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Cundo se usa?
Los procesos de bio-separacin se inician con una separacin de la
Mediante tecinas de biotecnologa e ingeniera gentica se ha logrado la produccin de muchos productos a partir de los microorganismos. La mayora de esos productos se encuentran en el interior del microorganismo. Denominados por esa razn metabolitos intracelulares. Para poder ser comercializados necesitan ser liberados hacia el exterior.
El proceso de ruptura celular se ha convertido en algo crucial e importante en los procesos de fermentacin, y para lograrlo se necesita de un
En los ltimos cuarenta aos se ha venido investigando sobre estos procesos de ruptura celular , pero no fue hasta hace poco que se vio la necesidad de aplicar estos procesos a grande escala.
Caldo de Fermentacin
Protenas Intracelular
Separacin de Clulas
Rompimiento Celular
Separacin Material Intracelular
Sobrenadante
Precipitacin cidos Nucleicos, Proteasas
Refinamiento
Procesos y Equipos La liberacin de las protenas intracelulares involucra la ruptura o permeabilizacin de la pared celular. Los equipos involucrados en esta etapa no han sido diseados especialmente para el rea biotecnolgica sino que son prestadas de otras reas (rea de alimentos, de pinturas y pigmentos).
Al considerar las necesidades de gran escala solo pocas tcnicas pueden aplicarse. Un dispositivo que cumple con los requisitos para lograr una casi perfecta ruptura celular: Homogenizador
Este rompimiento o permeabilizacin se puede llevar a cabo por dos mtodos: Mtodos No- Mecnicos
Mtodos Mecnicos
Mtodos No-Mecnicos
Pueden ser de dos tipos: Agente qumicos Solventes orgnicos Detergentes Alcalis Agua (shock osmtico)
Enzimticos se trata de enzimas que permeabilizan en forma selectiva las membranas celulares, tales como lisozima, glucanasas, mananasas, etc.
Los mtodos no-mecnicos son fciles de escalar, si uno necesita tratar 10 veces ms materia orgnica basta con adicionar 10 veces ms reactivo qumico o enzimtico.
Mtodos No-mecnicos
Tcnicas
Permeabilizacin Enzimtico
Principios
Permeabilizacin de la pared celular, lo cual produce el rompimiento de la clula
Stress
Suave
Costos
Caro
Ejemplos
Tratamiento de M. lysodeikticus con lisozima.
Ruptura de Clulas de Glbulos Rojos.
Shock Osmtico
Solubilizacin
Suave
Suave
Barato
Moderadamente Caro
Disolucin de Lpidos
Barato
Barato
MTODOS MECNICOS Los mtodos mecnicos se pueden dividir en dos tipos : Mtodos a pequea escala son : Ultrasonificacin Molina con abrasivos Homogenizadores Mtodos a gran escala Homogenizadores a alta presin Molinos de bolas Ambos son operaciones unitarias tpicas de la Ingeniera de Procesos y de la industria de alimentos.
Mtodos Mecnicos
Tcnicas
Homogenizador de cuchillos Homogenizador alta presin
Principios
Las clulas son rotas en un mezclador
Las clulas son forzadas a pasar a travs de un pequeo orificio lo que produce que se rompan por el esfuerzo de corte
Stress
Moderado
Costos
Moderado
Ejemplos
Rompimiento de tejidos y clulas Tratamiento a animales.
gran escala de suspensin de clulas.
Fuerte
Moderado
Ultrasonificacin
Fuerte
Caro
Molienda
Moderado
Barato
Molinos de bolas
Fuerte
Barato
Pequea Escala
100% Rompimiento
1. 2.
Se adicionan 1 volumen de bolas de vidrio en un ependorf. Se adiciona 1 volumen de las clulas a desintegrar (en forma de pasta, previamente
separadas del caldo)
1-3
4-5
3.
4. 5. 6.
Se agitan fuertemente en un vortex, entre 2 y 5 minutos (controlando que no se caliente) Se repite el punto 4 hasta asegurarse que no se rompen ms las clulas. Se separan los desechos de la solucin y se analiza la concentracin de protenas.
Ultrasonificacin
Se utilizan frecuencias de 20 Khz esto produce vibraciones que provocan el fenmeno de cavitacin. Se producen zonas de baja presin en el lquido El lquido se transforma en gas formndose pequeas burbujas Las burbujas colapsan debido a los cambios de presin. Se producen fuertes esfuerzos de corte en el lquido que rompen las clulas.
Homogenizadores
La idea es generar altos esfuerzos de corte que produzcan la ruptura de las clulas. Los altos esfuerzos de corte se pueden obtener por: 1. Embolos 2. Cuchillas 3. Pistones
mbolos
Cuchillas
Pistones