cido peridico-Schiff (PAS): Fundamento

El cido peridico rompe la unin entre carbonos con hidroxilos adyacentes, y forma grupos aldehdo. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehdos para dar un color rojo prpura intenso.

La reaccin de PAS tie carbohidratos, y se usa para detectar: Grnulos de glucgeno Moco en diversas clulas

Membrana basal de los epitelios

Fibras reticulares del tejido conjuntivo

Glucgeno, mucinas, membranas. PRPURA HONGOS: PRPURA NCLEOS: AZUL

MUCOPOLISACRIDOS: EPITELIO GSTRICO, GLNDULAS DEL DUODENO, CAPSULAS BACTERIANAS. MUCOPROTENAS: Mucinas del tubo digestivo y rbol respiratorio.

GLUCOLPIDOS: Ganglios y cerebro

La tincin tricrmica de Masson, al igual que otras tinciones tricrmicas, es una tcnica de coloracin especial que permite visualizar claramente las fibras de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean tres colorantes para diferenciar el ncleo celular, el citoplasma y las fibras de colgeno.

FUNDAMENTO

Primeramente, se tien las secciones con un tinte cido tal como escarlata de Biebrich. Todos los elementos acidfilos del tejido tales como el citoplasma, el msculo y el colgeno se unirn a los tintes cidos. Las secciones entonces se tratan con cido fosfotngstico y/o fosfomolbdico. Ya que el citoplasma es mucho menos permeable que el colgeno, los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno pero no del citoplasma. Los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos actan como medio de unin entre el colgeno y el azul de la anilina, que es el tinte del colgeno.

Solucin de hematoxilina frrica de Weigert.

Solucin de escarlata de Biebrich fucsina cida Solucin de azul de anilina Solucin de verde luz al 2% (alternativa al azul) Solucin diferenciadora: solucin acuosa de cido actico glacial al 1%.

Los ncleos se tien con Hematoxilina de Weigert, una Hematoxilina de hierro, que es resistente a la decolorizacin por soluciones cidas. Luego se aplica sobre el tejido escarlataacidofuchsin que tie los elementos de tejido acidfilo como citoplasma, clulas musculares y colgeno. Tratamiento posterior por cido fosfomolbdico/fosfotngstico sirve como un decolorizador causando la difusin del iebrichescarlata acidofuccina fuera de las fibras de colgeno, dejando las clulas musculares rojo. Tras la aplicacin de anilina azul se manchan las fibras colgenas despus de lo cual, se emplea cido actico al 1% para diferenciar adecuadamente el tejido.

RESULTADOS
Fibras de colgeno = Azul. Por tanto, el tejido conjuntivo se teir de dicho color. Estructuras oxidadas + Citoplasma = Rojo. Se teirn de rojo la queratina, los glbulos rojos y el tejido muscular. Ncleo celular = Lila, marrn.

 Es

un mtodo de tincin especial ms empleado para hongos. La reaccin tintorial est basada en que, en presencia de cido perydico, los polisacridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehdos; stos, a su vez, reducen el complejo nitrato-plata metanamina (o metenamina) produciendo una coloracin de caf a negra, debido al depsito de plata reducida en los lugares de localizacin de los aldehdos. Tambin se utiliza para la identificacin de la melanina.

REACTIVOS
Solucin de cido brico (solucin A): Solucin de tetra borato sdico (solucin B) Solucin buffer borato (comprobar que el pH sea 8.2)

Solucin de plata metanamina

RESULTADOS
Reticulina,

membranas basales, hongos, mucinas, glucgeno: negro. Nucleos: marrn oscuro a negro

TINCIN
hematoxilina-eosina

HEMATOXILINA

HEMATOXILINA
La HEMATOXILINA tie: Estructuras cidas Estructuras Basfilas

Y existen algunos tipos

Lacas AlumnIcas de HEMATOXILINA

HEMATOXILINA de Harris

HEMATOXILINA de Mayer

HEMATOXILINA de Mayer

HEMATOXILINA de Harris

EOSINA

EOSINA
Proviene

(del griego Eos), Amanecer Es un polvo rojo cristalino C20H6Br4Na2O5

Se utiliz mucho a finales del siglo XIX

EOSINA
FUNDAMENTO Es un compuesto cido Tiene una polaridad negativa Colorea componentes y orgnulos citoplasmticos, colgeno y fibras musculares Los componentes que se tien con sta se conocen como: acidfilos o eosinfilos

EOSINA
Resultado de la tincin:
Citoplasmas

y fibra colgena de rojo o rosa Eritrocitos de rojo brillante

EOSINA

En conclusin
La HEMATOXILINA es un colorante catinico La EOSINA es un colorante aninico La HEMATOXILINA-EOSINA nos permite contrastar el ncleo del citoplasma, tiendo as el ncleo de un color azul y el citoplasma de un color rosado.

HEMATOXILINA-EOSINA

La HEMATOXILINA-EOSINA es una tcnica de coloracin que se utiliza luego de:

La fijacin de la muestra La deshidratacin Lavados de ALCOHOL El Aclaramiento Con XILOL La inclusin en Parafina El Corte

Y luego de este proceso viene la coloracin con los tintes, pero para esto debemos desparafinar e hidratar la muestra con H2O para luego resaltar la tincin H.E. que tiene como resultado: Colorear el ncleo de azul El citoplasma de rosa Los eritrocitos de rojo brillante

CORTES POR CONGELACIN

La

congelacin de los tejidos es una manera rpida de endurecerlos sin necesidad de inclusin, por lo que la preservacin molecular es mxima.

ENFRA LA MUESTRA

 Para

preservar correctamente la estructura del tejido ha de ser una congelacin muy rpida, normalmente en isopentano enfriado con nitrgeno lquido, lo que evita la formacin de cristales de hielo que deterioran las estructuras celulares.

Cmara refrigerada a la temperatura seleccionada. En esta cmara se encuentra la muestra, la cuchilla y es donde se recogen las secciones.

 Los

dos aparatos ms usados para realizar cortes por congelacin son: el micrtomo de congelacin y el criostato.

MICRTOMO
Realiza

cortes de decenas de m de grosor y consiste en una plataforma que se enfra a bajas temperaturas sobre la que se coloca la muestra. Tras cada corte la plataforma se eleva un espacio correspondiente al grosor de corte seleccionado.

 En

los microtomos de congelacin antiguos se produca la congelacin mediante gas carbnico que haba que suministrar regularmente. Actualmente se produce la congelacin (de -30 a menos -40 C) de la plataforma mediante tubos que parten de un sistema de refrigeracin externo al propio dispositivo de corte. Adems, existe la posibilidad de congelar tambin la cuchilla si se desea. La muestra se congela por contacto directo con la plataforma y su temperatura es constante durante todo el tiempo de corte.

CRIOSTATO
Se

utiliza para obtener secciones por congelacin de 10 a 30 m, aproximadamente. En este aparato todo el sistema de corte se encuentra encerrado en una cmara refrigerada cuya temperatura se puede regular, normalmente entre -20 y -30 C. La congelacin se suele hacer en una plataforma dentro de la propia cmara refrigerada que se encuentra a una temperatura inferior, en torno a -28 C

 Antes

de la congelacin, la muestra se encastra en un medio que es lquido a temperatura ambiente y slido a la de corte. Por tanto, tenemos nuestra muestra en un bloque slido, encastrado pero no incluido. Esto permite manipular la muestra y adherirla a un soporte porta muestras, el cual se fijar a un eje que avanza sobre la cuchilla.

GRACIAS POR SU ATENCION