Biotecnologia Industrial I

Prof.: Vinicius Fernandes Moreira

Produo de Etanol A produo de lcool no Brasil iniciou-se na Capitania de So Vicente, onde foi montado o primeiro engenho de acar no pas. Primeiras mudas de cana-de aucar ilha da Madeira, 1532.
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 A I Guerra Mundial contribuiu para o desenvolvimento da produo em grande escala, j que o etanol foi utilizado como combustvel lquido de motores de exploso.
- A Alemanha e, principalmente a Frana, deram grande contribuio ao desenvolvimento das tcnicas de fermentao alcolica, de destilao e de construo de aparelhos de destilao. -Utilizava-se o etanol para fins farmacuticos, produo de produtos qumicos, bebidas e fonte de energia trmica.
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 A primeira utilizao do etanol como combustvel ocorreu em 1927 (Usina Serra Grande de Alagoas) 1929 Crise internacional; instalao da primeira destilaria de lcool anidro 1931 - Obrigatoriedade da mistura de 5% de etanol gasolina (Dec. 19717)

2 Guerra 1939/1945 Falta de gasolina, fez-se uso do lcool como combustvel. Dcada de 1970: crise do Petrleo e criao do programa Pr-lcool
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Urbano Ernesto Stumpf - 1916/1998 - tido como o "Pai do motor a lcool no Brasil. Quando da primeira crise do petrleo em 1973, o CTA ( Centro Tcnico Aeroespacial ), incumbiu-o de realizar estudos tcnicos sobre o etanol Nesse mesmo ano, comea a circular o primeiro veculo movido a lcool ( um modelo Dodge Polara ) e criado o pr-lcool. A experincia definitiva - No dia 19 de outubro de 1976, teve incio o " circuito de integrao nacional ". Uma experincia em que trs carros ( um Dodge, um Fusca e um Gurgel Xavante ) movidos a lcool partiram do CTA. Percorreram nove estados brasileiros totalizando oito mil e quinhentos quilmetros de distncia e retornando 21 dias depois ao ponto de partida. 4

 1978: Lanamento do primeiro carro movido a lcool fabricado em srie no Brasil (Fiat 147)
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Vias de obteno 3 maneiras: - destilao - sntese - fermentao

Via destilatria - no tem significao econmica no Brasil. Via sinttica - a partir de hidrocarbonetos no-saturados, como eteno e o etino, e de gases de petrleo e da hulha. Via fermentativa mais importante para o Brasil mesmo com o lcool sinttico, para a produo de bebidas alcolicas, caractersticas como o sabor e aroma so decorrentes do processo de fermentao. E a legislao no permite (sntese de lcool para bebida).

Fermentao forma mais econmica devido a matria-prima existente em todo o pas (distribuio geogrfica, clima, solo) O processo se divide em trs fases: preparo do substrato fermentao destilao 1) Preparo do substrato tratamento da matria-prima para a extrao dos aucares fermentveis, diferente para cada tipo de matria-prima. 2) Fermentao comum a todos os substratos aucarados destinados a produo de etanol.

3) Destilao separao do etanol. Duas fases: separar do substrato fermentado (mistura hidroalcolica com aldedos, steres, cidos orgnicos); e separar impurezas do etanol.

Matrias-primas, composio e conservao Qualquer produto que contenha acar ou outro carboidrato, constitui-se em matria-prima, desde que vivel economicamente (volume de produo, rendimento e custo). Classificao das matrias-primas Matrias aucaradas cana-de-acar, mel, beterraba, etc. Matrias amilceas gros, razes e tubrculos (lcool de cereais)

Matrias celulsicas palhas, madeiras

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Aucaradas:

diretamente fermentveis contem monossacardeos; no diretamente fermentveis contem dissacardeos,

fermentam aps a hidrlise inverso naturalmente pela ao da invertase.

Dissacardeos

Hidrlise (inverso)

Acar fermentescvel

Amilceas e Feculentos fermentao aps hidrlise sacarificao transformao do amido no-fementvel em acar fermentvel.

processo mais complexo

dificuldade de conservao

custo de fabricao alto

Fabricao em pequena escala para industria de bebidas

Celulsicas variedade de matria, mas economicamente no-vivel; processo complexo; teor de acar baixo.
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Composio das matrias-primas A composio pode variar com fatores controlados ou no pelo homem (variedade, idade, clima, transporte, armazenamento, solo). -melao: resduos da fabricao de acar - cana-de-acar: sacarose principal (frutose e glicose) quanto mais madura, menor teor de glicose e frutose

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-milho: alto volume de lcool produzido, desinteresse.

-sorgo: alto volume de lcool produzido, baixo tempo de cultivo, mas baixo tempo de colheita e armazenagem. - mandioca: volume de lcool alto, produtividade baixa, difcil mosto.
- resduos celulsicos: difcil mosto, baixo rendimento, elementos txicos no substrato. - outros: arroz, batata-doce, cevada, trigo (todos sem importncia econmica no Brasil).
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Conservao das matrias-primas Cana trs dias sem queimar; queimadas em menos tempo; quanto maior tempo, mais deteriora, prejudica a fermentao; mximo 10 dias. Milho longo; Cereais silos com baixa umidade e sem insetos, roedores e fungos.

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Preparao dos meios

Preparo do mosto de melao diluio com gua em misturadores

- dilui-se o melao entre 15 e 25 Brix, com mdia de 18 a 20 Brix (unidade utilizada para expressar a quantidade de slidos solveis totais presentes)

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Mosto muito diludo fermenta mais rpido, escoa melhor, suja menos os aparelhos, mas exige volume maior, mais energia, mais gua, etc. Mosto muito concentrado, maiores perdas com aucares nofermentados, temperaturas mais altas para fermentao, suja mais, mas diminui o volume nas dornas (recipientes de ao para fermentao), etc.

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Preparo do mosto de caldo de cana de acar O caldo, misturado com gua de embebio, rico em sacarose e aucares redutores. Geralmente clarifica-se o caldo por meio de aquecimento, decantao e filtrao (para separar colides e materiais nitrogenados). Isso torna-o um mosto mais limpo, fermenta melhor, espuma menos e suja menos.

Aps clarificao, resfria-se o caldo e envia-se s dornas.

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Matrias amilceas e feculentas

-fermentam aps hidrlise do amido sacarificao: * via qumica * via enzimtica * via biolgica ** ao enzimtica do malte ** ao microbiana de certos fungos

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Preparo do mosto de materiais amilceos necessrio sacarificar os gros e feculentos (razes e tubrculos) pois os agentes de fermentao no possuem enzimas amilolticas. A sacarificao pode ser realizada por vias qumicas, biolgicas ou ao direta de enzimas, mas as destilarias preferem a biolgica. A sacarificao faz-se por ao enzimtica do malte ou pela ao microbiana de certos fungos no processos Amilo.

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Sacarificao pelo malte - Preparo do malte malte um cereal germinado em condies especiais de umidade, temperatura e aerao. Durante a germinao, ocorrem modificaes bioqumicas no cereal (secreo de enzimas) que so desejadas para a sacarificao (por exemplo, solubilizao do amido). Nas cervejarias e fabricas de usque cevada Na destilaria de lcool milho

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Gros limpeza e classificao Macerao gua:gro 3:1; 10-12C

Amido Pesagem/Moagem Hidratao

Germinao Cozimento
Malte verde Malte seco Goma de amido Agitao 65C/1h Resfriamento 28 a 30 C

Limpeza e classificao dos gros

Macerao a baixa temperatura em cubas com gua

Preparao do leite de malte ou secagem

Germinao

Ativao de amilofosfatase, amilopectinase, a-amilase, b-amilase e at maltase

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Sacarificao 1) Formao da goma pesagem, moagem, hidratao e cozimento 2) Aps obteno da goma, coloca-se em contato com o malte para ocorrer a sacarificao pela ao das enzimas amilolticas. 3) Aps cozimento resfria-se a massa, adiciona-se o leite de malte sob agitao temperatura constante, efetua-se a correo do mosto e envia-se s dornas para fermentar.

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Sacarificao por ao microbiana Usam-se fungos com propriedades amiloliticas pr exemplo Preparo de inoculo 20 gramas de material amilceo em 1 litro de gua, inocula-se uma suspenso de esporos. Encuba-se por 3-4 dias, 35 a 38C e obtm-se um inoculo para 100.000 litros de mosto.

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Amido

Inculo Fungos amilolticos

Goma de amido

gua

Agitao e aerao 24 h

microrganismo

Fermentao

Preparo do mosto prepara-se a goma de forma semelhante a j descrita. Goma Autoclave Dornas Com Agitao Refrigera oe inoculao 24h

Esterilizao

Fermentao

72-96h

Inoculao de leveduras

40h

Fungo desenvolvido e mosto sacarificado

Destiladores especiais

Separao do lcool

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Fermentao alcolica Breve histrico: -H 4.000 anos egpcios; - descoberta do fungo Antonie Van Leewenhak; - estequiometria da fermentao Gay-Lussac; - Pasteur processo anaerbico. - Saccharomyces O metabolismo no interior da clula A transformao do acar em etanol e CO2 envolve 12 reaes no citoplasma celular

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Saccharomyces um aerbio facultativo (se ajusta em aerobiose

ou anaerobiose). Em aerobiose acar vira biomassa, CO2 e gua Em anaerobiose a maior parte convertida em etanol e CO2 (fermentao alcolica) Os substratos tanto podem ser endgenos (da prpria levedura, ex: glicognio e trealose), como exgenos (fornecidos levedura, como sacarose, frutose, glicose). Objetivo metabolizar anaerobicamente o acar para gerar energia na forma de ATP (adenosina trifosfato). O etanol e CO2 so s excrees do processo, sem utilidade metablica. Formao de outros produtos como glicerol, acido actico, biomassa (polissacardeos, protenas, acido nuclico) como produtos secundrios.

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Fatores que afetam a fermentao

-Fsicos temperatura, presso osmtica - Qumicos pH, oxigenao, nutrientes minerais e orgnicos, inibidores - Microbiolgicos linhagem, espcie, concentrao da levedura, contaminao bacteriana

Afetam o rendimento, eficincia da fermentao.

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Agente de fermentao
Algumas bactrias tambm produzem etanol, mas as leveduras ainda so mais economicamente viveis. A levedura da fermentao alcolica a Saccharomyces cerevisiae da qual forma selecionadas varias linhagens.

Cada linhagem diferentes) tem prprias.

(isolada de meios suas caractersticas

O desempenho do processo fermentativo afetado pelo tipo de levedura que o executa.

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As fermentaes se iniciam com leveduras com culturas fornecidas por instituies ou de uso em panificao, produzidas por fabricantes. Culturas puras isoladas ou melhoramento gentico. Com o tempo, so substitudas por leveduras comuns regio da destilaria (leveduras selvagens). Leveduras selvagens pontos positivos: dominncia, persistncia ao longo da safra, habilidades fermentativas desejveis, alta eficincia e alta tolerncia fatores estressantes;

pontos negativos: variadas habilidades fermentativas podem acarretar problemas (baixo rendimento, alta formao de espuma, floculao do fermento).

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Nutrio mineral e orgnica As leveduras (organismos saprfitos) exigem uma fonte de carbono para energia e formao (de seu esqueleto carbnico) de sua estrutura celular. Algumas vitaminas como tiamina e acido pantotnico. O meio deve fornecer nitrognio, fsforo, enxofre, potssio, magnsio, clcio, zinco, mangans, cobalto, ferro, cobre, iodo em quantidades pequenas.

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A Saccharomyces retira nitrognio: -Da forma amoniacal (NH4+) - amdica - amnica (uria) - no usa nitrato - pouca habilidade ou nenhuma para protenas. - o fsforo e absorvido de ons H2PO4-1 - o enxofre pode ser absorvido do sulfato, sulfito ou tiossulfato fornecido na sulfitao do caldo no processo de fabricao do acar, bem como H2SO4.

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Temperatura As leveduras so mesfilas. Temperatura tima para produo do etanol: 26 a 35C. Alta temperatura aumenta a velocidade de fermentao, mas favorece contaminao bacteriana, e a levedura fica sensvel toxidez do etanol. Aumento da temperatura perda de etanol por evaporao nas dornas.

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PH Adequada entre 4,0 e 5,0 O pH do mosto 4,5 a 5,5 Reutilizao da levedura, tratamento com acido sulfrico, pH de 2,0 a 3,2 por uma hora. A fermentao alcolica inicia com pH baixo e termina com 3,5 a 4,0. Fermentao em meio acido mais rendimento, restringe crescimento do fermento e produo do glicerol, diminui contaminao bacteriana. Fermentaes: melao pH 5,8 / 5,9 caldo de cana pH 5,2 a 6,8 Conclui-se que as leveduras devem resistir pH acido.
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Inibidores da Fermentao O processo de fermentao pode ser inibido por: Etanol ao nas leveduras K, Ca efeito negativo na fermentao Al estressa a levedura, diminui fermentao Sulfitao alto teor de SO3, efeito toxico s leveduras. Concentrao de acares

Alto teor de aucares: estresse osmtico da levedura

Geralmente o mosto diludo a concentrao de 17% de acar, no mximo.
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Concentrao do Inculo Elevado teor de levedura exige energia de manuteno maior, mais consumo de acar para mant-las vivas, resultando em competio pelos nutrientes do meio. Uso de acido benzico: diminui leveduras, aumenta contaminao bacteriana. OBS: O crescimento de 1g de levedura requer 1,5 a 2,0g de monossacardeos por dia, e 6g para mant-lo.

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Contaminao Bacteriana Pela dimenso do processo no est em completa assepsia; Esto presentes ou podem estar principalmente Lactobacillus e Bacillus: o aumento do teor de bactrias diminui o rendimento; O aumento da temperatura de fermentao favorece a contaminao bacteriana, o aumento do tempo de fermentao e o estresse da levedura. Pode ser responsvel pela floculao da levedura.

lactobacillus sp

bacillus sp
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Efeito da concentrao de bactrias indutoras de floculao (L. fermentum CCT 1396) na floculao de Saccharomyces cerevisiae em suspenso, 20 minutos aps adio da bactria decantao das clulas de leveduras, provocando uma ntida separao de fases.
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Antissepticos -A utilizao no usual no Brasil; -Cada tipo de antissptico atua de forma diferente grupos de microorganismos diferentes; -Podem deixar resduos. Pentaclorofenol 0,01-0,05g/ L de mosto (proibido) Hexaclorofeno 4mg/L de mosto CuSO4 H2SO4 (usado no mosto para tratar o fermento)
A exposio, ainda que por pouco tempo, debilita o sistema imunitrio, pode afetar os sistemas cardiovascular, respiratrio, gastrintestinal, neurolgico, endcrino e reprodutivo e causar problemas de pele, efeitos prejudiciais para o fgado, rins, pele, sangue, pulmes e sistema nervoso central e carcinognico,.

sobre

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Se no houver um controlo exato da temperatura pode ocorrer a formao, como produto secundrio, de um produto altamente txico: o TCDD (tetraclorodibenzodioxina). O hexaclorofeno, devido ao seu efeito bactericida (inibe o crescimento das bactrias grampositivas), utiliza-se juntamente com o fluorofeno e o bromoclorofeno, de estruturas semelhantes em sabes antisspticos, desinfetantes cirrgicos, desodorizantes, cosmticos e produtos dermatolgicos

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Correo do Mosto -Os substratos de origem amilcea sofrem esterilizao, pela tcnica de sua preparao e, quanto ao mais, adicionam-se fosfatos em sua frao solvel, na proporo de 1g por litro de substrato. Se necessrio, corrige-se a acidez com H2SO4. - Para os substratos de melao, normalmente faz-se apenas a diluio. Em casos especiais adicionam-se fosfatos e sais de amnio na proporo de 1g por litro de mosto. - Para caldo de cana faz-se uma correo mais cuidadosa, para oferecer levedura condies de nutrio que normalmente no se encontram no caldo em doses suficientes. Juntam-se fosfatos e sais de amnio e vitaminas. Melhores rendimentos 0,1g de sais de magnsio por litro de mosto, e 0,01g de sais de mangans e de cobalto. - Alm da diluio e da adio de nutrientes, adicionam-se antibiticos ou antisspticos e ajusta-se a temperatura.
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- A acidez mais conveniente para a fermentao alcolica de 12g por litro expressa em acido sulfrico, e o pH de 4-5. - Para mostos de poder tampo elevado, com os melaos, nem sempre se pode conciliar a acidez titulvel e o pH na prtica industrial.

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Preparo do inculo Nas pequenas destilarias de aguardente costuma-se deixar a fermentao ocorrer por obra dos microorganismos selvagens, que acompanham os caldos naturais. Nas grandes destilarias, usam-se em grande escala, as leveduras de panificao, encontradas no comrcio sob a forma mida e prensada, ou secas e granuladas. Nesse caso, partindo-se de 10 a 20g de levedura, para cada litro de mosto obtm-se, fcil e rapidamente, grande massa de inculo. Usa-se uma frao do volume total para essa quantidade de leveduras e deixa-se fermentar. Aps fermentao, divide-se o mosto fermentado por diversos recipientes, e faz-se sua realimentao com mostos diludos, at completar o volume total das dornas.

Tambm usa-se leveduras selecionadas com tolerncia a altos teores de etanol e boa velocidade de fermentao. Preparo do inculo mais complexo. 45

-Etapa de laboratrio: inicia-se com tubo de cultura pura, com a qual inoculam-se 100ml de um substrato se 5 Brix, corrigido e esterilizado. Aps desenvolvimento, passa-se todo o mosto inicial fermentado para um volume de 500ml de mosto a 7 Brix, preparado como o anterior, e assim por diante, at atingir-se um volume suficiente para inocular o meio contido em aparelhos de preparo de cultura pura, em dimenso industrial (o meio no deve ultrapassar 13 Brix).

- Etapa industrial: nos pr-fermentadores 10% do volume total das dornas principais de fermentao

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