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PROVAS BIOQUMICAS

INTRODUO
A investigao das atividades metablicas das bactrias in vitro chamada de Provas Bioqumicas e servem para auxiliar o microbiologista a identificar grupos ou espcies de bactrias ou leveduras atravs da verificao das transformaes qumicas, que ocorrem num determinado substrato, pela ao das enzimas de um dado microrganismo. Baseado nos diferentes sistemas enzimticos apresentados pelos microrganismos, as provas bioqumicas podem ser utilizadas na prtica para a sua caracterizao. Para a realizao das provas bioqumicas necessrio utilizar meios de cultivo especiais contendo o substrato a ser analisado e fornecer ao microrganismo as condies nutritivas e ambientais necessrias ao seu desenvolvimento. Objetivos: executar e interpretar os resultados e as transformaes metablicas ocorridas em algumas provas bioqumicas empregadas para identificao de bactrias. As principais e mais utilizadas provas bioqumicas so:

As enterobactrias fermentam a glicose produzindo cidos:

mudana de cor no meio, de vermelho para amarelo, devido reduo no pH

Glicose est presente em pequenas quantidades (0.1%), ela logo esgotada e o organismo crescendo na superfcie do agar, na presena de oxignio, forado a catabolizar peptonas e aminocidos para obter energia. (LAC-)

Estes organismos iro gerar produtos finais alcalinos os quais iro reverter o pH do meio e ento mudar a cor novamente para vermelho.

Organismos LAC+, como E. coli, produziro um cultivo cido tanto na superfcie quanto na base do tubo devido fermentao da lactose/sucrose aps o trmino da glicose.

Se a glicose metabolizada em CO2, a produo de gs ser observada como bolhas ou rachaduras na base do tubo. Se sulfeto de hidrognio formado durante o crescimento, uma colorao cinza ou preta (sulfeto de ferro) ser observada. Semeadura mista agulha de platina.

BACTRIA Shigella dysenteriae Salmonella typhimurium Salmonella typhi Escherichia coli Proteus vulgaris Klebsiella pneumoniae

Superfcie Vermelha Vermelha Vermelha Amarela vermelha Amarela

Base Amarela Amarela e Gs Amarela Amarela e Gs amarela e Gs Amarela e Gs

H2S + + +

1.

Prova da Glicose: Determina a capacidade do microrganismo de fermentar a glicose. Um pequeno tubo de vidro (tubo de Durham) colocado em posio invertida no fundo do tubo de meio. Sua funo coletar o gs, um dos produtos do processo fermentativo.

Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

1.

Prova da Urease: Determina se um microrganismo capaz de hidrolisar uria em duas molculas de amnia por ao da enzima urease.

Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

3.

Prova do Indol: Determina se a bactria capaz de produzir indol, a partir do aminocido triptofano, atravs da ao da enzima triptofanase.

Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

4.

Prova da Fenilalanina:

Tipo de inoculao: estrias

5.

Prova da Motilidade (SIM)

Tipo de inoculao: punctura

6.

Prova do Citrato: determina se o microrganismo capaz de utilizar o citrato como nica fonte de carbono.

Tipo de inoculao: estrias

7.

Produo de H2S: Determina se ocorre a liberao de cido sulfdrico gasoso, pela metabolizao bacteriana de aminocidos que contm enxofre em sua estrutura.

Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

Determina a capacidade do microrganismo de fermentar a glicose. Um pequeno tubo de vidro (tubo de Durham) colocado em posio invertida no fundo do tubo de meio. Sua funo coletar o gs, um dos produtos do processo fermentativo. Indicador: Vermelho de fenol. Positivo Amarelo Gs+: E.coli, Salmonella, Klebsiella, Serratia e Proteus

Determina se um microrganismo capaz de hidrolisar uria em duas molculas de amnia por ao da enzima urease. Indicador: Vermelho de fenol

Positivo Rosa

Klebsiella e Proteus

Determina se a bactria capaz de produzir indol, a partir do aminocido triptofano, atravs da ao da enzima triptofanase. Indicador: Reativo de Kovacs

Positivo Anel escuro (vinho)


E. coli Shigella, Klebsiella e Proteus

Capacidade do microrganismo de desaminar a fenilalanina em cido fenilpirvico atravs da enzima fenilalanina desaminase. Indicador: Cloreto frrico Positivo Verde

Proteus

Determina se o microrganismo capaz de utilizar o citrato como nica fonte de carbono. Indicador: Azul de Bromotimol

Positivo Azul

Salmonella, Klebsiella e Serratia

Determina se ocorre a liberao de cido sulfdrico gasoso, pela metabolizao bacteriana de aminocidos que contm enxofre em sua estrutura. Indicador Acetato de chumbo

Positivo- Salmonella e Proteus