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PRINCIPIOS BSICOS
INMUNOHISTOQUMICA
Es una tcnica para identificar componentes celulares o de los tejidos basndose en el principio de las interacciones entre los antgenos y anticuerpos
Antgenos: una molcula que induce la formacin de un anticuerpo y que tiene uno o ms lugares donde un anticuerpo puede unirse a ella. Esas regiones de la molcula que tienen la capacidad de unirse al anticuerpo esta formado por secuencias de amino cidos o carbohidratos y se conocen como eptopes Anticuerpos: Un tipo de protena srica que se conoce como inmunoglobulina
Especifidad
-Cuan selectivo es el anticuerpo en adherirse a un antgeno
Sensitividad
- Cuanto antgeno es capaz el anticuerpo de detectar. Ej. Una tcnica ms sensitiva es capaz de detectar menos antgeno y viceversa
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Corte Deparafinar e hidratar Recuperacin de antgeno o antigen retrieval Bloqueo de actividad o afinidad endgena Anticuerpo primario
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TCNICA DE IHQ
Corte
Deparafinar e hidratar
Temperatura NO >60 C Nuevas soluciones permiten que se lleve a cabo en el mismo paso de recuperacin de antgeno
TCNICA DE IHQ
Recuperacin de antgeno: el proceso de fijar los tejidos puede ocultar o alterar los eptopes de las moleculas
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TCNICA DE IHQ
Mtodos de deteccin o visualizacin Directo Indirecto APA APAP Avidina-Biotina Dextran
El
anticuerpo esta ligado directamente al marcador que detectar la presencia o no del antgeno para el cual esta dirigido el anticuerpo
Baja
TCNICA - DIRECTA
sensitividad
Todava
la utilizamos para IF
Se
utiliza un anticuerpo primario de otra especie diferente a la humana en contra de el antgeno que estamos tratando de identificar (ratn o conejo)
Se
TCNICA - INDIRECTA
1
o
utiliza un segundo anticuerpo (anticuerpo secundario) contra la especie de animal del cual este creado el anticuerpo primario y este tiene el visualizador
Ms
2o
sensitivo
APA Y APAAP
AVIDIN-BIOTIN
(No biotin)
DEXTRAN
Pre-analtica
Fijacin
Tipo: formalina amortiguada y neutralizada 10%(V/V) Tiempo 6-48 horas
Temperatura
<60 C
Deshidratacin
Alcoholes graduados
Clarificacin Impregnacin
Analtica
Manual Automatizado Sistema de deteccin o visualizacin Efecto de orilla Efecto de secado Efecto de lavado incompleto