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introduccion
tincin de Gram, denominada as por el bacterilogodans Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, gram positivas y gram negativas.
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada,y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (decomposicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capadelgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. Lamembrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.
bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano .
rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas.La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a quela membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos,como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano queposee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristalvioleta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa,perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Grampositivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcinde peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sinoque este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que puedaescaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea
Colocar el frotis en forma vertical y usando fondo blanco decolorando aadiendo gota a gota alcohol-acetona (5-15 seg.)
Iniciar tincin Gram y separar un frotis despus despues de cada uno de los pasos de la tecnica
Resultados:
Morfologa Microscpica
Hacer dos frotis con una mezcla de E.coli y B.subtillis.
Gram
+ +
Teir los frotis con la tcnica de gram, dejando actuar el alcohol-acetona 3seg.en uno y 3min.en el otro
Bacillus subtillus.
Conclusiones
La tincin Gram funciona debido a que ambos tipos de
bacterias Gram (+) y Gram (-)se tien diferencialmente debido a las diferencias constitutivas de su pared.