VALIDACIN DE MTODOS CALCULO DE INCERTIDUMBRE DE MEDIDA

ISO/IEC 17025: (5.4.5.1) Confirmacin mediante examen y la aportacin de evidencias objetivas que demuestren el cumplimiento de ciertos requisitos para el uso especfico previsto.
La validacin de un mtodo es un paso fundamental para asegurar que los resultados entregados por dicho mtodo son confiables.

MTODOS QUE REQUIEREN ALGN TIPO DE VALIDACIN:

MTODOS

NO NORMALIZADOS MTODOS NORMALIZADOS MODIFICADOS

Los desarrollados en el propio laboratorio. Debern ser validados en funcin del uso que se vaya a hacer de ellos, definiendo su campo de aplicacin. En estos mtodos se realizar una nueva validacin (parcial o total) cuando se cambien las condiciones del mismo.

Los desarrollados fuera del laboratorio y publicados por organismos oficiales y/o de reconocido prestigio:

No requerirn validacin cuando se tiene constancia de que han sido validados y se dispone de los correspondientes parmetros de validacin. Cuando un mtodo externo validado sea modificado para su uso en el laboratorio, se dispondr de un registro que recoja las modificaciones y se evaluarn los parmetros necesarios para asegurar su correcta validacin. Los mtodos validados por ensayos inter-laboratorios en los que participe el laboratorio se considerarn como mtodos externos publicados, si se dispone de los parmetros de validacin del mismo. Los mtodos externos publicados por organismos oficiales y/o de reconocido prestigio de los que no se tenga constancia de su validacin, debern ser validados antes de ser utilizados en los ensayos. Los mtodos externos publicados por organismos oficiales y/o de reconocido prestigio de los que no se

Cuando se trata de un mtodo empleado tradicionalmente por el Laboratorio que no este normalizado, se puede realizar una Validacin Retrospectiva curvas de calibracin, resultados de ensayos, cartas de control, ensayos de aptitud, etc.

En caso de ser un mtodo nuevo (o uno antiguo del que no se dispongan de datos suficientes) se debe realizar una Validacin Prospectiva, generando a travs de anlisis datos experimentales.

CONTINUACIN

Se Documentar por escrito en el documento de diseo de la validacin: Alcance Diseo experimental : La sistemtica completa a seguir en el proceso de validacin Materiales y equipos a utilizar Responsables de validacin Cualquier modificacin realizada al plan de validacin, durante el proceso, debe quedar debidamente documentada.

Nombramiento del responsable (o responsables) de la validacin. Recopilacin de la normativa aplicable Definicin de las caractersticas mnimas del mtodo y de los parmetros a validar as como los criterios de aceptacin, en funcin de los requisitos. Establecer plan de accin

Los parmetros a determinar estarn en funcin del uso del mtodo Cuantitativo Semi-cuantitativo Cualitativo Identificativo La informacin relativa al proceso de validacin ser anotada en un registro de validacin.

Linealidad/Funcin de respuesta Selectividad/Especificidad Precisin: Repetibilidad Reproducibilidad Veracidad (Exactitud) Lmite de cuantificacin Lmite de deteccin Rango o intervalo de trabajo Incertidumbre

Tipo de ensayo Identificacin

Parmetro Especificidad/Selectividad Rango o intervalo de trabajo Funcin de respuesta/Linealidad Selectividad/Especificidad Precisin Exactitud Limite de cuantificacin Precisin Exactitud Funcin de respuesta Selectividad/Especificidad Especificidad/Selectividad Lmite de deteccin

Determinacin cuantitativa de un componente

Determinacin semicuantitativa de un componente

Determinacin cualitativa

Materiales de Referencia Certificados (MCR) Materiales de Referencia (MR) Muestra analizada por otro mtodo normalizado debidamente evaluado Muestras con adiciones de sustancia de concentracin certificada.

Se verificar que el material de referencia viene acompaado de su certificado, en el que se especifique claramente: el mtodo por el que se ha certificado el material el nmero de participantes en la certificacin su periodo de caducidad y/o condiciones de conservacin.

Materiales obtenidos a partir de Test de eficiencia suministrados por Entidades Organizadoras del mismo, al que se les asigna un valor y una incertidumbre (o variabilidad del valor de referencia). Llevan asociado un certificado, pero que no incluye todos los requisitos de un MCR. Se recomienda que el nmero de laboratorios que participan en la asignacin del valor sea superior a 10.

Segn el parmetro de validacin, se realizar el estudio mediante la comparacin de los resultados por pares de valores de ambos mtodos como datos independientes.

Muestras preparadas en el laboratorio con muestras de bajo nivel de concentracin del analito a las que se aade una cantidad conocida de patrn certificado.

Todos los valores de referencia tendrn calculada:su incertidumbre estimada o el intervalo de confianza conocido y compatible con los requisitos especificados. Los materiales preparados correspondern a muestras con matriz representativa del alcance que tiene el mtodo que se est validando Dado que no es posible realizar la validacin con materiles de referencia para absolutamente todas las matrices analticas, se proceder a crear grupos de matrices en los que un material de referencia sea representativo del grupo, para realizar su

Aquellos en los que tras la aplicacin del procedimiento analtico a la muestra analizada, se genera un valor numrico. Aplicacin: Mtodos directos Mtodos que requieren calibracin instrumental

Criterios reglamentados legales o normativos: se emplearn como criterios de aceptacin. Mtodo reglamentado o normativo y se indica el procedimiento de validacin: prevalece ste. Muestras de validacin: similares a las matrices del campo de aplicacin. Tres muestras con valor de referencia

Al no poder validar la totalidad de las matrices, definir familias de matrices en el que el mtodo se pueda decidir que se comporta de igual forma, por evidencias histricas, bibliografa o el sentido comn. Aconsejable calcular, y por cada nivel, la cantidad del material a analizar en la validacin. Tener en cuenta la caducidad, estabilidad,

Lmites superior e inferior del intervalo en el que se puede determinar el mensurando con aceptable grado de precisin y veracidad. Lmite inferior: el ms bajo en el que han comprobado precisin y exactitud, a no ser que el mtodo deba medir el nivel ms bajo posible o ausencia por lo que ser el lmite de cuantificacin o el de deteccin. Lmite superior: el nivel ms alto en el que se ha comprobado la precisin y la veracidad. Criterio de aceptacin: Si existe lmite legislado: el rango lo incluir en el intervalo. Si no existe lmite legislado: ser definido por el uso del mtodo a los requerimientos de los usos del mtodo.

Capacidad de un mtodo para obtener resultados linealmente proporcionales al valor del mensurando en la muestra, dentro de un intervalo determnado. Se determinar mediante la curva de calibracin y se comprobar la linealidad analizando diferentes concentraciones de patrones de valor conocido con un mnimo de 5 en el intervalo lineal y al menos cada patrn por duplicado.

Criterios de aceptacin: Si coef. de variacin de los factores de respuesta de las diferentes conc. es inferior al 20%: la recta es lineal y pasa por el origen. Si (Sm/m)x 100 es inferior al 20%, se considera que la recta es lineal. Si el coeficiente de correlacin r es superior a 0,99

Concordancia entre los resultados de ensayos independientes en condiciones estipuladas. El clculo de la desviacin estndar de repetibilidad y de reproducibilidad se emplear el mtodo descrito en la Norma UNE 82009-2, a los datos generados en los ensayos para el proceso de validacin. Es recomendable que se realicen un mnimo de 10 anlisis en condiciones de reproducibilidad y cada anlisis se har por duplicado, al menos.

Repetibilidad Reproducibilidad

Medida de la precisin de un mtodo efectuado en las mismas condiciones. Se expresar como Lmite de repetibilidad r, siendo la diferencia absoluta entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas sobre la misma muestra. Para ser aceptados, en condiciones de repetibilidad y con un nivel2 de significacin del 0,05, la diferencia entre los valores de los duplicados no puede ser mayor que el valor de r. 2 r al 95% de confianza se calcula: r = 2 x x Sr

Criterio de Aceptacin r Shx2x 2 x F Sh = 0,02 x C0,8495 x 0,67 (C expresado en fracciones

msicas)

Medida de la precisin de un mtodo efectuado sobre la misma muestra pero en condiciones diferentes. Se expresar como Lmite de reproducibilidad R, siendo la diferencia absoluta entre los resultados de dos determinaciones realizadas en condiciones de reproducibilidad sobre la misma muestra. R al 95% de confianza se calcula: R2= 2 x x SR

Criterio de Aceptacin R SHx2x 2 x F SH = 0,02 x C0,8495 (C expresado en fracciones msicas)

Capacidad de un mtodo analtico para dar resultados lo ms prximos posibles al valor verdadero. Las muestras empleadas para la validacin de la exactitud, sern preferiblemente MCR. Cada muestras ser analizada al menos 10 veces, en condiciones de reproducibilidad intralaboratorio, cada vez por duplicado (20 valores) VR X exactitud/veracidad = x 100

X recuperacin (%) = VR

VR

x 100

Correccin = VR X

Criterio de Aceptacin Tabla A.O.A.C. Indice de Compatibilidad

Grado por el cual un mtodo puede determinar un analito dentro de una mezcla compleja, sin ser interferido por otros componentes de la mezcla. Las pruebas ms utilizadas para determinar la selectividad son, a modo de ejemplo:

Mtodo de adiciones Comparacin de espectros Comparacin de mtodos

Menor cantidad de mensurando que puede ser determinada con aceptable precisin y veracidad bajo las condiciones experimentales establecidas.

Mtodos con calibracin instrumental:

Mtodos con el anlisis de la seal del blanco

Sin utilizar la correccin del blanco Cuando se utiliza la correccin del blanco

Mtodo estadstico aplicado a la recta de calibrado

Regresin sin blanco Regresin con blanco

Mtodos sin calibracin instrumental Criterios de Aceptacin:

Con reglamentacin especfica: LC < al 50% del valor reglamentado Mtodo normalizado y si se indica el valor del LC, deber cumplirse con este valor.

Menor cantidad de mensurando que puede ser detectada con aceptable precisin y veracidad bajo las condiciones experimentales establecidas. Deber ser evaluado solamente en los mtodos cualitativos o en los mtodos cuantitativos en los que se evala la presencia sin proceder a la cuantificacin. Criterios de Aceptacin:

Con reglamentacin especfica: LD < al lmite reglamentado Mtodo normalizado y si se indica el valor del LD, deber cumplirse con este valor.

El laboratorio slo debe demostrar exactitud y precisin en un punto. Este punto de concentracin/valor analtico escogido para cada matriz marcar la expresin de resultados que ser menor que (<) y mayor que (>). Generalmente es un lmite reglamentado. Los estudios a realizar son los mismos que pa-ra un mtodo cuantitativo, excepto la linealidad. El L.C. Ser

Mtodos diseados para detectar muestras positivas hasta un nivel bajo de presencia del analito Selectividad Lmite de Deteccin Parmetros de calidad de deteccin del mtodo

Sensibilidad Especificidad Falsos positivos Falsos negativos Eficiencia

Mtodos que se pueden tratar como casos particulares de mtodos cualitativos, en los que se pretende determinar la identidad de una sustancia o especie pura, por lo que no se requiere el anlisis del Lmite de Deteccin, sino pruebas de deteccin (determinacin de falsos negativos, falsos positivos,) El procedimiento de validacin estar basado en el epgrafe correspondiente a los mtodos cualitativos y sern documentados por los responsables de la validacin, definiendo los parmetros a validar.

ISO/IEC 17025: (5.4.6.2) Los laboratorios de ensayo deben disponer y aplicar procedimientos para estimar la incertidumbre de medida.

La Norma ISO 17025 establece la necesidad de calcular o estimar las incertidumbres en los resultados de ensayos cuantitativos y calibraciones que se realicen en el laboratorio.

Incertidumbre de una Medida

Estimacin de la parte del resultado completo que caracteriza el intervalo de valores, dentro del cual se encuentra el valor verda-dero de la cantidad medida (o mensurando). Ello, una vez efectua-das las correcciones correspondientes a los errores sistemticos conocidos. En caso de no corregirse, se incrementar el intervalo de incertidumbre para incluir el efecto del error sistemtico.

La incertidumbre de un resultado comprende normalmente mu-chas componentes que pueden ser agrupadas en dos categoras en funcin del mtodo utilizado para estimar su valor numrico.

Tipo A Los que son estimadas aplicando mtodos estadsticos a una serie de determinaciones repetidas. Tipo B Las que son estimadas por otros medios.

Estimacin basada en la experiencia Estimadas a partir del conocimiento de los intervalos mximos de variacin de una magnitud Resultados previos Medidas de las que se conoce su distribucin.

Definicin de la magnitud a medir Lista de Causas Evaluacin de los componentes Clculo de la estimacin de la Incertidumbre Tpica Combinada (Uc) Clculo de la Incertidumbre Expandida de Medida Clculo por etapas

Se debe definir cual es la magnitud que medimos y si esta medida es:

Medida Directa (ej.: peso) Medida Indirecta (ej.: resultado anlisis de A.A.) En este caso se debe definir la frmula que liguen todas las magnitudes utilizadas para calcular el resultado final. En caso contrario deber ser tratada como una nica medida.

Para cada una de las medidas definidas establecer la lista de posibles causas de incertidumbre que la afectan, asociadas con el factor que la determina. A ttulo orientativo: Certificado de Calibracin (define correcciones e incertidumbres) Exactitud del instrumento de medida (dada por el fabricante) Temperatura Inestabilidad de la medida Estabilidad a Corto Plazo o Repetibilidad ( a veces aportada por el fabricante) Operador Otras: Humedad, ruido, no linealidad, etc., la experiencia, etc..

Para cada una de las causas, evaluar la contribucin de su componente en funcin de las posibilidades disponibles.

a) Para medidas repetidas, tratar las componentes como TIPO A b) Las componentes de TIPO B (UB) sern estimadas basndose en el certificado de calibracin, la experiencia, recomendaciones del fabricante, etc..

Si las componentes de la incertidumbre que se han considera-do pueden suponerse independientes, la incertidumbre tpica combinada se obtiene realizando la suma cuadrtica: U c 2 = U A2 + U B 2 Cuando la medida no se realiza directamente, se tendr en cuenta:

Definir la frmula que exprese la magnitud de inters en funcin de los parmetros relacionados Estimar las correcciones e incertidumbres asociadas a cada una de esos parmetros Calcular la incertidumbre tpica combinada aplicando la expresin general de la Ley de Propagacin de las Varianzas.

I = k x UC
siendo: I: Incertidumbre expandida k: Factor de cobertura (salvo que se especifique otra cosa k = 2) UC: Incertidumbre tpica combinada

En el caso de que no se pueda descomponer la medida de una serie de medidas intermedias y el proceso de anlisis requiera la realizacin de mltiples etapas independientes, que imposibiliten la realizacin de experimentos adecuados para la obtencin de una estimacin del valor de la incertidumbre se podr optar po el siguiente esquema de clculo de incertidumbres:

Definicin de etapas Clculo de la incertidumbre de cada etapa (desglosada por partes o por caja negra) Composicin como suma cuadrtica de la incertidumbre de cada etapa Clculo de la incertidumbre tpica combinada

El modelo caja negra se basa en suministrar al mtodo, una muestra con un valor y fiabilidad (incertidumbre) conocidas. Del mtodo, por alguna causa no sabemos o no podemos evaluar sus diversos componentes de variabilidad interna. En este caso, se puede conocer la incertidumbre del mtodo analizando los resultados a la salida, evaluando su precisin y su exactitud.

Valor de referencia Valor asignado incertidumbre MRC Ejercicio intercomparacin Adiciones

Mtodo (Caja Negra)

Resultado analtico Promedio Desviacin estndar Nmero de resultados

Proceso analtico CMR

(Referencia) (Caja Negra) (Resultados)

CLab

Sesgo
(exactitud)

Desviacin estndar Promedio

(Precisin)