y no codificables. No proteicos: no se obtienen por hidrlisis de protenas.

Segn la naturaleza qumica de la cadena lateral:

AAs Alifticos: Gly, Ala, Val, Leu, Ile. AAs Aromtico: Phe, Tyr, Trp. AAs Hidroxilados: Ser, Tyr, Thr. AAs Azufrados: Cys, Met. AAs Acidos y Amidas: Asp, Asn, Glu, Gln. AAs Bsicos: Lys, Arg, Hys. AAs Iminoacido: Pro.

Segn la polaridad de la cadena lateral:

Aminocidos con grupos R no polares o hidrofbicos: Existen 8 aminocidos que contienen grupos R no polares o hidrofbicos. Aqu se encuentran la alanina, la leucina, la isoleucina, la valina, la prolina, la fenilalanina, el triptfano y la metionina. Estos aminocidos son menos solubles en el agua que los aminocidos con grupos R polares. El menos hidrfobo de esta clase de aminocidos es la alanina, la cual se halla casi en la lnea fronteriza entre los aminocidos no polares y los que poseen grupos R polares.

Aminocidos con grupos R polares sin carga: Estos aminocidos son relativamente ms solubles en el agua que los aminocidos anteriores. Sus grupos R contienen grupos funcionales polares, neutros que pueden establecer enlaces de hidrgeno con el agua. La polaridad de la serina, la treonina y la tirosina se debe a sus grupos hidroxilos; la de la aspargina y la glutamina, a sus grupos amdicos y de la cistina a la presencia del grupo sulfhidrilo (-SH). La glicola, a veces se clasifica como una aminocido no polar. La cistina y la tirosina poseen las funciones mas polares de esta clase de aminocidos, sus grupos tilo e hidroxilo fenlico tienden a perder mucho ms fcilmente protones por ionizacin que los grupos R de otros aminocidos de esta clase.

Aminocidos con grupos R cargados positivamente:

Los aminocidos en los que los grupos R poseen carga positiva neta a PH 7, poseen todos seis tomos de carbono. Aqu se encuentran la lisina, la arginina y la histidina. Esta ltima tiene propiedades lmite. A pH 6 ms del 50 % de las molculas de la histidina, poseen un grupo R cargado positivamente, pero a pH 7 menos del 10 % de las molculas poseen carga positiva.

Aminocidos con grupos R cargados negativamente: Los dos miembros de esta clase son los cidos asprtico y glutmico, cada uno de los cuales posee un segundo grupo carboxilo que se halla completamente ionizado y por tanto cargado negativamente a pH 6 y 7.

Segn el nmero de grupos ionizables:

Monoamino-Monocarboxilo. Diamino-Monocarboxilo. Monoamino-Dicarboxilo. -Segn importancia nutricional: AAs Esenciales: no son sintetizados por el organismo (Phe, Val, Thr, Trp, Ile, Met, Hys, Arg, Lys, Leu). AAs No esenciales: pueden ser sintetizados por el organismo. (Gly, Ala, Tyr, Ser, Cys, Pro, Asp, Asn, Glu, Gln).

Las protenas se pueden clasificar en: Segn su forma:

Fibrosas: presentan cadenas polipeptdicas largas y una estructura secundaria atpica. Son insolubles en agua y en disoluciones acuosas. Algunos ejemplos de stas son queratina, colgeno y fibrina. Globulares: se caracterizan por doblar sus cadenas en una forma esfrica apretada o compacta dejando grupos hidrfobos hacia adentro de la protena y grupos hidrfilos hacia afuera, lo que hace que sean solubles en disolventes polares como el agua. La mayora de las enzimas, anticuerpos, algunas hormonas y protenas de transporte, son ejemplos de protenas globulares. Mixtas: posee una parte fibrilar (comnmente en el centro de la protena) y otra parte globular (en los extremos).

- Segn su composicin qumica Simples: su hidrlisis slo produce aminocidos. Ejemplos de estas son la insulina y el colgeno (globulares y fibrosas). Conjugadas o heteroprotenas: su hidrlisis produce aminocidos y otras sustancias no proteicas con un grupo prosttico.

Electroforesis: Es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico. En la Electroforesis libre, el campo elctrico se aplica a disoluciones o suspensiones; Electroforesis en zona, el campo elctrico se aplica a un medio o soporte estabilizante (en vez de a un fluido) y la muestra se deposita en una reducida zona del mismo.

Cromatografa de papel: Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el fondo. Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin del disolvente y la del papel de filtro.

3)

Reacciones de Precipitacin de las protenas:

Efecto de la temperatura sobre la solubilidad:

La solubilidad de las protenas se ve afectada cuando la temperatura sobrepasa de 35C sufriendo un fenmeno de desnaturalizacin. Cuando esto ocurre, la solubilidad disminuye hasta

desaparecer. Algunas protenas no presentan ningn cambio de solubilidad a temperaturas inferiores a los 35C otras se hacen ms o menos solubles.

Precipitacin y solubilizacin salina:

Tcnica donde se logra el aumento de la fuerza inica del medio. Grandes cantidades de sal agregadas a una solucin de protenas, disminuye la interaccin protena H2O porque quita la capa de solvatacin, predominando la interaccin protena-protena y generando la precipitacin de los mismos. La concentracin salina a la que se produce la precipitacin no es igual para todas las protenas, lo que permite usar esta propiedad para la separacin y purificacin de protenas particulares a partir de mezclas complejas.