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DNA CHIP
Presentado por:
CAYAMPI QUISPE, Betsy J. ESPINOZA SALAZAR, Lucy E. ORMEO ANGULO, Mara del C. RAMOS PACHECO, Patricia C. SEGURA LOAYZA, Diego A.
Qu es un DNA Microarray?
Qu es un DNA Microarray?
gen
en
un
genoma
Definiciones Generales
Objetivo o Blanco es la muestra de cido nucleico (cDNA) cuya
chip de DNA).
anlisis.
- Remover el buffer con RNA. - El mRNA ser 5-3 con una terminacin AAA.
Convertir cada mRNA en cDNA coloreados. - Los objetivos estn marcados con los fluorforos.
DNA microarray
Tecnologas mltiples usadas en Gentica, Biologa Molecular y en Medicina Matrices seriadas de miles de huecos microscpicos de oligonucletidos de DNA. El sondeo del objetivo de hibridacin es usualmente detectado y cuantificado por la deteccin de fluorofosfo-, plata-, o quimoluminiscenciasobre objetivos marcados.
Puede ser usado para: medir los cambios de expresin en los niveles;
2. Purificacin
unido
El RNA purificado es analizado por cualidad (por electroforesis capilar) cantidad (por espectrofotmetro)
Amplificacin (opcional)
por
PCR
4. Marcacin o etiquetado
El marcador es agregado bien en la fase RT o en una fase adicional de la amplificacin (de ser hecha).
Las muestras marcadas son luego mezcladas con una solucin de hibridacin propia. SDS, SSC, dextran sulfate, a blocking agent, Denhardt's solution and formamine.
6. Escaneo
Los huecos son sellados y el microarray hibridado. El microarray es secado y escaneado en una mquina especial donde el lser excita el colorante y el detector mide su emisin. Despus el resultante bruto es normalizado para su estudio.
7. Normalizacin y anlisis
El Proceso
Cells Poly-A RNA AAAA Fragment (heat, Mg2+) Labeled fragments L L L cDNA 10% Biotin-labeled Uracil Antisense cRNA IVT L L L (In-vitro Transcription)
Hybridize
Wash/stain
Scan
14
Esquema de codificacin:
Green = repressed (less mRNA) gene in experiment Red = induced (more mRNA) gene in experiment Black = no change (1:1 ratio)
Or
Green = control condition (e.g. aerobic) Red = experimental condition (e.g. anaerobic)
Conclusiones
Lab-On-A-Chip
Gracias