BIOLOGIA MOLECULAR

AULA 5 CDIGO GENTICO. BIOSSNTESE DE PROTENAS.

Luclia Parente
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CDIGO GENTICO
A relao entre a sequncia de bases no DNA a sequncia correspondente de aminocidos na protena, chamada de cdigo gentico. Este encontra-se na forma de triplets (trinucleotdeos) que so chamados de cdons. Um cdon uma sequncia de trs nucleotdeos que corresponde a um determinado aminocido. A descoberta da construo de cada cdon e o que ele especifica, levou vrios anos de estudo. Esses estudos baseavam-se em princpios j conhecidos:
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CDIGO GENTICO
- A informao gentica est no DNA (ncleo); - A sntese de protenas ocorre no citoplasma, dirigida pelo RNAm. A dvida era como a sequncia de nucleotdeos, presente no DNA e transmitida para o RNAm, era decodificada no citoplasma na forma de aminocidos. Por volta de 1955 havia duas hipteses: 1)George Gamow, propunha que a informao no DNA estaria sob a forma de cdigo;
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CDIGO GENTICO
2) Francis Crick, sugeria que haveria molculas adaptadoras que interagiriam com o RNAm e com os aminocidos, sendo, no mnimo, 20 adaptadores diferentes, um para cada aminocido. As duas hipteses estavam certas. Descobriu-se que a sequncia de nucleotdeos do DNA determina a sequncia de aminocidos de uma protena, de acordo com o cdigo gentico universal entre os organismos vivos. A molcula adaptadora proposta por Crick era o 4 RNAt e que esse mediava a traduo do cdigo

DECIFRANDO O CDIGO GENTICO

Os fatos de que o DNA possui 4 bases diferentes e de que existem 20 diferentes aminocidos indicavam que um grupo de nucleotdeos seria necessrio para especificar um determinado aminocido. Desse modo, deduziu-se que 3 nucleotdeos deveriam constituir 1 cdon; a utilizao de apenas 2 nucleotdeos produz apenas 16 combinaes diferentes, enquanto que a de 3 nucleotdeos resulta em 64 combinaes possveis. Brenner e Crick em 1961, demonstraram que o 5

DECIFRANDO O CDIGO GENTICO

Em 1961 Nuremberg e Matthaei, comearam a determinar que combinaes de nucleotdeos determinavam quais aminocidos. Utilizando um sistema de sntese de protenas in vitro, eles demonstraram que uma sequncia sinttica de poli-uridilato-poli (U) levava sntese de poli fenilalanina. Dessa maneira, descobriram que o cdon UUU codificava fenilalanina. A partir da, outros pesquisadores comearam a realizar experimentos semelhantes, nas mais diferentes combinaes possveis, para serem 6 determinados outros cdons.

1 letra (5)

O CDIGO GENTICO
2 letra Os cdons so escritos na direo 53. A terceira base de cada cdon (em negrito) desempenha um papel menor na especificao de um aminocido que os dois primeiros. Os trs cdons de terminao so sombreadas em rosa O cdon AUG de iniciao em verde.Todos os aminocidos, exceto metionina e triptofano tm mais de um cdon. Na maioria dos casos, cdons que especificam o mesmo aminocido diferem apenas na terceira base.
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CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

No processo de traduo, o RNAm lido a cada 3 nucleotdeos, cdon por cdon. A mediao entre os cdon no RNAm e os aminocidos que devem ser incorporados na protena feita pelo RNAt, j ligado a um determinado aminocido, atravs do anticdon. O anticdon uma sequncia de 3 nucleotdeos presente no RNAt e complementar ao cdon. Alguns RNAt com diferentes anticdons so ligados (ativados) a um mesmo aminocido e, consequentemente, diferentes podem codificar 8 um mesmo aminocido.

CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

Isso possvel porque o cdigo em forma de triplets, sendo o nmero de cdons (64) maior do que o de aminocidos (20). Esse fenmeno define uma das caractersticas do cdigo gentico: a degenerao, ou seja, um mesmo aminocido pode ser codificado por vrios cdons diferentes. Cdons que representam um mesmo aminocido so chamados de sinnimos. Excetuando-se metionina e triptofano, todos os outros aminocidos so representados por mais 9 de um cdon.

CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

Na maioria dos casos, os vrios cdons que especificam um determinado aminocido diferem na sua terceira base. Diz-se que a degenerao parcial quando a terceira base pode ser uma das duas purinas ou uma das duas pirimidinas. Na degenerao total, qualquer uma das quatro bases pode estar presente na terceira posio. A degenerao do cdigo pode implicar, tambm, no apenas a existncia de mais de um RNAt para cada aminocido, mas que um determinado RNAt 10 pode parear com mais de um cdon.

CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

O pareamento com a terceira base do cdon menos rgido, devido prpria conformao da molcula de RNAt. Dessa maneira ocorre o que se chama de pareamento oscilante. O pareamento oscilante permitido aquele que mantm a distncia usual entre as riboses. Sendo assim, no possvel o pareamento entre duas purinas ou duas primidinas (distncias muito grandes e muito pequenas, respectivamente). Os pareamentos possveis esto na tabela a 11 seguir:

CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

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CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

Esse pareamento oscilante explica por que, para alguns aminocidos, encontrado um nmero de RNAt diferentes menor do que o nmero de cdons. Para cdons em ocorre degradao total na terceira posio, so necessrios, pelo menos, dois RNAt diferentes para cada aminocido. A degenerao do cdigo gentico, especialmente a variao na terceira base, explica a grande variao nas taxas de AT/GC, encontradas entre alguns organismos, sem uma correspondente 13 variao nos aminocidos utilizados nas protenas.

CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

Uma outra caracterstica do cdigo gentico a sua no-ambiguidade, isto , cada cdon corresponde a somente um aminocido. Universalidade O cdigo gentico com raras excees o mesmo nos mais diversos organismos, desde as bactrias at o homem. Dentro da universalidade do cdigo gentico, h , ainda, um aspecto mais restrito que se refere aos cdons de iniciao e terminao.
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CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

O RNAm no traduzido do seu incio ao fim. A traduo comea e termina em pontos internos da molcula e esses pontos so determinados, em parte, pelos cdons de iniciao e terminao. O cdon AUG um dos sinais que determina o incio da sntese de protena, sendo, a metionina o primeiro aminocido a ser incorporado em todas as protenas de procariotos e eucariotos. Eventualmente, o cdon GUG pode ser utilizado, em E. coli, como cdon de iniciao.
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ESTRUTURA DO tRNA
Cada molcula de tRNA relativamente pequena, com cerda de 80 nucleotdeos, e sua fita-nica dobra-se sobre si mesma; Em cada clula h mais do que 60 tipos diferentes de molculas de tRNA, pelo menos um tipo para cada um dos aminocidos presentes nas protenas; Cada molcula de tRNA tem dois importantes stios de ligao. Um desses stios, o anticdon, corresponde a uma sequncia de trs nucleotdeos que ir se ligar a um cdon de uma molcula de 16 mRNA;

ESTRUTURA DO tRNA
O outro stio na extremidade 3 da molcula responsvel pela ligao do tRNA a um aminocido particular; A molcula de tRNA ligada ao seu aminocido correspondente denominada tRNA-aminoacil. Essa ligao catalisada por enzimas conhecidas como tRNA-aminoacil sintases; E ssas enzimas que utilizam a energia liberada pela 17 hidrlise de ATP, determinam o tipo de aminocido

ESTRUTURA DO tRNA
1.S o capazes de representar somente um aminocido, ligando-se covalentemente a ele; ontm uma sequncia de trinucleotdeos, o anticdon, que complementar ao cdon do mRNA e que representa o aminocido.

2.C

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ESTRUTURA DO tRNA
Est associado aos ribossomos, que so grandes complexos formados por molculas de RNA e protenas; Do ponto de vista funcional so mquinas de sintetizar protenas aos quais molculas de tRNA ligam-se obedecendo ordem precisa contida nas molculas de mRNA; nos ribossomos que ocorre a leitura cuidadosa da mensagem gentica no RNA; Os ribossomos possuem duas subunidades, uma grande e outra pequena, cada uma delas composta por molculas especficas de RNA e protenas; 20

ESTRUTURA DO RIBOSSOMO
Na subunidade menor localiza-se o stio de ligao no mRNA. A subunidade maior possui trs stios de ligao para tRNA: stio A (Aminoacil); o stio P (peptidil), onde se instala o tRNA que est associado cadeia polipeptdica em crescimento; e stio E (sada), local onde os tRNAs deixam os ribossomos aps se haverem liberado dos aminocidos que estavam associados.

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ESTRUTURA DO RIBOSSOMO

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RNA Mensageiro Traduzido em Protenas

A sntese de protenas conhecida como traduo, pois ela envolve a transferncia de informaes de uma linguagem (sequncia de nucleotdeos) para outra (sequencia de aminocidos); As principais etapas na traduo so a INICIAO, a ELONGAO da cadeia polipeptdica e a TERMINAO da cadeia.

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PAREAMENTO ENTRE rRNA e mRNA

Para que a sntese de protenas inicie, necessrio que ocorra uma ligao entre o mRNA e o ribossomo. O tamanho dessas sequncias do mRNA que so recobertas pelos ribossomos, denominadas de stio de ligao dos ribossomos (RBS), pode variar de 35 a 40 nucleotdeos. O RBS apresenta duas caractersticas principais: 1)O cdon de iniciao AUG (raramente GUG ou UUG) est sempre contido na sua sequncia; 2)Possui uma sequncia de nucleotdeos parcialmente complementar a uma regio 3 do rRNA. Essa 24 sequncia denominada de RBSS ou de sequncia

ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

Durante a sntese de protenas, os ribossomos deslocam-se ao longo do mRNA, possibilitando um pareamento entre esses e o tRNA que carregam os diferentes aminocidos que iro compor as protenas. Os ribossomos deslocam-se no mRNA na direo 5 3, sintetizando a protena no sentido aminoterminal para carboxil-terminal. Uma mesma molcula de mRNA traduzida simultaneamente, por diferentes ribossomos. O stio A e P nos ribossomos so ocupados por diferentes tRNA durante o processo de traduo. 25

ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

O stio A expe o triplet correspondente ao aminocido que dever ser adicionado, sendo ocupado pelo aminoacil-tRNA contendo o anticdon correspondente. No stio P, est localizado tRNA correspondente ao cdon anterior, e ficar ocupado pelo tRNA, carregando a cadeia polipeptdica em formao (peptidil-tRNA). A sntese de protenas dividida em 3 etapas: 1)INCIO Inicia-se com a adio do primeiro aminocido da 26 protena, sendo necessria a formao do

ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

O complexo de iniciao dependente das subunidades separadas 30S e 50S, sendo formado pelos ribossomos intactos (70S). Essa reao ocorre em duas etapas: 1)Ligao da subunidade 30S no stio RBS do mRNA, formando o complexo de iniciao; 2)Formao do ribossomo completo pela adio da subunidade maior 50S. A ligao da subunidade 30S com o mRNA e o tRNA iniciador necessita de protenas auxiliares denominadas fatores de iniciao (IF).
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RBS
I F I F

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ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

Esses fatores de iniciao esto envolvidos somente na formao do complexo de iniciao, sendo dissociados durante a formao do ribossomo completo. 2) ALONGAMENTO E TRANSLOCAO O alongamento da cadeia polipeptdica inclui todos os processos, desde a ligao dos primeiros aminocidos at a adio do ltimo aminocido peptdico. Os aminocidos so adicionados isoladamente, 29 sendo a fase que ocorre mais rapidamente

ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

Aps a formao do ribossomo completo (70S) no cdon de iniciao, o processo dever ocorrer de forma cclica, sendo os aminoacil-tRNAs adicionados no stio A e o peptdeo localizado no stio P. A apresentao dos aminoacil-tRNAs no stio A depende de m fator de alongamento (EF-Tu), que possui afinidade por todos os tRNAs ativados. Esse fator de alongamento no capaz de se ligar ao tRNA iniciador. A ligao depende da energia fornecida pelo GTP. 30 Aps a adio do aminoacil-tRNA no stio A e a

ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

Esse fator (EF-Tu-GDP) no capaz de ligar-se aos tRNAs e necessita ser regenerado sua forma ativa. Um outro EF-Ts se liga em EF-Tu-GDP originando a forma ativa. Durante o processo de sntese de protenas, o ribossomo permanece parado, permitindo que o peptdeo formado, ligado ao tRNA localizado no stio P, seja transferido para o aminoacil-tRNA no stio A. A atividade enzimtica responsvel pela ligao peptdica denominada peptidil-trasnsferase, localizada na subunidade maior. 31

ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

Aps a formao da ligao peptdica, o tRNA (sem aminocido) permanece ligado ao stio P e o peptidil-tRNA ao stio A. O ribossomo realiza m movimento de translocao. Com a translocao ocorrem trs efeitos: 1)O tRNA no carregado liberado do stio A; 2)O peptidil-tRNA move-se do stio A para o stio P; 3)Um novo triplet exposto no stio A. Dessa forma o stio A est preparado para receber o aminoacil-tRNA contendo anticdon 32 correspondente, dando continuidade a sntese

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ETAPAS DA SNTESE DE PROTENAS

3) TERMINAO O fim da sntese de protenas ocorre pelo aparecimento, no stio A, de triplets especficos de terminao (UAG, UAA e UGA). O reconhecimento desses cdons realizado por protenas e no por molculas de tRNA, diferente do que acontece em outros cdons. O trmino da sntese de protenas ocorre com a localizao de um RF no stio A, a liberao do peptdeo do tRNA, a eliminao do tRNA do ribossomo e a dissociao das subunidades 30S 3 34 50S.

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